In vitro analys av PDZ-beroende Signaling CFTR makromolekylära komplex

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Cystisk fibros transmembran konduktans-regulator (CFTR), en epitelial kloridkanal, har rapporterats interagera med olika proteiner och reglera viktiga cellulära processer, däribland de CFTR PDZ-motivet-medierade interaktioner har dokumenterats väl. Detta protokoll beskriver metoder vi utvecklat för att montera en PDZ-beroende CFTR makromolekylära signalering komplex

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Wu, Y., Wang, S., Li, C. In Vitro Analysis of PDZ-dependent CFTR Macromolecular Signaling Complexes. J. Vis. Exp. (66), e4091, doi:10.3791/4091 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Cystisk fibros transmembran konduktans (CFTR), en kloridkanal belägen främst på de apikala membranen i epitelceller, spelar en avgörande roll i transepitelial vätska homeostas 1-3. CFTR har varit inblandad i två stora sjukdomar: cystisk fibros (CF) 4 och sekretoriska diarré 5. I CF är syntes eller funktionella aktiviteten av CFTR Cl-kanalen minskas. Denna störning drabbar cirka 1 på 2.500 vita i USA 6. Överdriven CFTR aktivitet har också varit inblandad i fall av toxin-inducerad sekretoriska diarré (t.ex. genom kolera toxin och värme stabilt E. coli enterotoxin) som stimulerar cAMP eller cGMP produktion i tarmen 7.

Ackumulerande bevis tyder på förekomsten av fysiska och funktionella interaktioner mellan CFTR och ett växande antal andra proteiner, inklusive transportörer, jonkanaler, receptorer, kinaser, fosfataser, signalIng-molekyler, och cytoskelettala element och dessa interaktioner mellan CFTR och dess bindande proteiner har visat sig vara kritiskt involverade i regleringen av CFTR-medierad transepitelial jontransport in vitro och även in vivo 8-19. I detta protokoll, fokuserar vi bara på de metoder som stöd i studiet av samspelet mellan CFTR karboxylterminala svans, som har en protein-bindande motiv [kallas PSD95/Dlg1/ZO-1 (PDZ) motiv] och en grupp byggnadsställning proteiner, vilka innehåller en specifik bindningspartner modul kallad PDZ domäner. Hittills har flera olika PDZ ställningsdelar proteiner har rapporterats binda till den karboxylterminala änden av CFTR med olika affiniteter, såsom NHERF1 och NHERF2 och PDZK1 och PDZK2, CAL (CFTR-associerad ligand), Shank2, och gripa 20-27. Den PDZ motivet inom CFTR som är erkänd av PDZ ställning proteiner är de sista fyra aminosyrorna vid C-terminalen (dvs. 1477-DTRL-1480 i mänsklig CFTR) 20. Intressant nogCFTR kan binda mer än en PDZ-domänen av både NHERFs och PDZK1, om än med varierande affinitet 22. Detta multivalens med avseende på CFTR bindning har visat sig vara av funktionell betydelse, vilket antyder att PDZ ställningsdelar proteiner kan underlätta bildning av CFTR makromolekylär signalering komplex för specifika / selektiva och effektiva signalering i celler 16-18.

Flera biokemiska analyser har utvecklats för att studera CFTR-involvera proteininteraktioner, såsom sam-immunoutfällning, neddragningstransistor analys parvisa bindningsanalys, kolorimetrisk parvisa bindningsanalys och makromolekylärt komplex sammansättning analys 16-19,28,29 . Här fokuserar vi på de detaljerade förfaranden för montering en PDZ motiv-beroende CFTR-innehållande makromolekylära komplex in vitro, som används i stor utsträckning av vårt laboratorium för att studera protein-protein eller domän-domän interaktioner mellan CFTR 16-19,28,29.

Protocol

1. Expression och rening av rekombinanta taggade fusionsproteiner i bakterier

  1. Amplifiera definierade områden av den C-svansar (de sista 50-100 aminosyror innehållande de PDZ-motiv vid C-terminalen) för CFTR, 2 LPA, MRP2, MRP4, β 2 pa, och NHERFs (full längd eller PDZ1 eller PDZ2 domäner ) av PCR-metoden.
  2. Klona PCR-produkter in pGEX4T-1-vektorn för GST-fusionsproteiner (såsom GST-NHERFs, GST-MRP4 CT), pMAL-c2-vektorn för MBP-fusionsproteiner (såsom MBP-β 2 AR CT, MBP-CFTR CT ) och pET30 för hans-S-fusionsproteiner (såsom His-S-CFTR CT, His-S-PDZK1).
  3. Transformera i en proteas-defekta E. coli-stam (BL21-DE3) för att minimera eventuell rekombinant protein nedbrytning.
  4. Växa i kultur över natten vid 37 ° C i Luria-Bertani-medium (pH 7,0) innehållande lämpliga antibiotika (såsom ampicillin eller kanamycin). Späd den resulterande kulturen vid 1:10 och växa under ytterligare 2 h vid 37 ° C. IDuce med 0,5-1 mM IPTG under de följande 4 h vid 30 ° C. Pelletera cellerna genom centrifugering vid 8000 x g under 10 min vid 4 ° C.
  5. Lysera cellerna i sackarosbuffert (50 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF och 10% sackaros) innehållande lysozym (1 mg / ml), 0,2% Triton X-100, och proteas inhibitorer. Använd 20 ml för cellpellet härrör från 1 liter kultur.
  6. Blanda på en roterande skakanordning under 30 min vid 4 ° C.
  7. Snurra vid 20.000 x g under 30 min vid 4 ° C. Uppsamling av den klara supernatanten.
  8. I den klara supernatanten, tillsätt 1 ml av följande harts / agaros-pärlor (50% uppslamning i sackarosbuffert):
    • Glutation-agarospärlor för GST-fusionsproteiner.
    • Talon pärlor för His-S-fusionsproteiner.
    • Amylosharts för MBP-fusionsproteiner.
  9. Blanda under 4 h vid 4 ° C på en roterande skakanordning.
  10. Tvätta pärlorna genom återsuspendering i 1 x PBS (15 ml), blandning för 2 miln, spinning vid 800 x g under 2 minuter, och kasta supernatanten. Upprepa detta steg för sex gånger.
  11. Eluera proteinet från pärlorna med hjälp av respektive elueringsbuffert (2 ml elueringsbuffert per 1 ml pärlor).
    • Elueringsbuffert för GST-fusionsproteiner: 25 mM Tris-HCl (pH 8,0), 140 mM NaCl och 20 mM reducerad glutation.
    • Elueringsbuffert för His-fusionsproteiner: 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 500 mM NaCl och 200 mM imidazol.
    • Elueringsbuffert för MBP-fusionsproteiner: 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT och 10 mM maltos.
  12. Dialysera de eluerade proteinerna mot 2 L av 1 x PBS vid 4 ° C (för att undvika eventuell nedbrytning av protein). Byt PBS var 4: e h för fyra gånger. Koncentrera proteinet med användning av en Centricon-filter (10.000 MW cutoff, Millipore) och lagrar som små alikvoter vid -80 ° C.
  13. DEThermelin proteinkoncentrationen genom Bradford-metoden. Bedöma kvaliteten proteinet genom SDS-PAGE med användning av BSA som standard. Om integriteten av proteinet inte är tillfredsställande, kan sekundära reningsförfaranden såsom gelfiltrering eller jonbyteskromatografi användas. (T.ex., har vi använt en G-75 Sepharose-kolonn för att ytterligare rena GST-fusionsprotein).

2. Cell Culture och Cell Lysate Förberedelse

  1. Kultur babyhamsternjure (BHK)-celler som stabilt överuttrycker CFTR-vikt och CFTR-his10 eller BHK-celler som övergående överuttrycka Flag-LPA 2-wt eller Flag-LPA 2-ΔSTL och Madin-Darby Canine Kidney (MDCK -celler som stabilt överuttrycker MRP2 i Eagles minimala essentiella medium (MEM) innehållande 10% fetalt kalvserum och penicillin / streptomycin i polystyren-kolvar vid 37 ° C med 5% CO2.
  2. Kultur humana embryonala njurceller 293 (HEK293-celler) som stabilt överuttrycker CFTR-vikt och CFTR-his10 i Dulbecco'S modifierade Eagle-medium (DMEM) kompletterat med 10% fetalt bovint serum och penicillin / streptomycin i polystyren-kolvar vid 37 ° C med 5% CO2.
  3. Lysera cellerna i lysbuffert (PBS - 0,2% Triton-X-100 kompletterat med en blandning av proteasinhibitorer innehållande 1 mM fenylmetylsulfonylfluorid, 1 | ig / ml aprotinin, 1 | ig / ml leupeptin, 1 ug / ml pepstatin) och användning 500 | il lysbuffert till varje 60-mm Petri-skål och 1000 pl lyseringsbuffert för varje 100-mm Petri-skål.
  4. Gungas cellysat i 20 min vid 4 ° C, och avlägsna det olösliga materialet genom centrifugering vid 16.000 x g under 15 min vid 4 ° C. Bestämma proteinkoncentrationen genom Bradford-analysen.

3. In vitro Sammansättning av en CFTR-innehållande Macromolecular Complex (CFTR-PDZK1-MRP4)

  1. I 200 ^ il lysbuffert (PBS - 0,2% Triton-X 100 + proteas-inhibitorer), tillsätt 20 | ig renat GST-MRP4-C-terminala50 aa (CT50)-fusionsprotein.
  2. Lägg olika mängder (0-40 ng) av renat His-S-PDZK1 fusionsprotein.
  3. Blanda de två proteinerna på en roterande bländare vid 22 ° C under 1-2 timmar.
  4. Tillsätt 20 pl glutation pärlor (50% uppslamning) i proteinblandningen, och fortsätter att blanda under ytterligare 1 timme. Detta steg betecknas även såsom parvisa bindning.
  5. Under denna tid framställa HEK293 cellysaten som överuttrycker Flag-CFTR (vikt) som beskrivet ovan i steg 2).
  6. Tvätta komplexet två gånger med lysbuffert. Snurra med 800 x g under 1 min för varje tvätt-och noggrant aspirera supernatanten efter varje tvätt. Iakttag försiktighet inte att suga bort kulorna i botten.
  7. Tillsätt de ovan framställda HEK293 cellysat till pärlorna, och försiktigt blanda vid 4 ° C under 3 h (eller över natten).
  8. Tvätta pärlorna extensivt tre gånger med lysbuffert såsom beskrivs i Steg 3,6).
  9. Eluera proteinerna med användning av 30 | il provbuffert (5 x): 0,6 M Tris-HCl (pH 6,8), 50% glycerol, 2% SDS och 0,1% bromfenolblått; innehållande 5% β-merkaptoetanol.
  10. Inkubera i 37 ° C vattenbad under 10-15 min, och centrifugera vid 5000 x g under 30 s för att fälla ut pärlorna.
  11. Ladda alla eluatet på 4-15% gel.
  12. Köra SDS-PAGE under ca 30-40 min.
  13. Överföra proteinband till PVDF-membran, under 1,5 timmar.
  14. Blockera membranet i TBS-Tween innehållande 5% icke fet mjölk.
  15. Inkubera membranet med primär antikropp (t.ex. anti-CFTR-IgG, R1104) vid 4 ° C över natten.
  16. Tvätta membranet med TBS-Tween under 5 min, sex gånger.
  17. Inkubera membranet med sekundär antikropp (såsom get-anti-mus-HRP-konjugerad 2: a antikropp) under 45 min vid 22 ° C.
  18. Tvätta membranet med TBS-Tween under 5 min, sex gånger.
  19. Visualisera proteinbanden via ECL.
  20. Representativa data visas i figur 1.
jove_title "> 4 Representativa resultat

Ett exempel på CFTR-innehållande makromolekylära signalering komplex som sattes samman in vitro visas i figur 1. Ett makromolekylärt komplex som bildas mellan MRP4 C-terminala 50 aminosyrorna (MRP4-CT50) och PDZK1 och fullängds CFTR (figur 1, nedre). Komplexbildningen ökade på ett dosberoende sätt med ökande mängder av det mellanliggande proteinet, PDZK1 (figur 1, nedre) 18.

Figur 1
Figur 1. En illustration av den makromolekylära komplexet analys (överst). Ett makromolekylärt komplex detekterades in vitro med tre proteiner (GST-MRP4-CT50, His-S-PDZK1 och Flag-CFTRwt) i en dos-beroende sätt (botten) 18.

2 AR (ref. 14) CFTR-NHERF2-LPA 2 (ref. 15) CFTR-PDZ proteiner-MRP 2 (ref. 17) CFTR-PDZK1-MRP4 (ref. 16)
Affinitetspärlor Amylosharts S-proteinet agaros Amylosharts Glutation-agaros
Renat protein-1 MBP-β 2 AR CT His-S-CFTR CT MBP-CFTR CT GST-MRP4 CT
Renat protein-2 GST-NHERF1 GST-NHERF2 GST-PDZ proteiner His-S-PDZK1
Renat protein-3 (eller cellysat) CFTR-wt eller CFTR-his10 (BHK eller HEK cellysater) Flag-LPA 2-WT eller Flag-LPA 2-ΔSTL (BHK cellysater) MRP2 (MDCK-cell-lysat) Renat Flag-CFTR-WT eller CFTR-his10 (eller cellysater)
Antikropp Anti-CFTR IgG Anti-Flag HRP Anti-MRP2 IgG Anti-Flag HRP

Tabell 1. Sammanfattning av olika CFTR-innehållande makromolekylära komplex hopsatta in vitro.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I detta protokoll vi visat ett förfarande för in vitro montering och detektering av en CFTR-innehållande makromolekylärt komplex signalering genom att använda renade proteiner (eller proteinfragment) och / eller cellysat som rapporterats tidigare 16-19,29,30. För att uppnå bästa resultat följande kritiska punkter under beredningsprocessen kräver särskild uppmärksamhet:

  • Det är viktigt att pH för elueringsbufferten justeras till 8,0 efter tillsats av reducerat glutation vid rening av GST-fusionsprotein såsom beskrivits i steg 1). PH kan vara så låg som 3,0 efter tillsatsen av reducerat glutation. Om pH inte justerades före eluering, är effektiviteten av eluering reduceras drastiskt.
  • När proteinet elueras från pärlorna, måste de dialyseras direkt, i annat fall kan det renade proteinet kommer ut ur lösningen. Om protein dialys inte är möjligt direkt efter eluering processen, inte eluera inte proteinet och lämna dem med the agaros / pärlor.
  • Det rekommenderas starkt att inte koka CFTR innehåller makromolekylära komplexa prover bereds för Western blotting som CFTR aggregering är ett vanligt problem. I stället bör proverna värmdes vid 37 ° C under 10-15 min före laddas i gelén.
  • För proteinet komplex med låg affinitet interaktion kan immunoblot visualiseras med användning av supersignalen West Femto (eller Pico) Maximal känslighet substrat (Pierce) för att öka signalen.

Tekniken visas här tillhandahåller ett bekvämt och reproducerbar analys för att biokemiskt definiera en CFTR-innehållande tertiära proteinkomplex. Det finns flera sätt att montera in vitro CFTR makromolekylära komplex som beskrivs i tabell-1.

  • För att erhålla övertygande resultat, bör man försöka montera komplexet i båda riktningarna, dvs i) CFTR - PDZ ställning protein (er) - den tredje protein, ii) den tredje protein - PDZ ställning protein (s) - CFTR.
  • För att demonstrera den PDZ-motivet-beroendet av den makromolekylära komplexbildning, CFTR-his10 (CFTR-his10 innehåller 10 His-rester i den C-terminala svansen, vilket protein har en inre PDZ-motiv och inte kan binda NHERFs 29), proteiner med deras PDZ motiv muterade eller raderas (t.ex. β 2 AR-L413A, LPA 2-ΔSTL, etc) kan användas parallellt i makromolekylära komplex analysen också.
  • Istället för att använda hela lysat av celler som också innehåller många andra komponenter, kan man använda renade proteiner (såsom den tredje protein) vid steg 3.7) (såsom vid monteringen av MRP4-PDZK1-CFTR använde vi också den renade Flag-CFTR, ref 18).. Detta ger övertygande resultat av en enbart tri-protein komplex, eftersom det bara 3 renade proteiner i hela monteringssystem.

Emellertid detektering av CFTR makromolekylärt komplex in vitro med användning reninged proteiner (eller protein fragment) eller lysat från celler som överuttrycker CFTR eller interagerande proteiner inte anger om det makromolekylära signalering komplex existerar i celler som endogent uttrycker dessa interagerande proteiner. För att lösa detta problem kan samimmunoprecipitering utföras för att bedöma de endogena CFTR komplexen i celler såsom luftvägsepitelceller 16 och i tarmen epitelceller 17,18. Dessutom kan masspektrometrianalys och 2-dimensionell gelelektrofores 29 utföras för att identifiera okända bindningspartners för CFTR. Det är dock utanför ramen för detta protokoll för att visa dessa tekniker.

Dessutom kan den subcellulära lokaliseringen av interagerande proteiner in vivo påverkar också molekylära interaktioner. Till exempel har MRP4 visats uttryckas i såväl apikala och basolaterala membran, medan CFTR är lokaliserad huvudsakligen till det apikala membranet, även om de har varit demonstrated att interagera fysiskt och funktionellt med varandra via PDZ ställningen proteinet PDZK1 18. Dessutom överuttryck av de rekombinanta proteiner som används i det nuvarande protokollet, kan påverka deras subcellulär lokalisering och därigenom möjliggöra interaktioner som annars inte skulle uppstå. Dessa möjligheter bör också beaktas vid tolkning av data och extrapolera resultaten.

Även om det nuvarande protokollet fokuserar på förfarandet att montera PDZ-beroende CFTR innehåller makromolekylära komplex, har detta protokoll också potentiella tillämpningar i montering icke-CFTR inblandade multi-proteinkomplex (antingen PDZ-beroende eller oberoende). Helt nyligen, med användning av denna analys makromolekylär enhet, har vi visat att en kemokinreceptor CXCR2 fysiskt bildar en protein-komplex med sin nedströms effektor PLCβ 2 medierad via NHERF1 i neutrofiler, och detta CXCR2 makromolekylära komplexet har funktionellarelevans som stör komplexet (via användning av en exogen CXCR2 peptid) signifikant försvagade neutrofila funktioner 31.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Inga intressekonflikter deklareras.

Acknowledgments

Vårt arbete har finansierats med bidrag från American Heart Association (Greater sydöstra Affiliate) Början-bidrag-i-bistånd 0765185B, Elsa U. Pardee Foundation forskningsanslag, och Wayne State University intramural start fonden och Hjärt Forskningsinstitut Isis Initiative utmärkelse. Denna metod för in vitro-CFTR makromolekylära komplex sammansättning ursprungligen uppfunnen av Dr AP Naren (University of Tennessee Health Science Center).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
pGEX4T-1 vector GE Healthcare 28-9545-49 formerly Amersham Biosciences
pMAL-C2 vector New England BioLabs
pET30 vector EMD Chemicals 69077-3 formerly Novagen
Glutathione agarose beads BD Biosciences 554780
Amylose resin New England BioLabs E8021S
Talon beads Clontech 635501
reduced glutathione BD Biosciences 554782
imidazole Fisher BP305-50
maltose Fisher BP684-500
S-protein agarose EMD Chemicals 69704-3 formerly Novagen
Anti-Flag HRP Sigma A8592
Anti-CFTR IgG Custom-made R1104 mAb recognizing CFTR epitope at a.a. 722-734
Anti-MRP2 IgG Chemicon International MAB4148 Now a part of Millipore

Table 2. Specific reagents and equipment.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Anderson, M. P. Demonstration that CFTR is a chloride channel by alteration of its anion selectivity. Science. 253, 202-205 (1991).
  2. Bear, C. E. Purification and functional reconstitution of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR. Cell. 68, 809-818 (1992).
  3. Quinton, P. M. Chloride impermeability in cystic fibrosis. Nature. 301, 421-422 (1983).
  4. Cheng, S. H. Defective intracellular transport and processing of CFTR is the molecular basis of most cystic fibrosis. Cell. 63, 827-834 (1990).
  5. Gabriel, S. E., Brigman, K. N., Koller, B. H., Boucher, R. C., Stutts, M. J. Cystic fibrosis heterozygote resistance to cholera toxin in the cystic fibrosis mouse model. Science. 266, 107-109 (1994).
  6. Li, C., Naren, A. P. CFTR chloride channel in the apical compartments: spatiotemporal coupling to its interacting partners. Integr. Biol (Camb). 2, 161-177 (2010).
  7. Chao, A. C. Activation of intestinal CFTR Cl- channel by heat-stable enterotoxin and guanylin via cAMP-dependent protein kinase. Embo. J. 13, 1065-1072 (1994).
  8. Gabriel, S. E., Clarke, L. L., Boucher, R. C., Stutts, M. J. CFTR and outward rectifying chloride channels are distinct proteins with a regulatory relationship. Nature. 363, 263-268 (1993).
  9. McNicholas, C. M. Sensitivity of a renal K+ channel (ROMK2) to the inhibitory sulfonylurea compound glibenclamide is enhanced by coexpression with the ATP-binding cassette transporter cystic fibrosis transmembrane regulator. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 8083-8088 (1996).
  10. Schreiber, R., Nitschke, R., Greger, R., Kunzelmann, K. The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activates aquaporin 3 in airway epithelial cells. J. Biol. Chem. 274, 11811-11816 (1999).
  11. Shumaker, H., Amlal, H., Frizzell, R., Ulrich, C. D. 2nd, Soleimani, M. CFTR drives Na+-nHCO-3 cotransport in pancreatic duct cells: a basis for defective HCO-3 secretion in CF. Am. J. Physiol. 276, 16-25 (1999).
  12. Ahn, W. Regulatory interaction between the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator and HCO3- salvage mechanisms in model systems and the mouse pancreatic duct. J. Biol. Chem. 276, 17236-17243 (2001).
  13. Sugita, M., Yue, Y., Foskett, J. K. CFTR Cl- channel and CFTR-associated ATP channel: distinct pores regulated by common gates. Embo. J. 17, 898-908 (1998).
  14. Naren, A. P. Regulation of CFTR chloride channels by syntaxin and Munc18 isoforms. Nature. 390, 302-305 (1997).
  15. Naren, A. P. Syntaxin 1A is expressed in airway epithelial cells, where it modulates CFTR Cl(-) currents. J. Clin. Invest. 105, 377-386 (2000).
  16. Naren, A. P. A macromolecular complex of beta 2 adrenergic receptor, CFTR, and ezrin/radixin/moesin-binding phosphoprotein 50 is regulated by PKA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100, 342-346 (1073).
  17. Li, C. Lysophosphatidic acid inhibits cholera toxin-induced secretory diarrhea through CFTR-dependent protein interactions. J. Exp. Med. 202, 975-986 (2005).
  18. Li, C. Spatiotemporal coupling of cAMP transporter to CFTR chloride channel function in the gut epithelia. Cell. 131, 940-951 (2007).
  19. Li, C., Schuetz, J. D., Naren, A. P. Tobacco carcinogen NNK transporter MRP2 regulates CFTR function in lung epithelia: implications for lung cancer. Cancer Lett. 292, 246-253 (2010).
  20. Hall, R. A. A C-terminal motif found in the beta2-adrenergic receptor, P2Y1 receptor and cystic fibrosis transmembrane conductance regulator determines binding to the Na+/H+ exchanger regulatory factor family of PDZ proteins. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 8496-8501 (1998).
  21. Short, D. B. An apical PDZ protein anchors the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator to the cytoskeleton. J. Biol. Chem. 273, 19797-19801 (1998).
  22. Wang, S., Yue, H., Derin, R. B., Guggino, W. B., Li, M. Accessory protein facilitated CFTR-CFTR interaction, a molecular mechanism to potentiate the chloride channel activity. Cell. 103, 169-179 (2000).
  23. Sun, F. E3KARP mediates the association of ezrin and protein kinase A with the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in airway cells. J. Biol. Chem. 275, 29539-29546 (2000).
  24. Cheng, J. A Golgi-associated PDZ domain protein modulates cystic fibrosis transmembrane regulator plasma membrane expression. J. Biol. Chem. 277, 3520-3529 (1074).
  25. Scott, R. O., Thelin, W. R., Milgram, S. L. A novel PDZ protein regulates the activity of guanylyl cyclase C, the heat-stable enterotoxin receptor. The Journal of biological chemistry. 277, 22934-22941 (1074).
  26. Lee, J. H. Dynamic regulation of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator by competitive interactions of molecular adaptors. The Journal of biological chemistry. 282, 10414-10422 (2007).
  27. Gee, H. Y., Noh, S. H., Tang, B. L., Kim, K. H., Lee, M. G. Rescue of DeltaF508-CFTR trafficking via a GRASP-dependent unconventional secretion pathway. Cell. 146, 746-760 (2011).
  28. Naren, A. P. Methods for the study of intermolecular and intramolecular interactions regulating CFTR function. Met. Molecul. Med. 70, 175-186 (2002).
  29. Li, C., Roy, K., Dandridge, K., Naren, A. P. Molecular assembly of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in plasma membrane. The Journal of biological chemistry. 279, 24673-24684 (2004).
  30. Li, C., Naren, A. P. Analysis of CFTR Interactome in the Macromolecular Complexes. Met. Molecul. Med. 741, 255-270 (2011).
  31. Wu, Y. A chemokine receptor CXCR2 macromolecular complex regulates neutrophil functions in inflammatory diseases. J. Biol. Chem. (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics