Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

1Tissue Engineering Program and Surgical Research, Nationwide Children's Hospital, 2Department of Cardiothoracic Surgery, Nationwide Children's Hospital, 3Pediatric Surgery, Nationwide Children's Hospital
Published 6/04/2014
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Hücresel ve moleküler neotissue oluşumu hakkındaki bilgi geliştirmek için, TEVG bir fare modeli yakın zamanda geliştirilmiştir. Greftler C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Bu model bizim klinik araştırmada elde edilenlere benzer sonuçlar elde, ama çok kısaltılmış zaman zarfında.

Cite this Article

Copy Citation

Lee, Y. U., Yi, T., Tara, S., Lee, A. Y., Hibino, N., Shinoka, T., et al. Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model. J. Vis. Exp. (88), e51632, doi:10.3791/51632 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Kemik iliği mononükleer hücreler (BMCS) ile ekildi biyobozunur iskelelerinin genellikle doğumsal kalp anomalileri tedavi rekonstrüktif cerrahi için kullanılır. Uzun süreli klinik sonuçları darlık önemli insidans, ancak mükemmel açıklık oranları gösterdi. Vasküler neotissue oluşumu hücresel ve moleküler mekanizmalarının araştırılması ve doku mühendisliği damar grefti (TEVGs) içinde darlık gelişimini önlemek için, biz yaklaşık 1 mm iç çapı ile greft bir fare modeli geliştirdi. İlk olarak, TEVGs bir poliglikolik asit dokunmamış imal edilmiş biyolojik olarak parçalanabilir boru şekilli iskeleler monte edilmiştir ε-kaprolakton ve L-laktid kopolimeri ile kaplanmış ağ hissetti. Iskeleler, daha sonra bir dondurarak kurutucuda yerleştirilen 24 saat boyunca vakumlu ve hücre tohumlama kadar bir desikatör içinde depolanmıştır. İkinci olarak, kemik iliği donör farelerden toplandı ve tek çekirdekli hücreler yoğunluk gradyan santrifüjü ile izole edilmiştir. Üçüncü olarak, yaklaşık bir milyon hücre idibir yapı iskeleti üzerine ekildi ve O / N inkübe Son olarak, tohumlanmış iskeleler sonra C57BL / 6 farelerinde Infrarenal vena kava araya girme greft olarak implante edildi. Implante greftler tromboembolik komplikasyonlar veya anevrizmal oluşum kanıt olmadan mükemmel açıklık (>% 90) gösterdi. Bu fare modeli anlayış bize yardım ve TEVG içinde neotissue oluşumu hücresel ve moleküler mekanizmaları miktarının olacaktır.

Introduction

Konjenital kalp kusurları ABD'de canlı doğumların yaklaşık% 8 etkileyen ciddi durumlardır. Konjenital kalp kusurları veya 2.4 1.000 canlı doğum olan bebeklerin yaklaşık% 25'i, hayatlarının 1 ilk yıl invaziv tedavi gerektirir. Konjenital kalp hastalığı için en etkili tedavi rekonstrüktif cerrahi olduğunu. Ne yazık ki, mevcut vasküler kanalların kullanımından kaynaklanan komplikasyonlar ameliyat sonrası morbidite ve mortalitenin en önemli nedenidir.

Bu sorunu çözmek için, klinik kullanım 2 için ilk doku mühendisliği vasküler greft (TEVGs) geliştirdi. TEVGs otolog kemik iliğinden elde edilmiş tek-çekirdekli hücreleri (BM-MNC) ile tohumlandı ve konjenital kalp ameliyatı venöz kanalları olarak implante edilen biyolojik olarak parçalanabilir polyester tüplerden inşa edilmiştir. Sonuçlar takipte 1-3 yıldır mükemmel açıklık oranları gösterdi, ama darlığının önemli insidansı 5,6 oluşturuldu. Bu modelde, TEVGs başarılı bir şekilde canlı damarları içine transforme edildi ve morfolojisi ve ana damarlar fonksiyonu hem de benzerdi. Büyük bir hayvan modelinin bu kullanımı TEVGs klinik kullanımını destekli önemli klinik öncesi bilgi veren iyi bir ilk adım oldu. Ancak, büyük hayvan modelleri kullanılarak TEVGs vasküler neotissue oluşumu hücresel ve moleküler mekanizmaları tam anlaşılması nedeniyle türlerin spesifik moleküler araçlar eksikliği nedeniyle vasküler hücre fenotipleri moleküler karakterizasyonu kısıtlamalar sınırlıdır. Bu eksikliklerin üstesinden gelmek için, TEVGs bir murin modeli fare genetik hızlı ilerleme ve geniş Molecula nedeni ile geliştirilmiştirdaha kısa bir zaman ölçek ilave avantajı ile r karakterizasyonu.

Sıçangil modeli IVC araya girme sadık büyük hayvanlarda ve insanlarda meydana neoveseller oluşum sürecini değinmeyecek ama çok daha kısa bir zaman süreci boyunca 6-9. Burada, biyolojik olarak parçalanabilir yapı iskelesi kullanılarak küçük ölçekli aşı üretimi için ayrıntılı bir protokol, BM-MNC hasat ve izolasyon, bir platform üzerinde BM-MNC tohumlama ve bir murin modelinde greft tarif edilmiştir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

NOT: Bütün hayvan prosedürleri Nationwide Çocuk Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi.

1.. Greft İmalat

  1. Bir davlumbaz altında 2 ml dioksan içerisinde 100 mg P (LA / CL) eklenerek ε-kaprolakton ve L-laktid kopolimeri P (LA / CL) çözeltisi olun. Bir girdap çözüm yerleştirin ve tamamen erimesi için 1-1.5 saat boyunca sürekli olarak karıştırınız.
  2. Bu arada, (PGA) dondurucu hissettim poliglikolik asit tabakasını kaldırmak ve birkaç 5 x 8 mm bölümleri kesip. Ayrıca sadece filtrenin üstünde bir 0.1-10 ul pipet ucu kesilmiş.
  3. Bir pipet ucunun uzak ucunda bir 19 G iğne (1.5 uzunluk) takın ve PGA mikro forseps kullanılarak iğnenin keçe sarın.
  4. 19 G iğne içine takıldığında ise dikkatlice, lümen bir kör 18 G iğne kullanılarak, yakın kısmı daha düz bir pipet ucu, distal ucuna keçeyi itin.
  5. Pipet40 ul P (CL / LA) üst ucu içine pipet çözeltisi. PGA çözümü ile hissetti doyurabilecek. Sonra pipet dağıtıcı kullanarak hava kabarcıkları dışarı itmek. Gerekirse bu işlemi tekrarlayın.
  6. Yer, 50 ml bir tüp içinde greft ve 20 dakika boyunca -80 ° C dondurucu içine yerleştirin. Iğnelerin baş aşağı doğru karşı karşıya olduğundan emin olun.
  7. Bir liyofilizerde içine tüp transferi ve 24 saat için vakum. Hava akımı oluşturacak şekilde tüpün kapağını açmak için emin olun.
  8. Greft dışarı atın ve iğnelerden çıkarın. A ~ 5 mm bölümünü terkeden greft iki ucunu kesme ve şeklini korumak için, iğnelerin üzerine geri koyun. Desikatörde greft tutun.
  9. Bir biyogüvenlik kaput O / N önce hücre tohumlama UV ışık altında iskele yerleştirin.

2.. Kemik İliği Mononükleer Hücre Hasat ve İzolasyon

  1. Ketamin / ksilazin aşırı dozda (ketamin 200 mg / kg ketamin hidroklorid ve 20 mg / kg) ile fareler Euthanize.
  2. Kaldır kemikler (femur bir10 cc RPMI sahip bir Petri kabındaki 10 greft implantasyonu ve yer 3 fareden d tibias). 3 cc RPMI ile yeni bir Petri kabı, bir 25 G iğnesi olan bir şırınga kullanılarak, kemik ve kemik iliği gömme iki ucunu kesin. 15 cc tüpte kemik iliği ve RPMI çözeltisi toplayın ve BM arasında kalan toplamak için ek 2 cc RPMI ile petri yıkayın.
  3. Örnek (5-10 ul) alın ve bir otomatik hücre sayıcı veya hemasitometre kullanarak hücre saymak. Sonucu kaydedin.
  4. 15 cc santrifüj tüpüne 5 cc Ficoll koyun ve kemik iliği ve RPMI çözüm ekleyin. Ficoll'ün ile karıştırma önlemek için çok nazikçe çözüm ekleyin.
  5. 24 ° C'de "HAYIR FRENİ" ile 30 dakika boyunca 528 x g'de santrifüj
  6. Üst pembe katmanı kaldırın. MNC katmanı orta berrak tabaka Şekil 1, toplayın, ve PBS 01:01 ile sulandırmak.
  7. 24 ° C'de 10 dakika boyunca 528 x g'de santrifüj solüsyonu inceltilmiş MNC
  8. Süpernatantı ve di kaldırud 5 ml PBS ile pelet.
  9. 24 ° C'de 10 dakika boyunca 528 x g'de topak çözeltisi santrifüj
  10. Süpernatant kaldırmak. RPMI (~ 200 ul) uygun miktarda pelet seyreltin.
  11. 5-10 ul örnek almak ve bir otomatik hücre sayıcı veya hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. Sonucu kaydedin. Bir kez daha sayım hücreyi tekrarlayın ve ortalama hücre sayısını hesaplamak.
  12. RPMI kullanarak ul 1.000.000 cells/10 hücre konsantrasyonu sulandırmak.

3.. Hücre Serpilmesi

  1. 5 dakika boyunca luminally 5 ul RPMI ilave edilerek ön ıslatılmış iskele, sonra RPMI çıkarın.
  2. Iskele lümen Adım 2.12 RPMI 10 ul kemik iliğinden elde edilen mono nükleer hücreleri ekleyin ve 10 dakika hücreleri iskele üzerine takmak için izin için bekleyin.
  3. 1 cm uzunluğunda bir 19 G iğne Kesme ve iskele şeklini korumak için, skafoldun lümeni içine iğne koydu. Bir 24-çukurlu plaka içindeki örnek yerleştirin. </ Li>
  4. Her kuyuya 1.000 ul RPMI ilave edin ve bir kuluçka makinesi içinde O / N inkübe edin.

4. Greft İmplantasyonu

  1. Ameliyat öncesi tüm cerrahi aletler otoklava sokun: ince makas, 3x mikro forseps, 2x mikro vasküler kelepçeler, 1x kelepçe uygulayarak forseps, 1x mikro iğne tutucu, 1x yaylı makas, 1x ekartörünü 1x.
  2. 6-8 haftalık dişi C57BL / 6 doku mühendisliği damar grefti alıcı olarak kullanılır. Kafesinden fare çıkarın ve ağırlık, daha sonra bir ketamin / ksilazin kokteyl (ketamin 100 mg / kg ketamin hidroklorid ve 10 mg / kg) ile karnın alt sağ çeyrek dairesi içine bir intraperitoneal enjeksiyon yoluyla anestezi. Ketoprofen (5 mg / kg, IP) bir ön anestezi analjezik olarak kullanılır.
  3. Masal sıkıştığı tarafından sedasyon seviyesini kontrol edin, sonra karın saç klibi. Steril Oftalmik merhem ile gözleri yağlayın ve bir yastık üzerinde bir dorsal recumbence pozisyonda fare yerleştirin. Betadine ve alkol pedleri ile karın dezenfekte edin. Costeril bir örtü ile fareyi ver ve sadece kesi alanı açığa.
  4. Suprapubik bölgeye xiphoid aşağıdan bir orta hat laparotomi kesi yapmak ve bir öz-istinat ekartörünü yerleştirin. Tuzlu çözelti ile nemlendirilmiş gazlı bez bağırsakları sarın. Açık açık infrarenal aorta ve vena kava tanımlar.
  5. Proksimal ve aort ve vena kava distal taraflarında iki mikro vasküler kelepçeler yerleştirin sonra açık açık vena kava transekt vena kava gelen aort ayrı. Gerekirse, konik iğne üzerinde 10-0 monofilament sütür ile abdominal aort dalları Arter.
  6. Steril 10-0 sütür kullanılarak anastomoz sonuna yakın ve uzak ucu ile alt vena kava interpozisyonundan greft dikiniz. Fare anatomisine bağlı greft, genellikle 1-2 mm, Trim. Proksimal ve distal uçlarında hem bir tane dikiş greft elde edin ve greft diğer taraftan 4-5 stiches sürekli dikiş başlar. Ön tarafı bitirdikten sonra, kelepçeler ve greftler çevirmekdiğer tarafa ve greft arka tarafını dikin. Implantasyon sırasında, akut trombozu önlemek için sık sık heparin solüsyonu ile greft yıkayın.
  7. Proksimal kelepçesini çıkarın ve bir topikal emilebilir steril hemostat ajanı uygulayarak kanamayı kontrol. Kanama tamamen durduğunda, distal kelepçesini çıkarın ve kanama aynı şekilde kontrol. Greft içinden emin kan akışları olun.
  8. Dahil dişli bir iğne ile 6-0 siyah bir poliamid monofilament dikiş ile iki kat olarak abdominal kas ve deri kapatın.
  9. 0.5 ml serum fizyolojik subkutan enjekte edilir ve fare tamamen mobil kadar bir ısınma pad üzerinde bir kurtarma kafes fare yerleştirin. Kurtarma üzerine, kağıt yatak ile yeni kafesine fareyi dönmek. 48 saat boyunca ağrı ilaç (ibuprofen, 30 mg / kg, içme suyu) ver.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

TEVG implantasyonu şematik, Şekil 1 'de gösterilmiştir. Kemik iliği, verici bir fare hasat edilmiştir ve mono nükleer hücreler yoğunluk santrifüj ile izole edildi ve daha sonra biyolojik olarak parçalanabilir bir yapı iskeleti üzerine ekildi. Numaralı seribaşı iskeleleri O / N bekletilir ve bir alt vena kava greft interpozisyonu gibi bir alıcı fareye implante edildi.

Şekil 2, PGA-P (CL / LA) iskele taramalı elektron mikroskobu göstermektedir. Iç çapı yaklaşık 1 mm ve duvar kalınlığı yaklaşık olarak 0.17 mm idi. Toplam porozite% 78.5 idi ve gözenek boyutları 45.4 ± 17.6 mikron idi demek.

C57BL / 6 farelerinin IVC içine yerleştirilen bir TEVG brüt görüntü implantasyon (A) ve implantasyonu (B) sonra, 2 hafta sonra, Şekil 3'te. Doğru gösterilmiştir. (C) karşılaştırıldığında, bir nativ IVC brüt görüntüsünü gösterir. Bu açıktırgreft neotissue ile doluydu, ancak hala orijinal greft şeklini tuttu. Bizim önceki sonuç toplam greft bozulması 12 hafta 10 kadar sürdüğünü gösterdi.

TEVG implante 2 hafta ultrason B-mod ve renkli Doppler görüntü implante greft açıklığını göstermek için 4A-B Rakamlar. Bir yerli IVC görüntü karşılaştırma (Şekil 4, C) için eklenmiştir. Hücre tohumlama önemli ölçüde greft açıklığını geliştirilmiş, dereceye giremeyen ve seribaşı greft için 2 hafta açıklıkları sırasıyla% 65 ve% 91 (p <0.05, Fisher'in kesin testi) vardır.

Şekil 5, implantasyon 2 hafta sonra hücre infiltrasyonu ve TEVG hücre dışı matris birikmesini gösterir. H & E boyaması ile boyanmış Eksplante greft iskele malzemesi (A) ve greft ve kalanlar boyunca neotissue oluşumunu gösterdi. Harts ve Masson trichrome leke IN elastin birikimini gösterditimal tabaka (B) ve orta katman (C) kolajen. Endotel hücre astar intimal tabaka (D) boyunca gözlendi ve sırasıyla CD31 ve αSMA boyamasıyla görüldüğü gibi birleşik yumuşak kas hücreleri özellikle astar EC (E) altında, TEVG boyunca mevcuttu edildi. F4/80 boyama (F) ile belirtildiği gibi implantasyon sonrası ikinci haftada, makrofaj infiltrasyonu, açıktı.

Şekil 1
Şekil 1. TEVG implantasyonu şematik. Kemik iliği mono nükleer hücreler, bir verici fareden toplanan biyolojik olarak parçalanabilir bir yapı iskelesi üzerine ekildi ve bir alıcı fareye bir IVC araya girme greft olarak implante edildi.

ince-page = "Her zaman"> Şekil 2,
Bir iskele Şekil 2.. Taramalı elektron mikroskopisi ve görüntüler. Ortalama dış çap lümen çapı 1.1 mm olan, 1.45 mm, boyu 3 mm idi.

Şekil 3,
Şekil 3.. Implant TEVG 2 hafta ve yerli IVC'da sonra. A) hemen implantasyondan sonra, karşılaştırma için B) 2 hafta implantasyonu sonrası, ve C) yerli IVC.

fig4.jpg "/>
Şekil 4. Ultrason görüntüleri 2 hafta ve yerli IVC. Karşılaştırma için 2 hafta. C) Yerli IVC sonra TEVG A) B-Mode ve B) renkli Doppler görüntü.

Şekil 5,
2 hafta Şekil 5. Temsilcisi görüntüleri operatif TEVG gönderebilirsiniz. A) H & E (iç lümen), B) Harts (pembe = elastin), C) Massion trikrom (mavi = kolajen), D) CD31 (kahverengi = endotelyal hücre), E) αSMA (kahverengi = düz kas hücresi), ve F ) F4/80 (kahverengi = makrofaj).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

TEVG fare modeli neotissue stenoz oluşumu ve geliştirilmesi hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için değerli bir araçtır. Tohumlanmış BM-MNC greft 11 tohumlanmış hücreleri hem histolojik ve SEM görüntüleri gösterilmiştir. Hücre Ekme etkinliği, bir DNA deneyi 7 ile gösterilmiştir. Bu model sistemi kullanarak biz cep tohumlama insan klinik deneme 3 başarısızlık birincil modu oldu TEVG stenoz, gelişiminin insidansını azalttığını göstermiştir. Tohumlanmış hücreleri hızla bir parakrin mekanizması 8,12 yoluyla etki uyguladığı düşündüren TEVG kayboldu. Ayrıca neoveseller formasyonu bir immün aracılı rejeneratif bir süreçtir ve neoveseller skafoldun lümen yüzeyi boyunca, komşu damar duvarından vasküler hücrelerde (EC ve SMC) içeri büyümesine kaynaklandığı gösterilmiştir. Ayrıca, normal makrofaj infiltrasyonu, damar neotissue oluşumu için gereklidirBu işlem fazla olduğu zaman ancak TEVG darlığı 7,8 gelişmesine yol açar. Bu sonuçlar, insan hastalığı için bu fare modeline alaka gösterir. Mikrocerrahi teknikleri damar grefti 13 ve venöz fistül için arter dahil olmak üzere diğer vasküler uygulamalara uyarlanabilir.

Biz her yıl 1,000 VKİ grefti implantasyonu üzerinde işletmek ve ölüm oranı% 1'den daha az olduğunu. Başarılı bir greft implantasyonu için, söz birkaç önemli nokta vardır.

Bu anastomoz boyunca birkaç kez etrafında fare çevirmek için gerekli olduğu için İlk olarak, enjekte edilebilir bir anestezi Bu işlem için tercih edilir. Anestezinin etkisi genellikle bir saat civarında sürer ve yetenekli bir mikro cerrah için tüm cerrahi süresi ameliyatı tamamlamak için yeterli zaman sağlar, yaklaşık 30-45 dk vardır. Hayvan ameliyat sırasında uyanırsa, bir anestezi kokteyl 0.05-0.1 ml kas içine enjekte edilebilircularly.

İkinci olarak, küçük bir aortik dalların en IVC ve karın bölgesinden aort ayıran aşırı kan kaybını önlemek için lige olması gerekiyordu. Ayrıca aort ayrıldığında IVC kesmemeye akılda tutmak.

Greft dikildi Üçüncü olarak, her iki tarafta, ilk iki dikiş sürecin en önemli adımlardır. Dikkatle yerleştirilir değildir, bu IVC ön ve arka tabakaları ayırmak zordur. Katmanlar açıkça tespit değilseniz, yanlışlıkla onları bir araya dikmek için daha yüksek bir şans var. Greft IVC dikilmesi sırasında, bitti yırtılmasına neden olabilir IVC, germek için önemli değildir. Ayrıca greft aynı uzunlukta değiştirmek için çok IVC kesmek için değil emin olun. Genellikle IVC yaklaşık 1-2 mm nedeniyle IVC uzunlamasına germek için, 3-5 mm greft değiştirmek için uzaklaştırılmıştır. IVC aynı uzunlukta çıkarılırsa, o anastomoz yaparmosis son derece zorlu.

Dördüncü, TEVG oluşumu ve darlık gelişmesi açısından varyasyonlar zorlanma önemli gerginlik vardır. Örneğin, giremeyen C57BL / 6 fareleri (vahşi tip) SCID / bg farelere göre stenoz çok daha yüksek bir oranı (bağışıklık yetersizliği olan farenin) 8,12 gösterdi. Buna ek olarak, deneyim, SCID / bg farenin nedeniyle daha sert IVC duvarı 14 C57BL / 6 farelerine kıyasla çalıştırmak için çok daha kolaydır. Farelerin yeni bir gerginlik üzerinde çalışırken aklınızda tutun.

Greft üretim, BM-MNC hasat ve hücre tohumlama işlemleri bilincinde olması süreçlerin sadece bir çift vardır, yalındır vardır. İlk olarak, greft üretimi için, değil 18 G künt iğne kullanarak iterken, keçeyi 'demet' için çok önemli. Biz aşağı pipet ipuçları uzak ucuna keçe itmek için farklı yöntemler denedim. Künt bir iğne ile greft iterek kadar, en iyi sonucu gösterdi. İçkünt iğnenin çapı, keçe etrafına sarıldığında iğnenin dış çapından biraz daha büyüktür. Bu nedenle, küçük iğne rahatça büyük bir kör iğne içine kayabilir ve keçe daha sonra her keçenin araya toplanmasının engelleyen keçe, çevresi etrafında eşit miktarda kuvvet ile aşağı doğru itilebilir. Biz daha önce demetler halinde greftler 2 hafta alt açıklığını gösterdiği görülmektedir. Kabarcıkları iskele yüzey ve kan delikler implantasyondan sonra delikten sızıntı neden olur, çünkü aynı zamanda, tüm kabarcıklarını çıkarmak için çok önemlidir. Kemikler BM-MNC hasat için ayrılmış İkincisi, çok fazla kas veya saç dahil kalmamak kemik mümkün olduğunca temizlemek için emin olun. Gerekirse, bu yoğunluk santrifüj işleminden önce bir doku süzgeç kullanılması önerilir.

TEVG Bu model bir alçak basınç ve yüksek akış sistemi venöz dolaşımı, iyi çalıştı. Bununla birlikte, dolaşımda arter, biryüksek basınç ve yüksek akış sistemi, biz onun hızlı bozulma özelliğinden dolayı PGA greft ile rüptür oranları yüksek görülmektedir. Hangi neotissue arter basıncı direnmek için yeterli mukavemetini almadan greft yapısal gücünü kaybeder demektir. Biz Polilaktik asit (PLA) önceden greft kullanılan, ancak anevrizma oluşma sıklığının yüksek olduğunu göstermiştir. Ayrıca tamamen farelerin ömrü daha fazladır in vivo ve in PLA aşağılamak için en fazla 2 yıl sürer. Arteryel dolaşım aşı üretim teknikleri olarak, gelecekteki bir uygulama için, örneğin, bir electrospun aşı geliştirme aşamasındadır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Acknowledgements

Bu çalışma CKB için NIH (RO1 HL098228) bir hibe, kısmen desteklendi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Polyglycolic acid (PGA) felt Biomedical Structures Custome ordered
Pipet tip, 0.1-10 μl  Fisher Sientific 02-707-456
Lyophilizer  Labconco 7070020
RPMI medium 1604 Gibco 11875-093
Petri dish BD 353003
24-well plate Corning 3526
15 cc tube  BD 352096
Ficoll Sigma 10831-100ml Also called 'Histopaque'
DPBS Gibco 14190-144
Littauer bone cutter 4.5" Straight Roboz RS-8480 For BM harvesting
Forceps 4.5" Roboz RS-8120 For BM harvesting
Scissors 4.5" Roboz RS-5912 For BM harvesting
Microscope Leica M80
C57BL/6J (H-2b), Female Jackson Laboratories 664 8-12 weeks
Ketamine hydrochloride injection Hospira Inc. NDC 0409-2053
Xylazine sterile solution Akorn Inc. NADA# 139-236
Ketoprofen Fort Dodge Animal Health NDC 0856-4396-01
Ibuprofen PrecisionDose NDC 68094-494-59
Heparin sodium Sagent Pharmaceticals NDC 25021-400
Saline solution (sterile 0.9% sodium chloride) Hospira Inc. NDC 0409-0138-22
0.9% Sodium chloride injection Hospira Inc. NDC 0409-4888-10
Petrolatum ophthalmic ointment Dechra Veterinary Products NDC 17033-211-38
Iodine prep pads Triad Disposables, Inc. NDC 50730-3201-1
Alcohol prep pads McKesson Corp. NDC 68599-5805-1
Cotton tipped applicators Fisher Scientific 23-400-118
Fine scissor FST 14028-10
Micro-adson forcep FST 11018-12
Clamp applying forcep FST 00072-14
S&T Vascular clamp FST 00396-01
Spring scissors FST 15008-08
Colibri retractors FST 17000-04
Dumont #5 forcep FST 11251-20
Dumont #7 - fine forceps FST 11274-20
Dumont #5/45 forceps FST 11251-35
Tish needle holder/forceps Micrins MI1540
Black polyamide monofilament suture, 10-0 AROSurgical Instruments Corporation TI638402 For suturing the graft
Black polyamide monofilament suture, 6-0 AROSurgical Instruments SN-1956 For musculature and skin closure
Non-woven sponges McKesson Corp. 94442000
Absorbable hemostat Ethicon 1961
1 ml Syringe BD 309659
3 ml Syringe BD 309657
10 ml Syringe BD 309604
18 G 1.5 in, Needle BD 305190
25 G 1 in, Needle BD 305125
30 G 1 in, Needle BD 305106
Warm water recirculator Gaymar TP-700
Warming pad Gaymar TP-22G
Trimmer Wahl 9854-500

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Heart Association, A. merican Heart Disease and Stroke Statistics—2012 Update. Circulation. 125, (2012).
  2. Shinoka, T., et al. Creation Of Viable Pulmonary Artery Autografts Through Tissue Engineering. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 115, 536-546 (1998).
  3. Hibino, N., et al. Late-term results of tissue-engineered vascular grafts in humans. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 139, 431-436 (2010).
  4. Shin'oka, T., et al. Midterm clinical result of tissue-engineered vascular autografts seeded with autologous bone marrow cells. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 129, 1330-1338 (2005).
  5. Brennan, M. P., et al. Tissue-engineered vascular grafts demonstrate evidence of growth and development when implanted in a juvenile animal model. Ann Surg. 248, 370-377 (2008).
  6. Roh, J. D., et al. Construction of an autologous tissue-engineered venous conduit from bone marrow-derived vascular cells: optimization of cell harvest and seeding techniques. Journal of Pediatric Surgery. 42, 198-202 (2007).
  7. Hibino, N., et al. Tissue-engineered vascular grafts form neovessels that arise from regeneration of the adjacent blood vessel. The FASEB Journal. 25, 2731-2739 (2011).
  8. Hibino, N., et al. A critical role for macrophages in neovessel formation and the development of stenosis in tissue-engineered vascular grafts. The FASEB Journal. 25, 4253-4263 (2011).
  9. Naito, Y., et al. Characterization of the Natural History of Extracellular Matrix Production in Tissue-Engineered Vascular Grafts during Neovessel Formation. Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).
  10. Naito, Y., et al. Beyond Burst Pressure: Initial Evaluation of the Natural History of the Biaxial Mechanical Properties of Tissue Engineered Vascular Grafts in the Venous Circulation Using a Murine Model. Tissue Eng. Part A. 20, (2013).
  11. Mirensky, T. L., et al. Tissue-engineered vascular grafts: does cell seeding matter. Journal of Pediatric Surgery. 45, 1299-1305 (2010).
  12. Roh, J. D., et al. Tissue-engineered vascular grafts transform into mature blood vessels via an inflammation-mediated process of vascular remodeling. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 4669-4674 (2010).
  13. Mirensky, T. L., et al. Tissue-engineered arterial grafts: long-term results after implantation in a small animal model. Journal of Pediatric Surgery. 44, 1127-1133 (2009).
  14. Lee, Y. U., Naito, Y., Kurobe, H., Breuer, C. K., Humphrey, J. D. Biaxial mechanical properties of the inferior vena cava in C57BL/6 and CB-17 SCID/bg mice. Journal of Biomechanics. 46, 2277-2282 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats