Optagelse Mouse Ultrasonic vocalizations at vurdere Social Kommunikation

1Human Genetics and Cognitive Functions, University Paris Diderot, CNRS UMR 3571, Institut Pasteur, 2Neurophysiology and Behavior, University Pierre et Marie Curie Paris 6, CNRS UMR 7102, 3Bio Image Analysis, CNRS URA 2582, Institut Pasteur
Published 6/05/2016
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Behavior
 

Summary

Cite this Article

Copy Citation

Ferhat, A. T., Torquet, N., Le Sourd, A. M., de Chaumont, F., Olivo-Marin, J. C., Faure, P., et al. Recording Mouse Ultrasonic Vocalizations to Evaluate Social Communication. J. Vis. Exp. (112), e53871, doi:10.3791/53871 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Patienter med neuropsykiatriske lidelser normalt få underskud i social kommunikation (f.eks patienter med autisme spektrum forstyrrelser, skizofreni eller Alzheimers sygdom) 1. Gensplejsede mus mere og mere hyppigt anvendt til at modellere genetiske årsager til disse lidelser 2. Studere social kommunikation i disse musemodeller er af stor interesse for at forstå mekanismerne i genetiske mutationer, der fører til atypiske sociale dysfunktioner og for afprøvning af nye behandlingsformer. Da mus er sociale dyr og kommunikere med hinandens hjælp olfaktoriske, taktile, visuelle og akustiske signaler, de er egnede modeller til at vurdere den sociale kommunikation.

Mus ultralyd vokaliseringer nu i øjeblikket anvendes som en proxy til modellering de genetiske baser til mundtlig kommunikation underskud 3,4 (men eksistensen af vokal læring i denne art er stadig debatteret 5,6, selv om de fleste nyere undersøgelser nærmest skændese for fravær af vocal læring 7). Laboratorie mus har vist sig at udsende ultralyd vocalizations i mor-spædbarn relationer, i mand-kvinde socio-seksuelle interaktioner, i samme køn sociale interaktioner (revideret i henvisning 8) og i juvenile-juvenile sociale interaktioner 9. Mus hvalpe udsender isolation opkald i løbet af deres første to uger af livet, når isoleret fra dæmningen og søskende 10. Hanner udsender ultralyd vokaliseringer når i tilstedeværelse af en brunst kvindelige (eller urin stikord fra hende) 11,12. Hanner og hunner udsender ultralyd vokalisering når interagere med et ukendt conspecifikt af samme køn 13,14. Organisationen og funktioner af disse vokaliseringer er ikke helt klart, og har brug for yderligere undersøgelser. Aktuel viden om funktionelle aspekt er begrænset til fremkaldelse af hentning adfærd i mødre høre hvalp isolation opkald, lettelse af nærhed af voksne kvinder mod voksne mænd vocalizationer 15 og den øgede udforskende adfærd af voksne hanner høre voksen kvindelige vokaliseringer 16.

Karakterisering af abnormiteter i mundtlig kommunikation i musemodeller af neuropsykiatriske lidelser bør gennemføres i standardiserede betingelser for at udelukke stort bidrag af de eksperimentelle betingelser. Sådanne beskrivelser kombineret med vurderingen af ​​samtidige sociale interaktioner og neurobiologiske studier, i forskellige genetiske modeller skal forbedre vores viden om den genetiske bidrag til de forskellige aspekter af mus ultralyd kommunikation. Over en lang sigt, bør det give yderligere lys over nogle neurobiologiske grundlag for social kommunikation i mennesker. Vi i øjeblikket sigter mod at give simple protokoller til pålideligt fremkalde ultralyd vocalizations under udvikling og i voksenalderen for både mandlige og kvindelige mus i laboratoriet. Sådanne protokoller bør lette standardisering af optagelser til mere pålideligt sammenligne Ultrasonic vokalisering emissioner mellem stammer og laboratorier. Det bør også lette oprettelsen af ​​sådanne optagelser i laboratorier, der har nogen forudgående erfaring med mus ultralyd vocalizations optagelser. Vi fremhæver også den nuværende mulighed for at kombinere ultralyd vokaliseringer data med detaljerede adfærdsmæssige data indsamlet samtidigt under sociale interaktioner i voksne mus, for at få vigtige oplysninger om sociale nedskrivninger samt forbindelse med emission af ultralyds vokaliseringer. Sådanne analyser vil kaste nyt lys over opbygning og funktioner, mus ultralyd vokaliseringer. Endelig vil vi også annoncere muligheden for at dele ultralyd vokalisering optagelser med hele det videnskabelige samfund på mouseTube database (http://mousetube.pasteur.fr). Åben adgang til lydoptagelse data skal øge viden om mus ultralyd kommunikation ved at tillade forskerne at sammenligne egne data med ultralyd vokaliseringer optaget i andre labotorier (med lignende eller forskellige stammer / protokoller), og / eller til at udfordre deres analysemetoder med filer optaget under forskellige forhold.

Protocol

Etik erklæring: Procedurer, der involverer dyr fag er blevet godkendt af Comité d'Ethique en eksperimenteren animale (CETEA) n ° 89 på Institut Pasteur, Paris.

1. Dyrepræparation

  1. Hvis du vil optage hvalp isolation opkald, få gravide kvinder fra muse stamme af interesse. Bemærk: Race heterozygote hanner og hunner for at opnå mindst 10 kuld herunder vildtype, heterozygote og knock-out unger at opnå robuste kontroldyr.
  2. Opnå to kategorier af voksne mus til at registrere vocalizations under samme køn interaktioner.
    1. Opnå mindst 12 hanner eller 12 hunner af hver genotype som forsøgsmus fra stammen af ​​interesse (for at tage hensyn til inter-individuel variation). Bemærk: Denne protokol er godt tilpasset til voksne, men det kan justeres til unge, med reduceret isolation tid før forsøget 9. Denne test virker for mænd eller kvinder. Men undgå testning mandliges fra musestammer, der viser en klar aggressiv fænotype i han-han social interaktion test.
    2. For at maksimere mængden af ​​affiliative interaktioner, isolere forsøgsdyrene før forsøgene. Huset hanner individuelt i 3 uger (for at reducere aggressive interaktioner til et minimum 14,17) og hunner i 3 dage (E. Ey, upubliceret data) for at øge deres sociale motivation.
    3. Få mænd eller kvinder fra stammer repræsentative for den genetiske baggrund af testen stammen at bruge dem som nyankomne (f.eks, som interagerende mus, se 3.1.3). For eksempel, hvis mutantstammen blev undersøgt er blevet genereret på C57BL / 6J baggrund, bruge C57BL / 6J mus som nyankomne. Beregne antallet af dyr, der er nødvendige, således at hver af disse mus ikke bruges mere end 2 gange om dagen som ny comer. Huse dem i grupper.
  3. Opnå to kategorier af voksne mus for at optage mandlige vocalizations i nærværelse af et østrus kvinde.
    1. Opnå på least 12 kønsmodne hanner fra hver genotype af stammen af ​​interesse (at tage hensyn til inter-individuel variation). Bemærk: Hvis hannerne aldrig har haft erfaring med kvinder før, sætte dem i individuelle bure og lade dem tilbringe en nat med en kvindelig to dage før prøven for at øge deres motivation til at udsende ultralyd vocalizations 6.
    2. Opnå kønsmodne kvinder fra baggrundsstammen af ​​de registrerede hanner. For eksempel, hvis de mutante hanner blev undersøgt blevet genereret på C57BL / 6J baggrund, bruge C57BL / 6J hunner. Beregne antallet af hunner, der er nødvendige, således at hver af disse mus ikke bruges mere end 3 gange om dagen. Huse dem i grupper.

2. Pup Isolation opkald

  1. Pup Identifikation
    1. Tre dage før den forventede dagen for fødslen, isolere de drægtige hunner.
    2. Tjek hunnerne for fødslen hver morgen og hver aften. Bemærk dagen for fødslen som P0.
    3. Identificer hvalpene på P1 bruger langvarig pote tatoveringer (subkutan injektion af grønne tatovering pasta med en 0,3 mm x 13 mm [30 G ½ "] nål). Opret en kode med en, to, tre eller fire poter markeret. Vær så hurtig som muligt, for at minimalt forstyrre hvalpe, og sætte dem tilbage i reden så hurtigt som muligt.
  2. Opsæt Cage til Record Pup Isolation opkald.
    1. Brug enten en self-made lydisoleret kammer (figur 1A) eller en simpel Styrofoam boks. Placer et termometer i feltet for at overvåge temperaturen for hver optagelse. Sørg for, at temperaturen forbliver mellem 18 ° C og 22 ° C.
    2. Anbring en mikrofon i toppen (gennem et hul i toppen af ​​boksen). Justere højden af ​​mikrofonen, så membranen af ​​mikrofonen er 12-15 cm over bunden af ​​kassen, hvor pup vil ligge ned. Tilslut mikrofonen til lydkortet, og lydkort til computeren.
    3. For at justere forstærkningen af ​​sound kort, foretage en optagelse forsøg med en hvalp, der ikke vil blive anvendt i eksperimentet. Sæt hvalpen i de samme betingelser som i eksperimentet (se 2.3.1). Luk døren. Justér forstærkningen på lydkortet, så det er på den maksimale værdi (at have den størst mulige udsving de vocalizations), men uden at overbelaste (tjek på live spektrogram display på optagelse software).
      Bemærk: Et par opkald kan blive overbelastet, hvis amplituden af ​​de fleste af de opkald holdes på det højest mulige niveau.
    4. Registrer forstærkningen for hver optagelse session og ikke ændrer den mellem unger / kuld / sessioner. Variationer i gain niveauer vil føre til unøjagtige opkald afsløring og akustiske variabler foranstaltninger med de samme tærskler i analyserne ved hjælp af automatisk registrering og målinger (se 5.1 til 5.4).

figur 1
(A) Eksempel på en self-made lydtætte kammer til at registrere hvalp isolation opkald.. (B) spektrogrammerne af de forskellige typer opkald anvendes i den foreliggende klassificering opkaldstype; se beskrivelse i tabel 1. Klik her for at se en større version af dette tal.

  1. Gennemføre registrering af hvalp isolation kalder hver to dage. Gennemføre optagelser i morgen for hvalpe født i nat, og i eftermiddag for hvalpe født i løbet af dagen for at undgå kategorisering i de samme aldersklasse unger med en halv dag med aldersforskellen. Dette er mest mærkbar for de helt unge stadier P2 og P4.
    1. Tag en hvalp i kuldet. Det anbringes så hurtigt og skånsomt som muligt i en plast recipient vasket med ethanol 10% og tørret (diameter: 9cm; Højde: 10 cm for at forhindre ældre unger fra at flygte fra det område, som mikrofonen). Sætte modtageren lige under mikrofonen.
    2. Luk boksen så hurtigt og lydløst som muligt. Start registrering af ungernes ultralyd vokaliseringer i optagelsen software (16-bit format, 300 kHz samplingfrekvens til at fange lyd amplitude op til 150 kHz med en høj kvalitet).
    3. Efter der er gået den krævede tid for optagelse (op til 5 min), stopper optagelsen. Tag hvalpen ud af kassen. Skriv ned pote tatoveringer af hvalpen.
    4. Tag axillær temperatur hvalpen med en probe-termometer. Mark hvalpen på ryggen med en lille punkt med en lugt-mindre pen (vand blæk), at genkende lettere de allerede indspillede unger i reden, når den næste er valgt, og for at undgå at manipulere alle unger hver gang en ny er valgt. Sæt hvalpen tilbage i reden.
    5. Vask plast modtager og plastlaget dens bund med 10% ethanol og tør det godtfør du sætter den næste hvalp indeni.
    6. Vælg den næste hvalp i kuldet og gentag 2.3.
  2. Check kropsvægt, motorik, negative geotaxis, og udviklingsmæssige mærker (for oplysninger om den reducerede testbatteri se metoden afsnit i Schmeisser et al. 18 og i Ey et al. 19) efter en periode med resten af 1 time for at tillade hvalpene at komme sig efter den udmattende emission af ultralyd vokaliseringer. Brug en anden kohorte af dyr, hvis det komplette udviklingsmæssige testbatteri såsom i Chadman et al. 20 og Scattoni et al. 21 gennemføres.
  3. Gentag disse optagelser hver to dage mellem P2 og P12 til at karakterisere hvalp vokal adfærd og udvikling i hele deres første to uger af livet.

3. Ultrasonic vocalizations under samme køn sociale interaktioner

  1. vokalisation Optagelser
    1. Forbered en test bur (50 x 25 cm x 30 cm 3; Plexiglas, 100 lux [lav intensitet hvidt lys]) rengøres med sæbe vand, tørres og fyldes med 2 cm frisk strøelse i lydisoleret kammer.
      1. Placer mikrofonen, så der kan optages vocalizations udsendes fra alle hjørner af buret. Fastgør mikrofonen i et hjørne af testen bur (enten på buret eller på et stativ), og justere vinklen mikrofon-bur bund til at dække buret er hele overfladen.
        Bemærk: Ultralyd er meget retningsbestemt.
      2. Placer et videokamera på toppen af ​​lydisoleret kammer til at fange hele overfladen af ​​testen bur.
        Bemærk: Kontroller, at mikrofonen ikke gemmer sig et hjørne af testen bur på videoen.
      3. Før afprøvning justere forstærkningen af ​​lydkortet med et ekstra han- og et ekstra kvindelig som ikke vil blive anvendt i eksperimentet senere. Sæt disse dyr i testen bur i optagelsen kammer. Juster gain niveau på lydkortet at maksimere amplituden af ​​de optagede vocalizations but for at minimere overbelastning som set i levende spektrogram displayet på optagelse software.
        Bemærk: Gevinsten afhænger af afstanden mellem mikrofonen og de vocalizing dyr.
    2. Indføre dyret, der skal testes (mand eller kvinde, og det vil blive kaldt "beboer") i testen bur på frisk strøelse. Lad det vænne på prøve buret i lydisoleret kammer i 20 min for at maksimere sin interesse for den ukendte conspecifikt introduceret i 3.1.3.
    3. Efter denne tilvænning tid, indføre 2. dyr for samspillet (mand eller kvinde, samme køn som beboer, men forskellige øre mærker / pote tatovering til at identificere dem senere, og det vil blive kaldt den "nye-comer").
      1. Start optagelse ultralyd vokaliseringer (16-bit format, 300 kHz sampling frekvens til at fange lyd amplitude op til 150 kHz med en høj kvalitet), og videoen til at fange indførelsen af ​​den nye comer i testen buret. Start optagelse ultrasonic vocalizations under tilvænning (beboer alene), hvis der er behov for en sammenligning mellem baseline niveau af vokalisering emission under bur udforskning og den sociale interaktion.
      2. Synkroniser manuelt / visuelt lyd- og videooptagelser ved at trykke på den tid, ur ( "bip" lyd nær mikrofonen) præcis hvornår bagpoterne i den nye-comer mus røre jorden.
      3. Lad de to dyr interagerer for den ønskede (f.eks 4 min, en varighed tilstrækkelig til at samle nok ultralyd vocalizations).
    4. Sæt beboer og den nye-comer tilbage i deres respektive bure. Tøm brugt strøelse fra testen bur, vaske det med sæbe vand og tør den med køkkenrulle. Put frisk strøelse og læg den tilbage i lydisoleret kammer til den næste test.

4. Mandlige vocalizations Under Interaktion med en Estrus Female

  1. Tidligt om morgenen den dag, testemænd, tage vaginale udstrygninger fra hver hun at bestemme deres seksuelle status inden for østrus cyklus.
    1. Hold den kvindelige i halen og fastholde hende på buret nettet. Brug en pipette til at skylle vagina flere gange med 20 pi PBS (dvs. injicere og huske de samme 20 pi PBS flere gange). Huske de 20 pi PBS med det samme pipettespids. Brug sterilt PBS, for at undgå infektion, hvis kvinder er at blive testet for flere dage i træk.
    2. Spred PBS indeholdende suspensionen af ​​vaginale celler på et dias. Sæt fire prøver på et dias (identificere de personer på siden af ​​slæden med en blyant). Lad objektglassene tørre før udførelse af farvning.
    3. Arbejdet under laboratoriet emhætte.
      1. Forbered et bad af ren May-Grunwald, et bad af phosphatpufferopløsning (0,1 M) og et bad af Giemsa R (1/20 i phosphatbufferopløsning).
      2. Sæt dias i badet af ren maj-Grünwald i 3 min, såskyl dem i badet med phosphatpufferopløsning i 1 min og endelig overføre dem i 10 minutter i badet med Giemsa R (1/20 i phosphatbufferopløsning).
      3. Efter dette, glassene skylles igen i badet med phosphatpufferopløsning i 10 sek og lad dem tørre.
    4. Undersøg farvede objektglas under lup. Hunner, der kan bruges i løbet af dagen er dem, hvis prøver til stede kun store forhornede epitelceller (uden kerne, farvet i blå, fuld brunst).
  2. Sæt hanner i prøverummet mindst 30 minutter før teste dem.
  3. vokalisation Optagelser
    1. Gentag 3.1 om nødvendigt.
    2. Indføre den mandlige, der skal testes (på frisk strøelse). Lad ham vænne på prøve bur i lydtætte kammer i 10 min.
    3. Efter denne tilvænning tid, indføre en kvinde i brunst (blandt de udvalgte fra farvningen dem).
      1. Start optagelse ultralyd vokaliseringer og videoat indfange indførelsen af ​​hunnen i testen bur. Start optagelse ultralyd vocalizations under tilvænning (han alene), hvis der er behov for en sammenligning mellem baseline niveau af vokalisering emission under bur udforskning og social interaktion.
      2. Synkroniser manuelt / visuelt lyd- og videooptagelser ved at trykke på den tid, ur ( "bip" lyd nær mikrofonen) præcis hvornår bagpoterne i hunmus røre jorden.
      3. Lad de to dyr interagerer for den ønskede (f.eks 4 min, en varighed tilstrækkelig til at samle nok ultralyd vocalizations).
    4. Sætte hannen og hunnen tilbage i deres respektive bure. Tøm brugt strøelse fra testen bur, vaske det med sæbe vand og tør den med køkkenrulle. Put frisk strøelse og læg den tilbage i lydisoleret kammer til den næste test.
      Bemærk: Det er optimalt at bruge hver brunst kvindelige kun én gang hver dag (men hvis det er nødvendigt det kananvendes op til 3 gange på samme dag, men ikke i en række).

5. Variabler, der skal udvindes

  1. Forbered lydfiler til analyserne. Bemærk: Proceduren nedenfor er specifik for en visoft SASLab Pro og kan ændres i henhold til den anvendte software.
    1. Skær filer, så de starter præcis på det "bip" af tiden ur, og slutter efter den ønskede varighed (5 min til ungernes optagelser, 4 min for voksne optagelser).
    2. Filtrer amplituden under 30 kHz ved hjælp af en high-pass filter (Rediger> Filter> FIR Time Domain Filter, High Pass med 30 kHz frekvens afskåret). Brug batchbehandling at filtrere alle filer af interesse (Handlinger> Batch Processing> FIR filter).
    3. Identificer hver ultralyd vokalisering ved mærkning dem med softwaren.
      1. Brug automatisk genkendelse for ungernes optagelser (Værktøjer> Etiketter> Opret afsnit etiketter fra bølgeform hændelser). Juster tærskel, holde tid og margin feller den mest præcise detektion. kontrollere manuelt påvisning og juster etiketter om nødvendigt (anbefales).
      2. Brug visuel detektion (manuel indsættelse af etiketter) for voksne optagelser med baggrundsstøj (vælg de vocalizations, klik til højre, og indsæt sektion etiket fra markør).
    4. Opret spektrogram. Aktiver automatiske parameter målinger (Værktøjer> Automatiske parametermålinger> Automatiske parametermålinger oprettet).
    5. Kontrollér "Aktiver automatiske målinger", de "beregne parametre fra hele spektrogram", og "Automatisk opdatering" kasser. Vælg "Element adskillelse": interaktivt (afsnit etiketter).
    6. Check kasser til at beregne de ønskede tidsmæssige parametre (varighed element, Interval, Start / Slut tid) og spektrum-baserede parametre (Peak frekvens) og placeringen af ​​målinger (Start af element, End of element, Mean, Max, Min) .
    7. Kopier målingerne og indsætm i et regneark.
      Bemærk: For optagelser udført med voksne, kan målinger af spektrum-baserede parametre være umuligt på grund af baggrundsstøj. Brug manuelle målinger af peak frekvens ved at klikke på de forskellige frekvens værdier direkte på spektrogram og indsætte de værdier manuelt i en tabel.
  2. Bestem takst, dvs antallet af opkald i minuttet ved først at bestemme antallet af vokaliseringer udsendes (samlet antal etiketter). Derefter beregner opkaldet sats ved at dividere det samlede antal vokaliseringer registreret af varigheden (i minutter) af filen.
  3. Bestem tidsmæssige organisation, dvs. fordelingen af tidsintervaller mellem opkald til at bestemme sekvens organisation.
    1. Beregn tidsintervallerne mellem slutningen af ​​vokalisering n og starten af ​​vokalisering n + 1 ved hjælp af start / sluttidspunkt for hver etiket.
    2. Etablere fordelingen tæthed af tidsintervallerne mellem Ultrasonic vokaliseringer.
  4. Bestem opkald repertoire, dvs. definere typer opkald til stede i optagelsen. Bruge eksemplet med klassificering vist i tabel 1 og figur 1B.
    1. Når mærkning hver vokalisering i 5.1.3, skriv navnet på den type opkald i etiketten.
    2. Beregn det nøjagtige antal og andelen af ​​hver opkaldstype at opbygge den vokale repertoire.
  5. Bestem akustiske egenskaber for hver vokalisering, dvs. varighed, peak frekvens (dvs. frekvens med den højeste amplitude) i begyndelsen og slutningen af opkaldet, maksimum og minimum peak frekvens, og betyder frekvens, hvis automatisk måling er mulig (figur 1B) .
    1. Brug den automatiske parametermålinger funktion i softwaren til at måle automatisk varighed, peak frekvens egenskaber (f.eks, start, slut, middelværdi, maksimum, minimum) i pup optagelser. Brug varigheden af ​​etiketten som varigheden af ​​vokalisering for voksne optagelser. Mål manuelt på spektrogram vinduet peak frekvens egenskaber (f.eks, start, slut, maksimum, minimum).
  6. Par ultralyd vokalisering data og social interaktion data (MiceProfiler plugin fra ICY platform 22).
    1. Sørg for at synkronisere så præcist som muligt lyd og videooptagelser, som beskrevet i protokollen.
    2. Encode videoen af den sociale interaktion ved hjælp af mus Profiler Tracker plugin for ICY platform, som beskrevet i de Chaumont et al. 22. Start sporing præcis hvornår bagpoterne af den indførte dyr røre jorden.
    3. Upload den kodede videofil og dens tilsvarende xml-fil (genereret af Mice Profiler Tracker) i mus Profiler Video Label Maker plugin for ICY platform, som beskrevet i de Chaumont etal. 22.
      Bemærk: Mus Profiler Video Label Maker plugin vil automatisk forbinde videofilen og tekstfil genereret fra analysen af den lydfil, hvis de har det samme navn (se: http://icy.bioimageanalysis.org/plugin/Mice_Profiler_Video_Label_Maker) .
    4. Efter kontrol, at musen skalaen er korrekt, skal du klikke på "Opret USV statistik" for hver fil for at få antallet og andelen af ​​vokaliseringer udsendes under hver social begivenhed i en adskilt fil.

6. Upload af filer på mouseTube Database

  1. Sørg for, at filerne er på en storage-server, som kan tilgås fra uden for institutionen.
    Bemærk: Servere hostet i nogle institutioner med høj sikkerhedsniveauer får brug for en specifik konfiguration for at være tilgængelig for folk forbinder fra uden for institutionen.
  2. Gå til mouseTube hjemmeside (http://mousetube.pasteur.fr). Log ind (log ennd adgangskode tilskrives hver bruger af administratorerne).
  3. Kontroller, om musestamme indspillet allerede findes i mouseTube database ved at klikke på knappen "Stammer". Hvis ikke, beder administratorerne at oprette den.
  4. Opret emner ved hjælp af "Emner> Opret" knappen. Indtast identifikationskoder for de dyr, der konstateres. Samle dem i grupper for at lette senere hentning af data.
  5. Indtast beskrivelsen af ​​den anvendte protokol til at registrere ultrasoniske vokaliseringer ved hjælp af "Protocols> Opret" knappen.
  6. Opret et eksperiment for hver optagelse session bruge "Eksperimenter> Opret" knappen. Angiv protokollen, gruppe af personer, som er blevet optaget, hardware og software, der bruges, og deres forhold.
    Bemærk: Eksperimentet samler alle metadata svarer til vokalisering filer.
  7. Opret linket til vokalisering filer ved hjælp af "vokaliseringer> Opret & #34; knap. Vælg eksperimentet på listen. Kopier og indsæt webadressen på den vokalisering fil (dette link begynder med http: // ...) i det tilsvarende felt i "Filer til at linke" kolonnen. Godkend posterne ved at klikke på knappen "Opret et link mellem mouseTube og filer".
    Bemærk: Det er ikke nødvendigt at udfylde hver boks for hver fil på samme tid.
  8. Hvis det er nødvendigt, ændre links indtastet på ethvert tidspunkt, og tilsæt nærmere forklaring i afsnittet "Bemærkninger". Tøv ikke med at skrive noter til at give flere detaljer. For eksempel, hvis der er indgået et link mod en videofil, der blev indspillet samtidig med den lydfil, dette kan angives i "Notes".

Representative Results

Med de nuværende protokoller, vi karakteriserede vokal opførsel af mus mangler ProSAP1 / Shank2, et gen forbundet med autisme spektrum forstyrrelser (ASF) 23-25. ASD er kendetegnet ved underskud i social kommunikation og stereotype adfærd 1. Vores Shank2 - / - mus viste hyperaktivitet, øget angst og atypisk vokal kommunikation 18,26. Faktisk konstaterede vi, at Shank2 - / - mus viste en atypisk udviklingsmæssig profil i deres emission i pup isolation opkald i sammenligning med den typiske omvendt U-formet kurve i deres vildtype-kuld Shank2 -. / - Mus viste øget takst på P4 og nedsat momssats på P6 i sammenligning med deres vildtype-kuld (Figur 2). Vi observerede også en nedsat momssats i kvindelige interaktioner, der involverer en Shank2 - / - hun i SAMMENLIGNINGn med interaktioner, der involverer en vildtype kuld (figur 2). Vi undersøgte repertoiret af de 5 forskellige kategorier opkald. Det syntes at være forskellige mellem unger (fx her P2, P6 og P10) og voksne (figur 3). Genotype-relaterede forskelle var signifikante meste i voksenalderen. Under sociale interaktioner, der involverer voksne Shank2 - / - mænd eller kvinder med en C57BL / 6N kvindelige, blev flere korte opkald og ustrukturerede opkald registreres i forhold til interaktioner, der involverer deres vildtype-kuld (figur 3D og E). Mindre komplekse opkald og frekvens hopper opkald blev også konstateret i interaktioner med en C57BL / 6N kvindelige involverer voksne Shank2 - / - hunner i sammenligning med interaktioner, der involverer Shank2 + / + hunner (Figur 3E). Endelig har vi også målt manuelt akustiske variabler. Der var ingen signifikant genotype-relateret forskel during udvikling. I modsætning hertil varighed af opkald registreret under interaktioner, der involverer voksne Shank2 - / - hunner var kortere end de registreret under interaktioner, der involverer deres vildtype-kuld (Figur 4A). Vi fremhævede også, at peak frekvensen af ultralyd vokaliseringer steg i hvalp udvikling uden væsentlig genotype-relaterede forskel 26. Under interaktioner, der involverer Shank2 - / - mænd eller kvinder med en C57BL / 6N kvindelige, ultralyd vocalizations havde en lavere peak frekvens sammenlignet med opkald registreret under interaktioner, der involverer deres vildtype-kuld (figur 4B).

Hertil kommer, at denne protokol også lov til at studere forbindelse med emission af ultralyds vokaliseringer ved at kombinere data fra lydoptagelser til de adfærdsmæssige data udtrukket fra MiceProfiler (ICY software, Institut Pasteur, Paris). For eksempel, i kvindedominerede kvindelige interaktioner, var de fleste ultralyd vokaliseringer udsendes, når dyrene var i kontakt og mere specifikt beboer snuse den nye comer s ano-genital region, eller i det mindste beboer at stå bag det nye-comer. Mus udledes også mange ultralyd vokaliseringer når beboeren nærmede sig nye-comer (figur 5, øverste panel). Mindre vocalizations blev registreret når beboeren Shank2 - / - mus var i fysisk kontakt med den nye-comer (f.eks sniffing det ano-genitale område af ny-comer) end når beboeren var en vildtype mus. Mindre vocalizations blev udløst, når beboeren bag den nye-comer var en Shank2 - / - mus, end da det var en vildtype mus. Flere vocalizations blev også registreret, når den nye-comer var i synsfeltet af beboer mus, og endnu mere i vildtype-typer end i mutanterne (Figur 5, nedre panel).

s = "jove_content" fo: holde-together.within-side = "1"> Figur 2
Figur 2:. Emission på ultralyd vocalizations under udvikling og hos voksne mandlige og kvindelige Shank2 - / - mus og vildtype-kuld Ring på hvalpe (hver anden dag fra P2 til P12, n = 18-19 Shank2 + / +, n = 15-16 Shank2 - / -) og voksne under han-brunst kvindelige interaktioner (n = 15 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) og kvindelige-kvindelige interaktioner (n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) i vildtype-mus (venstre felt) og Shank2 - / - mus (højre panel). Data er præsenteret som middelværdi +/- SEM og individuelle punkter (ikke-parrede Wilcoxon-test: * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001).ge.jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Figur 3:. Vocal repertoire af Shank2 - / - mus og vild-type kuld andele af de fem forskellige opkaldstyper udsendes af P2 hvalpe (A; n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), P6 hvalpe (B; n = 19 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), P10 hvalpe (C, n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), voksne mænd med en østrus kvindelige (D n = 16 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) og voksne hunner med en anden kvinde (E; n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) i vildtypemus (venstre paneler) og Shank2 - / - mus (højre paneler). Data er præsenteret som middelværdi +/- SEM og enkelte punkter (chi-squared test: * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001). Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4
Figur 4:. Akustiske variabler ekstraheret fra ultralyd vocalizations i Shank2 - / - mus og vild-type fra samme kuld (A) Længde af alle typer opkald beskæmmes udsendes af P2 hvalpe (n = 20 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / - ), P6 hvalpe (n = 19 Shank2 + / +, n = 18 Shank2 - / -), P10 hvalpe (n = 20 Shank2 + / + Shank2 - / -), voksne mænd med en østrus kvindelige (n = 16 Shank2 + / +, n = 16 Shank2 - / -) og voksne hunner med en anden kvinde (n = 15 Shank2 + / +, n = 13 Shank2 - / -) i vildtypemus (venstre felt) og Shank2 - / - mus (højre panel). (B) Maksimal peak frekvensen målt på alle typer opkald forvirret i P2 unger, P6 hvalpe, P10 hvalpe, voksne hanner med en østrus kvinde og voksen kvinde med en anden kvinde (samme Ns som ovenfor). Data er præsenteret som middelværdi +/- SEM og enkelte punkter (ikke-parrede Wilcoxon test: * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001). Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 5
Figur 5: Context. s af emissionen af mus ultralyds vokaliseringer i hun-hun voksen sociale interaktioner Andel af ultralyd vokaliseringer udsendes af par, der involverer en Shank2 + / + med en C57BL / 6N mus (n = 16, A) og par, der involverer en Shank2 - / - med en C57BL / 6N mus (n = 13, B) i løbet af de følgende typer af adfærdsmæssige begivenheder (rød: beboer, grøn: ny-comer): sociale kontakter, oro-oral kontakt, ano-genitale sniffing fra beboer mus, ano- genital sniffing fra den nye-comer mus, beboer bag ny-komne, new-comer bag beboer, immobilitet af beboer, immobilitet af nyankomne, tilgang fra beboer & flygte fra den nye-comer, tilgang fra den nye-comer & flygte fra beboer, tilgang og flygte fra beboer, tilgang og flygte fra den nye-comer, beboer efter den nye-comer, new-comer i synet på beboer, beboer i synet inden for ny-comer. Dataene er presented som middelværdi +/- SEM og individuelle punkter (ikke-parrede Wilcoxon test: * p <0,05, ** p <0,01). Upublicerede data. Klik her for at se en større version af dette tal.

Call typer Beskrivelse
kort varighed ≤5 ms og frekvensområde ≤6.25 kHz
enkel varighed> 5 ms og frekvensområde ≤6.25 kHz (flad), eller frekvens modulation kun i én retning (opad eller nedad) med frekvensområdet> 6,25 kHz
kompleks frekvens modulationer i mere end én retning og frekvensområde> 6,25 kHz (moduleret) eller tilføjelse af en eller flere yderligere frekvens component (harmoniske eller ikke-lineære fænomener, men ingen mætning) men ingen begrænsning på frekvensområdet (kompleks)
frekvens hopper inddragelse af et spring (en frekvens hop) eller flere hopper (frekvens hopper, andre) i frekvens uden tid kløft mellem de på hinanden følgende frekvens komponenter, med (blandet) eller uden nogen støjende del inden for ren tone opkald
ustruktureret ingen ren tone komponent kan identificeres; "støjende" opkald

Tabel 1:. Karakteristik af fem typer af mus ultralyd vokaliseringer Eksempler på kriterier for varighed, frekvensområde, frekvens modulationer og frekvens hopper anvendes til at bestemme 5 forskellige typer opkald inden for mus ultralyd vokaliseringer.

Discussion

Protokollen præsenteres her giver standardiserede og pålidelige måder at indsamle mus ultralyd vocalizations i laboratoriet. Disse meget begrænsede situationer er den fordel, at standardisering. De anvendes med succes til at sammenligne stammer eller genotyper i stammerne 18,19,26,27. Som præsenteret i de repræsentative resultater, de kan benyttes til identifikation af atypiske social kommunikation i mus muteret til Shank2, et gen forbundet med autisme spektrum forstyrrelser. Sammenligninger mellem musestammer, mellem forskellige sammenhænge eller endda mellem laboratorier vil blive udløst af tilgængeligheden af større datasæt på mouseTube databasen. Dette værktøj bør sætte skub i undersøgelser af mus ultrasoniske vocalizations ved at tillade multivariate analyser.

De her beskrevne protokoller er optimeret til at teste mus af forskellige genotyper inden for en stamme, som det gøres i de fleste undersøgelser modellere genetiske cIDRAG til neuropsykiatriske lidelser. Det anbefales at eksperimentelt designe hver undersøgelse for at få den bedst mulige kontrol. Faktisk kunne kuld effekter maskere eller kunstigt genetiske virkninger 28,29. Det er derfor tilrådeligt at inkludere kuld kontroller for hver genotype. Opdræt heterozygote forældre bør derfor begunstiget, da det vil give den korrekte matchning af muterede og kontrol mus inden for et kuld. Dette retfærdiggør pote tatovering mærkning af alle hvalpe (blindet til genotype) at spore personer gennem optagelserne hver to dage. Genotypebestemmelse sker ved fravænning, ved at tage hale prøver. Når du optager hvalp isolation opkald fra P2 på, ville vi ikke anbefale at tage hale prøver allerede i hvalpe, da denne operation omfatter supplerende manipulation og stress meget tæt i tiden til en optagelse.

Protokollerne foreslået her for at fremkalde ultralyd vokaliseringer hos voksne tillader ikke klar identifikation af EMItter af vokaliseringer. Det forklarer, hvorfor vi manipulere motivation forsøgsdyret. Faktisk er forsøgsmusene isoleret og ikke det nye-comer, og forsøgsdyrene vænne længe på prøve bur under samme køn interaktioner. I mand-kvinde interaktioner, den indførte kvindelige er ikke isoleret og testen mandlige habituates for kortere tid, da motivation kan være højere i denne seksuel kontekst. Disse manipulationer af motivation bør maksimere sandsynligheden for testen musen udsender de vocalizations og ikke den indførte én. For at optage mandlige ultralyd vocalizations i en seksuel kontekst, kan en simpel vatpind med frisk (dvs. ikke frosne) urin af en brunst kvindelig også indføres i buret 30. Denne metode gør det muligt at tildeling af ultralyd vokaliseringer til test mandlige med 100% sikkerhed, men det forhindrer at indsamle specifikke oplysninger om den faktiske sociale sammenhæng emissionen af ​​disse vokaliseringer. Derfor er vi fremme protocol beskrevet her (med en frit-bevægelige brunst hun). Vi anbefaler også altid at bruge indført mus fra den samme stamme ved test af mus fra en mutant stamme og til at analysere de data som et par af mus vocalizing. En nyere undersøgelse fremmer brugen af triangulering at lokalisere emitter 31. I denne undersøgelse blev hunnerne fundet at også udsende ultralyd vocalizations under møder med en mandlig. Dette kan forklares ved det faktum, at de blev isoleret i mindst to uger før indspilningen. Den almindelige brug af det foreslåede i denne undersøgelse triangulering bør dog tillade identifikation af emitter af vokaliseringer i de fleste tilfælde, hvis videooptagelser er korrekt synkroniseret.

De isolation opkald fra unger registreret under udvikling ikke forstyrres af baggrundsstøj fra strøelse. Sædvanligvis en automatisk analyse fungerer udmærket til at udtrække de vigtigste variabler. I modsætning hertil vocalizations optaget fra voksne er disturbed af baggrundsstøj fra dyrene bevæger sig i sengetøj. Automatisk analyse kunne fejle, og derfor bør anvendes manuel analyse. Ikke desto mindre, tilføjer strøelse i testen buret bør give forhold, der er mindre stressende for dyrene end bar jord (at mus ikke kan lide). Yderligere indsats i samfundet er koncentreret om at forbedre den automatiske registrering af ultralyds vokaliseringer under forskellige forhold, selv de indebærer baggrundsstøj. For eksempel, stemmen software gør det muligt at analysere vokaliseringer, der var blevet manuelt udvalgt for fravær af baggrundsstøj 32. I denne software, udvinding af de akustiske variabler er automatisk, men har behov for indledende manuelt valg.

Det skal bemærkes, at den inter-individuelle variation er meget vigtigt i det vokale opførsel af mus. For eksempel bliver opkaldet på voksne mænd i nærværelse af et østrus kvindelig meget fordelt (figur 1). Vi suggest disse standardiserede protokoller til at fremkalde ultrasoniske vokaliseringer allerede at begrænse variationen relateret til den eksperimentelle kontekst. Ikke desto mindre vil vi gerne påpege vigtigheden af at præsentere ikke kun middelværdien og SEM for dataene, men vigtigst de enkelte punkter i prøver af lille størrelse 33. Det er også meget relevant - hvis ikke nødvendigt - for at optage mindst 12 personer i hver gruppe / genotype at indsamle repræsentative data. I mange tilfælde bør inter-individuel variation ikke skjules (normalt det kan ikke være), og det kan være af stor betydning for at identificere enkeltpersoner, der bærer den genetiske mutation, undersøgt, men ikke viser nogen atypisk fænotype. Sådanne personer kunne give fingerpeg om kompensationer, som kan åbne nye veje for behandlinger af genetiske sygdomme.

I de fleste adfærdsmæssige karakterisering af musemodeller for neuropsykiatriske lidelser, vokal adfærd og sociale kontakter er overvejeed hinanden (f.eks 19,27,34,35). Nylige analysemetoder nu give en halvautomatisk detaljeret karakterisering af de sociale arrangementer og sekvenser af begivenheder i en interaktion (ved hjælp MiceProfiler for eksempel) 36, samt muligheden for at kombinere denne analyse med data fra lydoptagelser. Den største fordel ved denne metode er at give et overblik over den sociale kommunikation i musemodeller af ASD, at mere præcist at identificere, hvilke aspekter af social kommunikation er berørt. I nærværende protokol synkroniseringen er stadig manuelt, men dette kan forbedres ved at udløse videooptagelsen gennem lydoptagelsen software. Denne type af analyser bør være standard for at give en mere omfattende billede af social kommunikation underskud i musemodeller af neuropsykiatriske lidelser. Endvidere indtil nu, vokalsignaler meste analyseret fra emitteren side (dvs. tests er bygget til at favorisere emissionen af vocal signaler ved den testede mus, som i det foreliggende protokoller). bør nu også indstilles fokus på modtageren af ​​disse signaler, for bedre at kunne identificere de funktioner af disse akustiske signaler. Dette bør ske ved at evaluere også adfærd nye-comer mus i de nuværende protokoller hos voksne (ved hjælp MiceProfiler for eksempel) 36, ved hjælp af afspilning eksperimenter 16, eller ved at oprette nye protokoller. Faktisk er de nuværende protokoller giver meget begrænsede situationer, som måske ikke afspejler de nøjagtige etologiske betingelser for vokalisering emission i mus. Den spontane emission af ultralyds vokaliseringer skal bedre karakteriseres ved hjælp af kontinuerlig lyd- og videooptagelser til at kaste mere lys over den spontane vokal opførsel af mus.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
needles 0.3mm x 13 mm [30 G 1/2"] BD Microlance 304000 -
green tattoo paste Ketchum Manufacturing Inc., Ottawa, Canada 329AA -
thermometer Fisherbrand, Waltham, USA 4126 (W255NA) -
self-made soundproof chamber (pups) Institut Pasteur, Paris - acoustic foam + plexiglas; inside dimensions (W x H x D): 32 cm x 33 cm x 32 cm
small surface thermister + single probe thermocouple Harvard Apparatus 599814 + 601956 -
smell-less pen for instance: Giotto - ink made with water, washable: these pens are designed for babies
Ethanol absolute (100%) Sigma Aldrich,  Saint-Quentin Fallavier, France 24103 diluted 1/10
Condenser ultrasound microphone Avisoft-Bioacoustics CM16/CMPA Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #40011 furnished with extension cables by the Avisoft company
Ultrasound Gate 416H Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #34163 sound card
Avisoft Recorder USGH Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #10301; #10302 recording software for Windows Vista, 7 and 8
Avisoft SASLab Pro Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany #10101, 10111; #10102, 10112;  Windows 10, 8.1, 8, 7 or Vista including Intel-based Apple Macintosh running Boot Camp, Parallels or similar virtualization software.
Laptop or Apple Macintosh running Boot Camp - - running Windows 10, 8.1, 8, 7 or Vista; for the Apple Macintosh, Boot Camp is preferred to virtualizations softwares such as Parallels due to memory constraints
plastic recipient (pup recordings) Lock & Lock, Chatswood, USA HPL932D Lock & Lock Stackable Airtight Container Round 700 ml; use without the cover; dimensions: 9 cm diameter, 10 cm height
PBS 1x (pH = 7.4) Gibco (Life Technologies) 10010-023 -
slides Menzel-Gläser, Thermo Scientific J1800AMNZ Superfrost Plus
May-Grünwald solution 500 ml RAL Réactifs, Martillac, France 320070-0500 -
Giemsa R 500 ml RAL Réactifs, Martillac, France 720-1107 diluted 1/20 in phosphate buffer solution
phosphate buffer solution (self-made) - - pH = 7, 0.1 M: 39 ml NaH2PO4 0.2 M + 61 ml Na2HPO4 0.2 M + 100 ml H2O (final volume: 200 ml)
test cage Institut Pasteur, Paris - 50 x 25 cm, 30 cm height; Plexiglas
self-made soundproof chamber (adult recordings) Institut Pasteur, Paris - acoustic foam + PVC; inside dimensions (W x H x D): 66 cm x 90 cm x 46 cm
video camera From Noldus Information Technologies, Wageningen, The Netherlands - high-resolution CamTech Super-Hi-Res video camera; 25 fps 
EthoVision XT Noldus Information Technology, Wageningen, The Netherlands http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt video acquisition software
Mice Profiler Tracker plugin from the ICY platform Bio Image Analysis, Institut Pasteur, Paris http://icy.bioimageanalysis.org/plugin/Mice_Profiler_Tracker tracking software to analyse behavioral events during social interactions

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. American Psychiatric Association. Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fifth Edition (DSM-V). (2013).
  2. Ey, E., Leblond, C. S., Bourgeron, T. Behavioral Profiles of Mouse Models for Autism Spectrum Disorders. Autism Res. 4, (1), 5-16 (2011).
  3. Bourgeron, T., Jamain, S., Granon, S. Animal Models of Autism - Proposed Behavioral Paradigms and Biological Studies. Contemporary Clinical Neuroscience: Transgenic and Knockout Models of Neuropsychiatric Disorders. 151-174 (2006).
  4. Scattoni, M. L., Crawley, J., Ricceri, L. Ultrasonic vocalizations: A tool for behavioural phenotyping of mouse models of neurodevelopmental disorders. Neurosci. Biobehav. Rev. 33, (4), 508-515 (2009).
  5. Portfors, C. V., Perkel, D. J. The role of ultrasonic vocalizations in mouse communication. Cur. Opin. Neurobiol. 28, 115-120 (2014).
  6. Arriaga, G., Zhou, E. P., Jarvis, E. D. Of mice, birds, and men: the mouse ultrasonic song system has some features similar to humans and song-learning birds. PLOS ONE. 7, e46610 (2012).
  7. Hammerschmidt, K., Schreiweis, C., Minge, C., Pääbo, S., Fischer, J., Enard, W. A humanized version of Foxp2 does not affect ultrasonic vocalization in adult mice: Ultrasonic vocalization of "humanized" FoxP2 mice. Genes Brain Behav. (2015).
  8. Portfors, C. V. Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice. J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46, 28-34 (2007).
  9. Panksepp, J. B., et al. Affiliative Behavior, Ultrasonic Communication and Social Reward Are Influenced by Genetic Variation in Adolescent Mice. PLOS ONE. 2, (2007).
  10. Zippelius, H. -M., Schleidt, W. M. Ultraschall-Laute bei jungen Mäusen. Naturwissenschaften. 43, 502 (1956).
  11. Whitney, G., Coble, J. R., Stockton, M. D., Tilson, E. F. Ultrasonic emissions: do they facilitate courtship of mice. J. Comp. Physiol. Psychol. 84, 445-452 (1973).
  12. Holy, T. E., Guo, Z. S. Ultrasonic songs of male mice. PLOS Biol. 3, 2177-2186 (2005).
  13. Maggio, J. C., Whitney, G. Ultrasonic vocalizing by adult female mice (Mus musculus). J. Comp. Psychol. 99, 420-436 (1985).
  14. Chabout, J., et al. Adult Male Mice Emit Context-Specific Ultrasonic Vocalizations That Are Modulated by Prior Isolation or Group Rearing Environment. PLOS ONE. 7, (1), e29401 (2012).
  15. Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. Female mice respond to male ultrasonic "songs" with approach behaviour. Biol. Lett. 5, 589-592 (2009).
  16. Wöhr, M., Moles, A., Schwarting, R. K. W., D'Amato, F. R. Lack of social exploratory activation in male -opioid receptor KO mice in response to playback of female ultrasonic vocalizations. Soc. Neurosci. 6, 76-87 (2011).
  17. Granon, S., Faure, P., Changeux, J. -P. Executive and social behaviors under nicotinic receptor regulation. Proc. Nat. Acad. Sci. 100, (16), 9596-9601 (2003).
  18. Schmeisser, M. J., et al. Autistic-like behaviours and hyperactivity in mice lacking ProSAP1/Shank2. Nature. 486, (7402), 256-260 (2012).
  19. Ey, E., et al. Absence of Deficits in Social Behaviors and Ultrasonic Vocalizations in Later Generations of Mice Lacking Neuroligin4. Genes Brain Behav. 11, 928-941 (2012).
  20. Chadman, K. K., et al. Minimal Aberrant Behavioral Phenotypes of Neuroligin-3 R451C Knockin Mice. Autism Res. 1, 147-158 (2008).
  21. Scattoni, M. L., Gandhy, S. U., Ricceri, L., Crawley, J. N. Unusual Repertoire of Vocalizations in the BTBR T plus tf/J Mouse Model of Autism. PLOS ONE. 3, (2008).
  22. De Chaumont, F., Coura, R. D. -S., et al. Computerized video analysis of social interactions in mice. Nat. Methods. 9, 410-417 (2012).
  23. Leblond, C. S., et al. Genetic and Functional Analyses of SHANK2 Mutations Suggest a Multiple Hit Model of Autism Spectrum Disorders. PLOS Genet. 8, (2), e1002521 (2012).
  24. Berkel, S., et al. Mutations in the SHANK2 synaptic scaffolding gene in autism spectrum disorder and mental retardation. Nat. Genet. 42, 489-491 (2010).
  25. Pinto, D., et al. Functional impact of global rare copy number variation in autism spectrum disorders. Nature. 466, 368-372 (2010).
  26. Ey, E., et al. The autism ProSAP1/Shank2 mouse model displays quantitative and structural abnormalities in ultrasonic vocalisations. Behav. Brain Res. 256, 677-689 (2013).
  27. Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T plus tf/J mice during three types of social encounters. Genes Brain Behav. 10, 44-56 (2010).
  28. Zorrilla, E. P. Multiparous species present problems (and possibilities) to developmentalists. Dev. Psychobiol. 30, (2), 141-150 (1997).
  29. Lazic, S. E., Essioux, L. Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models. BMC Neurosci. 14, (1), 37 (2013).
  30. Hoffmann, F., Musolf, K., Penn, D. J. Freezing urine reduces its efficacy for eliciting ultrasonic vocalizations from male mice. Physiol. Behav. 96, 602-605 (2009).
  31. Neunuebel, J. P., Taylor, A. L., Arthur, B. J., Egnor, S. R. Female mice ultrasonically interact with males during courtship displays. eLife. 4, (2015).
  32. Burkett, Z. D., Day, N. F., Peñagarikano, O., Geschwind, D. H., White, S. A. VoICE: A semi-automated pipeline for standardizing vocal analysis across models. Sci. Rep. 5, 10237 (2015).
  33. Weissgerber, T. L., Milic, N. M., Winham, S. J., Garovic, V. D. Beyond Bar and Line Graphs: Time for a New Data Presentation Paradigm. PLOS Biol. 13, (4), e1002128 (2015).
  34. Jamain, S., et al. Reduced social interaction and ultrasonic communication in a mouse model of monogenic heritable autism. Proc. Nat. Acad. Sci. U. S. A. 105, 1710-1715 (2008).
  35. Won, H., et al. Autistic-like social behaviour in Shank2-mutant mice improved by restoring NMDA receptor function. Nature. 486, 261-265 (2012).
  36. Ferhat, A. -T., Le Sourd, A. -M., de Chaumont, F., Olivo-Marin, J. -C., Bourgeron, T., Ey, E. Social Communication in Mice - Are There Optimal Cage Conditions? PLOS ONE. 10, (3), e0121802 (2015).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats