For creation of highly organized structures of complex tissue, one must assemble multiple material and cell types into an integrated composite. This combinatorial design incorporates organ-specific layered cell sheets with two distinct biologically-derived materials containing a strong fibrous matrix base, and endothelial cells for enhancing new vessels formation.
Många vävnader, till exempel vuxna människors hjärtan, inte på ett adekvat sätt regenerera efter skada. 2,3 Strategier i vävnadsteknik föreslå innovationer för att hjälpa kroppen återhämtning och reparation. Till exempel kan TE metoder kan dämpa hjärt ombyggnad efter hjärtinfarkt (MI) och möjligen öka den totala hjärtfunktion till en nära normal pre-MI-nivå. 4 Som med alla funktionella vävnad, framgångsrik förnyelse av hjärtvävnad innebär korrekt leverans av flera celltyper med miljö signaler som gynnar integrationen och överlevnad implanterade celler / vävnad transplantat. Engineered vävnader bör åtgärda flera parametrar inklusive: lösliga signaler, cell-till-cell interaktioner och matrismaterial, uttryckt som leveransfordon, deras effekter på cellöverlevnad, materialhållfasthet och underlättande av cell-till-vävnadsorganisation. Studier som utnyttjar direktinsprutning av moderceller bara ignorera dessa grundsatser. 2,5,6En vävnads design som kombinerar dessa ingredienser har ännu inte utvecklats. Här presenterar vi ett exempel på integrerade konstruktioner med hjälp av skiktning av mönstrade cellark med två distinkta typer av biologiska härledda material innehållande målorganet celltyp och endotelceller för att öka nya fartyg bildning i "vävnad". Även om dessa studier fokuserar på generering av hjärtliknande vävnad, kan denna vävnad utformning tillämpas på många andra än hjärta med minimala ändra design och material organ, och är tänkt att vara en off-the-shelf produkt för regenerativa terapier. Protokollet innehåller fem detaljerade steg. En temperaturkänslig Poly (N -isopropylacrylamide) (pNIPAAM) används för att belägga vävnadsodlingsskålar. Sedan, vävnadsspecifika celler odlas på ytan av de belagda plattorna / micropattern ytor för att bilda cellark med starka sido sammanväxningar. För det tredje är en bas matris skapas för vävnaden genom att kombinera porös matris med neovaskulärt Permissive hydrogeler och endotelceller. Slutligen är de cellskikt lyfts från de pNIPAAM belagda rätter och överföras till baselementet, vilket gör den kompletta konstruktionen.
Injection of cells and/or single materials alone has shown variable success in other organ systems and limited success in cardiac regeneration.5,7-12 Currently, stem cell-derived cells are delivered to damaged tissue using a variety of delivery methods including: direct cell injection into tissue and perfusion into the blood supply.13-17 Others have implanted cells alone, materials alone and/or in combination with material carriers to help regenerate damaged organs.18-21 This design combines multiple strategies that provide material strength, patterning in multiple materials and multiple cell types.
Specifically, the base acellularized fibrous matrix provides the foundational physical strength to the construct, making it suitable for suturing in into the patient, if necessary. The void spaces in the base matrix are filled with endothelial cells in a neovascular permissive hydrogel22 for rapidly establishing vascularization of the implanted construct. This composite is then integrated with pre-patterned cell sheets that allow enhanced cell-to-cell communication, more closely mimic the native tissue.1,23-25 The overall production process for the layered cellular patch is outlined by the flowchart in Figure 1.
De kritiska stegen i protokollet är: beläggning plåtytorna med termoresponsiv polymer och manipulera cellblad efter kylning plattorna. Eftersom olika celler uppvisar olika fysikaliska egenskaper, som adhesivitet, lyft tid bör optimeras för varje annan celltyp. Den andra, och mest påtagligt utmanande del av detta protokoll, kretsar kring manipulation av cellskiktet, en kritisk aspekt av metoder för vävnads montering. Singeln cellskiktet i cellarket är ganska bräcklig och kan riva lätt om manipulerade med pince…
The authors have nothing to disclose.
This work was funded by a New Faculty Award II from the California Institute of Regenerative Medicine (CIRM; RN2-00921-1), NIH-funded National Research Award (F32-HL104924), and CIRM Training Grant (TG21163). Materials were provided by: Glycosan Biosystems Inc / BioTime and Dr. Stephen Badylak (University of Pittsburgh)
Table of Reagents: | |||
Reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Calcein-AM | Invitrogen | C3099 | Cell tracker / live dye |
Lysotracker Red | Invitrogen | L7528 | Cell tracker |
Neutral Red | Sigma | N7005 | Visible Cell dye |
pNIPAAM | Sigma Aldrich | 412780250 | Poly(N-isopropylacrylamide) |
Toluene | Sigma Aldrich | 244511-1L | |
Hexane | Sigma Aldrich | 296090-1L | |
RAOSMC | Lonza | R-ASM-580 | Rat Aortic Smooth Muscle Cells |
SmGM2 | Lonza | CC-4149 | Smooth Muscle Media |
HUVEC | Invitrogen | C-003-5C | Human Venous Endothelial Cells |
HyStem | Glycosan/Biotime | ———— | |
Isopropyl alcohol | VWR International | BDH1133-4LP | |
Trypsin | Corning Cellgro | 25-053-C1 | |
PBS | Gibco | 14287-072 | |
FBS | Gibco | 16140-071 | |
Table of Specific Equipment: | |||
Equipment | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Filter paper | Ahlstrom | 6310-0900 | |
Buchner Funnel | Sigma Aldrich | Z247308 | |
UpCell Plates | Nunc | 2014-11 | |
UV light. | Jelight Company | UVO Cleaner Model No.42 |