Infravermelho Próximo (NIR) Luz aumenta a expressão de um marcador da função mitocondrial no mouse Vestibular Sensorial Epithelium

1Discipline of Physiology, University of Sydney, 2Discipline of Biomedical Science, University of Sydney
Biology

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Summary

A disfunção mitocondrial é uma característica da senescência celular. Este trabalho usa não-invasivo do infravermelho próximo (NIR) de tratamento para melhorar a função mitocondrial no rato epitélio sensorial vestibular de envelhecimento.

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Zhang, L., Tung, V. W., Mathews, M., Camp, A. J. Near Infrared (NIr) Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium. J. Vis. Exp. (97), e52265, doi:10.3791/52265 (2015).

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Abstract

Estratégias para atenuar o declínio na função equilíbrio com o aumento da idade são predominantemente focado em terapias físicas, incluindo tarefas de equilíbrio e exercícios. No entanto, estas abordagens não abordam as causas subjacentes do declínio do equilíbrio. Usando ratos, o impacto da luz de infravermelho próximo (NIR) sobre o metabolismo de células do epitélio sensitivo vestibular foi avaliada. Os dados coletados mostram que essa intervenção simples e segura pode proteger essas células vulneráveis ​​dos efeitos deletérios do envelhecimento natural. ARNm foi extraído a partir do epitélio sensitivo vestibular periférico isolado (ampulares crista, e mácula utricular) e posteriormente transcrita para uma biblioteca de ADNc. Esta biblioteca foi então sondadas para a expressão de antioxidante ubíqua (SOD-1). A expressão do gene antioxidante foi então usado para quantificar o metabolismo celular. Usando entrega transcraniana de Nir em jovens (4 semanas) e mais velhos (8-9 meses), ratos, e um regime de tratamento breve (90 seg / dia para 5 days), este trabalho sugere NIR sozinho pode ser suficiente para melhorar a função mitocondrial no epitélio sensitivo vestibular. Uma vez que existem atualmente não há métodos disponíveis, acessíveis e não-invasivos de terapia para melhorar a função das células ciliadas vestibular, a aplicação de radiação NIR externa fornece uma estratégia potencial para neutralizar o impacto do envelhecimento sobre o metabolismo celular inthe epitélio sensorial vestibular.

Introduction

O declínio da performance de equilíbrio e quedas subsequentes são comuns, e, infelizmente, muitas vezes definem características de envelhecimento natural 1. O impacto desse declínio pode ser tanto física e social, e reduz significativamente a qualidade de vida das pessoas mais velhas. Em resposta, terapias físicas e reabilitação têm sido o foco da investigação sobre as quedas, mas não têm sido associadas com redução consistente na prevalência de quedas repetidas. Ao mesmo tempo, o trabalho investiga as mudanças no sistema vestibular periférico ou central (o sistema responsável por manter o equilíbrio) é escassa, e potenciais estratégias terapêuticas dirigidas a esses sistemas e as causas subjacentes de desequilíbrio limitado.

Trabalhos recentes sobre doenças neurodegenerativas associadas com a idade relacionada com a idade, incluindo degeneração macular 2-4, modelos da doença de Alzheimer, 5-8 e 9-12 doença de Parkinson têm mostrado efeitos neuroprotectores de simple aplicação não invasiva do infravermelho próximo (NIR) luz. Além disso, no sistema vestibular, NIR foi usada para aumentar a actividade dos neurónios aferentes primários vestibulares in vitro 13. Embora o mecanismo de NIR luz não é bem compreendido, a maioria dos estudos que usam NIR sugeriram que estimula NIR mitocôndrias complexo IV (citocromo c oxidase) 14-17 para facilitar o metabolismo celular. No epitélio sensorial vestibular da placa subcuticular do tipo células ciliadas I é denso em mitocôndrias 18 e, como tal, pode representar um local de ação para o tratamento terapêutico NIR.

Aqui, uma breve regime de tratamento, não-invasivo de transcraniana aplicado NIR que podem ser utilizadas para medir o metabolismo celular (e implicitamente, a função mitocondrial) no rato epitélio sensorial vestibular é descrito. Também é discutida a preparação de um epitélio sensorial vestibular e é mostrado que o NIR aumenta a expressão de um ubiquitonos anti-oxidante (superóxido dismutase 1) no epitélio sensorial - anteriormente mostrado ser importante para a sobrevivência de células do cabelo cóclea 19.

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Protocol

Declaração de Ética: Todos os procedimentos descritos a seguir foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade de Sydney animal.

1. Animais

NOTA: 1 e 8-9 meses de idade camundongos (C57 / BL6) foram obtidos a partir do Centro de Recursos Animal (Perth, Austrália). Os ratinhos foram alojados no mecanismo Bosch Roedor na Universidade de Sydney.

  1. Casa ratos em gaiolas-padrão do mouse em um ciclo claro / escuro de 12/12 horas de luz com acesso a comida e água ad libitum.
  2. Camundongos Divida em cada faixa etária em infravermelho próximo (NIR), tratados, ou sham grupos tratados (controle) para comparação.

2. Infravermelho Próximo (NIR) Irradiação e Tratamento Sham

  1. Raspar a pele na região da cabeça e pescoço do mouse com um barbeador elétrico, tanto quanto possível para evitar a rebrota rápida de cabelo antes da realização do regime de tratamento. A fim de manter o status de livre de patógenos dos ratos, use 70% de etanolpara limpar instrumentos entre animais para maquiagem e desinfetante F10 veterinário entre animais de gaiolas separadas. Faça isto 2-3 dias antes do início do tratamento para que os animais não estão sobre-tratadas.
  2. Conter rato com a extremidade proximal da cauda e permitir que ele relaxe na palma de uma mão ou de bancada, de modo a minimizar o stress, que pode levar a resultados falsos.
  3. Segure o NIR (670 nm) LED (light emitting diode) dispositivo de 1-2 cm de distância da área exposta (raspada) e ligar o aparelho durante 90 segundos (Figura 1A).
    NOTA: A mudança de temperatura como resultado de exposição de 90 segundos foi medida como <0,2 ° C em 100 ml de água.
  4. Repita os passos de 2,2-2,3 para o grupo de tratamento simulado de animais, mas deixar o aparelho desligado (Figura 1B).
  5. Repita os passos de 2,2-2,3 para o grupo de tratamento Nir-bloqueado de animais, mas cubra o aparelho com papel alumínio.
  6. Repita os passos 2,2-2,5 diariamente às approximate 24 intervalos de RH durante 5 dias consecutivos.
  7. Extraia o epitélio vestibular sensorial (3 cristas e uma mácula utricular) de ambas as orelhas no quinto dia pós-tratamento (ver secção 3 abaixo).

3. Extracção de tecido 20

  1. Preparar 300 ml de um fluido cerebrospinal artificial (ACSF) à base de glicerol que consistem em (em mM): 26 de NaHCO3, 11 de glucose, 250 glicerol, 2,5 de KCl, 1,2 de NaH 2 PO 4, 1,2 de MgCl2, 2,5 e CaCl 2. Antes da adição de CaCl2, gás a solução com carbogénio (95% O 2 e 5% CO 2) para estabelecer um pH de 7,4 e evitar a precipitação do cálcio (turvação). Arrefeça a solução num congelador a -80 ° C durante 45 minutos de modo que uma pasta de gelo é formada.
  2. Prepare o tampão de lise isolamento do RNA em microtubos parafuso superior marcados (pára o popping de tampas quando as alterações de pressão tubo entre congelamento e descongelamento em nitrogênio líquido), de acordocom as instruções do fabricante ou práticas de laboratório habituais. Já nitrogênio líquido pronto em um frasco de Dewar de alumínio.
    NOTA: Use roupas de proteção e eyeware ao manusear nitrogênio líquido. Certifique-se de que o nitrogênio líquido é usado em um quarto bem ventilado como o volume da sua forma de gás é aproximadamente 700 vezes maior do que a sua forma líquida e pode causar asfixia.
  3. Profundamente anestesiar os ratos com cetamina (400 mg / kg) através de uma injecção intra-peritoneal. Permitir que o reflexo posterior de membros para desaparecer completamente como indicação de que os ratos são totalmente anestesiado.
  4. Decapitar ratos com tesoura de aço inoxidável afiadas e fazer uma incisão ao longo da pele sagital do crânio usando uma lâmina de barbear (arredondado # 22). Neste momento e em toda as etapas 3,5-3,9, manter a calota craniana, cérebro e aparelho vestibular subjacente o mais fresco possível pela aplicação regular de ACSF gelada sobre o tecido.
  5. Usando o braço pontas de tesouras padrão standard fazer uma small incisão no crânio no Lambda e cortar ao longo da sutura sagital.
  6. Deslize suavemente um braço de um fórceps rasas debaixo do osso parietal mantendo a lâmina tão próximo quanto possível da superfície inferior do osso sem arrastar o cérebro. Seguros e afastar o osso parietal lateral e posterior do osso occipital até que o cérebro está exposto.
  7. Use uma pequena espátula de aço inoxidável e levante o cérebro de distância do anterior e fossa craniana média para expor o nervo vestibular (CN VIII). Transecto o nervo para evitar tensão desnecessária sobre os axônios aferentes primários que inervam diretamente as células ciliadas vestibulares.
  8. Remover o cérebro in toto após transecção do CN VIII.
  9. Observe o labirinto ósseo contendo a cóclea e os órgãos vestibulares periféricas da fossa craniana média. Faça duas pequenas incisões ao lado de cada labirinto ósseo e extirpar toda a estrutura, mantendo o canal semicircular anterior e puxando mais tardealiado.
  10. Mergulhar imediatamente labirintos excisadas em um prato de dissecação contendo solução ACSF gelado (como descrito no passo 3.1), enquanto que irriga continuamente com carbogéneo.
  11. Sob um microscópio estereoscópico, mantenha pressionado o labirinto pela cóclea e fixá-lo ao fundo do prato com uma pinça.
    1. Use uma pinça reta fina para riscar uma pequena abertura no osso acima do canal semicircular (SSC) ampulla anterior.
    2. Gentilmente ampliar esta abertura, alcançando imediatamente abaixo do osso e sacudindo para fora ampulífuga. Tenha cuidado aqui para não empurrar pinça na abertura e danificar o labirinto membranoso frágil abaixo. Continuar dessa maneira até que o utrículo, anterior e ampolas laterais estão todos expostos. Se possível remover a ampola posterior também.
  12. Usando uma pinça fina, levantar delicadamente o utrículo e ampolas de distância do labirinto ósseo até que estejam completamente isolada. Sempre que possível, mantê-lospor seus canais semicirculares associados para evitar danos ao epitélio sensorial. Em alguns casos, a parte proximal da conduta membranoso semicircular pode ter de ser cortado com tesoura de íris para libertar as ampolas a partir do osso.
  13. Firmemente compreender os órgãos vestibulares entre a ponta de uma pinça e lugar para o tampão de lise preparado anteriormente na etapa 3.2. Agite suavemente a pinça em torno do tampão para garantir órgãos vestibulares têm destacado a pinça. Confira este for o caso, trazendo a pinça, ao microscópio estereoscópico.
    1. Parafuso na tampa de microtúbulos e congelar a amostra em nitrogênio líquido imediatamente.

4. Extracção de ARN e RT-PCR

  1. Siga métodos padrão de RNA mensageiro (mRNA) extracção de acordo com as instruções do fabricante ou protocolos de laboratório preferenciais.
    NOTA: Um kit comercial que utilizou ARN de suporte para ajudar a isolar pequenos rendimentos de ARNm foi utilizada nesteprotocolo. Volumes de eluição inferiores podem ser utilizados para aumentar as concentrações finais de ARNm.
    NOTA: Negativo controles "não enzima" (CNE) e controles "nenhum modelo de DNA" (NTC) também deve ser concluído para garantir a validade dos efeitos observados.
  2. Aplicar os métodos padrão de transcrição reversa do ARNm de ADN complementar (ADNc) e amplificação de genes alvo 21-23.

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Representative Results

Para comparar o impacto do tratamento NIR em jovens (4 semanas) e mais velhos (8-9 meses), camundongos medimos a expressão de antioxidante superóxido dismutase 1 (SOD-1) em jovens (n ​​= 16) e mais velhos (n = 20) os ratos que foram tratados Nir, tratamento simulado, ou NIR-bloqueados. A Figura 2 mostra um aumento significativo na normalizada SOD-1 expressão β-actina de mais de 2 vezes em jovens tratados com NIR animais jovens em comparação com os animais tratados de forma simulada (p <0,01) e animais jovens NIR-bloqueadas (p <0,01). Animais tratados com Nir Older também mostrou que mais de 2 vezes up-regulação da SOD-1 quando comparados com animais Nir-bloqueadas mais velhos (p <0,05).

Figura 1
Figura 1. Nir Tratamento. 2 cm acima da região raspou na cabeça do rato durante 90 segundos por dia durante 5 dias consecutivos em irradiação trea - (A) Nir dispositivo portátil 1 LEDcamundongos ted. (B) Nir realizada dispositivo acima camundongos tratados de forma simulada, da mesma forma, mas com o dispositivo desligado durante o período de 90 seg LED. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 2
Figura 2. Análise de SOD-1 a expressão do gene após 5 dias consecutivos de tratamento NIR (90 seg / dia). O epitélio sensitivo vestibular foi colhida no quinto dia e antioxidante gene específico sondaram por meio de RT-PCR. O gene de SOD-1 foram normalizados para β-actina de linha de base e densitometria realizada utilizando o ImageJ v1.48. Significativo aumento da regulação (p <0,01) da SOD-1 expressão foi observada em animais jovens tratados-NIR, quando comparado com os dois controles jovens Nir-bloqueadas (4 semanas) tratados sham e jovem. Aumento significativo (p &# 60; 0,05) na expressão de SOD-1 foi também observada em animais mais velhos tratados com NIR, quando comparado com animais mais velhos NIR-bloqueados (8-9 meses). Todos os gráficos mostram a mudança de dobragem de SOD-1 em comparação com a expressão do gene do jovem de controlo tratados por simulação. Os dados representam a média ± SD. Todos os dados foram analisados ​​por meio de uma análise de variância e significância estatística determinada utilizando comparações múltiplas de Tukey teste post-hoc. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Discussion

Os resultados representativos descritos aqui mostram que a entrega breve transcraniana de luz NIR (90 seg / dia durante 5 dias) é suficiente para elevar os níveis de expressão de antioxidantes em ratos mais velhos quando comparados com os ratos tratados por simulação. Enquanto calor emitido poderia representar uma fonte de mitocondrial e / ou ativação neuronal, como relatado para vestibular rato aferentes 24 - nossa medição do calor emitido pelo NIR LED dispositivo foi <0,2 ° C durante 90 segundos, e, como tal, não é provável que o alterações descrito aqui. Além disso, ao contrário do relatório destacado acima, o tratamento Nir usada aqui não foi aplicada diretamente para o epitélio sensorial ou neurônios aferentes vestibulares, e como tal, é também pouco provável a impactar no termo canais sensíveis (eg, TRPV4). Finalmente, o trabalho anterior utilizando o mesmo dispositivo de NIR em outras regiões do cérebro sugeriram que o calor não foi a fonte das diferenças observadas 7,9.

Enquanto estes results mostram uma sobre-regulação da resposta celular ao stress oxidativo associada à idade no nível genético, não é claro se estas alterações são adicionalmente expressa ao nível da proteína, ou importante, se eles são reflectidos no desempenho global equilíbrio de ratinhos. Além disso, a sobre-regulação é mostrada para um único anti-oxidante ubíqua. É provável que vários marcadores do metabolismo celular são afectados por este regime de tratamento. Além disso, uma vez que o ARNm foi extraído a partir do aparelho vestibular in toto (isto é, células ciliadas, células de suporte, aferentes vestibulares e epitélio todos presentes), não é possível relacionar as alterações observadas no metabolismo celular em resposta ao tratamento com luz NIR para um cabelo vestibular específico tipo de célula ou aferentes primários. Importante, porém, utilizando o ARNm suficiente de preparação descrito pode ser extraído a partir de um único rato para permitir futuras estudos de correlação entre o metabolismo celular e análise comportamental de equilíbrio performance.

A intensidade LED dispositivo de alta usada aqui emite cerca de 5 J / cm 2 por 90 seg tratamento- totalizando 25 J de energia ao longo de 5 dias. Embora a vantagem da utilização de luz de comprimento de onda longo (incluindo NIR) é a penetrância, não pode ser assumido que o total de 25 J NIR de luz é entregue ao epitélio sensitivo vestibular. No rato, a luz deve penetrar pelo menos 1 mm por meio de camadas de tecidos moles e osso que protegem o aparelho vestibular periférico e no cérebro. Nos humanos este se estende para centímetros. Assim, a penetração de luz representa uma limitação da técnica descrita em relação à tradução de NIR estratégias de tratamento de luz para o ambiente clínico. Trabalhos recentes, entretanto, tem empregado fibras ópticas para entregar Nir luz para estruturas cerebrais profundas, incluindo os gânglios da base 25, e os órgãos sensoriais, incluindo a cóclea 26. Com base nesta e a localização do aparelho vestibular periférica adjacente àcóclea (e clínica acesso a ele através do processo mastóides), é viável a sugerir que, no ser humano, a estimulação directa do epitélio sensitivo vestibular pode ser alcançada através de uma pequena fibra óptica desencadeada por um dispositivo externo - semelhante a um implante coclear 27 .

Várias condições podem ser modificados no protocolo descrito acima, para se adaptar ao interesse do investigador. Em primeiro lugar, o comprimento de onda usado aqui (670 nm) pode ser estendido para incluir os comprimentos de onda mais longos na faixa do infravermelho tal como anteriormente reportado em outros sistemas sensoriais e modelos animais. Em segundo lugar, os regimes de tratamento também pode ser variada, dependendo se a curto prazo ou resposta a longo prazo é em questão. Aqui um breve regime de tratamento foi utilizado, mas isso poderia ser estendido para períodos mais longos, ou durações mais curtos para medir a dinâmica das mudanças induzidas NIR.

O principal desafio deste protocolo é para manter a viabilidade do tecidodurante a extracção do tecido. Dado o tempo necessário para remover o labirinto ósseo e excisar o labirinto membranoso a partir dele, é essencial para reduzir a degradação metabólica. Isto é conseguido por banhar o tecido em ACSF gelado durante todo o procedimento de perfusão e esta solução continuamente com carbogéneo. Além disso, no final do procedimento de dissecção, uma maior degradação do tecido pode ser interrompido com o uso de azoto líquido para congelar o tecido piscar extraída. Quando necessário, o tecido congelado pode ser descongelado e mRNA extraído para posterior análise genética.

Embora os métodos descritos aqui não descrevem o impacto total do tratamento de luz NIR no metabolismo celular no epitélio sensitivo vestibular, nova aplicação desta estratégia pode ser modificada para incluir outros marcadores associadas com a idade de função mitocondrial 28,29 e / ou metabólica celular insultos, como hipóxia 30. Em última análise, a capacidade de descrever o vperfil metabólico celular estibular de um rato indivíduo permitirá que a investigação das correlações entre o desempenho equilíbrio e processos subcelulares durante o envelhecimento, bem como o impacto da terapêutica incluindo tratamento NIR.

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Disclosures

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Acknowledgements

Os autores gostariam de agradecer Dr. Paul Witting e Ms. Genevieve Fong por sua assistência com extração de mRNA e PCR, eo Garnett Passe e Rodney Williams Memorial Foundation para o apoio.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Quantum WARP 10 Quantum Devices 2070N030-A
Screw top microtubules Quality Scientific Plastics 520-GRD-Q
Ketamine Parnell, Alexandria Australia
Standard pattern scissors FST 14001-12
Carbon steel surgical blades #22 Livingstone SBLDCL 22
Friedman-Pearson rongeurs FST 16221-14
Stereo microscope Leica Microsystems A60S
Dumont #5 SF forceps FST 11252-00
Isolate II RNA Micro Kit Bioline BIO-52075

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References

  1. Agrawal, Y., Carey, J. P., Della Santina,, C, C., Schubert, M. C., Minor, L. B. Disorders of balance and vestibular function in US adults: data from the National Health and Nutrition Examination Survey, 2001-2004. Archives of internal medicine. 169, 938-944 (2009).
  2. Bessho, K., et al. Effect of subthreshold infrared laser treatment for drusen regression on macular autofluorescence in patients with age-related macular degeneration. Retina. 25, 981-988 (2005).
  3. Olk, R. J., et al. Therapeutic benefits of infrared (810-nm) diode laser macular grid photocoagulation in prophylactic treatment of nonexudative age-related macular degeneration: two-year results of a randomized pilot study. Ophthalmology. 106, 2082-2090 (1999).
  4. Rodanant, N., et al. Predictors of drusen reduction after subthreshold infrared (810 nm) diode laser macular grid photocoagulation for nonexudative age-related macular degeneration. American journal of ophthalmology. 134, 577-585 (2002).
  5. De Taboada, L., et al. Transcranial laser therapy attenuates amyloid-beta peptide neuropathology in amyloid-beta protein precursor transgenic mice. Journal of Alzheimer's disease : JAD. 23, 521-535 (2011).
  6. Grillo, S. L., Duggett, N. A., Ennaceur, A., Chazot, P. L. Non-invasive infra-red therapy (1072 nm) reduces beta-amyloid protein levels in the brain of an Alzheimer's disease mouse model. TASTPM. Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology. 123, 13-22 (2013).
  7. Purushothuman, S., Johnstone, D. M., Nandasena, C., Mitrofanis, J., Stone, J. Photobiomodulation with near infrared light mitigates Alzheimer's disease-related pathology in cerebral cortex - evidence from two transgenic mouse models. Alzheimer's researc., & therapy. 6, 2 (2014).
  8. Sommer, A. P., et al. 670 nm laser light and EGCG complementarily reduce amyloid-beta aggregates in human neuroblastoma cells: basis for treatment of Alzheimer's disease. Photomedicine and laser surgery. 30, 54-60 (2012).
  9. Moro, C., et al. Photobiomodulation preserves behaviour and midbrain dopaminergic cells from MPTP toxicity: evidence from two mouse strains. BMC neuroscience. 14, 40 (2013).
  10. Peoples, C., et al. Photobiomodulation enhances nigral dopaminergic cell survival in a chronic MPTP mouse model of Parkinson's disease. Parkinsonis., & related. 18, 469-476 (2012).
  11. Shaw, V. E., et al. Neuroprotection of midbrain dopaminergic cells in MPTP-treated mice after near-infrared light treatment. The Journal of comparative neurology. 518, 25-40 (2010).
  12. Ying, R., Liang, H. L., Whelan, H. T., Eells, J. T., Wong-Riley, M. T. Pretreatment with near-infrared light via light-emitting diode provides added benefit against rotenone- and MPP+-induced neurotoxicity. Brain research. 1243, 167-173 (2008).
  13. Rajguru, S. M., et al. Infrared photostimulation of the crista ampullaris. The Journal of physiology. 589, 1283-1294 (2011).
  14. Chung, H., et al. The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy. Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).
  15. Desmet, K. D., et al. Clinical and experimental applications of NIR-LED photobiomodulation. Photomedicine and laser surgery. 24, 121-128 (2006).
  16. Huang, Y. Y., Chen, A. C., Carroll, J. D., Hamblin, M. R. Biphasic dose response in low level light therapy. Dose-response : a publication of International Hormesis Society. 7, 358-383 (2009).
  17. Rojas, J. C., Gonzalez-Lima, F. Low-level light therapy of the eye and brain. Eye and brain. 3, 49-67 (2011).
  18. Vranceanu, F., et al. Striated organelle, a cytoskeletal structure positioned to modulate hair-cell transduction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 4473-4478 (2012).
  19. Johnson, K. R., et al. Separate and combined effects of Sod1 and Cdh23 mutations on age-related hearing loss and cochlear pathology in C57BL/6J mice. Hearing research. 268, 85-92 (2010).
  20. Tung, V. W., Di Marco, S., Lim, R., Brichta, A. M., Camp, A. J. An isolated semi-intact preparation of the mouse vestibular sensory epithelium for electrophysiology and high-resolution two-photon microscopy. Journal of visualized experiments : JoVE. e50471 (2013).
  21. Kirby, J., Menzies, F. M., Cookson, M. R., Bushby, K., Shaw, P. J. Differential gene expression in a cell culture model of SOD1-related familial motor neurone disease. Human molecular genetics. 11, 2061-2075 (2002).
  22. Parry, S. N., Ellis, N., Li, Z., Maitz, P., Witting, P. K. Myoglobin induces oxidative stress and decreases endocytosis and monolayer permissiveness in cultured kidney epithelial cells without affecting viability. Kidney and Blood Pressure Research. 31, 16-28 (2008).
  23. Saee-Rad, S., et al. Analysis of superoxide dismutase 1, dual-specificity phosphatase 1, and transforming growth factor, beta 1 genes expression in keratoconic and non-keratoconic corneas. Molecular vision. 19, 2501-2507 (2013).
  24. Albert, E. S., et al. TRPV4 channels mediate the infrared laser-evoked response in sensory neurons. Journal of neurophysiology. 107, 3227-3234 (2012).
  25. Moro, C., et al. Photobiomodulation inside the brain: a novel method of applying near-infrared light intracranially and its impact on dopaminergic cell survival in MPTP-treated mice. Journal of neuroscience. 120, 670-683 (2014).
  26. Moreno, L. E., et al. Infrared neural stimulation: beam path in the guinea pig cochlea. Hearing research. 282, 289-302 (2011).
  27. Curthoys, I. S. A red thread as a guide in the vestibular labyrinth. The Journal of physiology. 589, 1241-1241 (2011).
  28. Chakrabarti, S., et al. Mitochondrial Dysfunction during Brain Aging: Role of Oxidative Stress and Modulation by Antioxidant Supplementation. Aging and disease. 2, 242-256 (2011).
  29. Petrosillo, G., De Benedictis, V., Ruggiero, F. M., Paradies, G. Decline in cytochrome c oxidase activity in rat-brain mitochondria with aging. Role of peroxidized cardiolipin and beneficial effect of melatonin. Journal of bioenergetics and biomembranes. 45, 431-440 (2013).
  30. Zhu, H., Sun, A., Zou, Y., Ge, J. Inducible metabolic adaptation promotes mesenchymal stem cell therapy for ischemia: a hypoxia-induced and glycogen-based energy prestorage strategy. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 34, 870-876 (2014).

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