Tissue Engineering: Konstruktion av en flercellig 3D Scaffold för Leverans av Layered Cell Sheets

1School of Engineering, University of California, Merced
Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Turner, W. S., Sandhu, N., McCloskey, K. E. Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets. J. Vis. Exp. (92), e51044, doi:10.3791/51044 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Många vävnader, till exempel vuxna människors hjärtan, inte på ett adekvat sätt regenerera efter skada. 2,3 Strategier i vävnadsteknik föreslå innovationer för att hjälpa kroppen återhämtning och reparation. Till exempel kan TE metoder kan dämpa hjärt ombyggnad efter hjärtinfarkt (MI) och möjligen öka den totala hjärtfunktion till en nära normal pre-MI-nivå. 4 Som med alla funktionella vävnad, framgångsrik förnyelse av hjärtvävnad innebär korrekt leverans av flera celltyper med miljö signaler som gynnar integrationen och överlevnad implanterade celler / vävnad transplantat. Engineered vävnader bör åtgärda flera parametrar inklusive: lösliga signaler, cell-till-cell interaktioner och matrismaterial, uttryckt som leveransfordon, deras effekter på cellöverlevnad, materialhållfasthet och underlättande av cell-till-vävnadsorganisation. Studier som utnyttjar direktinsprutning av moderceller bara ignorera dessa grundsatser. 2,5,6En vävnads design som kombinerar dessa ingredienser har ännu inte utvecklats. Här presenterar vi ett exempel på integrerade konstruktioner med hjälp av skiktning av mönstrade cellark med två distinkta typer av biologiska härledda material innehållande målorganet celltyp och endotelceller för att öka nya fartyg bildning i "vävnad". Även om dessa studier fokuserar på generering av hjärtliknande vävnad, kan denna vävnad utformning tillämpas på många andra än hjärta med minimala ändra design och material organ, och är tänkt att vara en off-the-shelf produkt för regenerativa terapier. Protokollet innehåller fem detaljerade steg. En temperaturkänslig Poly (N -isopropylacrylamide) (pNIPAAM) används för att belägga vävnadsodlingsskålar. Sedan, vävnadsspecifika celler odlas på ytan av de belagda plattorna / micropattern ytor för att bilda cellark med starka sido sammanväxningar. För det tredje är en bas matris skapas för vävnaden genom att kombinera porös matris med neovaskulärt Permissive hydrogeler och endotelceller. Slutligen är de cellskikt lyfts från de pNIPAAM belagda rätter och överföras till baselementet, vilket gör den kompletta konstruktionen.

Protocol

1 Skapande av pNIPAAM-belagda Plates

  1. Lös upp 2,6 g pNIPAAM i 2 ml av en 60% toluen / 40% hexan-lösning.
  2. Värm blandningen till 60 ° C under 10 min omrördes, tills pNIPAAM är upplöst.
  3. Skär filterpapper i en cirkel 60 mm diameter och plats papper i Biichnertratt.
  4. Filtrera lösningen genom Buchner tratt in i den på förhand vägda glasbägare (använd inte plast enligt hexan smälter plast).
  5. Placera bägaren och innehåll i en klocka vakuum (24 psi) O / N (16 timmar). Obs: Till återstoden reagera med isopropyl det oxiderar så se till att den inte kommer i kontakt med syre.
  6. Väg bägaren för att fastställa vikten av den pNIPAAM.
  7. Lägg isopropylalkohol till pNIPAAM, vilket skapar en 50/50 vikt / vikt lösning.
  8. Placera 2 ml av lösningen på ytan av vävnadsodlingsplatta, och kappa för fem minuter under UV-ljus.
  9. Tvätta plattan med 2 ml varmt PBS två gångerinnan du använder för cellodling.

2 Skapande av Cell Sheets

Obs: Cell ark primära celler för målorganet kan skapas med hjälp av ett antal olika metoder, eller genom att belägga vävnadsodlingsytor med värmekänslig polymer som beskrivs här. Pre-belagda värmekänsliga plattor erbjuds också av ett antal leverantörer.

OBS: Detta protokoll är kultur med hjälp av en 35 mm skål. Kortfattat, celler först inkuberas vid 37 ° C under ett minimum av 24 h vid sammanflödet för att upprätta sidoförbindelser mellan angränsande celler. För att frigöra cellblad är plattorna utsätts för temperaturer under 32 ° C. Cellen arket överförs sedan till den starka basen fibrös matris innehållande en neovaskulär permissive hydrogel med vaskulära endotelceller.

  1. Isolera cellpopulationen. Notera: Denna metod är beroende av de enskilda härledning förfaranden och den typ av celler. Råtta aorta smidig muscle celler (RASMC) används i detta exempel. Dessa är primära glatta muskelceller isolerade från bukaortan hos en råtta.
  2. Tvätta cellerna med 2 ml varmt PBS.
  3. Lägg 3 ml trypsin (eller annan klyvnings / frikoppla lösning) till cellerna under 5 min.
  4. Inhibera trypsinet genom tillsats av 3 ml av odlingsmedia, eller fosfatbuffertlösning (PBS) innehållande 10% fetalt bovint serum (FBS).
  5. Samla cellerna i ett koniskt rör och räknas en alikvot.
  6. Snurra cellerna vid 1000 rpm (228 xg) i 5 min.
  7. Aspirera supernatanten och suspendera cellerna i deras tillväxtmedier (SmGM2 plus kula kit odlingsmedium används för RASMC).
  8. Placera medier som innehåller cellerna på en 35 mm termokänsliga plattan - pNIPAAM belagd platta vid en koncentration som kommer att uppnå 100% sammanflödet. Anmärkning: För RASMCs det antalet bestämdes till 100.000 celler / cm 2. Men på grund av förlust av celler under förbigående, 120% av det va lue används.
  9. Placera i en inkubator vid 37 ° CO / N. Observera: Det är viktigt att bibehålla cellerna vid 37 ° C för att upprätthålla cellvidhäftning till plattan.

3 Beredning av Grundforskningen Matrix

Anm: Olika 3D fibrösa matriser kan användas till lager stark fibermatris mellan de känsliga cellblad. Några exempel är: gelfoam, bioglas, naturliga acellularized material 26 eller nanospun material 27,28 Den svin urinblåsan matris (UBM) användes i dessa studier var generöst tillhandahålls från vår samarbetspartner, Dr Badylak 29.

  1. Före användning, bestämma matrisegenskaper, inklusive icke cellulära innehåll om decellulariseras matris används, 27,28 cellspecifika livskraft och tomrum. 22
  2. Skär försteriliserad matris till en önskad storlek och form. Anmärkning: Här är ett hål-stans används för att skära en cirkel 4 mm diameter.
ve_title "> 4. sådd endotelceller till ett neovaskulärt Tillåt Hydrogel

Anm: Endotelceller kan erhållas från en mängd olika källor, inklusive differentiering från stamceller eller progenitorceller. Här HUVEC användes.

  1. Använd någon tillåt hydrogel (fibrin, kollagengeler) så länge som tvärbindningstiden räcker kort för att låta cellerna vara ekonomiskt lönsam. Obs: Här, en Hyaluronan (HA) baserad gel tvärbunden med en disulfidbrygga används.
  2. Förbered HA hydrogel i enlighet med företagets protokoll.
  3. Samla endotelcellerna och sprida till en enda cell lösning med hjälp av 1x trypsin. Obs: Accutase eller Cell Dissociation Buffer skulle också kunna användas för enskild cell spridning.
  4. Deaktivera trypsin enzym genom att använda en lika stor mängd av sojaböntrypsininhibitor (om det är viktigt att celler inte kommer i kontakt med serum) eller 10% FBS i PBS, uttag av den lösning /-celler i ett 15 ml koniskt rör.
  5. Count cellerna och beräkna volymen som behövs för patch mått (tidigare kvantifierade). Obs: För en 4 mm lapp, är här 2 miljoner endotelceller används.
  6. Utdrag 2.000.000 celler, och placera i en ny 15 ml koniska rör.
  7. Snurra vid (228 x g) under 5 min.
  8. Aspirera supernatanten och lämnar cellerna som en pellet i en konisk tub.
  9. Blanda HA och gelatin flytande material i en 1: 1 ranson. Sedan till 80% av den totala volymen i det koniska röret innehållande pelleten.
  10. Resuspendera endotelceller i 1: 1 HA / Gelatin blandning
  11. Placera de suspenderade cellerna i HA / gelatin blandningen i botten fibrösa matrisen från steg 2.
  12. Lägg 1/5 (20 procent) av den önskade av tvärbindaren totala volymen
  13. Inkubera under en timme vid 37 ° C.

5. Isolering av cellark

  1. Ta bort de 35 mm pNIPAAM-behandlade plattor innehållande cellerna från inkubatorn och placeras i ett cellodlings huv vidRT.
  2. Snabbt aspirera media från cellerna, och tillsätt 2 ml 6% normal gelatin som har behandlats med värme till 37 ° C.
  3. Medan gelatinet fortfarande är varm, placera metallgitter i gelatinet, submerging det under ytan av det normala gelatin (film 1).
  4. Placera hela plattan på is för 5-7 min vilket gör gelatinet att härda.
  5. Efter 7 minuter, använd en spatel för att försiktigt separera gelatinkanterna från sidan av plattan, och sedan använda pincett för att lyfta metallgaller från plattan Anm: 6% gelatin, och cellarket ska lyfta med galler.
  6. Flytta cellarket till skålen och placera på toppen av basen fibrös matris-hydrogel kombination, noggrant ställa gittret ovanpå konstruktionen. Obs: apikala sidan av cellarket fortfarande kommer att vara i det övre läget.
  7. Tillsätt 2 ml varmt medium (37 ° C).
  8. Inkubera O / N tillåter arket av celler att vidhäfta till hydrogelens yta.
  9. Ta than metallgaller efter det att lösningen värms (cirka 1 timme), eller till nästa dag.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Flödesdiagrammet (Figur 1) visar den övergripande metod för tillverkning av den flerskiktade plåstret. Cell ark loss från pNIPAAM behandlade plattan genom att tappa av temperaturen under 32 ° C. Då cellarket placeras på toppen av den tvärbundna hydrogelen innehållande endotelcellema ympats in i den underliggande fibrösa matrisen (figur 1). De förbehandlade värmekänsliga plattorna kan också användas för att skapa cell ark. Särskilda topologiska ytor används för att specifikt mönster (dvs rikta) cellerna 30.

Basen fibrösa matrisen kan genereras från decellularizing nativ vävnadsmatrisen eller electrospun. Här var det fibrösa materialarket skars till en 4 mm diameter för plåstret bas (Figur 2A). Karakteriseringen av detta material är viktig för bestämning av mängden av hydrogel som kan användas för att fylla de tomma utrymmena. Den matris som används här har previously karaktäriseras och publiceras. 22

Hydrogelerna som innehåller endotelceller är tvärbundna efter tillämpning av de HA-hydrogel flytande komponenter till den fibrösa matrisen. Fluorescens / transmissionsmikroskopi visar levande celler färgade med Calcein AM (Figur 2B) som har fångats i tvärbunden hydrogel.

Processen att skapa cellarket avbildas (Figur 3), samt en jämförelse mellan våra egna pNIPAAM-belagda plattor och pre-belagda plattor som köps från en leverantör. RASMC utstrykes på pNIPAAM behandlade ytan under åtminstone 16 h vid 37 ° C. Denna minimitid gör att cellerna att etablera sina sido sammanväxningar boarder med angränsande celler (Figur 3A). Obs: Cellerna måste vara sammanflödet att etablera dessa sido inneboende. Efter odling under åtminstone 16 h, måste plattan av celler flyttas till RT för en droppe under 32 ° C och med användning av is feller 5-8 min påskyndar kylprocessen (Figur 3B). Temperaturfallet ändrar konformakontaktvinkeln hos materialet beläggningen tillåter cellarket att lyfta av plattan. Figur 3C visar cellarket lyft från plattan.

Plattor belagda i laboratoriet fungerat bra, efter någon optimering, för att skapa och flytta cellblad. Figur 4D visar ett sammanflytande monolager av RASMC före överföringen. När cellerna tilläts lyfta, bladen tenderade att lägga sig och hålla sig till sig själv (Figur 3E). Faktum manipulera cellblad på egen skapade pNIPAAM eller de köpt var svårt och ofta lett till rivning av arken (Figur 3F). Därför gjordes en lösning för överföring av arken utvecklats. När cellerna avlägsnas från inkubatorn och börja kyla, var 6% gelatin som används för att täcka cellerna med en ytterligare metall lattice inbäddade i gelén (figur 3G). Eftersom plattan kyldes cellerna lyfts, och gelatinet stelnar. Använd pincett, kan gelatin- gitter och cellblad tas bort tillsammans från odlingsplattan; allt på samma gång (figur 3H). Då dessa tre komponenter är placerade ovanpå baserade konstruktionen (Figur 3I). Här är cellen arket (rosa) mycket större än den underliggande basmatris (tjock vit matris under rosa cellarket). Cellbladet kan lätt trimmas till rätt storlek.

Den slutliga cell patch (Figur 4) skapas genom att skikta cellen arket på den förformade komplex av plåstret bas och tillåtande hydrogel. Från botten till toppen, att plåstret består av en fibrös matris som ympats med hyaluronan hydrogel innehållande endotelcellema och sedan cellarket skiktas på toppen av denna matris. Tidiga försök att manipulera cellark utan användning av gelatin / gitter apparATU resulterade i mycket små cellblad som ofta vikta och var rivna (Figur 4A-D sett från ovan). Figur 4A representerar ett tidigt lappar design sammansatt bild kombinera MitoTracker röda färgade RASMC (Figur 4B), kalcein AM grönt fluorescerande HUVECs (Figur 4C), och det överförda ljuset bild (Figur 4D). Närmare 10x bilderna levereras för cellarket och HA / Hydrogel utan matris (Figur 4E-H). Figur 4E är den sammansatta av mitotraker röd (Figur 4F), den kalcein AM grön HUVEC (Figur 4G) och det transmitterade ljuset ( Figur 4H). Utsikten underifrån (basmatris, HA / HUVEC), och cellBlad för varje komponent är show i figurerna 4I-L. De sammansatta bilder är Figur 4I, med de enskilda delarna representerade i figur 4J-L, figur 4J shows cellarket (röd), endotel-celler (gröna) är i fig 4K, och transmissionsbild (fig 4L) Den sammansatta bilden (figur 4M) visar plåstret med en enhetlig cell-ark som täcker hela området av matrisen utan någon vikning eller bristningar. Siffror 4M-P är också från botten tittar upp i matrisen. Figur 4N är cellarket, som innehåller Neutral Red. Igen, tjocka röda remsor visas runt matrisen eftersom arket viks på dessa områden direkt angränsande till kanten av matrisen. Transmission ljus avbildning (Figur 4O) visar morfologin för cellerna, och strukturen av matrisen. Slutligen (Figur 4P), har matrisen en särskild kvalitet på fluorescerande på samma våglängd som Dapi. Därför är ultraviolett excitation av matrisen som används för att tydligt visa den separera från cellarket (klarröd). Kanterna på lappen kan trimmas tillavlägsna eventuella kanter av arket som hänger över kanterna av matrisen.

Figur 1
Figur 1 Flödesschema för Tissue församlingen. Cell-skivor skapas genom att så celler på termoresponsiv pNIPAAM-belagda plattor, och ger tillräckligt med tid för celler att nå sammanflödet och skapa sido anslutningar till angränsande celler. Cellen arket frigörs genom att minska temperaturen (gul disk). Samtidigt är endotelceller inbäddade i en neovaskulär permissiv HA hydrogel injiceras i hålrumsutrymmet i starkare bas fibrösa matrisen, och kemiskt tvärbunden (vit skiva). Cellblad (gul disk) är sedan lager med endothelial matriskombination (vit), efter behov. Klicka här för attvisa en större version av denna siffra.

Figur 2
Figur 2. Bilder från Base Matrix och Endothelial inkapsling. (A) Den starkare bas fibrösa matrisen stansas till en rund form. Här en 4 mm i diameter används baseras på in vivo djurmodell. (B) HUVECs färgade med MitoTracker green (Calcein AM) suspenderade i HA hydrogel på ytan av basmatrisen (10X). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3 Skapande av Cell Sheets. (A) RASMC cultured på pNIPAAM behandlad 35 mm-rätter för 16 timmar (10X). (B) RASMC lyfte efter placering plattan på is i 5-7 min. (C) Bild på kanten av ett cellblad släppa från kommersiellt köpt termoresponsiv cellodlingsskål (10X). (DF) Bilder skildra liknande resultat för generering av cellblad från egen skapade pNIPAAM-belagda rätter. (D) Confluent RASMC odlas på 35 mm standardvävnadsodlingsplattor (4X). (E ) Efter kylning cellblad kontrakterade och vikta som de fristående (4X). (F) På grund av hur skör den encelliga ark, är cellblad ofta skadas vid lyft eller andra manipulationer (4X). (G) I För att mildra perforeringar i cellskiktet, var en metallskärm används som ett fysiskt stöd för att underlätta överföringen av cellark. RASMC färgades med neutral röd, täckt med 6% gelatin och en porös metallskärm stöd, ennd tillåts härda. (H) Med stöd av skärmen, är cellblad överförs med minimal skada (4X). (I) större RASMC cellblad lager (rosa färg) placerades sedan ovanpå den starkare bas fibrösa patch-hydrogel kombination (pil). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 4
Figur 4. Bilder av Layered Cellulär Patch. Celler odlades på en pNIPPAM belagda ytan och förflyttas sedan som ett ark på ytan av den fibrösa matrisen. Tidiga försök att inte överfördes med gelatin / metallgaller gav små trasiga fläckar (AD). (A) Sammansatt bild av (BD),(B) RASMCs i två ark färgade med Mitotracker röd, och (C) HUVECs färgade med grönt, och (D) i genomlysning. (E) Sammansatt bild av en cell-ark i kombination med starkare bas fibermatris-hydrogel kombination innehållande Calceing AM färgade HUVECs (grön) och (F) Mitotracker Red RASMCs. (G) Gröna fluorescerande HUVECs upphängd i en hydrogel. (H) Transmission bild av starkare bas fibermatris-hydrogel kombination. (I) Sammansatt bild sett från botten av plåstret uppåt genom starkare bas fibermatris (ej färgas), HA innehåller HUVECs (grön), och cell ark RASMCs (röd), respektive. (J) Red fluorescerande RASMCs plåt, sedd genom basen fibrösa matris hydrogel kombination. (K) Gröna fluorescerande HUVECs. (L) Transmission bild av plåstret konstruktionen.(M) Sammansatt bild av cell ark (röd) över basen fibrösa matris hydrogel kombination (autofluorescerande-blå). (N) Celler i skyddsmanteln basen fibrösa matris hydrogel kombinationen show ökad fluorescens vid kanterna beror på veckning av cellerna. (O) Transmission bild av konstruktionen. (P) Naturligt fibergrundmatris autofluorescerande i DAPI (blå våglängd). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Film 1 . Processen att överföra arken av celler markeras i det kompletterande filmen in tillsammans med dokumentet. Filmen visar, i stegvis process, avlägsnande av cellerna från inkubatorn; byte av media med 6% gelatin, insättning av the metallnät, kylning av cellerna på is, överföring av cellerna från pNIPAAM belagda skålen till en annan skål, en bild av cellerna under överföringen, och slutligen avlägsnandet av skärmen från arket.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De kritiska stegen i protokollet är: beläggning plåtytorna med termoresponsiv polymer och manipulera cellblad efter kylning plattorna. Eftersom olika celler uppvisar olika fysikaliska egenskaper, som adhesivitet, lyft tid bör optimeras för varje annan celltyp. Den andra, och mest påtagligt utmanande del av detta protokoll, kretsar kring manipulation av cellskiktet, en kritisk aspekt av metoder för vävnads montering. Singeln cellskiktet i cellarket är ganska bräcklig och kan riva lätt om manipulerade med pincett. Dessutom, när cell bladen inte hålls på plats, de tenderar att dra ihop sig och kan lägga sig lätt. Den föreslagna överföringen cellarket med hjälp av en stödjande skärm underlättar manipulation av den bräckliga cellarket.

Metodiken utformning som presenteras i detta manuskript ger en ganska låg tillvägagångssätt kostnaden för att skapa en cellarket för en variation av vävnadstekniska tillämpkatjoner. Dessutom skapar pNIPAAM belagda plattor inom ett universitetslaboratorium kan ställas in med denna metod och ändringar i protokollet kan göras för att rymma flera celltyper och ytor. Användning av cellblad, snarare än oorganiserade enstaka celler, hjälper vävnad montering, och kan också öka sannolikheten för överlevnad och integration av implanterade vävnader. Emellertid kommer vivo leveransmetod i (nämns inte i detta protokoll) av dessa konstruktioner måste optimeras för varje vävnadstyp. Framtida tillämpningar inkluderar utforskning och optimerade metoder för att generera vävnader för specifika organsystem.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Reagents
Calcein-AM Invitrogen C3099 Cell tracker / live dye
Lysotracker Red Invitrogen L7528 Cell tracker
Neutral Red Sigma N7005 Visible Cell dye
pNIPAAM Sigma Aldrich 412780250 Poly(N-isopropylacrylamide)
Toluene Sigma Aldrich 244511-1L
Hexane Sigma Aldrich 296090-1L
RAOSMC Lonza R-ASM-580 Rat Aortic Smooth Muscle Cells
SmGM2 Lonza CC-4149 Smooth Muscle Media
HUVEC Invitrogen C-003-5C Human Venous Endothelial Cells
HyStem Glycosan/Biotime
Isopropyl alcohol VWR International BDH1133-4LP
Trypsin Corning Cellgro 25-053-C1
PBS Gibco 14287-072
FBS Gibco 16140-071
Specific Equipment
Filter paper Ahlstrom  6310-0900 
Buchner Funnel  Sigma Aldrich  Z247308 
UpCell Plates  Nunc  2014-11 
UV light Jelight Company  UVO Cleaner Model No.42

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ohashi, K., Okano, T. Functional tissue engineering of the liver and islets. Anat Rec (Hoboken). 297, 73-82 (2014).
  2. Chen, Q. Z., Harding, S. E., Ali, N. N., Lyon, A. R., Boccaccini, A. R. Biomaterials in cardiac tissue engineering: Ten years of research survey. Mat Sci Eng R. 59, 1-37 (2008).
  3. Jakob, P., Landmesser, U. Current status of cell-based therapy for heart failure. Curr Heart Fail Rep. 10, 165-176 (2013).
  4. Tongers, J., Losordo, D. W., Landmesser, U. Stem and progenitor cell-based therapy in ischaemic heart disease: promise, uncertainties, and challenges. Eur Heart J. 32, 1197-1206 (2011).
  5. Etzion, S., et al. Influence of embryonic cardiomyocyte transplantation on the progression of heart failure in a rat model of extensive myocardial infarction. J Mol Cell Cardiol. 33, 1321-1330 (2001).
  6. Masuda, S., Shimizu, T., Yamato, M., Okano, T. Cell sheet engineering for heart tissue repair. Adv Drug Deliv Rev. 60, 277-285 (2008).
  7. Koh, G. Y., Soonpaa, M. H., Klug, M. G., Field, L. J. Strategies for myocardial repair. J Interv Cardiol. 8, 387-393 (1995).
  8. Li, R. K., et al. Construction of a bioengineered cardiac graft. J Thorac Cardiovasc Surg. 119, 368-375 (2000).
  9. Muller-Ehmsen, J., et al. Rebuilding a damaged heart: long-term survival of transplanted neonatal rat cardiomyocytes after myocardial infarction and effect on cardiac function. Circulation. 105-1720 (2002).
  10. Reinecke, H., Zhang, M., Bartosek, T., Murry, C. E. Survival, integration, and differentiation of cardiomyocyte grafts: a study in normal and injured rat hearts. Circulation. 100-193 (1999).
  11. Roell, W., et al. Cellular cardiomyoplasty improves survival after myocardial injury. Circulation. 105, 2435-2441 (2002).
  12. Soonpaa, M. H., et al. Potential approaches for myocardial regeneration. Ann N Y Acad Sci. 752, 446-454 (1995).
  13. Akins, R. E. Can tissue engineering mend broken hearts. Circ Res. 90, 120-122 (2002).
  14. Goodell, M. A., et al. Stem cell plasticity in muscle and bone marrow. Ann N Y Acad Sci. 938, 208-218 (2001).
  15. Menasche, P., et al. Myoblast transplantation for heart failure. Lancet. 357, 279-280 (2001).
  16. Murry, C. E., Wiseman, R. W., Schwartz, S. M., Hauschka, S. D. Skeletal myoblast transplantation for repair of myocardial necrosis. J Clin Invest. 98, 2512-2523 (1172).
  17. Orlic, D., et al. Transplanted adult bone marrow cells repair myocardial infarcts in mice. Ann N Y Acad Sci. 938, 221-229 (2001).
  18. Elia, R., et al. Silk-hyaluronan-based composite hydrogels: a novel, securable vehicle for drug delivery. J Biomater Appl. 27, 749-762 (2013).
  19. Kai, D., et al. Stem cell-loaded nanofibrous patch promotes the regeneration of infarcted myocardium with functional improvement in rat model. Acta Biomater. (2014).
  20. Hong, H. J., et al. Tracheal reconstruction using chondrocytes seeded on a poly(l-lactic-co-glycolic acid)-fibrin/hyaluronan. J Biomed Mater Res A. (2014).
  21. Serpooshan, V., et al. The effect of bioengineered acellular collagen patch on cardiac remodeling and ventricular function post myocardial infarction. Biomaterials. 34, 9048-9055 (2013).
  22. Turner, W. S., et al. Cardiac tissue development for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial and cardiac cells in natural matrices. J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 100, 2060-2072 (2012).
  23. Sato, M., Yamato, M., Hamahashi, K., Okano, T., Mochida, J. Articular cartilage regeneration using cell sheet technology. Anat Rec (Hoboken). 297, 36-43 (2014).
  24. Sawa, Y., Miyagawa, S. Present and future perspectives on cell sheet-based myocardial regeneration therapy. Biomed Res Int. 2013, 583912 (2013).
  25. Demirbag, B., Huri, P. Y., Kose, G. T., Buyuksungur, A., Hasirci, V. Advanced cell therapies with and without scaffolds. Biotechnol J. 6, 1437-1453 (2011).
  26. Song, J. J., Ott, H. C. Organ engineering based on decellularized matrix scaffolds. Trends Mol Med. 17, 424-432 (2011).
  27. Badylak, S. F., et al. The use of extracellular matrix as an inductive scaffold for the partial replacement of functional myocardium. Cell Transplant. 15, Suppl 1. S29-S40 (2006).
  28. Wang, Y., et al. Lineage restriction of human hepatic stem cells to mature fates is made efficient by tissue-specific biomatrix scaffolds. Hepatology. 53, 293-305 (2011).
  29. Gilbert, T. W., et al. Collagen fiber alignment and biaxial mechanical behavior of porcine urinary bladder derived extracellular matrix. Biomaterials. 29, 4775-4782 (2008).
  30. Luna, J. I., et al. Multiscale biomimetic topography for the alignment of neonatal and embryonic stem cell-derived heart cells. Tissue Eng Part C Methods. 17, 579-588 (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics