En metodisk tilgang til ikke-invasive vurderinger af vaskulær funktion og morfologi

1School of Sport, Health and Exercise Sciences, Bangor University, 2Department of Rheumatology, Dudley Group of Hospitals NHS Trust, Russells Hall Hospital, 3Arthritis Research UK Epidemiology Unit, University of Manchester
Medicine
 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sandoo, A., Kitas, G. D. A Methodological Approach to Non-invasive Assessments of Vascular Function and Morphology. J. Vis. Exp. (96), e52339, doi:10.3791/52339 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Den endotel er den inderste foring af karrene og er involveret i opretholdelsen af ​​vaskulær homeostase via reguleringen af ​​et væld af vasoaktive processer. Forstyrrelse disse processer kan prædisponere fartøjet til åreforkalkning og øge risikoen for hjerte-kar-sygdom (CVD) 1. Perifer endotelfunktion er en god indikator for tidlige abnormiteter i den vaskulære væg 2. Endvidere har vist foranstaltninger perifer endotelfunktion at afspejle koronar endotel funktion 3-5, og som sådan betragtes som gode indikatorer for hjertekarsygdomme 6-9. Det er måske ikke overraskende i betragtning af at åreforkalkning nu er bredt værdsat at være en systemisk lidelse 10. Vurderinger af perifer endotelfunktion typisk kvantificere vasodilatorisk reaktion af fartøjet til en bestemt stimulus, med en dæmpning på den henholdende svar indikerer endotelkan måles dysfunktion 11, og i forskellige kar. Vurderinger af avancerede strukturelle ændringer i beholderen kan karakteriseres ved ultralydsundersøgelse af intima-media tykkelse.

I mikrocirkulationen, kan laser Doppler flowmetri (LDF) og Laser Doppler imaging (LDI) med iontoforese af vasodilaterende agonister give nyttige oplysninger om mikrovaskulær perfusion 12. Begge teknikker måle Doppler shift skabt af spredt lys i at bevæge røde blodlegemer. Perfusion er repræsenteret som blod flux snarere end blod flow (ml / min), med blod flux afspejler gennemsnit røde blodlegemer hastighed og koncentration. Måling af blod flux lineært forbundet med faktiske blodgennemstrømning 13. Vurderingen af ​​LDI giver betydelige fordele i forhold til LDF, fordi i modsætning til LDF, kan LDI scanne over et stort område således tegner sig for heterogenitet i blodgennemstrømningen i huden og øge reproducerbarheden af ​​teknikken12.

Stimulus for at øge blod flux under LDI er tilvejebragt ved iontoforese af vasodilaterende agonister acetylcholin (ACh) og natriumnitroprussid (SNP), som vurderer endotel-afhængige og endotel-uafhængige funktion henholdsvis ind i huden ved hjælp af en svag elektrisk strøm 14. Når gennem huden, ACh binder til endotelcelle muscarinreceptorer frigiver det karudvidende nitrogenoxid (NO). Anvendelsen af SNP direkte aktiverer glat muskel-cellereceptorer for at tillade maksimal vasodilation af fartøjet, og undersøgelse af glat muskulatur integritet 15. Der er en vis usikkerhed om, hvorvidt ACh-medieret dilatation indebærer nogen overhovedet, som ACh kan stimulere ikke-NO veje såsom cycloxygenase-medierede veje 12. Ikke desto mindre har vi tidligere rapporteret, at ACh og SNP svar er forringet i patientpopulationer med øget risiko for CVD 16 og at motion interventioner kendt for at forbedre Nej bioactivity også forbedre ACh-medieret blod flux hjælp LDI 17. Køretøjet til transport af stoffer ind i huden mikrokar omfatter ofte natriumchlorid eller demineraliseret vand 18,19. Mikrovaskulær endotelfunktion kan kvantificeres ved hjælp af forskellige metoder, med kutan vaskulær konduktans - et produkt af flux divideret med arterietryk, der anvendes i undersøgelser, hvor blodtrykket kan ændre sig på studiet varighed (dvs. under træning eller antihypertensiv behandling) 12. En anden almindeligt anvendt kvantificering er at beregne arealet under kurven for blod flux eller udtrykker den procentvise stigning i flux fra baseline. Det er vigtigt at bemærke, at der ikke er nogen fastlagt retningslinjer for at præsentere data, men efterforskerne bør udnytte en tilgang, der viser god reproducerbarhed.

I de store skibe, der er flow-medieret dilatation (FMD) og glyceryl-trinitrat medieret dilatation (GTN) udføres for at vurderes endotel-afhængige og endotel-uafhængige funktion henholdsvis 20. MKS udføres typisk i pulsåren, hvor en manchet anvendes for at okkludere arteriel blodgennemstrømning i 5 minutter; frigivelse af manchetten forårsager en pludselig stigning i blodgennemstrømning (reaktiv hyperæmi) gennem pulsåren resulterer i shear stress medieret dilatation af fartøjet. Baseline og post-manchetfrigivelse diameter kvantificeres ved ultralydsscanning af fartøjet med efterfølgende vurderinger af diameteren fartøjet udføres manuelt 20 eller ved hjælp af automatiseret kant afsløring software 21,22. Anvendelsen af GTN hjælper med at bestemme, om abnormiteter i vasodilatation skyldes et tab i glatte muskelceller integritet eller svækket frigivelse af NO fra endotelceller 23. MKS og GTN er udtrykt som den procentvise stigning i post-stimulus fartøj diameter i forhold til baseline diameter.

Den korrekte vurdering af mund- og klovesyge kræver en rækkevigtige overvejelser i forsøgsprotokollen 24,25. Varigheden af ​​manchetten okklusion skal omhyggeligt timet; 5 min af manchet okklusion er tilstrækkelig til NO-medieret dilatation mens længere manchet okklusion resulterer i ikke-NO medieret dilatation 26. Ligeledes, placering af den okkluderende manchetten omkring håndleddet og distalt fra ultralydsonden overvejende påberåber NO-medieret dilatation, mens manchetten placering på overarmen og proximalt til proben kun delvis stimulerer NO 27. Det er også vigtigt at måle peak dilatation efter manchet deflation i en længere periode, da måling af peak diameter inden for de første 60 sek efter manchet deflation kan undervurdere MKS via 25-40% 28. Faktisk en periode på 180 sek vil sandsynligvis være tilstrækkeligt til at fange ægte peak diameter, med de fleste spidsværdier forekommer inden for de første 120 sek 28.

Stimulus for mund- og klovesyge indebæres produktion af forskydningsspænding, som aktiverer specifikke endotel receptorer til at frigive NO 29. Men forskydningsspænding kan også aktivere flere andre vasoaktive faktorer (hvoraf nogle kan forårsage vasokonstriktion) 30, gør det nødvendigt, at det fremkaldte forskydningsspænding stimulus afspejler vasodilation fra NO veje 26. Det er også vigtigt at tage højde for forskydningsspænding stimulus i mund- og klovsyge, med beregning af forskydningshastighed (hastighed / diameter), der tjener som en passende foranstaltning forskydningsspænding, men ikke nødvendigvis afspejler peak flow 31. De seneste fysiologiske anbefalinger tyder på, at forskydningsspændingen profil altid bør karakteriseres ved ultralyd systemer tillader samtidig måling af puls bølge hastighed og aktiv B-mode billeddannelse i duplex 25.

Vurdering af halspulsårer ved hjælp B-mode ultralyd kan give oplysninger om carotis intima-media tykkelse (CIMT), og var første described i 1986 af pignoli og kolleger 32. Vurdering af CIMT afspejler proliferation af glatte muskelceller i intima af fartøjet og er en nyttig indikator for kliniske hændelser i tidlig atherosklerose 33. Carotis ultralyd kan ofte forudsige arteriel struktur bedre end lignende teknikker (såsom magnetisk resonans-billeddannelse eller radiografiske vurderinger) 34. Desuden CIMT associerede med en række klassiske CVD risikofaktorer, herunder ældning, hypertension og dyslipidæmi 35. Ændringer i væggene af halspulsåren sædvanligvis initieres af en reduktion i NO biotilgængelighed, som fremmer inflammation inden i beholderen 36. Den fælles carotis arterie, arteria carotis interna og carotis bifurkationsbetingelser point kan anvendes til at bestemme CIMT, som hvert sted på samme måde kan forudsige kardiovaskulære hændelser 37.

I det foreliggende manuskript, vi giver detaljeret metode om vurdering af microvascular endotelfunktion (LDI med iontoforese), stort fartøj endotelfunktion (FMD og GTN) og vaskulær morfologi (CIMT). Aterosklerose er en multi-trins proces, der begynder med endotel dysfunktion og slutter med fokale atherosklerotiske læsioner i de store arterier. Begrundelsen for at vælge de ovennævnte evalueringer er, at de afspejler de forskellige stadier af åreforkalkning og bidrage til at redegøre for den heterogene karakter af karrene 38. Desuden har vi tidligere vist, at i en population af patienter med øget risiko for CVD, mikrovaskulære endotel funktion var uafhængig af store fartøj endotelfunktion 39, og funktionelle vurderinger var uafhængige af strukturelle vurderinger af karrene 40. Derfor kan overordnede vurderinger af karrene med til at dechifrere de forskellige stadier af åreforkalkning.

Protocol

BEMÆRK: Protokollen følger retningslinjerne fra Dudley Group NHS Foundation Trust Human Research Ethics Committee. Udfør alle beskrevne teknikker i et temperaturstyret laboratorium (21 - 22 ° C), med en stabil belysning og fravær af støj. Spørg individer gennemgår vurderinger til at afstå fra mad, drikke, rygning og motion 12 timer forud for testen. Tilbageholde vasoaktive lægemidler i mindst 12 timer, når det er relevant.

1. Laser Doppler Imaging med Iontophoresis

  1. Tænd Laser Doppler Imager (LDI), og lad scanneren automatisk stabilisere i ca. 30 min. Start LDI softwaren og klik på 'Måling "(softwarens startskærm vil derefter blive vist). På startskærmbilledet vælge "Ionto protokollen« på proceslinjen placeret øverst i vinduet.
  2. Indtaste protokollen manuelt (den protokol, der bruges i vores laboratorium involverer i alt 13 sdåser, med elektrisk strøm til iontoforetisk lægemiddelafgivelse indstilles fra scanning 2 for at scanne 11 ved en spænding på 30 uA). Indstil scanning 1 som baseline scanning uden elektrisk strøm, og scanne 12 & 13 som nyttiggørelse scanninger også uden elektrisk strøm. Klik på OK for at bekræfte indstillingerne og vende tilbage til startskærmen.
  3. Spørg deltager til at slappe af i en halvt liggende stol med deres underarm hvilende 90 grader på en komfortabel, fast pude, og placere en sort mat under underarmen.
    BEMÆRK: Måtten er med til at begrænse klenodie målinger genereret af baggrunden overflader omgiver vævet. Det er vigtigt, at deltagerne arm er spændt fast til puden, så at der ikke er nogen bevægelse og tilhørende artefakter.
  4. Tilslut wired stik i den modsatte ende af hver perspex kammeret til iontoforese controller. Tilslut kammer indeholdende en 2,5 ml dosis på 1% acetylcholin (ACh) til anodisk tilslutning af iontoforese controller, og tilslut det andet kammer indeholderen 2,5 ml dosis af 1% natrium-nitroprussid (SNP) til katodisk forbindelse. Bland begge midler i kammeret under anvendelse af 0,5% saltopløsning. Forbind de to kamre til volare aspekt af deltagerens højre underarm hjælp dobbelt klæbende puder.
  5. Dæk kamrene ved 32 mm dækglas for at forhindre lækage af væske.
  6. Før du starter scanningen, skal du åbne 'Scanner Setup' vindue placeret øverst til venstre på startskærmen. Vælg fanen 'Video og afstand' og vælg 'auto afstand' funktionen til at måle afstanden af ​​scanneren hovedet fra deltagerne underarm.
    1. Efter endt måling auto afstand, skal du vælge fanen 'Billede Scan' og bestemme det område, der skal scannes, ved at klikke på 'Mark' knappen i nederste højre hjørne af vinduet. Hvis det er nødvendigt, ændre størrelsen af ​​området af interesse ved manuelt at indtaste i størrelsen af ​​scanningsområdet ind i "Scan-området# 8217; sektion i nærheden af ​​toppen af ​​vinduet. Sikre, at regionen af ​​interesse omfatter diameteren af ​​hver af iontoforese kamre og er stor nok til at begrænse variabilitet i blodgennemstrømningen i huden.
  7. Efter afslutningen af ​​vurderingen, gemme datafilen. Åbn datafil ved hjælp af LDI billedanalyse software til at udføre målinger af perfusion.
    1. Klik på 'Billede Review' på de vigtigste software-vinduet, og åbn den billedfil, der skal analyseres.
    2. Brug softwaren til at markere et område af interesse omkring de ydre diametre hvert kammer. Juster området af interesse, således at det passer korrekt på det område, hvor kamrene var til stede. Klik derefter på ikonet statistik og en kolonne, der indeholder de median perfusion enheder for hvert kammer vil blive vist. Bemærk baseline perfusion enhed, samt den højeste perfusion enhed fra hver af de foregående 12 scanninger for hvert kammer.
      BEMÆRK: Denne analysemetode erspecifikke for vores laboratorium; dog kan andre metoder anvendes til at udtrykke data fra LDI scanning. For en omfattende gennemgang henvises til retningslinjer fra Roustit og Cracowski 12.
  8. For at beregne den procentvise ændring i perfusion som reaktion på ACh og SNP, trække baseline perfusion fra toppen perfusion, dividere med baseline perfusion og multiplicerer med 100.
    BEMÆRK: I vores laboratorium har ændringer i perfusion i forhold til baseline viste god intra-observatør variationskoefficient for ACh (7%) og SNP (6%).

2. Flow-medieret Dilatation og Glyceryltrinitrat-medieret Dilatation

  1. Tænd for Doppler ultralyd maskine og netværks-PC, der indeholder vaskulær billedanalyse (VIA) software.
    BEMÆRK: VIA software indfanger et levende billede (ved 25 billeder pr sekund) og giver oplysninger om diameteren fartøjet samt kvaliteten af ​​de vaskulære grænser blive opdaget af ultralyd maskine. Othendes software pakker er tilgængelige, som kan indeholde yderligere funktioner og indstillinger. Det er tilrådeligt at konsultere brugsanvisninger for specifik software.
  2. Spørg deltager til at slappe af i en halvt liggende lænestol og placere deres arm på en komfortabel pude ud til deres side, men i niveau med hjertet. Placer en blodtryksmanchet omkring deltagerens håndled.
    BEMÆRK: Patienten bør blive bedt om at holde deres arm så stille som muligt for at forhindre bevægelse artefakter under målingen.
  3. Fastgør lineære transducer fra ultralyd maskine i en stereotaktisk klemme, og stram klemmen ved hjælp af vingemøtrikker så ultralydstransducer forbliver i en fast position.
    BEMÆRK: klemme sikrer, at ultralydstransduceren vil forblive stabile, når blodkarret er placeret.
  4. På ultralyd maskine, rulle ind i 'Menu' og indstil scanning frekvens 5 MHz og optimere dybden (den anbefalede indstilling dybde er3,5 cm) og gain indstillinger på ultralyd maskine. Juster gain indstillinger for at sikre, at der er symmetrisk lysstyrke for den nærmeste og fjerneste væg af karret.
  5. Anvendelse af lineære transducer, find brachialarterien der normalt findes 2-10 cm over antecubital fossa i længderetningen scanning plan. Foretag eventuelle justeringer for at præcisere billedkvaliteten på dette tidspunkt. At hjælpe med at identificere arterien, tænde farve Doppler til at hjælpe vise pulserende arterielle blodgennemstrømning og skelne det fra kontinuerlig venøs blodgennemstrømning. Se brachialarterien vandret hen over skærmen; det skal vises som to faste parallelle linjer, adskilt af et klart område mellem linierne, der repræsenterer den lumen af ​​fartøjet.
  6. For at gøre det muligt for VIA software til automatisk at optage kardiameter Brug markøren til at markere et forudbestemt område af interesse at opdage og spore forreste og bageste vægge arterien.
    BEMÆRK: Størrelsen af ​​området af interesse kan væreøget eller nedsat hjælp af »x« og »y« knapper placeret på de vigtigste software-skærmen.
  7. Klik på 'Start' på via software og image arterien i 2 min. Derefter skal du trykke på 'Pump' på via software og samtidig puste blodtryksmanchetten placeret rundt om håndleddet for at suprasystolic tryk (normalt over 220 mmHg) i 5 min.
    BEMÆRK: Formålet med håndleddet manchetten for at okkludere blodstrømmen til hånden.
  8. Efter 5 min punktere blodtryksmanchetten at inducere reaktiv hyperæmi, som i en sund fartøj, vil stimulere NO-medieret vasodilatation.
    BEMÆRK: Peak dilatation kan forekomme op til 180 sek efter manchet deflation, så det er tilrådeligt at fortsætte optagelsen vaskulære diametre i 3 min efter manchetfrigivelse.
  9. Efter en 10 min hviletid, re-lokalisere brachialarterien efter den lineære transducer og optage en 2 min baseline diameter læsning på samme mådesom trin 2.7.
  10. Så spørg deltageren at placere en 500 ug sublingual glyceryl-(GTN) tablet under tungen og fortsætte med at måle brachialarterien diameter i yderligere 5 min. Efter denne periode, bede deltageren at fjerne GTN tablet og overvåge deltageren for at sikre, at de ikke oplever nogen bivirkninger for lægemidlet.
  11. Udfør alle analyse af data offline. Femogtyve datapunkter er tilgængelige for hvert sekund af vurderingen; skjule disse data i ét sekund epoker i Microsoft Excel. Eksportere dataene til et digitalt signal analyse pakke og filtreres med en 3 sek glidende gennemsnit filter.
  12. Etablere baseline diameter fra 120 sek af data forud for manchetten-inflation. Visuel kontrol af baseline-regionen og eksklusive genstande. Beregn gennemsnittet af de resterende baseline regionerne til at producere den baseline diameter.
  13. For strømmen-medierede dilatation (FMD) analyse, bruge softwaren til automatisk at scanne stillingen cuff-deflation region for peak dilatation og bruger markøren til at markere denne top for visuel inspektion. Hvis toppen er blevet fejlidentificeret, bruger markøren til at vælge en mere begrænset område, inden for hvilket den top så kunne identificeres. Optag spidsværdien peak diameter.
  14. For GTN data, vedtage en identisk procedure, der anvendes sammen med mund- og klovsyge, undtagen søgning på peak dilation i regionen efter 5 min af lægemiddeladministration.
  15. For at beregne FMD% og GTN%, trække baseline diameter fra toppen diameter, dividere med baseline diameter og multiplicerer med 100.
    BEMÆRK: I vores laboratorium, den intra-observatør variationskoefficient er 11% for mund- og klovesyge, og 12% for GTN.

3. carotis intima-media tykkelse

  1. Spørg deltager at ligge behageligt på en seng, og placere en pude under hovedet for at tilbyde støtte til nakken.
  2. Slut elektrokardiogram (EKG) fører til Doppler ultralyd og derefter vedhæfte dem på patient lemmer. Kun en grundlæggende EKG-optagelsen er påkrævet, så stiller det relevante kundeemner i venstre og højre arm, og på den venstre ankel.
  3. Forbered ultralyd maskine ved at rulle gennem "menu" og indstilling af scanning frekvens på 10 MHz og optimere dybde (den anbefalede indstilling dybde er 3 - 4 cm) og gain-indstillinger. Juster gain indstillinger for at sikre, at der er symmetrisk lysstyrke for den nærmeste og fjerneste væg af karret.
  4. Spørg deltager at vippe hovedet lidt til venstre, og ved hjælp af den lineære transducer, scanne den rigtige halspulsåren langs alle sine sektioner (fælles, intern og ekstern carotis arterie) ved hjælp af langsgående scanning flyet til at identificere tilstedeværelsen af ​​eventuelle plaques. Gem billeder, der viser tegn på plak. Til at identificere arterie, kigge efter en forgreningspunkt i beholderen, da dette viser den fælles halspulsåre bifurcating i de interne og eksterne carotisarterier.
  5. Til måling of carotid intima-media tykkelse (CIMT), nå mindst 3 billeder af en del af den fælles carotidarterie, der er fri for plak, og er 1 cm proximalt til carotis pære. Attain alle billeder på toppen af ​​R-bølge på EKG, da dette svarer til ventrikulær diastole og det punkt, hvor fartøjet er under den mindste mængde af forskydningsspænding.
  6. Gentag trin 3.4 og 3.5 i venstre halspulsåre. Spørg deltageren at vippe hovedet lidt til højre for denne måling.
  7. For at hjælpe med at opnå klare billeder af nære og fjerne vægge, omhyggeligt manipulere ultralydsonden under vurdering for at sikre at fartøjet er vinkelret ultralydsstrålen. Opnå dette ved subtilt at ændre tilt og rotation af transduceren sammen med mindre justeringer af tryk, proximal-til-distal vinkel (hæl-tå bevægelse) af sonden.
  8. Gennemføre analyse af billeder offline med Artery Måling Software (AMS) til at detektere den vaskulære BounDary henhold til de strækninger i pignoli. Læg op det billede, der skal analyseres, og derefter bruge markøren, skal du oprette et område af interesse i en del af det fartøj, der er fri for plak. Klik på 'opdage' på software og registrere de værdier, der vises på skærmen for CIMT og lumendiameter.
    BEMÆRK: nøjagtige målinger kan kun fås fra langt væg, så ignorere aflæsninger fra den nærmeste væg.
  9. Tag tre målinger for hver side, og derefter gennemsnit dem for at give den gennemsnitlige CIMT for højre og venstre halspulsårer separat. Yderligere gennemsnit af CIMT fra begge sider for at give den samlede CIMT.
    BEMÆRK: intra-observatør variationskoefficient for denne teknik i vores laboratorium er 9%.
  10. Udfør måling af en mindeplade ved hjælp af den samme software ved manuelt markere ud plakken ved hjælp af markøren. Klik på 'klassificere' på AMS til automatisk at beregne ekkogenicitet af plak og karakter efter sin modtagelighed for brud. Klikpå "Plaque Egenskaber" vinduet for at se disse oplysninger.

Representative Results

Laser Doppler Imaging med Iontophoresis

Median blod flux enheder under laser Dopplerbilledbehandling scanninger fra en sund midaldrende kvindelige gratis fra CVD er vist i figur 1. Der var en markant stigning i median blod flux for både ACh og SNP. Baseline blod flux var 48 perfusion enheder til ACh, og 67 perfusion enheder til SNP. Peak blod flux som reaktion på ACh var 455 perfusion enheder, og for SNP 446 perfusion enheder. Dette gav en stigning 831% og 566% i perfusion (i forhold til baseline) for ACh og SNP hhv. De værdier, der er forudsat er stærkt afhængige af det udstyr, der anvendes til at undersøge huden blod flux sammen med miljøfaktorer.

Flow-medieret dilatation og Glyceryltrinitrat-medieret Dilation

Figur 2 viser de grundlæggende og peak diametre for mund- og klovesyge og GTN vurderinger fra en sund ung mand fri fra CVD. Denbaseline diameter brachialarterien var 3,0 mm for vurderingerne MKS og GTN. Den maksimale diameter i MKS testen var 3,3 mm, mens for GTN vurdering var det 3,9 mm, hvilket svarer til en stigning i blodgennemstrømningen 10 og 30%, i forhold til baseline.

Carotis intima-media tykkelse

Figur 3 viser den venstre carotidarterie af et sundt individ. Beregning af CIMT værdier udføres ved anvendelse af automatiseret kant afsløring software. Den CIMT i langt muren var 0.83mm og lumendiameter fartøjets var 7.71mm. Resultaterne for den rette halspulsåre i samme individ var 0.87mm for CIMT, og 7.80mm for lumendiameter. Når gennemsnittet af aflæsningen fra begge sider, CIMT var 0,85 mm, og lumendiameter var 7.76mm.

Figur 1
Figur 1. ChanGES i blod flux som reaktion på laser Doppler billeddannelse med iontoforese. Efter afslutning af en baseline scanne at måle baseline blod flux, 10 scanninger (scan 1 til 10) med iontoforese af ACh og SNP ved hjælp af en 30 uA elektrisk strøm blev udført. Efter iontoforese blev 2 recovery scanninger udført. ACh = acetylcholin; SNP = natriumnitroprussid.

Figur 2
Figur 2. Flow-medieret og glyceryltrinitrat-medieret dilatation. Grafen viser baseline diameter og en klar stigning i peak diametre efter de mulige flow-medieret og glyceryltrinitrat-medieret dilatation stimuli. MKS = flow-medieret dilatation; GTN = glyceryltrinitrat-medieret dilatation.

Figur 3
Figur 3. ultralydsscanning af halspulsåren. En ultralydsscanning af venstre halspulsåre er vist med et område af interesse placeret 1 cm fra carotis pære (punkt forgrening). Klik her for at se en større udgave af dette tal .

Discussion

Den nuværende manuskript detaljer metoden af ​​flere særskilte vurderinger af vaskulær funktion og morfologi, der kan udføres i det perifere kar. Hver vurdering giver oplysninger om de forskellige stadier af åreforkalkning, og være med til at karakterisere den vaskulære profil forskellige vaskulære områder.

Vi har tidligere rapporteret, at mikrovaskulære endotel funktion er uafhængig af store kar endotelfunktion i en population af rheumatoid arthritis patienter med øget risiko for CVD 39. Desuden vurderinger af vaskulær funktion og morfologi var også uafhængige af hinanden i den samme gruppe af patienter og hos patienter med CVD 40,41. Disse resultater kan forklares med heterogenitet funktion og struktur af endotelceller i forskellige vaskulære områder 38, samt en mulig forsinkelse for progression af funktionelle ændringer morfologiskeAbnormiteter i beholderen. En undersøgelse foretaget af Hashimoto og kolleger 42 afsløret, at flere deltagere med åreforkalkning var faldet mund- værdier, men de normale CIMT værdier. Disse resultater tyder på, at behandlingen af ​​subklinisk aterosklerose ved hjælp af en række forskellige metoder er vigtigt at dechifrere de globale virkninger af CVD.

Betydningen af ​​mikrovaskulaturen i sundhed og sygdom vinder stadig større opmærksomhed i den medicinske litteratur. De mikrokar danner et langt større areal end store skibe gør dem væsentlige mål for skader fra skadevoldende stimuli 43. Det er blevet antaget, at mikrokar kan være den primære kilde af inflammatoriske mediatorer, som infiltrerer endotelet i de større fartøjer, der fører til dannelse af læsioner 43. I type II diabetikere, mikrovaskulære sygdom ofte går forud store fartøj sygdom 44, og i andre populationer med øget risiko for CVD såsom rheumatoid arthritis, indgreb, der mindsker CVD-risiko forbedre mikrovaskulære, men ikke stort fartøj, endotelfunktion 45,46. Kollektivt, disse resultater tyder på, at undersøgelsen af ​​mikrovaskulære funktion kan hjælpe med at forstå de komplekse mekanismer, der initierer åreforkalkning.

I det foreliggende arbejde, blev vurderingen af ​​mikrovaskulære endotel funktion udføres ved hjælp af LDI med iontoforese af vasoaktive midler. Kan bruges flere andre vurderinger til at vurdere mikrovaskulære funktion, herunder nailfold capillaroscopy og venøs okklusion plethysmografi. Imidlertid er den tidligere vurdering giver oplysninger om kun mikrovaskulær morfologi, mens sidstnævnte er tidskrævende og i nogle protokoller invasive grund administration af intra-brachial vasoaktive midler 1. I modsætning hertil LDI tilbyder en enkel, tidsbesparende fremgangsmåde til måling af mikrovaskulær perfusion af huden blodkar som respons på vasoaktive midler, der administreres ikke-invasholdsvis. Målingen af hudens blodgennemstrømning har vundet udbredt accept i litteraturen på grund af sin lette tilgængelighed og stærk korrelation med etablerede CVD 12. Desuden fordel LDI forhold til andre Doppler teknikker, såsom laser-doppler-flowmetri, er, at det samtidigt kan scanne flere punkter i et givet område og kan derfor udgøre cellulære bevægelse artefakter og rumlige forskelle i blodgennemstrømningen i huden, som begge kan påvirke perfusion af fartøjet 47,48.

På trods af de åbenlyse fordele ved iontoforese, er det vigtigt at bemærke, at inducerede strøm vasodilatation (CIV) fra iontoforese kan forvirre virkningerne af vasoaktive midler, især ved katoden. Valget af køretøj for drug delivery kunne bidrage til at reducere denne effekt, med 0,5% natriumchlorid (som anvendes i den nuværende protokol) effektive til at begrænse CIV 18. Desuden brug af kamre større diameter og lav elektrisk CURhusleje (som anvendes i den nuværende protokol) alle med til at reducere CIV 18. Anvendelse af en kontrol er også blevet anbefalet 12. Biologiske og adfærdsmæssige faktorer kan også påvirke pålidelighed og gentagelsesnøjagtighed af teknikken. For eksempel har Døgnsvingninger og rygning vist sig at påvirke mikrovaskulære endotel funktion 49,50. Strenge optageforhold skal overholdes for at opnå nøjagtige resultater og fastlagte retningslinjer bør følges ved udformningen protokoller 12.

Måling af MKS og GTN-medieret dilatation giver information om endotel dysfunktion i de store blodkar, og anvendes bredt i ikke-invasiv vaskulær forskning. MKS teknik giver surrogat oplysninger om NO biotilgængelighed og er en nyttig prognostisk markør for hjertetilfælde hos forskellige kliniske populationer 7-9. I det foreliggende arbejde, protokollen fremlagt regnskab for mange af de faktorer,er nødvendige for en tilstrækkelig stimulering af NO-medieret vasodilatation 25. For eksempel blev den okkluderende manchet placeret distalt i forhold til ultralydsonden og omkring håndleddet 27, varigheden af iskæmi var 5 min 26 og tilstrækkelig tid lodes optage den "sande" peak diameter efter reaktiv hyperæmi 28. Desværre har protokollen ikke omfatter karakterisering af forskydningsspændingen profil som den automatiske kant afsløring software ikke tillod samtidig optagelse af skib diameter og puls bølge hastighed signal. Beregningen af forskydningsspænding er en integreret nøjagtig måling af mund- og klovsyge 26 og vi anbefalede, så vidt muligt, vaskulære forskergrupper bruger software, der gør det muligt for sådanne målinger skal udføres.

Vurderinger af MKS og GTN-medieret dilatation er også modtagelige for miljømæssige og biologiske variationer 24, da små ændringer i vaskulær diameter kanfremkalde store FMD / GTN svar. For eksempel er typiske MKS værdier for raske deltagere spænder fra 5-10% 51, hvilket svarer til 0,25 - 0,5 mm ændring i arterielt diameter for en arterie med en diameter på 5 mm. I betragtning af sådanne små ændringer i arteriel diameter, skal omhyggelig vægt på tekniske og biologiske faktorer, der kan påvirke målingen. Faktisk kan FMD være påvirket af en lang række biologiske og adfærdsmæssige faktorer som sympatisk aktivering 52, søvnmangel 53, koffein forbrug 54, rygning 55, antioxidant terapi 56 og tidspunkt på dagen 57. Det er derfor vigtigt at kontrollere for disse forhold ved at udnytte oplysninger fra fastlagte retningslinjer 24,25.

Vurdering af avancerede men subklinisk atherosklerose blev gjort ved hjælp af CIMT. Teknikken er blevet udnyttet i flere kliniske populationer og giver meget detaljeret om arteriel structure forhold til mere sofistikerede teknikker såsom magnetisk resonans-billeddannelse 34. Som med de andre vaskulære teknikker, måling af CIMT kræver nøje overvejelse af de tekniske faktorer, som kan påvirke målingen. Generelt bør CIMT udføres i områder fri plak i langt væg af den fælles halspulsåre. Svarende til mund- og klovsyge, måling af CIMT udføres under anvendelse af høj opløsning ultrasonography og så er meget bruger-afhængig. Rapporteret variationskoefficient (CofV) interval 2,4-18,3% 58, mens den for mund- og klovesyge er det 1-84% 59. Men selv når begge teknikker udføres af kompetente ultrasonographers med eksterne faktorer velkontrollerede, er der stadig en høj CofV 58,60,61. En af grundene til dette kan være, at analyse af vaskulære grænser udføres ved anvendelse af manuelle metoder 60,61. En sådan analyse kan reducere pålidelighed som billedbehandling artefakter såsom falske grænser, støj fra ultrasound signal, og forvridning af fartøjer kan påvirke fortolkningen af billedet 22.

Den seneste udvikling i kontinuerlig automatiseret kant-afsløring software har forbedret påvisning af karvæggen grænser 21,22. I den foreliggende undersøgelse blev via software anvendes til at måle pulsåren diameter, mens AMS blev anvendt til at detektere CIMT. Brugen af disse software reducerer operatør afhængighed, men i tilfældet med AMS, en vis grad af operatørens kontrol er stadig tilgængelig i situationer, hvor billedkvaliteten kan være dårlig 62. Laboratorier, der anvender automatiserede kant afsløring software generelt en tendens til at have lav CofV 58,63,64, derfor bør det være målet for alle vaskulære forskningslaboratorier at indarbejde automatiseret måling af vaskulære grænser for at sikre nøjagtigheden af resultaterne. Det er også god praksis at rapportere resultater af reproducerbarhed undersøgelser af specifikke protokoller, når der udgives undersøgelse resultater.

6-9, er der stadig en mangel på undersøgelser, som har undersøgt forholdet mellem dårlig endotelfunktion og negative kardiovaskulære resultater, såsom myokardieinfarkt og slagtilfælde. Yderligere prospektive undersøgelser er nødvendige for at løse disse problemer. En anden begrænsning er brugen af ​​menneskelige operatører til at udføre de vurderinger og udføre analysen. Dette introducerer en potentiel kilde til skævhed; dog kan dette begrænses ved blændende operatøren til resultaterne eller sikre, at læseren er forskellig fra operatøren. Deter også vigtigt at sikre, at læseren følger en standardiseret protokol for dataanalyse, således at alle data analyseres konsekvent.

Sammenfattende nuværende manuskript indeholder detaljerede oplysninger om de metodiske trin, der er nødvendige for en vellykket udføre vurderinger af mikrokardannelse og store fartøj endotelfunktion samt vaskulær morfologi af den perifere cirkulation. Når det bruges sammen, vurderingerne giver global information om de forskellige stadier af åreforkalkning. Yderligere prospektive studier undersøger den potentielle diagnostiske rolle af disse teknikker er berettiget.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Laser Doppler Imager Moor Instruments, Devon, UK moorLDI2
Iontophoresis Controller Moor Instruments, Devon, UK MIC2
Miochol-E 20 mg Novartis UK Prescribed by physician Acetylcholine for endothelium-dependent function
Nitroprussiat Fides 50 mg Rottapharm Spain Prescribed by physician Sodium nitroprusside for endothelium-independent function
Doppler Ultrasound Siemens PLC, Camberley UK Accuson Antares
Glyceryl Trinitrate 500 mcg Alpharma, Barnstaple, UK Prescribed by physician

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sandoo, A., Veldhuijzen van Zanten, J. J. C. S., Metsios, G. S., Carroll, D., Kitas, G. D. The endothelium and its role in regulating vascular tone. The Open Cardiovascular Medicine Journal. 4, 302-312 (2010).
  2. Lerman, A., Zeiher, A. M. Endothelial Function: Cardiac Events. Circulation. 111, (3), 363-368 (2005).
  3. Anderson, T. J., et al. Close relation of endothelial function in the human coronary and peripheral circulations. Journal of American College of Cardiology. 26, (5), 1235-1241 (1995).
  4. Takase, B., et al. Close relationship between the vasodilator response to acetylcholine in the brachial and coronary artery in suspected coronary artery disease. International Journal of Cardiology. 105, (1), 58-66 (2005).
  5. Khan, F., Patterson, D., Belch, J. J., Hirata, K., Lang, C. C. Relationship between peripheral and coronary function using laser Doppler imaging and transthoracic echocardiography. Clinical Science.(Lond). 115, (9), 295-300 (2008).
  6. Rossi, R., Nuzzo, A., Origliani, G., Modena, M. G. Prognostic role of flow-mediated dilation and cardiac risk factors in post-menopausal women). Journal of American College of Cardiology. 51, (10), 997-1002 (2008).
  7. Brevetti, G., Silvestro, A., Schiano, V., Chiariello, M. Endothelial dysfunction and cardiovascular risk prediction in peripheral arterial disease: additive value of flow-mediated dilation to ankle-brachial pressure index. Circulation. 108, (17), 2093-2098 (2003).
  8. Gokce, N., et al. Predictive value of noninvasively determined endothelial dysfunction for long-term cardiovascular events in patients with peripheral vascular disease. Journal of American College of Cardiology. 41, (10), 1769-1775 (2003).
  9. Jadhav, U. M., Sivaramakrishnan, A., Kadam, N. N. Noninvasive assessment of endothelial dysfunction by brachial artery flow-mediated dilatation in prediction of coronary artery disease in Indian subjects. Indian Heart Journal. 55, (1), 44-48 (2003).
  10. Ross, R. Atherosclerosis - an inflammatory disease. The New England. Journal of Medicine. 340, 115-126 (1999).
  11. Celermajer, D. S., Sorensen, K. E., Bull, C., Robinson, J., Deanfield, J. E. Endothelium-dependent dilation in the systemic arteries of asymptomatic subjects relates to coronary risk factors and their interaction. Journal of American College of Cardiology. 24, (6), 1468-1474 (1994).
  12. Roustit, M., Cracowski, J. L. Assessment of endothelial and neurovascular function in human skin microcirculation. Trends in Pharmacological Sciences. 34, (7), 373-384 (2013).
  13. Ahn, H., Johansson, K., Lundgren, O., Nilsson, G. E. In vivo evaluation of signal processors for laser Doppler tissue flowmeters. Medical & Biological Engineering & Computing. 25, (2), 207-211 (1987).
  14. Kalia, Y. N., Naik, A., Garrison, J., Guy, R. H. Iontophoretic drug delivery. Advanced Drug Delivery Reviews. 56, (5), 619-658 (2004).
  15. Morris, S. J., Shore, A. C. Skin blood flow responses to the iontophoresis of acetylcholine and sodium nitroprusside in man: possible mechanisms. Journal of Physiology. 496, (Pt 2), 531-542 (1996).
  16. Sandoo, A., Veldhuijzen van Zanten, J. J. C. S., Metsios, G. S., Carroll, D., Kitas, G. D. Vascular function and morphology in rheumatoid arthritis: a systematic review). Rheumatology. 50, (11), 2125-2139 (2011).
  17. Metsios, G. S., et al. Individualised exercise improves endothelial function in patients with rheumatoid arthritis. Annals of Rheumatic Diseases. 73, (4), 748-751 (2014).
  18. Ferrell, W. R., et al. Elimination of electrically induced iontophoretic artefacts: implications for non-invasive assessment of peripheral microvascular function. Journal of Vascular Research. 39, (5), 447-455 (2002).
  19. Khan, F., Newton, D. J., Smyth, E. C., Belch, J. J. F. Influence of vehicle resistance on transdermal iontophoretic delivery of acetylcholine and sodium nitroprusside in humans. Journal of Applied Physiology. 97, (3), 883-887 (2004).
  20. Celermajer, D. S., et al. Non-invasive detection of endothelial dysfunction in children and adults at risk of atherosclerosis. Lancet. 340, (8828), 1111-1115 (1992).
  21. Sidhu, J. S., Newey, V. R., Nassiri, D. K., Kaski, J. C. A rapid and reproducible on line automated technique to determine endothelial function. Heart. 88, (3), 289-292 (2002).
  22. Sonka, M., Liang, W., Lauer, R. M. Automated analysis of brachial ultrasound image sequences: early detection of cardiovascular disease via surrogates of endothelial function. IEEE Transactions on Medical Imaging. 21, (10), 1271-1279 (2002).
  23. Vallance, P., Collier, J., Moncada, S. Effects of endothelium-derived nitric oxide on peripheral arteriolar tone in man. Lancet. 2, (8670), 997-1000 (1989).
  24. Corretti, M. C., et al. Guidelines for the ultrasound assessment of endothelial-dependent flow-mediated vasodilation of the brachial artery: A report of the International Brachial Artery Reactivity Task Force. Journal of American College of Cardiology. 39, (2), 257-265 (2002).
  25. Thijssen, D. H., et al. Assessment of flow-mediated dilation in humans: a methodological and physiological guideline. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 300, (1), H2-H12 (2011).
  26. Mullen, M. J., et al. Heterogenous Nature of Flow-Mediated Dilatation in Human Conduit Arteries In Vivo : Relevance to Endothelial Dysfunction in Hypercholesterolemia. Circulation Research. 88, (2), 145-151 (2001).
  27. Doshi, S. N., et al. Flow-mediated dilatation following wrist and upper arm occlusion in humans: the contribution of nitric oxide. Clinical Sciences.(Lond). 101, (6), 629-635 (2001).
  28. Black, M. A., Cable, N. T., Thijssen, D. H., Green, D. J. Importance of measuring the time course of flow-mediated dilatation in humans). Hypertension. 51, (2), 203-210 (2008).
  29. Traub, O., Berk, B. C. Laminar Shear Stress : Mechanisms by Which Endothelial Cells Transduce an Atheroprotective Force. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 18, (5), 677-685 (1998).
  30. Pyke, K. E., Tschakovsky, M. E. The relationship between shear stress and flow-mediated dilatation: implications for the assessment of endothelial function. The Journal of Physiology Online. 568, (2), 357-369 (2005).
  31. Pyke, K. E., Dwyer, E. M., Tschakovsky, M. E. Impact of controlling shear rate on flow-mediated dilation responses in the brachial artery of humans. Journal of Applied Physiology. 97, (2), 499-508 (2004).
  32. Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation. 74, (6), 1399-1406 (1986).
  33. Corrado, E., et al. Endothelial dysfunction and carotid lesions are strong predictors of clinical events in patients with early stages of atherosclerosis: a 24-month follow-up study. Coronary Artery Disease. 19, (3), 139-144 (2008).
  34. Touboul, P. J., et al. Mannheim carotid intima-media thickness and plaque consensus (2004-2006-2011). An update on behalf of the advisory board of the 3rd, 4th and 5th watching the risk symposia, at the 13th, 15th and 20th European Stroke Conferences, Mannheim, Germany, 2004, Brussels, Belgium, 2006, and Hamburg, Germany, 2011. Cerebrovascular Disease. 34, (4), Mannheim, Germany. 290-296 (2012).
  35. Oren, A., Vos, L. E., Uiterwaal, C. S. P. M., Grobbee, D. E., Bots, M. L. Cardiovascular Risk Factors and Increased Carotid Intima-Media Thickness in Healthy Young Adults: The Atherosclerosis Risk in Young Adults (ARYA) Study. Archives of Internal Medicine. 163, (15), 1787-1792 (2003).
  36. Wohlin, M., et al. Both cyclooxygenase- and cytokine-mediated inflammation are associated with carotid intima-media thickness. Cytokine. 38, (3), 130-136 (2007).
  37. Iglesias del, S. a, Bots, M. L., Grobbee, D. A., Hofman, A., Witteman, J. C. Carotid intima-media thickness at different sites: relation to incident myocardial infarction; The Rotterdam Study. European Heart Journal. 23, (12), 934-940 (2002).
  38. Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: II. Representative vascular beds. Circulation Research. 100, (2), 174-190 (2007).
  39. Sandoo, A., Carroll, D., Metsios, G. S., Kitas, G. D., Veldhuijzen van Zanten, J. J. The association between microvascular and macrovascular endothelial function in patients with rheumatoid arthritis: a cross-sectional study. Arthritis Research and Therapy. 13, (3), R99 (2011).
  40. Sandoo, A., Hodson, J., Douglas, K. M., Smith, J. P., Kitas, G. D. The association between functional and morphological assessments of endothelial function in patients with rheumatoid arthritis: a cross-sectional study. Arthritis Research and Therapy. 15, (5), R107 (2013).
  41. Rohani, M., Jogestrand, T., Kallner, G., Jussila, R., Agewall, S. Morphological changes rather than flow-mediated dilatation in the brachial artery are better indicators of the extent and severity of coronary artery disease. Journal of Hypertension. 23, (7), 1397-1402 (2005).
  42. Hashimoto, M., et al. Correlation between flow-mediated vasodilatation of the brachial artery and intima-media thickness in the carotid artery in men. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 19, (11), 2795-2800 (1999).
  43. Stokes, K. Y., Granger, D. N. The microcirculation: a motor for the systemic inflammatory response and large vessel disease induced by hypercholesterolaemia. Journal of Physiology. 562, (Pt 3), 647-653 (2005).
  44. Krentz, A. J., Clough, G., Byrne, C. D. Vascular disease in the metabolic syndrome: do we need to target the microcirculation to treat large vessel disease). Journal of Vascular Research. 46, (6), 515-526 (2009).
  45. Sandoo, A., et al. Anti-TNFalpha therapy may lead to blood pressure reductions through improved endothelium-dependent microvascular function in patients with rheumatoid arthritis. Journal of Human Hypertension. 25, (11), 699-702 (2011).
  46. Sandoo, A., van Zanten, J. J., Toms, T. E., Carroll, D., Kitas, G. D. Anti-TNFalpha therapy transiently improves high density lipoprotein cholesterol levels and microvascular endothelial function in patients with rheumatoid arthritis: a pilot study. BMC. Musculoskeletal Disorders. 13, 127 (2012).
  47. Wardell, K., Jakobsson, A., Nilsson, G. E. Laser Doppler perfusion imaging by dynamic light scattering. The IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 40, (4), 309-316 (1993).
  48. Line, P. D., Mowinckel, P., Lien, B., Kvernebo, K. Repeated measurement variation and precision of laser Doppler flowmetry measurements. Microvascular Research. 43, (3), 285-293 (1992).
  49. Elherik, K., Khan, F., McLaren, M., Kennedy, G., Belch, J. J. F. Circadian variation in vascular tone and endothelial cell function in normal males. Clinical Science. 102, (5), 547-552 (2002).
  50. Pellaton, C., Kubli, S., Feihl, F., Waeber, B. Blunted vasodilatory responses in the cutaneous microcirculation of cigarette smokers. American Heart Journal. 144, (2), 269-274 (2002).
  51. Moens, A. L., Goovaerts, I., Claeys, M. J., Vrints, C. J. Flow-Mediated Vasodilation: A Diagnostic Instrument, or an Experimental Tool. Chest. 127, (6), 2254-2263 (2005).
  52. Hijmering, M. L., et al. Sympathetic activation markedly reduces endothelium-dependent, flow-mediated vasodilation. Journal of the American College of Cardiology. 39, (4), 683-688 (2002).
  53. Takase, B., Akima, T., Uehata, A., Ohsuzu, F., Kurita, A. Effect of chronic stress and sleep deprivation on both flow-mediated dilation in the brachial artery and the intracellular magnesium level in humans. Clinical Cardiology. 27, (4), 223-227 (2004).
  54. Papamichael, C. M., et al. Effect of coffee on endothelial function in healthy subjects: the role of caffeine. Clinical Sciences(Lond). 109, (1), 55-60 (2005).
  55. Lekakis, J., et al. Effect of acute cigarette smoking on endothelium-dependent brachial artery dilatation in healthy individuals). Americal Journal of Cardiology. 79, (4), 529-531 (1997).
  56. Engler, M. M., et al. Antioxidant Vitamins C and E Improve Endothelial Function in Children With Hyperlipidemia: Endothelial Assessment of Risk from Lipids in Youth. Circulation. 108, (9), 1059-1063 (2003).
  57. Etsuda, H., et al. Morning attenuation of endothelium-dependent, flow-mediated dilation in healthy young men: possible connection to morning peak of cardiac events. Clinical Cardiology. 22, (6), 417-421 (1999).
  58. Kanters, S. D., Algra, A., van Leeuwen, M. S., Banga, J. D. Reproducibility of in vivo carotid intima-media thickness measurements: a review. Stroke. 28, (3), 665-671 (1997).
  59. West, S. G., et al. Biological correlates of day-to-day variation in flow-mediated dilation in individuals with Type 2 diabetes: a study of test-retest reliability. Diabetologia. 47, (9), 1625-1631 (2004).
  60. Roos, N. M., Bots, M. L., Schouten, E. G., Katan, M. B. Within-subject variability of flow-mediated vasodilation of the brachial artery in healthy men and women: implications for experimental studies. Ultrasound in Medince and Biology. 29, (3), 401-406 (2003).
  61. Tyldum, E. V., Madssen, E., Skogvoll, E., Slordahl, S. A. Repeated image analyses improves accuracy in assessing arterial flow-mediated dilatation. Scandinavian Cardiovascular Journal. 42, (5), 310-315 (2008).
  62. Liang, Q., Wendelhag, I., Wikstrand, J., Gustavsson, T. A multiscale dynamic programming procedure for boundary detection in ultrasonic artery images. The IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 19, (2), 127-142 (2000).
  63. Hijmering, M. L., et al. Variability of flow mediated dilation: consequences for clinical application. Atherosclerosis. 157, (2), 369-373 (2001).
  64. Woodman, R. J., et al. Improved analysis of brachial artery ultrasound using a novel edge-detection software system. Journal of Applied Physiology. 91, (2), 929-937 (2001).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics