אפיון של יקוציט-טסיות העשיר הפיברין, רומן ביולוגי

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Madurantakam, P., Yoganarasimha, S., Hasan, F. K. Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial. J. Vis. Exp. (103), e53221, doi:10.3791/53221 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

צריכים להיעשות כל נהלי דם-הציור על ידי אנשי מקצוע מוסמכים ומאושרים. שימוש בבני אדם למחקר כרוך באישור מהמועצה לביקורת המוסדית או הסמכות מתאימה אחרת. אמצעי זהירות מיוחד לגבי הסכמה מדעת והגנה על זיהוי משתתף צריך להיות אחרי. כל הניסויים המפורטים בפרוטוקול זה כרוך טיפול בדם אדם ו / או מוצרי דם וציוד מגן אישי מתאים צריכים להיות משוחק בכל העת. הפסולת צריכה להיחשב כBiohazard ומסולק בהתאם לתקנות.

1. venipuncture

  1. זהה את המטופל / משתתף ואשר ברשומות קיימות. הסבר את המחקר בפירוט ולקבל הסכמה מדעת.
  2. יש מגש להגדיר עבור מטופל עם צינורות מסומנים על משטח יציב שטוח.
  3. הסבר את ההליך ולהפוך את מושב המטופל בנוחות עם הזרוע נתמכת. ליידע את החולה שהוא או SHדואר ירגיש צביטה קטנה וצריך להישאר עדיין בכל ההליך.
  4. צרף את המחט למתאם.
  5. שטוף את הידיים וללבוש כפפות.
  6. הכן את גומץ antecubital לvenipuncture על ידי ניקוי עם 70% אלכוהול איזופרופיל במעגלים ממרכז החוצה. תאפשר לאתר לאוויר יבש למשך 30 שניות.
  7. זהה את הווריד המתאים על ידי מישוש.
  8. החל חוסם עורקים 3-4 במעל האתר לנקב לוודא שזה לא חזק מדי (ועדיין מרגיש את דופק רדיאלי).
  9. בצע venipuncture ידי הוספת השיפוע של 15-30 מעלות המחט לעור בתנועה אחת חלקה. דחוף את צינור איסוף דם דרך המחט ולאסוף 9 מיליליטר של דם מלא.
  10. הסר את חוסם עורקים. הסר את הצינור מהמחט.
  11. למשוך את המחט ולהחיל את כיכר הגזה באתר לנקב לפני הסרת מחט. השלך את המחט במכל Biohazard מתאים.
  12. שאל מטופל לשמור על יחסי ציבורessure באתר לנקב.
  13. תווית הצינורות
  14. בדוק את האתר לנקב כדי להיות בטוח דימום הפסק.
  15. החל תחבושת או דבק מעל כיכר הגזה, לשאול אם המטופל מרגיש בסדר (אין כאב, נפיחות או קור אור)
  16. תודה המטופל / משתתף קודם לתחילת הזרמה.

2. L-PRF הכנה

  1. מייד לאחר איסוף דם ורידים בשפופרת הזכוכית יבשה מצופה האדומה, למקם אותו בצנטריפוגה.
  2. צנטריפוגה ב 400 XG במשך 12 דקות ב RT לאחר הצבת איזון נגדי מתאים.
  3. הסר את הצינור בסוף המחזור. שים לב לשלוש שכבות: הפלזמה טסיות-העני, הפיברין טסיות דם עשיר (L-PRF) ובסיס RBC (איור 1) (PPP).
  4. לשאוב PPP בעזרת פיפטה. פינצטה שימוש משוך בעדינות L-PRF החוצה ולשים אותו ברשת מתכת סטרילי, מחוררת.
  5. באמצעות אזמל כירורגי, לגרד את חלק הארי של שכבת RBC משאיר חובב בזהירותמעיל y ללא פגע.
  6. בעדינות לדחוס את קריש L-PRF (באמצעות לוחית מתכת סטרילי, גרם משקל משוער 225) למשך 30 שניות. פלזמה עניה טסיות דם תהיה סחטה.
  7. הסר את הצלחת ועדינות להרים את קרום L-PRF. קרום L-PRF מוכן לשימוש בניסויים 12.

3. uniaxial מתיחה בדיקה

  1. קרומי מקום L-PRF (n = 6) על נייר סינון כדי להקל על טיפול ואגרוף ל" עצמות כלב "באמצעות מחוייט מתכת מת (2.75 מ"מ רחב בנקודה הצרה שלהם באורך של 7.5 מ"מ מד).
  2. למדוד את העובי של כל דגימה בשלוש נקודות ולקחת את הממוצע.
  3. לעסוק בזהירות את קרום L-PRF במרכז אוחז הלסת של מערכת בדיקות uniaxial.
  4. לקרוע בזהירות את תמיכת נייר פילר לחשוף את קרום L-PRF.
  5. תכנית המכשיר כך שראש מטלטלין פועל בקצב קבוע (10.0 מ"מ / דקה) ולהתחיל את הניסוי כאשר L-PRF הוא עדיין רטוב.
  6. רשום את מודולוס האלסטיות, אנרגיה לשבור, ומתח בהפסקה מהתוכנה המלווה את מערכת בדיקת uniaxial. ערכים אלו מחושבים באופן אוטומטי ולא קלט משתמש מוגדר נדרש. אנא ראה איור 3.

כוח 4. תפר שייר

  1. קרומי מקום L-PRF (n = 3) על נייר סינון כדי להקל על טיפול וחותך לדגימות מלבניות מדידה (10 מ"מ x 25 מ"מ) באמצעות אזמל כירורגי.
  2. למדוד את העובי של כל דגימה (ממוצע של 3).
  3. הפוך חריר במרכז המדגם באמצעות חוט הנירוסטה אורתודונטי מייתר (220 מיקרומטר בקוטר).
  4. להעביר את חוט הקשירה דרך חריר כדי ליצור לולאה ולתקן אותה למכונת בדיקת מתיחה. הנח את הקצה של קרום L-PRF לאחיזת הלסת התחתונה 13.
  5. לתכנת את המכשיר כך שראש מטלטלין פועל בקצב קבוע (10 מ"מ / דקה) והתחלההניסוי.
  6. רשום את מודולוס האלסטיות, אנרגיה לשבור, ומתח בהפסקה מהתוכנה המלווה את מערכת בדיקת uniaxial. ערכים אלו מחושבים באופן אוטומטי ולא קלט משתמש מוגדר נדרש. אנא ראה איור 3.

5. מורפולוגי בחינה

  1. הכן את דגימות L-PRF לבדיקת SEM באמצעות אגרוף ביופסית עורי 10 מ"מ ומניח אותם בצלחת 24 גם.
  2. שטוף את הדגימות עם PBS ולתקן עם glutaraldehyde 2.5% (PBS) במשך 20 דקות.
  3. מייבש את הדגימות על ידי טבילה ברצף הגדלת ריכוזים של אתנול (50%, 70%, 80%, 90% ו -100%) במשך 5 דקות כל אחד.
  4. פנק עם 0.5 מיליליטר של 100% HMDS (Hexamethyldisilazane) במשך 5 דקות. לאוורר O / N כדי להסיר את עודפי 14 HMDS.
  5. דגימות הר על ספחים באמצעות קלטת דו צדדית, גמגום-מעיל פלטינה במשך 70 שניות ולבחון במיקרוסקופ אלקטרונים סורק הפועלות באקסלמתח eration של 20 קילו וולט (או הגדרה מתאימה).

6. Genipin Crosslinking של L-PRF, טריפסין רגישות וNinhydrin Assay

  1. כדי להכין L-PRF צולבים genipin, לשטוף ממברנות עם PBS ולספוג ב 4 מיליליטר של 1% פתרון genipin (באתנול 70%) במשך 48 שעות. לשטוף עם PBS לפני ניסויים כדי להסיר genipin העודף 15, 16.
  2. להעריך את היציבות של crosslinking genipin של L-PRF על ידי התנגדותה לשפלה על ידי טריפסין. קרום מקום L-PRF (n = 3) וgenipin L-PRF crosslinked ב500 μl של טריפסין 0.01% וטופחו על 37 מעלות צלזיוס במשך 3 ימים עם שינוי יומי של טריפסין.
    1. לשקול דגימות ביום 1 לפני אנזים חשיפה וביום 3. ההבדל בהתחלה וסיום במשקל מייצג השפלה האנזימטית 17.
  3. לכמת את כמות cross-linking בgenipin טופל L-PRF (G-PRF) על ידי ninhydrin assay. ראשית להכין הכמתמ"כ הסטנדרטיעקומת דואר באמצעות גליצין (1 מ"מ 0.031 מ"מ) כדי לקבוע את הקשר בין ריכוז חומצת אמינו החופשי (FAA) וספיגה.
    1. דגימות החום PRF עם 1 מיליליטר של 2% (w / v) ninhydrin במשך 15 דקות ב 100 מעלות צלזיוס.
    2. אפשר הפתרון להתקרר לRT ולהוסיף 1.5 מיליליטר של 50% אתנול.
    3. לנתח את הספיגה ב 570 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר מתאים.
    4. לקבוע אחוז cross-linking השתמש בנוסחא הבאה 15

משוואת 1

7. Assay התפשטות התאים MTS

  1. לגדול MC3T3 (עכבר preosteoblasts calvarial) בשינוי -alpha בינוני חיוני מינימאלי (αMEM) בT-75 צלוחיות עד monolayer ומחוברות 80% מתקבלת.
  2. הכן קרום טרי, סטרילי L-PRF (לפתוח את צינור L-PRF בתוך מכסה המנוע תרבית תאים) ולהעביר את הקרום על צלחת תרבית תאים חדשה.
  3. תקשורת לשאוב מהבקבוק ולשטוף את monolayer עם PBS, להוסיף 5 מיליליטר של 0.05% טריפסין ומניח את הבקבוק בC חממת 37 o במשך 5 דקות, פיפטה תכולת הבקבוק לתוך צינור צנטריפוגות ו צנטריפוגות ב 400 XG במשך 5 דקות.
  4. למזוג supernatant, לטפוח בעדינות את הצינור כדי לשבור את התא גלולה מחדש להשעות עם 4 מיליליטר של ממ α הטרי, לוותר תערובת של השעיה תא (50 μl) וtrypan כחול (50 μl) לhemocytometer ולספור את מספר תאים
  5. זרעי 4x10 5 תאים בתוך טבעות שיבוט זכוכית 10 מ"מ מונחות על גבי קרומי L-PRF כדי לשמר את התאים בתוך ממברנות (ניתן להסיר טבעות אחרי 24 שעות).
  6. ביום 4, לשטוף בונה עם שלוש פעמים PBS במשך 10 דקות.
  7. הוסף 1 מיליליטר של תקשורת חופשית בסרום ומגיב MTS 200 μl לכל היטב דגירה עבור שעה 2 על 37 מעלות צלזיוס.
  8. למדוד הספיגה בין 200 aliquots μl ב 490 ננומטר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

תמונת מיקרוסקופ האלקטרונים הסורקת של קריש L-PRF בחלקים שונים (למעלה, אמצעית ותחתון) שכבה מתוארת באיור 2. כפי שניתן לראות, החלק העליון מורכבת בעיקר של רשת הפיברין ללא תאים. השכבה האמצעית מועשרת בטסיות דם עם ראיות של ההפעלה וdegranulation. יש השכבה התחתונה תערובת של כדוריות דם לבנות ותאי דם אדומים וממולכד בתוך מטריצת הפיברין.

התכונות מכאניות הוערכו בשני מצבים: בדיקות מתיחים uniaxial ומבחן כוח שמירת תפר. התוצאות מראות התנהגות viscoelastic של L-PRF. למרות מודולוס האלסטיות הוא נמוך (0.47 MPA), הקרום קשה (אנרגיה כדי לשבור, 5 N · מ"מ), והוא מסוגל לעבור עיוות משמעותית (217%, איור 3). נתונים מבדיקות שימור תפר, אינדיקטור של היכולת של הקרום שנתפרו לרקמות, הציע קשה באופן משמעותיnd חומר לעיוותים (מודולוס-0.2 MPa, זן 140% ואנרגיה כדי לשבור-3.2 N.mm) בL-PRF (איור 4).

אחת המגבלות של מוצרי הפיברין ברפואת רגנרטיבית הוא החיים ביולוגיים הקצרים שלה. עשוי מהפיברין אנדוגני, L-PRF הוא רגיש לאנזים השפלה ועובר פירוק פיברין. על מנת להעריך את ההתנגדות של L-PRF לאנזים בתיווך השפלה, L-PRF הטרי היה נתון לטיפול טריפסין (0.01%) וטופחו על 37 מעלות צלסיוס אנו נצפו השפלה של L-PRF מלא בתוך שלושה ימים. crosslinking Genipin של קרומי L-PRF ירד השפלה בכמעט 60% (איור 5).

היכולת של קרומי L-PRF כדי לתמוך בצמיחת תא הוערכה על ידי culturing osteoblasts calvarial עכבר על קרומי crosslinked וuncrosslinked. קרישי uncrosslinked עברו השפלה לרמות שונות תוך קרומי genipin crosslinked נשמרו המבנה שלהם ותמכו בגצמיחת ell (איור 6).

איור 1
איור הצעדים 1. בדור של L-PRF. (א) לאחר צנטריפוגה של כל דם בשפופרת זכוכית, שלוש שכבות תהיה גלויות. (ב) לאחר decanting PPP, L-PRF מתבצע להסיר באמצעות פינצטה סטרילית . בסיס תאי דם האדום (C) נמצא בלגרד באמצעות אזמל והניח על מגש מתכת מחוררת (ד '). לאחר דחיסה עדינה, כוח הקנייה היא סחטה וקרום L-PRF חברה נוצר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
SEM תמונה של שכבות שונות של L-PRF הטרי () מייצג את שכבת הפיברין העשיר;. (ב) הוא אזור של טסיות דם מועשרות בדרגה שונות של הפעלה; (ג) הוא המעיל באפי עם לויקוציטים רב ו( ד ') הוא הבסיס של תאי דם האדום. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3. עקומות מתח המתח הבאים העמסה מכאנית של L-PRF במצב uniaxial בדיקות מתיחים () וכוח שמירת תפר (B). דפוס הטעינה של כל דגימה מיוצג בצבע שונה. נתונים uniaxial הבדיקות מתיחים () מצביעים על מודולוס נמוך, עיוות אלסטי גדולה וכישלון מהיר. עם ההתנפחות ידי תפר (ב '), L-PRF מייצג קרום שהוא קשה (שטח מתחת לעקומה) וכן distensible. אשכולות טובים של הנתונים מצביעים על שונות מינימליות בין דגימות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4
איור 4. תמונות של כישלון בפועל בבדיקת כוח שמירת תפר. חוט קשירה אורתודונטי 220 מיקרומטר עבה נירוסטה עבר דרך אמצע L-PRF וקשור לחבר הלסת העליון של המכונה הבדיקות המתיחה. הקצה השני היה מחובר לאחיזה הנמוכה ומתוח בקצב קבוע. שים לב להתארכות של הקרום וההתנגדות שלה לקרוע, המצביע על חוסן מצוין של L-PRF.אום קבצים / ftp_upload / 53,221 53221fig4large.jpg "target =" / / _ blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 5
השפלה 5. איור של קרומי L-PRF הבא דגירה בטריפסין 0.01%. כל קרומי L-PRF התפרקו לחלוטין בטריפסין תוך 3 ימים ואילו L-PRF genipin-crosslinked היו 60% יותר יציב. זה מראה כי crosslinking הכימי יכול להיות אסטרטגיה מעשית כדי לשפר את תוחלת החיים של ממברנות L-PRF כאשר הניח in vivo.

איור 6
אפקט איור 6. של crosslinking L-PRF על כדאיות תא. נציג תמונות של תרבות 4 ימים של תאי MC3T3 על uncrosslinked L-PRF (), PRF L-א-crosslinked genipin (ב)פלסטיק ND תרבית רקמה (C). L-PRF uncrosslinked מושפל בתרבות למידה משתנה והראה פעילות תאים דומה לפלסטיק. Genipin L-PRF crosslinked נשמר המבנה שלהם ותמך בהישרדות תא חזקה. מימין הוא נתונים לכמת (+ SD) מניסויים בלתי תלויים עם שלושה משכפל. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

תרכיזי טסיות אוטולוגית מבטיחים בתחום של רפואת רגנרטיבית 18 בגלל השפע של גורמי גדילה. עם זאת, הכנות אלה לעתים קרובות חסרי מבנה מוגדר שעושה מניפולציה כירורגית קשה מאוד. פעמים רבות, ההשעיות וג'לים אינן נשמרים בצורה יעילה באתר של משלוח, וכתוצאה מכך תוצאות בלתי צפויות. L-PRF מייצג התקדמות עצומה באבולוציה של טסיות דם מתרכזת בכך שהוא במהותו קרום הפיברין משרד עם טסיות לכוד. ממברנות מוצקות אלה בעלי מאפייני טיפול מצוינים, וניתן נתפר היטב במיקום רצוי מבחינה אנטומית בניתוחים פתוחים. עם זאת, התכונות הפיסיקליות וביולוגיות שלה הן יחסית לא ידועות.

L-PRF יהווה באופן עקבי כאשר צעדים שתוארו לעיל הם דבקו בקפדנות (איור 1). אחד השיקולים החשובים ביצירת קרום L-PRF טוב הוא tiשלי לעכב בין תיקו הדם וצנטריפוגה. ההצלחה של טכניקת L-PRF תלוי לחלוטין במהירות של איסוף דם והעברה מיידית לצנטריפוגות 19, בדרך כלל בתוך דקות. אי אפשר ליצור קריש L-PRF מובנה היטב (עם פרופיל תוכן סלולארי, ארכיטקטורת מטריצה ​​ושחרור גורם גדילה הספציפית שלה), אם קצירת דם היא ממושך ולא הומוגנית; מסה קטנה מבולבלת, פריכה של הפיברין עם תוכן לא ידוע נוצר במקום.

זה כבר מקובל שיש לי אינטראקציות mechanobiological בין תאים ומטריקס (ECM) השפעה קריטית בכל ההיבטים של התנהגות תא כוללים הגירה, שגשוג והתמיינות 20,21. L-PRF, סוג ייחודי של קריש דם, נוצר בנסיבות ספציפיות ומורכב מרשת מורכבת, מסועפת של הפיברין. פונקציות L-PRF כECM זמני שהתהפך לתוך רקמה תפקודית במהלך ריפוי. נתון מ 'כוחות echanical, תוצאות ריפוי מוצלחות תלויות בשלמות המבנית של L-PRF ולכן הבהרת התכונות הפיזיות שלהם הוא חשוב. ביצענו בדיקות uniaxial מתיחה (כדי לזהות את תכונות חומר הפנימיות) ובדיקת שמירת תפר (לזהות את מאפייני כישלון) על L-PRF הטרי. שלא כמו ג'ל PRP או דם קרוש שאין מבנים מוגדרים, L-PRF דומה רקמת חיבור צפופה עם מאפייני טיפול מעולים. אנו מדווחים מודולוס אלסטיות של .470 MPa (SD = 0.107) לקרומי L-PRF ולמתוח פעמיים אורכה הראשוני לפני הכישלון (זן של 215%). משחק אלה נתונים בספרות שפורסמה 22,23 שדיווח קשיחות נמוכה (1-10 MPA) וגבוה מתח (עד 150%) לפני השבירה. ההבדל בערכים יכול להיות בגלל השימוש ברשת הפיברין בהשוואה לשימוש בניתוח AFM של יחיד סיבי הפיברין במחקרים שהוזכרו לעיל.

כוח שמירת תפר הוא ניתוחפרמטר חשוב של חומרי שתל והוא מוגדר ככוח דרוש כדי למשוך תפר מהשתל או לגרום הקיר של השתל להיכשל. הניסויים שלנו משמשים ישרה על פני הליך (כהגדרתו על ידי 24 ANSI). הכוח הדרוש כדי למשוך את חוט הקשירה באמצעות L-PRF של 3.23 N.mm (SD = .329). בסך הכל, מצאנו L-PRF להיות מכאני קשה, מסוגל לתמוך בעומסים והיכולת למתוח כפליים על מתח ושומר על תפרים היטב (מעווה באופן משמעותי לפני הקריעה).

חוסר היציבות והשלמות מבנית של L-PRF בסביבות ביולוגיות הוא מגבלה עיקרית בשימוש בו בהנדסת רקמות. אנחנו ביקשנו לטפל בבעיה זו על ידי כימי crosslinking L-PRF באמצעות genipin. שלא כמו gluteraldehyde אשר מזוהה עם רעילות, genipin היא מולקולה מתכלה באופן טבעי עם רעיל נמוך. לאחר טיפול genipin, הקרומים היו יציבים באופן משמעותי בטריפסין וsupported התפשטות תאים מעל 4 ימים. עם זאת, רק 20% מL-PRF היה crosslinked עם genipin (שנקבע על ידי assay ninhydrin). הנתונים אלה מצביעים על כך שתוך crosslinking הכימי הוא אסטרטגיה בת קיימא, חלופות אחרות צריכים להיחקר.

בהתבסס על ממצאים אלה, ברור כי L-PRF הוא ביולוגי רומן עם תכונות ייחודיות: הכנה צפויה מהדם אוטולוגי, פשטות של פרוטוקול, ארכיטקטורה מוגדרת, תכונות מכאניות מרשימות ושפע של גורמי גדילה מטסיות מופעלות. הדם מותר לקרישה בתנאים פיסיולוגיים ללא חשיפה לנוגדי קרישה, תרומבין אקסוגניים וסידן כלורי. כל המאפיינים הללו להפוך L-PRF מבטיח ביולוגי עבור יישומים ברפואת רגנרטיבית.

אחת הסוגיות הקליניות להתמודד עם ביישום של L-PRF הוא ההטרוגניות באיכות של טסיות דם ומרכיבי דם. נכון לעכשיו, מעט מאוד הבינו עלL-PRF שנוצר מחולים עם הפרעות בקרישה או חולים בתרופות המשפיעות על קרישת דם (הפרין, קומדין או מעכבי טסיות דם). תשובות לשאלות אלה ללא ספק תשפר את ההבנה של ריפוי שלנו, כמו גם לתרום לקידום תחום הרפואה מותאמת אישית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

יש המחברים אין לחשוף ולאשר שאין התנגשויות ידועות של עניין הקשורים בפרסום זה.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needle 19G BD 305186
Needle Disposal Container Fisherbrand 14-827-122
Red-Topped Glass Collection Tube BD 8020129
Gauze Pads Tyco 5750
Bandage Johnson & Johnson 5005989
Surshield Terumo SV*S19BL Safety winged infusion set
Blood Collection Assembly BD 303380
Tourniquets BD 367203
Brand Luer Adapter Vacutainer L42179
Intra-Spin System  Intra-Lock International ISS110 Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit 
Pipettes (Serological & Micro) Corning
Scalpel Exelint 29552
MTS Bionix 200 MTS Systems Corporation Material testing systems
MTS Test Works 4 MTS Systems Corporation
Whatman Filter Paper Whatman 1004 070
SS Orthodontic ligature wire Patterson Dental 628-4228
200 Proof Ethanol Koptec V1001
Hexamethyldisilazane (HMDS) Aldrich 440191
Aluminium Mounting Stubs Ted Pella 16324
Double Sided Carbon Tape PELCO Tabs 16084-1
Scanning Electron Microscope JEOL LV 5610
Trypsin HyClone SH30042.01
Cell Culture Incubator Thermo Fisher Scientific Inc 51026282
Antibiotic-Antimicotic Gibco 15240-062
Genipin Wako 078-03021
Cell Culture Media Gibco 12000-022 Minimum Essential Medium-Alpha
MTS Reagent Promega G1118
PMS Reagent Sigma P9625
Spectrophotometer BioTek Epoch Spectrophotometer
10mm Glass Cloning Rings Corning 3166-10
T-75 Flask Corning 430641
DPBS Corning 55-031-PB
Ninhydrin 98% Aldrich 454044
24 Well Plate Corning 3987
Biopsy Punch Acu Punch P1025
Digital Micrometer Pittsburgh 68305
Glutaraldehyde Sigma G6257
12 Well Plate Corning 3336
96 Well Plate Corning 3596

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85, (6), 638-646 (1998).
  2. Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
  3. Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13, (7), 1207-1230 (2012).
  4. Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97, (2), 110-118 (2009).
  5. Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17, (6), 687-693 (2006).
  6. Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3, (2), 740-761 (2011).
  7. Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7, (10), 819-830 (2013).
  8. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e37-e44 (2006).
  9. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e45-e50 (2006).
  10. Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), 299-303 (2006).
  11. Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13, (7), 1145-1152 (2012).
  12. Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27, (3), 158-167 (2009).
  13. Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64, (2), 121-128 (2010).
  14. Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186, (1), 84-87 (1997).
  15. Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68, (3), 561-567 (2007).
  16. Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3, (4), (2008).
  17. Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
  18. Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine In Tech. 319-349 (2011).
  19. Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110, (4), 413-416 (2010).
  20. Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47, (9), 1931-1932 (2014).
  21. Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47, (9), 1933-1940 (2014).
  22. Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102, (26), 9133-9137 (2005).
  23. Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313, (5787), 634 (2006).
  24. American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics