Utvikling av en direkte Pulp-capping modell for evaluering av pulpal Wound Healing og reparerende Dentin Dannelse i Mus

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Vi beskriver en trinn-for-trinn metode for å utføre direkte papirmasse capping på mus tenner for evaluering av pulpal sårtilheling og reparerende dentin dannelse in vivo.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Song, M., Kim, S., Kim, T., Park, S., Shin, K. H., Kang, M., Park, N. H., Kim, R. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. J. Vis. Exp. (119), e54973, doi:10.3791/54973 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

Musene ble kjøpt fra Jackson Laboratory og holdt i et patogen-fri vivarium i UCLA Division of Laboratory Animal Medicine (DLAM). Forsøkene ble utført i henhold til godkjente institusjonelle retningslinjer fra kanslerens Forsøksdyrutvalget (ARC # 2016-037).

1. Mouse anesthetization

  1. Bruk åtte uker gammel kvinne C57 / BL6 mus (n = 3).
  2. Bedøve musene ved hjelp av ketamin (80-120 mg / kg musevekt) / xylazin (5 mg / kg musevekt) løsninger og administrere intraperitonealt (ip) med en dose på 10 ml / kg.
  3. Forbered ketamin (80-120 mg / kg) / xylazin (5 mg / kg) løsninger og administrere dem intraperitonealt (ip) med en dose på 10 ml / kg.
  4. Kontroller at mus er fullt bedøvet ved å utføre en tå klype.

2. Pulp-capping Prosedyre

  1. Plasser holderen i munnen mus munn.
  2. Sikker munnen holderen på bordet, slik at hanAnnonsen er vendt oppover.
  3. Plasser mikroskop (10X) på toppen av munningen, slik at det første kjeve molar er fullt synlig.
  4. Ved hjelp av ¼ rundt bur i en high-speed håndstykke ved 200 000 rpm, fjerne emalje del av tannen i midten inntil massen er synlig gjennom det gjennomsiktige dentin. Ikke utsett massen med bur.
  5. Ved hjelp av en # 15 endodontisk fil K-(diameter på 150 um), perforere gjennom dentin og utsette massen.
    MERK: Spesiell forsiktighet bør utvises slik at dentin rusk ikke blir skjøvet inn i massen. Dette kan unngås ved å rotere K-fil kvartalsvis og deretter trekke K-filen ut.
  6. Bland MTA med steril H 2 O i henhold til produsentens instruksjoner. Lever og plasser MTA på eksponerte masse med tuppen av explorer. Bruk baksiden av arket punkt (fine) å pakke MTA i den eksponerte massen ved forsiktig tapping. Jo tykkere side av papiret punkt er flat og derfor tillaterfor riktig kondensering av MTA inn i den eksponerte massen.
  7. Etse tann i 15 s ved å plassere 35% fosforsyreetsemiddel hvor det bare dekker tann. Vær spesielt nøye med å begrense plassering av etsemiddelet, da det kan irritere gingival vev.
    MERK: etsemiddel kommer i en sprøyte og brukes for ujevn tannoverflatene, slik at bondingprodukter kan strømme inn for å mediere mikromekanisk binding på tannen. Fordi de er tyktflytende, kan det være selvforsynt ved å påføre små mengder direkte på tannen.
  8. Bruk negativ-presset sug for å fjerne etsemiddel. Hjelp av en bomulls pellet som er lett fuktet med H2O for å fjerne rester av etsemiddelet. Gjenta dette trinnet til etsemiddelet er helt fjernet fra tannen.
  9. Ved hjelp av en komprimert luft støvkost, forsiktig tørke tannen.
  10. Påfør bondingprodukter bruker baksiden av papiret punkt.
  11. Gjør det klebende lag tynt med trykkluft for 3 s.
  12. Cure dental lim for 20 s ved hjelp av herde-lys enhet.
  13. Plasser det flytbare kompositten i små mengder på den tann som er avkortet med MTA. Bruk tuppen av explorer til å flyte kompositt inn i tannen sporene.
  14. Herde kompositten i 30 sekunder ved hjelp av en lys-herdeenheten for å polymerisere den. Bekreft at kompositt er ferdig herdet og vanskelig å bruke explorer.

3. Post-op Care

  1. Administrere karprofen (5 mg / kg) subkutant (sc) med en gang etter at massen-korkende prosedyre.
  2. Plasser mus på en varmepute på lav effekt for å holde dyrene varme før de våkner.
  3. Returner mus til vivarium for boliger.

4. vev anskaffelser

  1. Etter 5 - 6 uker, avlive mus ved halshugging under en komplett bedøvelse tilstand med isofluran.
  2. Fjern forsiktig maxilla ut av bunnen av hodeskallen og sette det inn i en 50-ml tube. Fest entire kjeve som inneholder både massen avkortet tann og kontralaterale uten lokk tann i 4% paraformaldehyde i PBS, pH 7,4, ved 4 ° C over natten, og deretter lagre den i en 70% etanol løsning.
    MERK: Paraformaldehyde er giftig og kreftfremkallende. Riktig bruk paraformaldehyde bør overvåkes som beskrevet i standard operasjonsprosedyrer (SOP).
  3. Skann musen maxillae bruker μCT scan. For å sikre maxillae under skanning, vikle prøvene med gasbind fuktet med 70% etanol og plassere dem i 15-ml cellekultur tube.

5. μCT Skanning

  1. Forbered prøvene for μCT skanning. I korthet, vikle prøvene med gas fuktet med 70% etanol og feste dem i en generisk 15 ml cellekultur konisk rør. røret festet inn på μCT skanning scenen, som beskrevet i produsentens instruksjoner.
  2. Still røntgenkilde til en strøm på 145 uA, en spenning på 55 kVp, og en eksponeringstid på 200 ms.
  3. Utfør image oppkjøpet med μCT skanneren på en 20-mikrometer oppløsning og med en 0,5 mm Al filter.
  4. Rekonstruere bildet og visualisere det 11.
  5. Når μCT skanningen er fullført, starter avkalking med 5% EDTA og 4% sukrose i PBS (pH 7,4) i 2 uker.

6. Tissue Behandling og farging

  1. Bygge inn decalcified vev i parafin. Før innebygging, trim maxilla ved å lage en sagittal kutt umiddelbart anterior til første molar. Mens innbygging, plasserer denne overflaten nedover, slik at den langsgående seksjon av den første molar er kutteflaten.
  2. Ved hjelp av mikrotom, forberede 5 mikrometer tykke lysbilder. Masse-korkende områder vanligvis faller sammen med distopalatal (DP) rot, som kan brukes som et fjell. Fastslå den nøyaktige området av interesse ved å undersøke histologi under lysmikroskop, og å sammenligne de μCT bildene.
  3. For H & E farging, deparaffinize og rehydrere lysbildene med xylen (2 x) og serielt fortynnet etanol (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x, og 70% EtOH 1x).
  4. Skyll lysbildene med rennende vann fra springen.
  5. Flekk med Hematoxylin løsning for 2,5 min og skyll med vann fra springen.
  6. Dypp lysbilder i 95% etanol i 1 min.
  7. Flekken med eosin løsning i 1 minutt og skyll med vann fra springen.
  8. Dehydrere med serielt fortynnet etanol (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x, og 100% EtOH 3x) og xylen (3x).
  9. Monter lysbilder med monteringsløsning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Her viste vi den trinnvise prosedyrer for å utføre masse capping på mus tenner. En av de viktigste aspektene av papirmasse capping i mus er å ha riktig apparat. I denne forbindelse har den mikroskop med en forstørrelse 10X kraft er vesentlig (figur 1A). For å opprette en klasse-I-lignende preparat i tannen, brukte vi en ¼-runde graden i en elektrisk høyhastighetshåndstykke på 200 000 rpm (figur 1B). Alternativt kan andre motorer, inkludert de som bruker komprimert luft, kan anvendes for å fremstille en tann.

I figur 2A-2E, er representative fremgangsmåten for å utføre masse capping vist. Den klasse-I-lignende preparat ble utført (figur 2B). Fordi en vannsprut kan drukne musene under prosedyren, er bruken ikke anbefalt. Av denne grunn er det viktig å fremstille tann med forsiktig og intermittent slag for å hindre overoppheting. Bruken av komprimert luft er også anbefalt for å tilveiebringe kjøleeffekter. Mens utsette massen med en endodontisk fil, ta forsiktighet for ikke å presse dentin rusk inn i massen, da dette kan forstyrre data tolkning i reparerende dentin dannelse (figur 2C). Dette kan unngås ved hjelp av trykkluft. Likeledes bør den MTA plasseres på den eksponerte masse uten å skyve for langt ned i massen. MTA plassering kan oppnås ved hjelp av baksiden av papiret punktet med milde gjengende bevegelser (figur 2D). Etter MTA plassering, vil tannen rengjøres med H 2 O-fuktet bomullspelletene for å fjerne eventuelle gjenværende MTA i sporene, som kan interferere med bindingen av kompositten på tannen. Konvensjonelle fremgangsmåter for kompositt restaurering benyttes, herunder etsing tannoverflatene, grunning og liming med klebemidler, og plassere og herding av flytbare kompositter (Figur 2E).

Seks uker etter papirmasse capping ble musene høstet, og den øverste visningen ble fotografert for å bekrefte at den sammensatte var fortsatt intakt (figur 3A). μCT scanning viste signifikant nedgang av pulpal plass i massen-avkortet gruppe (figur 3B), hvilket antyder at reparerende dentin ble dannet i massen. De decalcified vev Prøvene ble utsatt for H & E-farging for å ytterligere undersøke histologisk dannelse av reparativ dentin in vivo. I kontrollgruppen, odontoblastic lag (OB) var tydelig fremgår rundt kantene av dentin (figur 4A - 4C). I motsetning til dette pulp-blokkeringsgruppen hadde betydelige mengder av reparativ tannben (RD) som er utformet i den pulpal plass (figur 4D - 4F). Interessant, en nærmere undersøkelse viste at reparerende dentin (RD) viste en typisk karakteristikk av dentin (f.eks, s triated linjer som representerer dentinal tubuli, rød pil), samt at av bein (f.eks osteocytter representerer fanget osteoblaster, svart pilspisser). Når vi farget for Dentin Matrix protein 1 (DMP1), en markør for odontogenic differensiering 12, har vi funnet en signifikant økning i DMP1 ekspresjon i massen av masse-avkortet tann i forhold til den av ukorkede tann (figur 5A og 5B) Dette indikerer at reparerende dentin ble dannet i massen.

Figur 1
Figur 1: Utstyr Oppsett for Pulp-capping prosedyre. (A) En mikroskop (10X) for å visualisere mus tann. (B) Den høyhastighets håndstykket og den elektriske motoren motoren for å utarbeide en klasse I forberedelse til å utsette massen.= "_ Blank"> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
Figur 2: Representative Trappen i Capping prosedyre. (A) Uforberedt tann på overkjevens første molar i en mus. (B) Initial emalje fjerning ved hjelp av kvart runde bur. (C) Pulp eksponeringen med endodontisk fil. (D) MTA plassering i utsatte masse. (E) Composite restaurering plassering på tann. Baren representerer 500 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3: Klinisk presentasjon og μCT Scanning av Pulp-avkortet og ukorket tann hos mus. (A) okklusal visning av musen maxillae på masse-avkortet tann (til venstre) og uten lokk tann (til høyre). (B) Tverrsnitts μCT bilder av maxillae. Baren representerer 500 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 4
Figur 4: histologiske tegn på reparerende Dentin Formation in vivo. (AC) H & E farging av den ukorkede overkjevens første molar i en mus på 100X, 200X, 400X og. (DE) H & E farging av cellulose-avkortet overkjevens første molar i en mus på 100X, 200X, 400X og. Baren representerer 100 mikrometer (OB = odontoblast lag; RD = reparerende dentin, svart pilspisser =osteocytter; rød pil = dentinal tubuli). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 5
Figur 5: Immunhistokjemisk Farging av DMP1. (A) DMP1 farging av udekket overkjevens første molar i en mus på 400X. (B) DMP1 farging av massen-avkortet overkjevens første molar i en mus på 400X. Baren representerer 100 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

For tiden er det flere forskjellige eksperimentelle modeller som er tilgjengelige for å validere de in vivo virkningene av dentale materialer, stillas, eller vekstfaktorer på odontogenic differensiering av tann massen stamceller (DPSCs) 13. Disse modellene har ektopisk autolog transplantasjon av DPSCs til et organ, slik som nyrekapselen, eller subkutan transplantasjon av DPSCs inn immunkompromitterte mus med stillaser 14,15. Imidlertid er disse fremgangsmåter er begrenset ved at deres odontogenic effekt på DPSCs ikke utføres på ortotopisk massen miljø. På den annen side er ortotopisk transplantasjon inn i massen eller masse-capping prosedyrer på en tann som brukes i større dyr 16,17. Selv om disse modellene er verdifulle i å vurdere potensialet odontogenic i ortotopisk omgivelser, er anvendelsen av disse modeller i stor grad observasjons i naturen, noe som gir begrenset mekanistiske innsikt på masse sårheling og reparativ dentin formasjonen. I denne artikkelen presenterer vi en detaljert metode for å utføre masse-capping i mus. Denne trinn-for-trinn prosedyre inkluderer bedøvelse mus, forbereder klasse-I-lignende hulrom, plassere papirmasse-capping materialer, høsting maxillae, analysere med μCT skanne, og vurdere vevsprøver for reparativ dentin formasjon. Vår pulp-capping musemodell vil være instrumental i å undersøke de grunnleggende molekylære mekanismer pulpal sårtilheling in vivo i sammenheng med reparerende dentin ved å muliggjøre bruk av transgene eller knockout-mus, som er allment tilgjengelig i forskersamfunnet.

Nyere studier har vist flere musemodeller hvor dentin formasjonen ble observert 18,19. Saito et al. opprettet en klasse-I-lignende preparat uten masse eksponering, som stimulerer reaksjonær, ikke reparerende, dentin formasjon. Både reaksjonær dentin og reparerende dentin er klassifisert som høyere dentin, Som er en følge ytre stimulering til tannen. Imidlertid, i motsetning til reaksjonære dentin, som er dannet av de eksisterende odontoblaster er reparerende dentin dannet av odontoblast-lignende celler, slik som DPSCs, når massen blir utsatt for og de odontoblastic lag er brutt 20. Derfor betyr det ikke at det faktisk masse-capping prosedyre i klinikken. I en annen studie ble glassionomer brukt til cap masse eksponering 19. Men en klinisk studie viste at glassionomer indusert kronisk betennelse, men ikke reparerende dentin 21. I denne forbindelse, vår masse-korkende musemodell bedre representerer den faktiske pulp-capping prosedyre hos pasienter.

Det er bemerkelsesverdig at når vi høstet mus etter mer enn 6 uker, skjedde reparerende dentin dannelsen hele pulpa og rot kanalene (figur 4). En slik observasjon er ganske uventet, som vi forventet reparerende dentin dannelse på juniDette skjer mellom den pulp-tildekningsmateriale og massen. Imidlertid er potent mineralisering av massen også observert i kliniske settinger, særlig i relativt unge pasienter 22. Fordi åtte uker gamle mus brukt i denne studien er ansett for å være "unge voksne" 23, eksisterer det en mulighet hvorved disse musene fortsatt havnen betydelig odontogenic potensial. Derfor ville det være verdt å undersøke effektene av aldring reparative tannben dannelse hos mus.

Våre histologiske undersøkelser viste at, selv om reparerende dentin ble tydelig dannet i pulp-avkortet tann, var egenskapene til både tannben og beindannelse, noe som gjenspeiles ved nærvær av dentinal tubules (rød pil) og osteocytter (sorte pilspisser) i reparerende dentin (figur 5). Slike observasjoner tyder på at reparerende dentin dannelse kan induseres av lokalt bosatt odontoblast-lignende dental papirmasse stamceller, samt infiltrating mesenchymale stamceller fra omkringliggende bein.

Sammenlignet med de dentin-dannende celler, fant vi ingen dentin-resorberende celler i massen, bestemt ved tartrat-resistent sur fosfatase (TRAP) farving (data ikke vist). Faktisk, induserer pulpal eller periapical betennelse osteoklastdannelse på bein flater rundt tannen, men ikke på dentin overflater grunn som ennå-ukjent mekanismer 24. Av notatet, var det en klar avgrensning mellom eksisterende dentin og den nydannede reparerende dentin (figur 4). En tidligere studie viste et lignende fenomen; Når en tann trekkes ut i nærvær av bisfosfonat eller anti-RANKL antistoff, som begge inhiberer funksjonene av osteoklaster, var det klare avgrensninger mellom eksisterende lamellær ben og nydannede lamellært ben 25. Denne forestillingen støtter ytterligere fravær av dentin-resorberende celler i massen. Samlet vårt etablerte musemodell ville pROVIDE unike muligheter til å undersøke mekanismene for masse sårtilheling og reparerende dentin dannelse in vivo.

Det er en begrensning for den pulp-capping musemodell. Genetiske makeups mellom mennesker og mus er helt klart annerledes. Den komplette genomet er blitt sekvensert i mennesker og mus, og det er omtrent 85% likhet i protein-kodende regioner mellom mus og mennesker 26,27. I tråd med denne oppfatningen, ble det foreslått at funn relatert til masse capping hos dyr ikke nødvendigvis de hos mennesker 28. Likevel er dyremodeller mye brukt i forskersamfunnet å rekapitulere menneskelige sykdommer i vivo, som kollagen-indusert artritt for revmatoid artritt 29, ovariactomy-indusert bentap for osteoporose 30, lipopolysakkarid (LPS) administrasjon for systemisk sjokk 31, og ligatur plassering for periodontitt 32. Som sådan, pulp-capping mouse modellen vil være viktig å undersøke de molekylære mekanismene for masse sårtilheling og reparerende dentin dannelse in vivo. Likevel, akkurat som andre dyremodeller, tolkning og validering av funnene fra massen-capping musemodell bør vurderes nøye.

Oppsummert studien demonstrerer vellykket papirmasse capping hos mus. I motsetning til andre kjente modeller, vil denne masse-korkende musemodell gir en uvurderlig verktøy for forskning innen massen regenerering og reparerende dentin dannelse fordi det inneholder: 1) en mulighet til å utnytte allment tilgjengelig genetisk modifiserte musestammer for å belyse de underliggende mekanismene ved molekylært nivå og 2) en økonomisk effektiv måte å oppnå statistisk signifikante resultater ved å øke utvalgsstørrelser. Videre studier venter, inkludert objektiv kvantifisering av reparerende dentin dannelse in vivo, aldersavhengige effekter av reparerende dentin formasjon, evaluasjon av klinisk tilgjengelige papirmasse-capping materialer, og validering av molekylære determinanter som er nødvendig for riktig pulpal sårheling og reparerende dentin regenerering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Denne studien ble støttet av R01DE023348 (RHK) fra NIDCR / NIH og Fakultet stipend (RHK) fra Rådet for forskning av Det akademiske kollegium av Los Angeles Division ved University of California.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BM-LED stereo microscope MEIJI Techno Microscope 
Optima MCX-LED  Bien Air Dental 1700588-001 Electic motor engine
isoflurane Henry schein animal health NDC 11695-0500-2
1/4 round bur Brasseler 001092T0
Endodontic K-file Roydent 98947
ProRoot MTA Dentsply PROROOT5W MTA
Paper point Henry schein 100-3941
Ultra-Etch Ultradent product Inc. Phosphoric acid etchant
OptiBond SoloPlus Kerr 29669 Adhesives
Coltolux LED Coltene/whaledent Inc. C7970100115 Curing light unit
Characterization tint Bisco T-14012 Flowable composite
Skyscan Breuker 1275 uCT scanner
Microm Thermo HM355S Microtome
Hematoxyline-1 Thermo Scientific 7221
Eosin-Y Thermo Scientific 7111
Cytoseal 60 Thermo Scientific 8310-16 Mounting solution

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).
  2. Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent. 22, (1), 3-8 (2009).
  3. Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems. J Dent. 33, (8), 639-647 (2005).
  4. Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps. Quintessence Int. 29, (8), 535-542 (1998).
  5. Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine. J Endod. 40, (12), 1967-1971 (2014).
  6. Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide. Quintessence Int. 41, (4), 62-71 (2010).
  7. Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp. Head Face Med. 3, 40 (2007).
  8. Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations. Br Dent J. 151, (6), 184-186 (1981).
  9. Sela, J., Ulmansky, M. Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30, (3), 425-430 (1970).
  10. Maurice, C. G., Schour, I. Experimental cavity preparations in the molar of the rat. J Dent Res. 34, (3), 429-434 (1955).
  11. Skyscan, N. V. NRecon user manual. Available from: http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf (2011).
  12. Sohn, S., et al. The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells. J Dent Res. 94, (11), 1560-1567 (2015).
  13. Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration. Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).
  14. Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, (25), 13625-13630 (2000).
  15. Yu, J., et al. Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells. Biol Cell. 99, (8), 465-474 (2007).
  16. Zhu, X., et al. Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration. J Endod. 38, (12), 1604-1609 (2012).
  17. Iohara, K., et al. Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2. J Dent Res. 83, (8), 590-595 (2004).
  18. Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin. J Dent Res. (2016).
  19. Hunter, D. J., et al. Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration. J Bone Miner Res. (2015).
  20. Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. Dentin: structure, composition and mineralization. Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).
  21. Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth). Am J Dent. 13, (1), 28-34 (2000).
  22. Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study. J Am Dent Assoc. 139, (3), 305-315 (2008).
  23. Miller, R. A., Nadon, N. L. Principles of animal use for gerontological research. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55, (3), 117-123 (2000).
  24. Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions. J Dent Res. 95, 1503 (2016).
  25. Williams, D. W., et al. Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice). Am J Pathol. 184, (11), 3084-3093 (2014).
  26. McPherson, J. D., et al. A physical map of the human genome. Nature. 409, (6822), 934-941 (2001).
  27. Gregory, S. G., et al. A physical map of the mouse genome. Nature. 418, (6899), 743-750 (2002).
  28. Hilton, T. J. Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature. Oper Dent. 34, (5), 615-625 (2009).
  29. Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis. Ageing Res Rev. 1, (1), 135-147 (2002).
  30. Kalu, D. N., Chen, C. Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption. J Bone Miner Res. 14, (4), 593-601 (1999).
  31. Yokochi, T. A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury. Innate Immun. 18, (2), 364-370 (2012).
  32. Abe, T., Hajishengallis, G. Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice. J Immunol Methods. 394, (1-2), 49-54 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics