Nærheden Infrarød (NIR) lys Øger Angivelse af en markør for mitokondriefunktion i Mouse vestibulære sensoriske epithel

1Discipline of Physiology, University of Sydney, 2Discipline of Biomedical Science, University of Sydney
Published 3/14/2015
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Mitokondriel dysfunktion er kendetegnende for cellulær ældning. Dette papir anvender ikke-invasive nær-infrarøde (NIR) behandling for at forbedre mitokondrisk funktion i den aldrende mus vestibulære sensoriske epithel.

Cite this Article

Copy Citation

Zhang, L., Tung, V. W., Mathews, M., Camp, A. J. Near Infrared (NIr) Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium. J. Vis. Exp. (97), e52265, doi:10.3791/52265 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Strategier for formildende fald i balance funktion med stigende alder er overvejende fokuseret på fysiske behandlinger, herunder balance opgaver og motion. Men disse tiltag ikke de underliggende årsager til balance tilbagegang. Anvendelse af mus blev virkningerne af nær infrarødt lys (NIR) på metabolismen af ​​celler i det vestibulære sensoriske epithel vurderes. Data indsamlet, viser, at denne enkle og sikker indgriben kan beskytte disse sårbare celler fra de skadelige virkninger af naturlig aldring. mRNA blev ekstraheret fra det isolerede perifere vestibulære sensoriske epithel (crista ampullaris og utriculare macula) og efterfølgende transkriberes ind i en cDNA-bibliotek. Dette bibliotek blev derefter probet for ekspressionen af ​​allestedsnærværende antioxidant (SOD-1). Antioxidant genekspression blev derefter anvendt til at kvantificere cellulær metabolisme. Brug af transkraniel levering af Nir i unge (4 uger) og ældre (8-9 måneder) mus, og en kort behandling regime (90 sek / dag i 5 days) dette arbejde foreslår Nir alene kan være tilstrækkelig til at forbedre mitokondrisk funktion i det vestibulære sensoriske epithel. Da der i øjeblikket ikke til rådighed, overkommelige, non-invasive metoder til behandling for at forbedre vestibulære hår celle funktion, anvendelse af eksterne NIR-stråling giver en potentiel strategi til at modvirke aldringens konsekvenser for cellulær metabolisme inthe vestibulære sensoriske epithel.

Introduction

Faldende balance ydeevne og efterfølgende fald er fælles, og desværre ofte afgørende træk af naturlige aldring 1. Virkningen af ​​dette fald kan være både fysisk og socialt, og reducerer livskvaliteten for ældre mennesker. Som reaktion herpå har fysiske behandlinger og genoptræning været genstand for forskning i fald, men har ikke været forbundet med en vedvarende reduktion af forekomsten af ​​gentagne fald. På samme tid, arbejde undersøge ændringer i det perifere eller centrale vestibulære system (systemet er ansvarlig for at opretholde balancen) er knappe, og potentielle terapeutiske strategier rettet mod disse systemer og de underliggende årsager til ubalance begrænset.

Nyere arbejde på aldersbetingede associeret neurodegenerative lidelser, herunder aldersrelateret maculadegeneration 2-4, Alzheimers sygdom modeller 5-8, og Parkinsons sygdom 9-12 har vist neurobeskyttende virkninger af simple non-invasiv anvendelse af nær infrarød (NIR) lys. Endvidere i vestibulære system, NIR er blevet anvendt til at øge aktiviteten af vestibulære primære afferente neuroner in vitro 13. Mens den mekanisme af Nir lys ikke er godt forstået, har de fleste undersøgelser med anvendelse af Nir foreslået, at Nir stimulerer mitokondrier kompleks IV (cytochrom c oxidase) 14-17 for at lette cellulær metabolisme. I det vestibulære sensoriske epithel den subkutikulær plade af typen I hårceller er tæt på mitokondrier 18 og som sådan kan udgøre en virkningssted for terapeutisk NIR behandling.

Her en kort, ikke-invasiv behandling regime transcranially anvendt Nir der kan anvendes til at måle cellulær metabolisme (og implicit mitokondriefunktion) i mus vestibulære sensoriske epithel er beskrevet. Også diskuteres er et præparat af den vestibulære sensoriske epithel og det godtgøres, at Nir øger udtryk for en ubiquitoos antioxidant (superoxiddismutase 1) i det sensoriske epithel - tidligere vist at være vigtigt for cochlea hår celleoverlevelse 19.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Etik Statement: Alle procedurer, der er skitseret nedenfor, blev godkendt af University of Sydney Animal Ethics Committee.

1. Dyr

BEMÆRK: 1 og 8 - 9 måned gammel mus (C57 / BL6) blev opnået fra Animal Resources Centre (Perth, Australien). Mus blev opstaldet i Bosch Rodent Facility på University of Sydney.

  1. Husmus i standard mus bure på en 12/12 timers lys / mørke-cyklus med adgang til foder og vand ad libitum.
  2. Divide mus i hver aldersgruppe i nær infrarød (NIR) behandlet, eller sham behandlede (kontrol) grupper til sammenligning.

2. nærheden Infrarød (NIR) Bestråling og Sham behandling

  1. Barber pelsen på hovedet og halsområdet af musen med en elektrisk barbermaskine så tæt som muligt for at forhindre hurtig genvækst af hår inden afslutningen af ​​behandlingen regime. For at opretholde det patogen-fri status af musene, bruge 70% ethanolat rense instrumenterne mellem barbering dyr og F10 veterinære desinfektionsmiddel mellem dyr fra separate bure. Gør dette 2 - 3 dage før begyndelsen af ​​behandlingen, så dyr ikke over-håndteres.
  2. Begrænse mus ved at holde den proximale ende af halen og tillader den at slappe af i håndfladen på den ene hånd eller bænk top for at minimere stress, som kan føre til falske resultater.
  3. Hold NIR (670 nm) LED (light emitting diode) anordning 1 - 2 cm fra den eksponerede (barberet) område og tænd for enheden for 90 sekunder (figur 1A).
    BEMÆRK: temperaturændring som resultat af 90 sek eksponering blev målt som <0,2 ° C i 100 ml vand.
  4. Gentag trin 2,2-2,3 for skinbehandlingen gruppe dyr, men lad apparatet slukket (figur 1B).
  5. Gentag trin 2,2-2,3 for NIR-blokerede behandlingsgruppe af dyr, men dækker enheden med aluminiumsfolie.
  6. Gentag trin 2,2-2,5 dagligt på approximate 24 timers intervaller i 5 dage i træk.
  7. Uddrag det vestibulære sensoriske epithel (3 cristae og 1 utriculare macula) fra begge ører på femtedagen efter behandling (se afsnit 3 nedenfor).

3. Tissue Ekstraktion 20

  1. Forbered 300 ml af en glycerol-baseret kunstig cerebrospinalvæske (ACSF) bestående af (i mM): 26 NaHCO3, 11 glucose, 250 glycerol, 2,5 KCI, 1,2 NaH 2 PO 4, 1,2 MgCl2, og 2,5 CaCl2. Forud for tilsætning af CaCl2, gas løsningen med carbogen (95% O 2 og 5% CO2) for at etablere en pH-værdi på 7,4 og undgå calciumudfældning (uklarhed). Chill opløsningen i en -80 ° C fryser i 45 minutter, således at en is opslæmning dannes.
  2. Forbered RNA isolation lysisbuffer i mærkede skrue top mikrorør (stopper popping af låg, når rør trykændringer mellem fryse og optøning i flydende nitrogen) ifølgeanvisninger af fabrikanten eller sædvanlige lab praksis. Har flydende nitrogen klar i en aluminium Dewarkar.
    BEMÆRK: Brug beskyttelsestøj og eyeware ved håndtering af flydende nitrogen. Sørg for, at flydende nitrogen bruges i et godt ventileret rum, som omfanget af dens gasform er ca. 700 gange større end dets flydende form og kan forårsage kvælning.
  3. Dybt bedøve mus med ketamin (400 mg / kg) via en intra-peritoneal injektion. Lad hind-lemmer refleks til helt aftager som indikation af, at mus er fuldt bedøvet.
  4. Halshugge mus med skarpe rustfrit stål saks og lave et snit langs sagittale hud af kraniet ved hjælp af et barberblad (afrundet # 22). På dette tidspunkt og i hele trin 3,5-3,9, holde kranielle deformiteter, hjerne, og underliggende vestibulære apparat så køligt som muligt ved regelmæssig anvendelse af iskold ACSF over vævet.
  5. Ved hjælp af spidse arm af standard mønster saks gøre en small snit i kraniet på Lambda og skåret langs den sagittale sutur.
  6. Skub forsigtigt den ene arm af en lavvandet rongeurs under parietalknoglen holde bladet så tæt som muligt til den nedre overflade af knoglen uden at trække hjernen. Sikker og trække væk parietalknoglen sideværts og nakkebenet bagtil, indtil hjernen er udsat for.
  7. Brug en lille rustfrit stål spatel og løft hjernen væk fra den forreste og midterste kraniel fossa at blotlægge vestibulocochlear nerve (KN VIII). Transekt den frækhed at undgå unødvendige spændinger på de primære afferente axoner, der direkte innerverer de vestibulære hårceller.
  8. Fjern hjernen i toto efter transektion af CN VIII.
  9. Overhold benede labyrint indeholder cochlea og de perifere vestibulære organer i midten kranie fossa. Lav to små snit ved siden af ​​hver knoklet labyrint og punktafgifter hele strukturen ved at holde den forreste halvrunde kanalen og trække senereallieret.
  10. Umiddelbart fordybe udskårne labyrinter i en dissekere skål indeholdende iskold ACSF løsning (som beskrevet i trin 3.1) under fortsat perfusion med carbogen.
  11. Under et stereomikroskop, hold den labyrint af cochlea og fastgør den til bunden af ​​skålen med en pincet.
    1. Brug lige fin pincet til at ridse en lille åbning i knoglen over den forreste halvcirkulære kanal (SSC) ampulla.
    2. Forsigtigt forstørre denne åbning ved at nå lige under knoglen og zappe udad væk fra ampulla. Vær forsigtig her, ikke skubbe pincet i åbningen og beskadige den skrøbelige membranøs labyrint nedenfor. Fortsæt på denne måde indtil utricle, forreste og laterale ampuller er alle udsat for. Hvis det er muligt at fjerne den bageste ampulla også.
  12. Ved hjælp af fine pincet, forsigtigt løfte den utricle og ampuller væk fra den benede labyrint, indtil de er helt løsrevet. Hvor det er muligt, holde demaf deres tilknyttede halvrunde kanaler for at undgå at beskadige sensoriske epithel. I nogle tilfælde kan den proximale del af den halvcirkulære membranøs kanal skal skæres med iris saks for at frigøre ampuller fra knoglen.
  13. Gribe sikkert vestibulære organer mellem spidsen af tang og sted i lysisbuffer udarbejdet tidligere i trin 3.2. Drej forsigtigt pincet rundt i bufferen for at sikre vestibulære organer har løsrevet fra pincet. Check dette er tilfældet ved at bringe pincet under stereomikroskop.
    1. Skrues på mikrotubulus låg og fryse prøven i flydende nitrogen øjeblikkeligt.

4. RNA-ekstraktion og RT-PCR

  1. Følg standardmetoder af messenger RNA (mRNA) ekstraktion i overensstemmelse med producentens anvisninger eller foretrukne lab protokoller.
    BEMÆRK: et kommercielt kit, der anvendes carrier RNA'er til at isolere små udbytter af mRNA blev anvendt i detteprotokol. Lavere elueringsvolumener kan anvendes til at øge de endelige koncentrationer af mRNA.
    BEMÆRK: Negativ "intet enzym" kontroller (NEC) og "ingen DNA skabelon" kontroller (NTC), skal også være afsluttet for at sikre gyldigheden af ​​observerede virkninger.
  2. Anvende standard metoder til revers transkription af mRNA til komplementært DNA (cDNA) og forstærkning af målgener 21-23.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

For at sammenligne virkningen af ​​NIR behandling i unge (4 uger) og ældre (8-9 måneder) mus målte vi ekspressionen af ​​antioxidant superoxiddismutase 1 (SOD-1) i unge (n = 16) og ældre (n = 20) mus, der var NIR-behandlede, sham-behandlede eller NIR-blokeret. Figur 2 viser en betydelig stigning i β-actin-normaliseret SOD-1-ekspression på mere end 2-fold i unge NIR-behandlede dyr sammenlignet med unge sham-behandlede dyr (p <0,01) og unge NIR-blokerede dyr (p <0,01). Ældre NIR-behandlede dyr udviste også mere end et 2-fold opregulering af SOD-1 sammenlignet med ældre NIR-blokerede dyr (p <0,05).

Figur 1
Figur 1. Nir Behandling. (A) Nir LED enhed afholdt 1 - 2 cm over det barberede område på hovedet af musen for 90 sek per dag i 5 på hinanden følgende dage i bestråling skated mus. (B) Nir LED enhed holdes over sham-behandlede mus på samme måde, men med enheden slukket for varigheden af 90 sek. Klik her for at se en større udgave af dette tal.

Figur 2
Figur 2. Analyse af SOD-1 genekspression efter 5 dage i træk NIR behandling (90 sek / dag). Den vestibulære sensoriske epithel blev høstet på femtedagen og specifik antioxidant gen probet for anvendelse af RT-PCR. SOD-1-genet blev normaliseret til β-actin baseline og densitometri udført ved anvendelse ImageJ v1.48. Væsentlig opregulering (p <0,01) af SOD-1-ekspression blev observeret i unge NIR-behandlede dyr sammenlignet med både unge sham-behandlede og unge NIR-blokerede kontroller (4 uger). Betydelig stigning (p# 60; 0,05) i SOD-1-ekspression blev også observeret i ældre NIR-behandlede dyr sammenlignet med ældre NIR-blokerede dyr (8-9 måneder). Alle diagrammer viser fold ændring af SOD-1 genekspression i forhold til den unge sham-behandlede kontrol. Dataene repræsenterer middelværdi ± SD. Alle data blev analyseret ved hjælp af en-vejs ANOVA og statistisk signifikans bestemt ved anvendelse Tukeys multipel sammenligning post-hoc test. Klik her for at se en større udgave af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De repræsentative resultater er beskrevet her viser, at korte transkraniel levering af NIR lys (90 sek / dag i 5 dage) er tilstrækkelig til at hæve niveauet af antioxidant ekspression i ældre mus sammenlignet med sham-behandlede mus. Mens udsendte varme kunne udgøre en kilde til mitokondrie og / eller neuronal aktivering, som rapporteret for rotte vestibulære afferenter 24 - vores måling af varme, der afgives af NIR LED anordningen var <0,2 ° C i løbet af 90 sek, og som sådan er usandsynligt at forårsage ændringer beskrevet her. Endvidere, i modsætning til rapporten fremhævet ovenfor, NIR behandling bruges her var ikke påføres direkte på sensoriske epithel eller vestibulære afferente neuroner, og som sådan er også usandsynligt, at påvirke termo følsomme kanaler (f.eks TRPV4). Endelig har tidligere arbejde ved hjælp af den samme NIR-enheden i andre hjerneregioner foreslået, at varme var ikke kilden til observerede forskelle 7,9.

Mens disse resuLTS viser en opregulering af cellulære reaktioner på alder-associeret oxidativt stress på det genetiske niveau, er det ikke klart, om disse ændringer er endvidere udtrykt på proteinniveauet, eller vigtigere, uanset om de kommer til udtryk i den samlede balance ydeevne mus. Desuden er opreguleringen vist for et enkelt allestedsnærværende antioxidant. Det er sandsynligt, at flere markører for cellulær metabolisme påvirkes ved denne behandling regime. Eftersom mRNA blev ekstraheret fra det vestibulære apparat toto (dvs. hårceller, støtte celler, vestibulære afferenter og epithel alle til stede) er det ikke muligt at relatere observerede ændringer i cellulær metabolisme i respons på NIR lys behandling til en specifik vestibulære hår celle eller primære afferent type. Vigtigere dog ved hjælp af den beskrevne præparat tilstrækkelig mRNA kan udvindes fra en enkelt mus til at tillade fremtidige korrelative studier mellem cellulær metabolisme og adfærdsanalyse af balance Performance.

Den høje intensitet LED enhed bruges her udsender ca. 5 J / cm2 pr 90 sek behandlingsrelaterede alt 25 J af energi i løbet af 5 dage. Mens fordelen ved anvendelse af langbølget lys (herunder NIR) er penetrans, kan det ikke antages, at den fulde 25 J NIR lys er leveret til det vestibulære sensoriske epithel. Hos mus, skal lys trænge mindst 1 mm gennem lag af blødt væv og knogler, der beskytter den perifere vestibulære apparat og hjernen. Hos mennesker dette strækker sig til centimeter. Således penetrans af lys udgør en begrænsning af den beskrevne teknik i forhold til oversættelse af NIR lys behandlingsstrategier i kliniske omgivelser. Nyligt arbejde dog har ansat optiske fibre til at levere NIR lys til dyb brain strukturer, herunder basalganglierne 25, og sanseorganer herunder øresneglen 26. Baseret på dette og placeringen af ​​den perifere vestibulære apparat støder op tilcochlea (og klinisk adgang til den via mastoid processen), er det muligt at antage, at i det menneskelige, direkte stimulering af det vestibulære sensoriske epithel kunne opnås gennem en lille optisk fiber udløst af en ekstern enhed - beslægtet med en cochlea implantat 27 .

Flere forhold kan ændres i protokollen beskrevet ovenfor til at tilpasse sig interesse investigator. Første bølgelængde anvendes her (670 nm) kan udvides til at omfatte længere bølgelængder i det infrarøde område, som tidligere rapporteret i andre sensoriske systemer og dyremodeller. For det andet kan behandlingsregimer også varieres, alt efter om kortfristede eller langfristede reaktion er i spørgsmålet. Her er en meget kort behandlingsregimen blev anvendt, men dette kunne udvides til længere varighed, eller endnu kortere varigheder for at måle dynamikken NIR inducerede ændringer.

Den største udfordring i denne protokol er at opretholde levedygtigheden af ​​vævetunder væv ekstraktion. I betragtning af den tid, der kræves for at fjerne knoklet labyrint og udskære membranøs labyrint fra det, er det afgørende at reducere metabolisk nedbrydning. Dette opnås ved at bade vævet i iskold ACSF under hele proceduren og perfusion denne opløsning kontinuerligt med carbogen. Desuden, ved slutningen af ​​dissektion procedure yderligere nedbrydning væv kan standses ved anvendelse af flydende nitrogen til flash fryse ekstraheret væv. Når det er hensigtsmæssigt, kan det frosne væv optøs og mRNA ekstraheret til yderligere gen-analyse.

Selv om de her beskrevne metoder ikke beskriver den fuldstændige virkning af NIR lys behandling på cellulær metabolisme i det vestibulære sensoriske epithel, kan yderligere anvendelse af denne strategi modificeres til at indbefatte andre aldersrelaterede associerede markører af mitokondriefunktion 28,29 og / eller cellulær metabolisk fornærmelser såsom hypoxi 30. I sidste ende, evnen til at beskrive vestibular cellulære metaboliske profil af en individuel mus vil tillade undersøgelse af sammenhængene mellem balance ydeevne og subcellulære processer under aldring, og virkningen af ​​terapi, herunder Nir behandling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.

Acknowledgements

Forfatterne ønsker at anerkende Dr. Paul Witting og Ms. Genevieve Fong for deres hjælp med mRNA udvinding og PCR samt Garnett Passe og Rodney Williams Memorial Foundation for støtte.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Quantum WARP 10 Quantum Devices 2070N030-A
Screw top microtubules Quality Scientific Plastics 520-GRD-Q
Ketamine Parnell, Alexandria Australia
Standard pattern scissors FST 14001-12
Carbon steel surgical blades #22 Livingstone SBLDCL 22
Friedman-Pearson rongeurs FST 16221-14
Stereo microscope Leica Microsystems A60S
Dumont #5 SF forceps FST 11252-00
Isolate II RNA Micro Kit Bioline BIO-52075

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Agrawal, Y., Carey, J. P., Della Santina,, C, C., Schubert, M. C., Minor, L. B. Disorders of balance and vestibular function in US adults: data from the National Health and Nutrition Examination Survey, 2001-2004. Archives of internal medicine. 169, 938-944 (2009).
  2. Bessho, K., et al. Effect of subthreshold infrared laser treatment for drusen regression on macular autofluorescence in patients with age-related macular degeneration. Retina. 25, 981-988 (2005).
  3. Olk, R. J., et al. Therapeutic benefits of infrared (810-nm) diode laser macular grid photocoagulation in prophylactic treatment of nonexudative age-related macular degeneration: two-year results of a randomized pilot study. Ophthalmology. 106, 2082-2090 (1999).
  4. Rodanant, N., et al. Predictors of drusen reduction after subthreshold infrared (810 nm) diode laser macular grid photocoagulation for nonexudative age-related macular degeneration. American journal of ophthalmology. 134, 577-585 (2002).
  5. De Taboada, L., et al. Transcranial laser therapy attenuates amyloid-beta peptide neuropathology in amyloid-beta protein precursor transgenic mice. Journal of Alzheimer's disease : JAD. 23, 521-535 (2011).
  6. Grillo, S. L., Duggett, N. A., Ennaceur, A., Chazot, P. L. Non-invasive infra-red therapy (1072 nm) reduces beta-amyloid protein levels in the brain of an Alzheimer's disease mouse model. TASTPM. Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology. 123, 13-22 (2013).
  7. Purushothuman, S., Johnstone, D. M., Nandasena, C., Mitrofanis, J., Stone, J. Photobiomodulation with near infrared light mitigates Alzheimer's disease-related pathology in cerebral cortex - evidence from two transgenic mouse models. Alzheimer's researc., & therapy. 6, 2 (2014).
  8. Sommer, A. P., et al. 670 nm laser light and EGCG complementarily reduce amyloid-beta aggregates in human neuroblastoma cells: basis for treatment of Alzheimer's disease. Photomedicine and laser surgery. 30, 54-60 (2012).
  9. Moro, C., et al. Photobiomodulation preserves behaviour and midbrain dopaminergic cells from MPTP toxicity: evidence from two mouse strains. BMC neuroscience. 14, 40 (2013).
  10. Peoples, C., et al. Photobiomodulation enhances nigral dopaminergic cell survival in a chronic MPTP mouse model of Parkinson's disease. Parkinsonis., & related. 18, 469-476 (2012).
  11. Shaw, V. E., et al. Neuroprotection of midbrain dopaminergic cells in MPTP-treated mice after near-infrared light treatment. The Journal of comparative neurology. 518, 25-40 (2010).
  12. Ying, R., Liang, H. L., Whelan, H. T., Eells, J. T., Wong-Riley, M. T. Pretreatment with near-infrared light via light-emitting diode provides added benefit against rotenone- and MPP+-induced neurotoxicity. Brain research. 1243, 167-173 (2008).
  13. Rajguru, S. M., et al. Infrared photostimulation of the crista ampullaris. The Journal of physiology. 589, 1283-1294 (2011).
  14. Chung, H., et al. The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy. Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).
  15. Desmet, K. D., et al. Clinical and experimental applications of NIR-LED photobiomodulation. Photomedicine and laser surgery. 24, 121-128 (2006).
  16. Huang, Y. Y., Chen, A. C., Carroll, J. D., Hamblin, M. R. Biphasic dose response in low level light therapy. Dose-response : a publication of International Hormesis Society. 7, 358-383 (2009).
  17. Rojas, J. C., Gonzalez-Lima, F. Low-level light therapy of the eye and brain. Eye and brain. 3, 49-67 (2011).
  18. Vranceanu, F., et al. Striated organelle, a cytoskeletal structure positioned to modulate hair-cell transduction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 4473-4478 (2012).
  19. Johnson, K. R., et al. Separate and combined effects of Sod1 and Cdh23 mutations on age-related hearing loss and cochlear pathology in C57BL/6J mice. Hearing research. 268, 85-92 (2010).
  20. Tung, V. W., Di Marco, S., Lim, R., Brichta, A. M., Camp, A. J. An isolated semi-intact preparation of the mouse vestibular sensory epithelium for electrophysiology and high-resolution two-photon microscopy. Journal of visualized experiments : JoVE. e50471 (2013).
  21. Kirby, J., Menzies, F. M., Cookson, M. R., Bushby, K., Shaw, P. J. Differential gene expression in a cell culture model of SOD1-related familial motor neurone disease. Human molecular genetics. 11, 2061-2075 (2002).
  22. Parry, S. N., Ellis, N., Li, Z., Maitz, P., Witting, P. K. Myoglobin induces oxidative stress and decreases endocytosis and monolayer permissiveness in cultured kidney epithelial cells without affecting viability. Kidney and Blood Pressure Research. 31, 16-28 (2008).
  23. Saee-Rad, S., et al. Analysis of superoxide dismutase 1, dual-specificity phosphatase 1, and transforming growth factor, beta 1 genes expression in keratoconic and non-keratoconic corneas. Molecular vision. 19, 2501-2507 (2013).
  24. Albert, E. S., et al. TRPV4 channels mediate the infrared laser-evoked response in sensory neurons. Journal of neurophysiology. 107, 3227-3234 (2012).
  25. Moro, C., et al. Photobiomodulation inside the brain: a novel method of applying near-infrared light intracranially and its impact on dopaminergic cell survival in MPTP-treated mice. Journal of neuroscience. 120, 670-683 (2014).
  26. Moreno, L. E., et al. Infrared neural stimulation: beam path in the guinea pig cochlea. Hearing research. 282, 289-302 (2011).
  27. Curthoys, I. S. A red thread as a guide in the vestibular labyrinth. The Journal of physiology. 589, 1241-1241 (2011).
  28. Chakrabarti, S., et al. Mitochondrial Dysfunction during Brain Aging: Role of Oxidative Stress and Modulation by Antioxidant Supplementation. Aging and disease. 2, 242-256 (2011).
  29. Petrosillo, G., De Benedictis, V., Ruggiero, F. M., Paradies, G. Decline in cytochrome c oxidase activity in rat-brain mitochondria with aging. Role of peroxidized cardiolipin and beneficial effect of melatonin. Journal of bioenergetics and biomembranes. 45, 431-440 (2013).
  30. Zhu, H., Sun, A., Zou, Y., Ge, J. Inducible metabolic adaptation promotes mesenchymal stem cell therapy for ischemia: a hypoxia-induced and glycogen-based energy prestorage strategy. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 34, 870-876 (2014).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats