초음파 혈액 - 뇌 장벽 파괴 및 망간 향상된 MRI를 사용하여 기능성 Neuroimaging

Neuroscience

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Summary

기술은 광범위하게 microbubbles와 초음파를 사용하여 마우스의 혈액 - 뇌 장벽을 여는 대해 설명되어 있습니다. 이 기법을 사용하여, 망간은 마우스 뇌에 관리할 수 있습니다. 망간은 depolarized 뉴런에 축적 MRI 대비 에이전트이기 때문에, 이러한 방식의 연결 활동의 이미징을 가능하게합니다.

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Howles, G. P., Qi, Y., Rosenzweig, S. J., Nightingale, K. R., Johnson, G. A. Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI. J. Vis. Exp. (65), e4055, doi:10.3791/4055 (2012).

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Abstract

생쥐는 신경 과학, 마우스의 기능 neuroimaging의 유전 및 분자 토대를 공부에 대한 지배적인 모델 시스템이지만 것은 기술적으로 도전 남아있다. 하나의 접근 방법, 정품 인증 유발 망간 향상된 MRI (AIM MRI)는 설치류 1-5에의 연결 활동을 매핑하는 데 성공적으로 사용되었습니다. AIM MRI에서는 MN 2 + 칼슘 아날로그를 역할을하고 depolarized 뉴런 6,7 년 쌓입니다. MN 2 + T 1 조직 속성을 단축하기 때문에 고가의 연결 활동 지역은 MRI로 향상됩니다. 또한, MN 2 + 활성화된 지역에서 서서히 걷히고 있으므로 자극이 큰 실험적인 유연성을 가능하게 사전 이미징에 자석 외부에서 수행할 수 있습니다. 다만, MN 2 + 즉시 특히 생쥐의 혈액 뇌 장벽 (BBB) ​​BBB는 AIM MRI의 사용을 제한하고있다 열 필요성을, 교차하지 않기 때문에.

BBB를 열기위한 하나의 도구 ult입니다rasound. 위험성이 있지만 초음파는 가스입 microbubbles (즉, 초음파 대비 에이전트)과 함께 시행되는 경우, BBB 오프닝에 필요한 음향 압력은 상당히 낮습니다. 초음파 및 microbubbles의이 조합이 안정적으로 조직 손상 8-11를 일으키는없이 BBB을 여는 데 사용할 수 있습니다.

여기서 방법은 BBB를 엽니다 microbubbles와 초음파를 이용하여 MRI AIM 수행을 위해 제공됩니다. perflutren의 microbubbles의 정맥 주사 후, 산만 펄스 초음파 빔는 3 분 동안 면도 마우스 머리에 적용됩니다. 단순 위해서는 Microbubbles 및 BOMUS 12 등 초음파와 BBB 영업이 기법을 참조하십시오. 양쪽 대뇌 반구에 걸쳐 BBB를 엽니다 BOMUS를 사용하여 망간은 전체 마우스 두뇌로 관리합니다. 가볍게 좀 진정 생쥐의 실험 자극 후, AIM MRI가의 연결 응답을 매핑하는 데 사용됩니다.

에이 접근법을 보여주는, 여기 BOMUS 및 AIM MRI도 13 가볍게 마취 생쥐의 vibrissae의 일방적인 기계적 자극을 매핑하는 데 사용됩니다. BOMUS 양쪽 반구에 걸쳐 BBB를 열 수 있기 때문에 뇌의 unstimulated 측면은 특이 현상이 배경 자극에 대해 제어하는​​ 데 사용됩니다. 결과 3D 활성화지도 총신 분야 피질 14 vibrissae 지역의 출판 표현과 잘 동의한다. BBB의 초음파 개통은 빠른 비침 투, 그리고 가역입니다; 때문에 이러한 방식은 깨어있는 생쥐의 높은 처리량 및 / 또는 종단 연구에 적합합니다.

Protocol

1. 초음파 시스템 조립 및 보정

  1. 초음파 시스템은 2 MHz의 범위에서 마우스 두뇌와 중심 주파수를 충당 하고도 다양한 직경을 가진 단일 요소 초음파 변환기로 시작합니다. 변환기가 초음파 펄스 시퀀스를 생성 신호 발생기에 연결된 50 DB-전력 증폭기에 의해 구동된다.
  2. 초음파 시스템의 음향 압력을 보정하려면 결과 음향 압력에 적용된 전압을 관계하는 수중 처음기을 사용합니다. 수중 처음기 이상의 수조에 변환기를 배치합니다. 변환기에 간단한 펄스 (예 : 10 Hz의 펄스 반복 주파수와 트랜스 듀서의 주파수에서 10 사이클 사인파) 적용합니다. 변환기의 자연 포커스 (우리 13mm 직경 2.15 MHz의 변환기에 대한 약 60 ㎜)에서 초음파 빔의 중심에 있어야 정상 응답을 찾기 위해 3 축 번역 단계를 사용하십시오.
  3. 울렸다 통해 여러 측정 만들기시스템의 선형성을 확인하기 위해 입력 전압의 전자 (예 : 50-400 MV PP). 입력 전압과 음향 압력 사이의 관계를 추정하는 간단한 선형 회귀를 사용하십시오. 저희 시스템에서는 258 및 167 MV PP의 입력 전압은 0.52와 0.36 MPA의 피크 - 부정적인 음향 압력에 통신을.
  4. 프로그램 신호 발생기를 50,000 버스트 당 사이클 및 64 MS의 버스트주기와 변환기 주파수에서 sinusoidal 펄스의 파열 구성된 초음파 펄스 시퀀스를 생성합니다. 교정 측정을 바탕으로 변환기의 자연 초점의 중심에서 0.36 MPA의 피크 - 부정적인 음향 압력을 생성하는 펄스 진폭을 설정합니다.

2. 시약을 준비한다

  1. 100 밀리미터 (300 mOsM) 및 필터 소독의 농도에서 살균 물에 망간 염화물 tetrahydrate (MnCl 2 · 4H 2 O)를 해산.
  2. "activati​​n 의해 perflutren 지질 microspheres를 생산G는 "45의 제조 업체에서 제공한 교반기의 약병. 실험 하루 들면, 하나의 약병은 하루를 시작할 때 한 번만 활성화와 하루의 휴식을위한 재활 성화없이 사용할 수 있습니다.
  3. microsphere 행정에 바로 전에, microspheres를 resuspend 위해 1 분 동안 손으로 유리병을 선동하다. 이것은 남아있는 microbubbles를 저하로 병을에서 microbubbles을 철수하면, 유리병으로 실내 공기를 주입하지 않습니다. 오늘의 마지막 사용 때까지 유리병을 남겨 후 냉장고에 보관. 이런 방식으로 유지, 하나의 약병은 몇 일간 지속될 수 있습니다. 이전 이후 일 처음으로 사용, 교반기에 저장된 약병을 다시 활성화.

3. 동물 준비

  1. 코 콘에 의해 전달, isoflurane과 동물을 마취. 코 콘 장치는 동일한 위치에 각 시간에 정확하고 안정 동물의 머리를 해결할 수 있도록 설계되어야합니다. 우리 장비가 15 일 안에 머리를 유지전자 Paxinos 뇌 아틀라스 16에 사용되는 '두개골 - 플랫 "위치 (즉, 지느러미 두개골 표면이 수평입니다.) 85 125 숨을 당 분 간의 호흡 속도를 유지하기 위해 마취를 적정하다. 가열 램프 또는 파열된 공기를 사용하여 체온을 유지합니다. 윤활제로 눈을 보호합니다.
  2. 전기 트리머를 사용하여 마우스 두피에서 머리카락을 제거합니다.
  3. 꼬리 정맥 카테터와 intraperitoneal (IP) 카테터를 놓습니다. 생존 연구의 경우 적절한 무균 기술을 사용해야합니다;이 기사에 대한 동영상에서 시연 IP 카테터 배치는 아닌 생존 실험에 적합합니다.
  4. 의 연결을 자극 실험에 필요한 추가 준비를합니다. 배럴 필드 피질의 vibrissae 자극 매핑을 보려면 자극적 뿌리 주위를 둘러싸고있는 피부가없이 가장 가까운 가능한 피부 표면 vibrissae를 잘라 해부 현미경과 microsurgical 가위를 사용합니다.
  5. 의 장소 초음파 젤두피 후 머리쪽으로 얇은 플라스틱 시트 (예, 7.6 μm의의 쓰레기통 라이너)에 의해 포함된 낮은 물이 칼럼. 초음파 젤에 갇혀받을 모든 공기 방울을 밀어 솜 스쳐 면봉으로 물 기둥을 통해 도달. 직접 마우스 뇌 이상의 물을 열에 자연 초점 거리 (58 ㎜)에 초음파 변환기를 배치하고, 모든 갇힌 공기 방울을 제거하려면 손가락 팁 함께 변환기를 닦아냅니다.

4. Microbubbles 및 울트라 사운드 (BOMUS)와 혈액 - 뇌 장벽 개관

  1. 0.5 mmol / kg IP의 복용량에서 망간 용액의 intraperitoneal 주사를 줘. 망간가 흐름, 그리고 (그림 1)은 배포할 수 있도록 10 분 정도 기다려야하지 않도록 intraperitoneal 카테터를 쏠.
  2. BBB를 열려면 꼬리 정맥 카테터를 통해 perflutren 지질 microspheres (활성화 DEFINITY) 30 μL를 관리하고, 동시에, 초음파 펄스 시퀀스를 시작합니다. C3 분 insonification을 ontinue.

5. 의 연결을 자극

  1. MN 2의 두뇌 레벨을 약 40 분간 허용 +의 연결을 자극을 시작하기 전에 안정화한다. 이런 방식에서는 MN이로 인해 극적인 기준 강화는 BBB 전체 + 확산은 자극으로 인해 미묘한 차등 향상 구분할 수 있습니다. 그렇다면, 선택의 패러다임 (그림 1)과 자극을 시작합니다.
  2. vibrissae 자극은 isoflurane을 끄고 코 콘을 제거합니다. 피부에서 약 2~5mm의 거리 vibrissae 배열을 통해 원형 운동 (1-5 Hz에서)에 수동으로 부드러운 작가의 페인트 브러시를 이동합니다. 90 분 대한 자극을 계속합니다. 망간은 동물의 억제 자극을 허용 진정제 효과가 있습니다. 동물이 불안되면, 약 15 초간 코 콘 통해 isoflurane 5 %를 관리할 수 있습니다.

6. MagnetiC 공명 이미징

  1. 자극 후, 코 콘을 통해 마취를 재개. 체온을 유지하고 85-125 심호흡 - 분당의 호흡 속도로 isoflurane 수준을 titrating 계속합니다.
  2. MR 이미징 코일에 마우스를 놓고 MRI 시스템에 전송할 수 있습니다. 고해상도 3D T 1-가중 MR 이미지를 취득. 예를 들어, 다음 매개 변수와 함께 에코 (SPGR) 시퀀스를 회상 3D 버릇없는 그라디언트 사용, 2 MS의 반향 시간, 30 도로의 플립 각도, 15.63 kHz에서의 대역폭, 25 MS의 반복 시간 20 뷰 × 20 ​​필드 × 12mm, 128 × 128 × 60 행렬.

7. 이미지 분석

  1. 이미지 분석에 사용되는 자극 패러다임에 따라 다릅니다. vibrissae 자극 실험 내용은 (그림 2), 적절한 분석 환경에 여러 동물로부터 이미지를 가져옵니다. 다른 사람은 왼쪽, FL에 자극 동안에 동물 오른쪽에 자극한다면IP 모든 이미지가 효과적 "왼쪽 자극된."되도록 몇 가지 그런 다음, 그 contralateral unstimulated 편으로 각 뇌의 자극 측면을 비교, 중복 및 왼쪽 unstimulated 이미지 집합이 만들어집니다 미러를 만듭니다. 일반적인 공간으로 모든 이미지를 등록 후 3 × 3 × 3 픽셀 가우스 커널을 부드럽게.
  2. 같은 MATLAB과 같은 수학적 분석 환경에 데이터를 내보냅니다. 선택적으로 데이터 세트에 무관한 해부를 덮으. Venot 외의 반복 방법으로 이미지를 강렬-정상화. 17,18.
  3. 각 뇌의 unstimulated 측면에 해당 contralateral voxel 각 뇌의 자극 측면의 각 voxel을 비교하는 이점, 단일 꼬리 t 테스트를 사용합니다.
  4. 차동 활동 영역 (그림 3)을 확인하는 결과 P-값지도를 표시합니다.

8. 대표 결과

여기에 제시된 방법은 두 가지 기금이 있습니다 amental 단계 : Microbubbles 및 초음파 (BOMUS)와 (1) BBB 오프닝 및 (2) 활성화 유발 망간 향상된 MRI (AIM MRI). 후자의 단계 전에 달려 있기 때문에 성공적인 구현 BOMUS를 확인하는 것이 중요합니다.

T 1-단축 대비 에이전트 (예 : 망간 또는 가돌리늄 기반 에이전트 등) T에서 뇌 실질 조직의 신호 증가 1-가중 영상에서 결과의 행정 후에 혈액 - 뇌 장벽의 파괴 두뇌에 비해 어느 BOMUS에서 (그림 4) 수행되지 않았습니다. 그것이 동물간에 매우 일관성이 있지만, 이러한 망간 향상의 분포는 완전히 균일하지 않습니다. 분포 BBB 오프닝에서뿐만 아니라 inhomogeneity를 반영뿐만 아니라 뇌의 19 이내 MN의 본질이 아닌 균일한 분포입니다. BBB 오프닝의 공간적 및 시간적 역학 관계는 더 이전 12 설명되어있다.

엔트 "> BOMUS이 성공적으로 구현되면 다음 단계는 목표는 MRI를 수행하는 것입니다 많은 실험적인 패러다임이 가능합니다,.. 그러나 많은 잠재력의 confounds, 컨트롤 및 분석 있기 때문에 신중하게 설계되어야 혼란함을 주죠 효과 inhomogeneous BBB 개구를 포함, 뇌, MN 확산의 시간적 역학 및 특이 현상의 연결 활동 MN의 inhomogeneous 축적.이 예제에서는 vibrissae의 일방적인 자극으로의 연결 응답이 매핑되었다. inhomogeneities와 미네소타 유량, 각 뇌의 unstimulated 측면 용도에 대한 상세한 설명 내부 통제로 사용되었다. 동물 사이에 차이가있을 특이 현상의 연결 행위를 정산하는 데, 분석 동물 (그림 2) 사이에서 일관되게 달랐다 영역을 식별하는 통계적 테스트를 사용했습니다. 결과는 입체 차이가지도하고 있었다 입체 P-값은지도 (그림 3), 영역을 표시하는 오른쪽의자극 vibrissae에 contralateral 높은 신호. 지도의 왼쪽 영역이 자극 vibrissae에 ipsilateral 상당히 높은 신호를 가지고있는 지적했다. P-값지도 응답 자극이 광범위하게 전기 생리학 20,21 및 2-deoxyglucose 연구에 의해 문서화되었습니다 vibrissae하는 일차 감각 피질의 배럴 필드로 통신을 자극 vibrissae에 contralateral 높은 신호의 광범위한 지역을 확인. 이러한 결과의 더 완전한 논의는 이전에 13 게시되었습니다.

그림 1
그림 1. BOMUS 및 AIM MRI (Howles 외에서 적응. 13)과 기능적인 neuroimaging을위한 프로토콜 타임 라인.

그림 2
지역 O를 식별하는 그림 2. 분석 제도각 뇌의 자극과 unstimulated 양측 간의 F 서로 다른 강도. 그 contralateral unstimulated 편으로 각 뇌의 자극 측면을 비교하려면이 중복과 왼쪽 unstimulated 이미지 집합이 만들어집니다 미러. 이러한 이미지는 등록 여과 및 표준됩니다. 마지막으로, 검사에서 왼쪽 자극과 왼쪽 unstimulated 이미지를 비교합니다. 각 뇌의 자극 측면에만 동일한 뇌의 unstimulated 측면에 비해되도록 t 시험은 "이점"입니다. t 시험은 P-값은지도의 반대쪽이의 unstimulated 측면에 상당히 높은 신호를 나타내며 P-값지도의 한쪽은 두뇌의 자극 측면에서 상당히 높은 신호를 나타냅니다 있도록 "단일 꼬리"입니다 뇌 (Howles 외에서 적응. 13).

그림 3
그림 3. 두 개의 서로 다른 축방향 위치에서 일곱 동물의 풀링된 분석 결과. 티 그는 첫 번째 열에는 효과적 모든 생쥐들이 왼쪽 vibrissae는 자극했다 있도록 정렬 등록된 모든 이미지의 의미를 보여줍니다. 이러한 이미지는 contralateral 반구 각 voxel 상대에서 신호의 평균 % 증가를 나타내는 컬러지도와 중첩되며, 같은 색상 막대로 표시. 자극에 contralateral 반구가 높은 신호를 가지고있는 이미지의 오른쪽에있는 컬러 지역 보여줍니다. 자극에 ipsilateral 반구가 높은 신호를 가지고있는 이미지의 왼쪽에 컬러 지역 보여줍니다. 두 번째 열은 신호의 증가의 통계적 의미를 나타내는 P-값지도 중첩 같은 이미지를 보여줍니다. 세 번째 열 (Howles 외에서 적응. 13) 음영 감각 피질의 총신 필드 Paxinos stereotaxic 아틀라스 16 일부터 해당 인물에 중첩 같은 P-값지도를 보여줍니다.

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그림 4. + 두뇌에 MN 2 공간적 분포. 이미지 (N = 5) 및 ​​제어 (N = 4) 생쥐에게 BOMUS-대우에서 0.5 mmol / kg IP MnCl이 후 170 분을 인수했다. 정규화 후, 의미 및 표준 편차지도는 (왼쪽 패널) 계산되었다. 향상은 BOMUS-대우 생쥐에 늘어납니다. 이러한 향상은 두뇌에 걸쳐 균일 아니었지만, 그것은 두뇌와 심실의 가장자리 근처를 제외하고 비교적 일관했습니다. 각종 구조물 주위에 그려진 관심 지역 (ROIs)을 사용하여 평균 SNR은 (+ 1 SD) 각 그룹 (오른쪽 패널)을 통해 계산되었다. BOMUS - 대우 동물은 큰 SNR을 보여주뿐만 아니라 구조 사이의과 동물 사이에 큰 편차 (Howles 외에서 적응. 13).

그림 5
그림 5. BOMUS의 조직 효과를 검토하기 위해서는 BOMUS-대우 생쥐의 두뇌는 고정되어 있었는데, SE500 ctioned - μm의 간격, 그리고 hematoxylin 및 eosin 물들일. 뇌의 각 부분에서 본 붉은 혈액 세포 extravasations의 평균 개수는 0.36 MPA (N = 3), 0.52 MPA (N = 4), 및 5.0 MPA (N = 1)의 음향 압력에 대해서만 표시됩니다. 오차 막대는 표준 오류를 표시합니다. 두 번째 패널은 5.0 MPA (Howles 외에서 적응. 12)에 노출 두뇌에서 심각한 적혈구의 넘쳐 흐름의 예를 보여줍니다.

그림 6
6 그림. 양적 행동 테스트를 마취하기 전에 활동, 각성, 그리고 응답을 평가하는 데 사용, 3, 24 시간 마취에서 회복 후되었습니다. 채점 시스템은, 이전에 12 설명이 잘 창업 양적 마우스 행동 평가 개발을 바탕으로했다1968 22 어윈에 의해 에드. 평균 동작 (± SEM) 제어를위한 점수 (N = 3)과 BOMUS (0.36 MPA) 취급 (N = 8) 동물이 표시됩니다. 사전 마취 기준에 상대적으로, 모든 동물 3 시간 마취 후 행동 점수의 감소를 보여,하지만 그들은 대부분 다음날로 복구합니다. 각 시점에서 아무런 차이가 BOMUS은 잴 수있을 정도로 동물의 행동을 (Howles 외에서 적응. 12)에 영향을 미치지 않았다고 나타내는 두 그룹 사이에 본 적이되었다.

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Discussion

여기 방법 noninvasively 초음파 및 microbubbles (BOMUS)로 전체 마우스 뇌 전체에 BBB를 열기 위해 제시되었다. BBB 오픈과 함께, MN 2 + 투여되었으며 활성화 유발 망간 향상된 MRI는 (AIM MRI) 가볍게 진정제를 생쥐의 짧은 기간 동안의 자극에 대한 이미지의 연결 응답에 사용되었다.

적절한 BBB 오프닝은 0.36 MPA의 피크 - 부정적인 음향 압력으로 실현됐다. 참고 이것은 초음파 빔의 중심에서 두피 표면의 압력이다. 단일 요소 변환기의 빔 프로파일 측정은 빔 가장자리 음향 압력이 약 0.12 MPA는 것을 나타냅니다. 그 후, 두개골을 통해 감쇠는 약 25 % 뇌에 도달 압력을 감소 (23. 토대로 derating 및 주파수에 따라 조정). 이것은 BBB 장애가 (우리의 빔의 중심에서 0.09 MPA의 피크 - 부정적인 음향 압력에서 발생 나타냅니다) 0.03 MPA (가장자리)에. 이러한 압력은 다른 곳에서 24 보고된 수준 (일반적으로 0.4-0.5 MPA)보다 낮습니다. 이 감소 압력 한계는 다른 사람에 비해이 작품 (약 1.2 ML / ㎏)에 사용되는 지질 microbubbles의 높은 복용으로 인해 발생했을 수 있습니다. 사용 microbubbles의 복용은 권장되는 진단 인간의 선량 (10 μL / ㎏)보다 높은있을 때, 부정적인 영향은 관찰되지 않았다.

여기에 지정된대로 BOMUS 기술은 비침 투와 가역 수 있지만 그것은 손상을 줄 수있는 잠재력을 가지고 있습니다. 이전의 작품 12, BOMUS로 치료 생쥐 histologic 손상 (그림 5)와 행동 변화 (그림 6)에 대해 평가했다. 0.36 MPA의 피크 - 부정적인 음향 압력이없이 관찰된 부정적인 영향 (그림 6)과 관련된 있었다. 그러나 0.52-MPA BOMUS는 동물의 하위 집합에서 했습니다만 적혈구 세포 extravasations 소수와 관련된 (

BOMUS 기법이 잠재적 피해는 것처럼, 망간 독성도 25 잘 알려져있다. MN 2 +는 신경근육학 접합 26 신경계 27 독성 영향을 미칠 것으로 알려져 있습니다. 이 효과에 대한 메커니즘은 알 수 있지만이 독성은 행정부 후 생쥐의 졸림에 대한 가능성이 담당합니다. 자극의 약 최초 60 분, 마우스가 약간 졸리는하지만 그러한 발가락 핀치 등의 통증 자극에 반응이 여전히 남아있다. 이것은 마우스가 물리적 구속없이 자극을 용납하실 수 있습니다. 우리의 경험에서이 졸림은 동물 불안이 될 수있는 후 60 분 정도에 적합합니다. 추가 화학적 구속이 될 수 있습니다nosecone 통해 isoflurane 5 % 약 15 초 정도로 필요에 따라 chieved. 이 예제에서, 졸림이 vibrissae의 자극을 촉진 있지만, 그것은 또한 배럴 피질에의 연결 반응을 감소된다.

단순히 MN 2 +의 관리 이외에 BOMUS 기술은 세계적으로 다른 진단 또는 치료 대리인을 관리하는 데 사용할 수 있습니다. 이전 직장에서 BOMUS가 뇌로 GD-DTPA, MRI 대비 에이전트를 관리하는 데 사용되었습니다. 그럼에도 불구하고 12 일 많은 질문 BOMUS 구현할 BBB의 투자율의 자연 현상에 대해 유지됩니다. 첫째, 크기 대리인 BOMUS 후 BBB를 건너 수있는 무엇 확실하지 않습니다. MN이 모두 +와 GD-DTPA (500 다)는 매우 작은 분자입니다. 둘째, 그것은 BBB의 투자율은 뇌 이상 차이가 얼마나 명확하지 않습니다. 셋째, 그것은 BBB가 열리는 비교적 이진 효과인지 여부를 확실하지 않습니다, 또는 특정 오프닝 파라미터는 재료의 크기 또는 속도에 영향을 미칠 수있다면침투. GD-DTPA는 위의 연구에 두뇌를 통해 비교적 균일하게 분포돼 있지만, 그것은 투자율의 모든 차이를 밝히지 너무 작고 너무 diffusible했을 수 있습니다.

BOMUS에 관한 이러한 불확실성에도 불구하고, 방법은 신속 + AIM-MRI의 목적을 위해 MN 2 관리를위한 효과적입니다. AIM-MRI는 생쥐 28-30의 장기 (1~2일) 자극에 대한 반응의 연결을 매핑하는 생쥐에 사용하지만,이 새로운 접근 방식으로 단기 자극 실험은 이제 가능되었습니다. 이전에는 미네소타 2의 급속한 행정부는 + hypertonic mannitol의 intracarotid 주입을 이용한 삼투 BBB 장애에서만 가능했습니다. 이 접근법은 쥐와 큰 동물 모델에서만 실천했지만 심지어 쥐에서는 이러한 연구는 기술의 invasiveness과 unilaterality에 의해 제한되었다. BOMUS가 noninvasively 수행할 수 있기 때문에 깨어있는 자극과 종방향 연구는 이제 수 있어야한다. 또한, 베카MN 2를 사용 + 양쪽 대뇌 반구를 관리하실 수 자극 패러다임의 넓은 범위가 가능합니다. 위의 예제에서, 양국 행정부 MN 2 + unstimulated 반구가 아닌 구체적인 배경 자극에의 연결 응답이 일방적 vibrissae의 자극에 대한 응답에서 분리 수 있도록 내부 통제의 역할을하는 것을 허용했다.

불특정 배경 자극에 대한 통제뿐만 아니라, unstimulated 반구도 망간 행정부의 균질성 및 일관성을위한 제어하는​​ 데 사용되었습니다. 다른 망간 향상된 MRI 실험 19에서 본 바와 같이, 유통 데이터는 (그림 4) BOMUS 기술은 두뇌의 균질 향상을 제공하지 않는다는 것을 나타냅니다. 따라서, 적절한 컨트롤 (컨트롤 동물이나 unstimulated 반구)없이 높은 기준 강화와 영역은 누구의 ele 지역의 구별하기가 어렵습니다vated 신호의 연결 활동으로 인한 것입니다.

기준 MN 2 + 강화가 균질하지, 패턴이 개인들 사이에 상당히 일치했지만. 그럼에도 불구하고,이 기준 향상에 조그만한 변화는 AIM-MRI 신호를 가리는 수 있습니다. 이 예제에서 우리는 여러 동물 이상의 AIM-MRI 신호를 평균하여이 잠재적인 문제를 해결. 또는 기준 강화의 차이는 사전 자극 이미지를 획득하여를 차지했다 수 있습니다.

여기에 제시된 방법은 바람에 높은 충실도 이미지 등록을 필요로 상당한 통계적 이미지 분석을 필요로합니다. 원본 데이터가 관심의 구조보다 충분히 미세한입니다 해상도 (전 3 차원에)와 함께 취득하는 경우 물론 이러한 등록은 의미이다. 이 예제에서는 3D 이미지는 거의 등방성 voxels과 우수한 허용 각각의 차원에서 약 160 미크론을 획득했다해부 등록. 그럼에도 불구하고, 이미지 등록 증진의 방법-약간 misregistration 수 평균 아웃 아주 작은 영역의 공간적 해상도를 제한할 수 있습니다. 그들은 가늘게 계층 증진을 가지고 뇌를 함께 제자리가 종종 있기 때문에 소뇌 및 후각 전구는 등록이 특히 어려울 수 있습니다.

여기, 우리는 깨어있는 생쥐의 짧은 기간 동안 자극에의 연결 응답을 매핑하는 방법을 제시했습니다. 간단하지가지만, 방법은 상대적으로 실용적이고 액세스할 수 있습니다. 제한과 미묘 이러한 세부적인 논의는 희망 독자가 자신의 실험적인 질문 기법을 적용할 수 있도록해야합니다.

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Disclosures

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

Acknowledgments

모든 작품은 VIVO 현미경에 대한 공작 센터, NIH / NIBIB에서 수행되었다 국립 바이오 메디컬 기술 리소스 센터 (P41 EB015897)와 NCI 작은 동물 이미징 자원 프로그램 (U24 CA092656). 추가 지원은 NSF 대학원 연구 원정 (2,003,014,921)에서 제공했습니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hydrophone Sonora Medical Systems, Longmont, CA SN S4-251
Translation stage Newport Corporation, Irvine, CA
Ultrasound transducer Olympus NDT, Inc., Waltham MA A306S-SU Review the manufacturer's test sheet that accompanies the transducer to find the exact center frequency of that particular transducer, which may differ from the nominal frequency listed in the catalog. (e.g., the nominal frequency of our transducer was 2.25 MHz, but the actual center frequency was 2.15 MHz.)
Vevo Imaging Station VisualSonics, Inc. Toronto, Canada
50 dB power amplifier E&I, Rochester, NY model 240L
Signal generator Agilent Technologies, Santa Clara, CA model 33220A
MnCl2-(H2O)4 Sigma Molecular weight varies by batch, call manufacturer for exact measurement
Perflutren lipid microspheres Lantheus Medical Imaging, N. Billerica, MA DEFINITY
Microsphere agitator Lantheus Medical Imaging, N. Billerica, MA VIALMIX
MR imaging coil m2m Imaging Corp., Hillcrest, OH 35 mm diameter quadrature transmit/receive volume coil
MRI system GE Healthcare, Milwaukee, WI GE EXCITE console operating a 7-T horizontal bore magnet
Image analysis environment Visage Imaging, San Diego, CA, MathWorks, Natick MA Amira MATLAB

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References

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