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गिनी सूअरों में गैर टर्मिनल रक्त नमूना तकनीक

Biology

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Summary

एक मशहूर मॉडल हालांकि, गिनी पिग वर्तमान में प्रयोगात्मक पशु विज्ञान में एक आला प्रतिनिधित्व करता है और सीमित डेटा सबसे प्रक्रियाओं के निष्पादन पर उपलब्ध है. यहाँ हम सचेत या anaesthetized गिनी सूअरों या तो इन विवो रक्त नमूना तकनीक में गैर टर्मिनल के लिए चार अलग अलग दृष्टिकोण प्रस्तुत करते हैं.

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Birck, M. M., Tveden-Nyborg, P., Lindblad, M. M., Lykkesfeldt, J. Non-Terminal Blood Sampling Techniques in Guinea Pigs. J. Vis. Exp. (92), e51982, doi:10.3791/51982 (2014).

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Abstract

गिनी सूअरों मनुष्य के लिए कई जैविक समानता के अधिकारी और प्रयोगात्मक पशु मॉडल 1-3 मान्य हैं. विशिष्ट पद्धति तदनुसार कम है पर फिर भी, गिनी सूअरों का उपयोग वर्तमान में अनुसंधान और वर्णनात्मक डेटा की एक अपेक्षाकृत संकीर्ण क्षेत्र का प्रतिनिधित्व करता है. गिनी सूअरों की शारीरिक विशेषताओं, चूहों और चूहों की तुलना में. इसलिए नमूना तकनीक के मॉडुलन जैसे, प्रजाति विशेष के अंतर के लिए समायोजित करने के लिए, अन्य कृंतक मॉडल से थोड़ा अलग हैं पर्याप्त और उच्च गुणवत्ता के नमूने प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं. Vivo अध्ययन में दोनों लंबी और छोटी अवधि अक्सर नमूना रक्त दोहराया आवश्यकता के रूप में तकनीक के चुनाव को अच्छी तरह से पशुओं में तनाव और बेचैनी कम करने के लिए विचार किया जाना चाहिए, लेकिन यह भी नमूना आकार और पहुंच की आवश्यकताओं के अस्तित्व के साथ ही अनुपालन सुनिश्चित करने के लिए. शिरापरक रक्त के नमूने गिनी सूअरों जैसे में साइटों की एक संख्या में प्राप्त किया जा सकता है., Saphenous और कंठनसों, फायदे और नुकसान दोनों युक्त प्रत्येक तकनीक 4,5. यहाँ, हम होश में या anaesthetized गिनी सूअरों के लिए या तो चार अलग रक्त नमूना तकनीक मौजूद है. प्रक्रियाओं सभी गैर टर्मिनल प्रक्रियाओं प्रयोगशाला पशुओं 6 में रक्त संग्रह के लिए दिशा निर्देशों से अधिक नहीं है कि नमूना मात्रा और नमूनों की संख्या प्रदान की जाती हैं. सभी वर्णित विधि अच्छी तरह से जांच और हमारे अनुसंधान सुविधा के भीतर अध्ययन में विवो रक्त नमूने में दोहराया के लिए लागू किया गया है.

Introduction

गिनी पिग की वजह से इस तरह के विटामिन सी, मानव गर्भनाल और साथ एंजाइमों और लिपोप्रोटीन प्रोफाइल, साथ ही साथ साझा समानताएं metabolizing तुलनीय प्लाज्मा लिपोप्रोटीन के एक आहार की आपूर्ति के लिए एक आवश्यकता के रूप में मनुष्य के लिए जैविक समानता के एक नंबर के लिए एक मूल्यवान और मान्य प्रयोगात्मक पशु मॉडल है जन्म के पूर्व का विकास 1-3,7,8. इस गिनी पिग ऐसे गैर शराबी फैटी लीवर रोग, हृदय रोग और विटामिन सी की कमी से ख्यात प्रभाव लेकिन यह भी जैसे के प्रभाव के रूप में आहार से जुड़े रोगों के प्रभाव के अध्ययन के लिए एक आकर्षक और उपयुक्त मॉडल बनाता है., मातृ आहार हस्तक्षेप के विकास पर संतानों.

दोहराया रक्त नमूने अक्सर vivo अध्ययन में दोनों लंबी और छोटी अवधि में आवश्यक है. कारण प्रजाति विशिष्ट संरचनात्मक मतभेदों को नमूना तकनीक के मॉडुलन अन्य कृंतक मॉडल की तुलना में गिनी सूअरों में रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए आवश्यक है 3,9 संज्ञाहरण की आवश्यकता नहीं है. इस तकनीक में रक्त (100-400 μl), जैसे की थोड़ी मात्रा के नमूने दोहराया अनुमति देता है., प्लाज्मा में जैव रासायनिक मार्कर निर्धारित करने के लिए. एक भी छोटे नमूने का आकार (50-100 μl) के लिए पर्याप्त है, तो यह काफी आसानी से कान की नस puncturing द्वारा प्राप्त किया जा सकता है. इस तकनीक को भी जागरूक पशुओं में किया जाता है और रक्त ग्लूकोज 10,11 मापने जब ​​उदाहरण के लिए उपयोगी है किया जा सकता है. गले नस से सैम्पलिंग रक्त की बड़ी मात्रा में (1-2 एमएल) के संग्रह के लिए अनुमति देता है, लेकिन संज्ञाहरण की आवश्यकता है.

यहाँ, हम होश में या anaesthetized गिनी सूअरों के लिए या तो चार अलग रक्त नमूना तकनीक मौजूद है. procedures सभी गैर टर्मिनल प्रक्रियाओं प्रयोगशाला पशुओं 6 में रक्त संग्रह के लिए दिशा निर्देशों से अधिक नहीं है कि नमूना मात्रा और नमूनों की संख्या प्रदान की जाती हैं. यह तनाव एक न्यूनतम करने के लिए रखा जाना चाहिए कि पशु कल्याण के रूप में भी अच्छा विज्ञान के हित में है. नतीजतन, केवल अच्छी तरह से प्रशिक्षित और सक्षम निजी पशु प्रक्रियाओं का प्रदर्शन करना चाहिए.

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Protocol

दिखाया प्रक्रियाओं खाद्य, कृषि और मत्स्य पालन मंत्रालय के अधीन डैनिश पशु प्रयोग निरीक्षणालय द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार प्रदर्शन किया गया.

लेटरल saphenous या टखने की हड्डियों का नस से 1 रक्त का नमूना लेना

  1. संज्ञाहरण के बिना इस प्रक्रिया और एक अन्वेषक, गिनी पिग से निपटने, और एक नमूना एकत्रित की मदद प्रदर्शन करना.
  2. नसों दिखाई दे रहे हैं जब तक एक इलेक्ट्रिक शेवर के साथ हिंद पैर के टखने की हड्डियों का क्षेत्र दाढ़ी. क्षेत्र पंचर साइट के साथ हस्तक्षेप फर से बचने के लिए काफी बड़ी है सुनिश्चित करें.
  3. एक गुनगुने पानी से स्नान में हिंद पैर रखें और धीरे नसों अधिक फैली हुई है और स्पष्ट है, जिससे पैर रगड़ना.
  4. एक साफ तौलिया के साथ पैर साफ कर लें और धुंध या 70% शराब के साथ घटा एक कपास झाड़ू के साथ पंचर साइट कीटाणुरहित.
  5. गिनी पिग को नियंत्रित और तुरंत घुटने संयुक्त T ऊपर कोमल दबाव लागू करने, जबकि नीचे हिंद पैर का विस्तारओ ठहराव प्रदान करते हैं.
  6. एक 21 जी सुई या नुकीला का उपयोग नस पंचर. रक्त जैसे लीजिए., एक संग्रह या केशिका ट्यूब का उपयोग करके. धीरे रक्त प्रवाह सहायता करने के लिए पैर में हेरफेर.
  7. नमूना प्राप्त किया गया है एक बार, ठहराव रिलीज. खून बह रहा बंद कर दिया है जब तक पंचर साइट पर कोमल दबाव के साथ धुंध या रूई का एक टुकड़ा लागू करें.
  8. Hemostasis सुनिश्चित करने के लिए 5-10 मिनट के लिए अपने पिंजरे और निगरानी के लिए पशु लौटें.

कान नस से 2 रक्त का नमूना लेना

  1. एक सहयोगी की मदद से या तो अकेले या बेहतर संज्ञाहरण के बिना इस प्रक्रिया को.
  2. धुंध या 70% शराब के साथ घटा एक कपास झाड़ू का प्रयोग कान के पृष्ठीय सतह कीटाणुरहित.
  3. ठहराव प्रदान करने के लिए कान के आधार पर प्रकाश दबाव लागू करें.
  4. एक 21 जी सुई या नुकीला का उपयोग नस पंचर, और रक्त इकट्ठा.
  5. , ठहराव रिलीज नमूना प्राप्त किया गया है एक बार, जीई के साथ धुंध या रूई का एक टुकड़ा लागू करेंखून बह रहा है जब तक पंचर साइट पर ntle दबाव बंद कर दिया है.
  6. Hemostasis सुनिश्चित करने के लिए 5-10 मिनट के लिए अपने पिंजरे और निगरानी के लिए पशु लौटें.

गले नस से 3 रक्त का नमूना लेना

  1. एक अतिरिक्त अन्वेषक की मदद का उपयोग कर इस प्रक्रिया से बाहर ले; एक गिनी पिग से निपटने और एक नमूना एकत्रित.
  2. इस प्रक्रिया की पूरी अवधि के लिए एक उपयुक्त संवेदनाहारी के साथ गिनी पिग चतनाशून्य. Tiletamine का एक मिश्रण (0.93 मिलीग्राम / किग्रा), zolazepam (0.93 मिलीग्राम / किग्रा), xylazine (1.49 मिलीग्राम / किग्रा) और butorphanol (0.06 मिलीग्राम / किग्रा) का इस्तेमाल किया जा सकता है.
  3. अपनी पीठ पर anaesthetized गिनी पिग रखें और धीरे दुमदारी forelegs वापस लेना.
  4. दाढ़ी और कीटाणुरहित (जैसे., 70% शराब के साथ) गर्दन के उदर भाग.
  5. कोट के थक्के के जोखिम को कम करने के क्रम में हेपरिन या EDTA पूर्व नमूने को या तो साथ सिरिंज.
  6. सुई एक 1 मिलीलीटर सिरिंज एपी पर घुड़सवार (23 जी या) हंसली टटोलना और एक 25 जी डालेंproximately 1 सेमी कंधे संयुक्त के स्तर पर midline के लिए पार्श्व. एक मामूली नकारात्मक दबाव लागू करने, जबकि एक मामूली ऊपर और औसत दर्जे का कोण में सिरिंज रखें. गले नस काफी सतही स्थित है के रूप में अंतर्निहित संरचनाओं हानिकारक से बचने. नस की वृद्धि ठहराव प्रदान करने के लिए थोड़ा पीछे की ओर गिनी पिग की गर्दन झुकाएँ.
  7. खून का नमूना प्राप्त किया जाता है जब सामने पैर जारी है, और सुई मुकर जाने से पहले ठहराव कम. पंचर साइट पर कोमल दबाव लागू करने के लिए धुंध या रूई का एक सूखा टुकड़ा का उपयोग करें.
  8. एक वसूली पिंजरे में पशु लौटें और संज्ञाहरण से hemostasis और वसूली सुनिश्चित करने के लिए निगरानी.

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Representative Results

होश में या anaesthetized गिनी सूअरों में या तो गैर टर्मिनल में विवो रक्त नमूना तकनीक के लिए चार अलग अलग दृष्टिकोण प्रस्तुत किया गया है. चित्रा 1 गिनी पिग और संभव पंचर साइटों में पार्श्व saphenous और टखने की हड्डियों का नस बेशक दिखाता है. एक गिनी पिग कान के पृष्ठीय सतह पर दिखाई कान नसों केवल एक बहुत छोटी मात्रा की आवश्यकता होती है जब इन नसों रक्त नमूना लेने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है चित्रा 2 में सचित्र हैं. गले का रक्त नमूना लेने के लिए गिनी पिग की स्थिति चित्रा 3 में शो है. गले नस के पाठ्यक्रम की सिफारिश पंचर साइट पर ऊपरवाला ओर इशारा करते तीर के साथ तीर से यह साफ है.

चित्रा 1
चित्रा 1 गिनी पिग में पार्श्व saphenous और टखने की हड्डियों का नस. छवि पाठ्यक्रम और दिखाता हैरक्त पार्श्व saphenous (ऊपरी तीर) से नमूने या गिनी पिग में टखने की हड्डियों का नस (नीचे तीर) के लिए पंचर साइट.

चित्रा 2
चित्रा 2 कान नसों. यह छवि एक गिनी पिग कान के पृष्ठीय सतह पर दिखाई कान नसों (तीर) दिखाता है. केवल एक बहुत छोटी मात्रा की आवश्यकता होती है जब इन नसों रक्त नमूना लेने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

चित्रा 3
गले नस रक्त नमूना लेने के लिए गिनी पिग की चित्रा 3 स्थिति. इस गिनी पिग की स्थिति और गले नस रक्त नमूना लेने के लिए पंचर साइट दिखाता है. तीर सिफारिश पंचर साइट की ओर ऊपरवाला ओर इशारा करते तीर के साथ गले नस के पाठ्यक्रम से संकेत मिलता है.

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Discussion

चूहों और चूहों की तुलना में, गिनी सूअरों स्वभाव से डर रहे हैं और शांति से संपर्क किया और तनाव कम करने के लिए सही ढंग से नियंत्रित किया जाना चाहिए. देखने का एक पशु कल्याण बिंदु से, ध्यान के साथ अभिनय स्वाभाविक रूप से एक प्राथमिकता है; हालांकि, यह भी. एकत्र डेटा जैसे पर चिंता जुड़े प्रभाव के जोखिम को कम corticosteroids की वृद्धि की रक्त स्तर और 12 ग्लूकोज जाएगा. इसी तरह, दैनिक निपटने सामान्य प्रक्रियाओं को जानवरों आदत डालना होगा और आगे भी तनाव को कम करने के लिए सेवा कर सकता है. एक विशेष रक्त नमूना तकनीक में व्यावहारिक विशेषज्ञता पहले एक अनुभवी ऑपरेटर देख और क्षमता हासिल की है जब तक उसके बाद देखरेख में तकनीक का आयोजन द्वारा प्राप्त किया जाना चाहिए. चुना तकनीक आदर्श दोनों एक न्यूनतम करने के लिए तनाव और बेचैनी को कम करना चाहिए, लेकिन यह भी नमूना आकार और पहुंच की आवश्यकताओं के अस्तित्व के साथ ही अनुपालन सुनिश्चित करने के लिए. सभी प्रस्तुत रक्त नमूना लेने के तरीकों के लिए सड़न रोकनेवाला तकनीक होना चाहिएसंक्रमण के खतरे को कम करने और पवित्र नमूनों का संग्रह सुनिश्चित किया.

रक्त नमूना लेने के लिए सचित्र दृष्टिकोण जानवर के अस्तित्व कि नमूना मात्रा प्रदान की है और आवृत्ति के दिशा निर्देशों के अनुसार हासिल की है और सभी छोटी और लंबी अवधि के अध्ययन के 6 दोनों में दोहराया नमूना लेने के लिए लागू किया जा सकता हैं. यह इसके द्वारा 3RS '(कमी) के अनुपालन में विचरण और शामिल जानवरों की संख्या कम समय के साथ व्यक्ति पशुओं की लगातार निगरानी 13,14 सक्षम बनाता है. यहाँ प्रस्तुत तकनीकों एक प्रयोग शुरू करने से पहले विचार किया जाना चाहिए जो प्राप्य नमूना मात्रा (1-2 मिलीलीटर अप करने के लिए कुछ μl) की विभिन्न श्रेणियों है. संयुक्त राष्ट्र anaesthetized गिनी सूअरों में गले नस से खून इकट्ठा करने के लिए प्रक्रियाओं 12 में वर्णित किया गया है, हम दृढ़ता से जितना संभव तनाव और बेचैनी कम करने के लिए संज्ञाहरण के इस्तेमाल की सिफारिश. जब ऐसा करने से, संज्ञाहरण के चुनाव carefull होना चाहिएवाई गिनी सूअरों चतनाशून्य और संवेदनाहारी के काफी भिन्नता प्रभावशीलता के रूप में अच्छी तरह से प्रेरित श्वसन अवसाद 15,16 की दिशा में एक उच्च संवेदनशीलता प्रदर्शित करने के लिए बेहद मुश्किल हैं, टिप्पण है कि संबोधित किया. गिनी सूअरों में गले नस दिखाई और न ही स्पष्ट नमूना कठिनाइयों को बढ़ा सकता ठहराव / शिरापरक फैलाव में कोई कमी न होने की है, इस प्रकार यह आम तौर पर संज्ञाहरण-मिश्रण में vaso-बाधा एजेंटों से बचने के लिए सिफारिश की है. . इसके अलावा, इच्छित डेटा संग्रह जैसे के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं जो विशिष्ट anaesthetizing एजेंट के ज्ञात प्रभाव, α 2 निम्नलिखित हृदय प्रभाव और / या वृद्धि की रक्त शर्करा का स्तर - कृन्तकों में एगोनिस्ट कार्रवाई 16,17 मूल्यांकन किया जाना चाहिए. भी गिनी सूअरों में हालांकि इंटुबैषेण के रूप में एक विकल्प हो सकता है इस तरह के isoflurane के रूप में साँस लेना संज्ञाहरण का उपयोग एक बहुत ही मुश्किल काम देखभाल इस complic सकता है के रूप में सिर / गर्दन की स्थिति के साथ साँस लेना मुखौटा द्वारा हस्तक्षेप से बचने के लिए लिया जाना चाहिए हैअनावश्यक प्रक्रिया खा लिया. सामान्यीकृत संज्ञाहरण जैसे., साँस लेना द्वारा भी एक बड़ा नमूना मात्रा उपलब्ध करा सकता है जो हृदय पंचर के लिए आवश्यक है. हालांकि, हृदय पंचर एक टर्मिनल प्रक्रिया और दोहराया नमूना लेने के लिए इसलिए लागू नहीं है और आगे वर्णित नहीं किया जाएगा.

ऐसे नकसीर, चोट, घनास्त्रता, संक्रमण और डरा के रूप में संभावित प्रतिकूल प्रभाव एक नस का पंचर के बाद हो सकता है. हमारे अनुभव में, गिनी पिग वर्तमान पांडुलिपि के रूप में वर्णित प्रक्रिया से किया जाता है बशर्ते कि अन्य कृंतक मॉडल की तुलना में इस तरह के अवांछित जटिलताओं का खतरा बढ़ प्रदर्शन नहीं करता. गले नस बाहरी सतह से देखे जा नहीं सकते हैं, यह सुई वापस लेने से पहले ठहराव को दूर करने और पेरी शिरापरक नकसीर और चोट के जोखिम को कम करने के लिए पर्याप्त hemostasis प्रदान करने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है. प्रतिकूल प्रभाव की स्थिति में उपचार हमेशा जिम्मेदार veteri से मांग की जानी चाहिएnarian. अच्छा पशु कल्याण और विज्ञान के कारणों के लिए, गंभीर विचार नमूना मात्रा और आवृत्ति और नमूना तकनीक की पसंद के संयुक्त प्रभाव को दिया जाना चाहिए. सभी वर्णित रक्त नमूना तकनीक अच्छी तरह से जांच और हमारे अनुसंधान सुविधा के भीतर अध्ययन में विवो रक्त नमूने में दोहराया के लिए लागू किया गया है.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है. सभी प्रक्रियाओं यूरोप कन्वेंशन टिकट 123 की परिषद के अनुसार है जो डेनमार्क के पशु प्रयोगों अधिनियम द्वारा अनुमोदित किया गया.

Acknowledgments

हम एनी बी Kristensen, एलिसाबेथ वी एंडरसन, बेलिंडा बी Bringtoft और प्रायोगिक चिकित्सा, फ़्रेडरिक्सबर्ग कैम्पस, स्वास्थ्य और चिकित्सा विज्ञान के संकाय, कोपेनहेगन, डेनमार्क के विश्वविद्यालय के विभाग में पशु रखवाले के कुशल सहायता स्वीकार करते हैं. याकूब Lønholdt प्रक्रियाओं फिल्माने में अपने उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए धन्यवाद दिया है. इस अध्ययन में विवो फार्माकोलॉजी और कोपेनहेगन विश्वविद्यालय के लिए LIFEPHARM केंद्र द्वारा समर्थित किया गया था.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Electric shaver Wella (Contura), Denmark 273207 Alternative product may be used. Multiple suppliers
Syringes  B.Braun-Omnifix-F, Germany 9161406V Alternative product may be used. Multiple suppliers
Needles BD Microlance, Spain 301156 Alternative product may be used. Multiple suppliers
Microvette collection tube  Sarstedt, D-51588Nümbrecht, Germany 201,288,100 Alternative product may be used. Multiple suppliers
Accu-Check analyzer Roche A/S Diagnostics, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Heparin 5000 IE/ml LEO Pharma, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia Zoletil 50, Chemvet, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Anesthesia Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Denmark Alternative product may be used. Multiple suppliers
Neutral eye ointment Alternative product may be used. Multiple suppliers
Gauze or a cotton swab  Alternative product may be used. Multiple suppliers
Disinfectant (70% alcohol) Alternative product may be used. Multiple suppliers

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