Systematisk vurdering af velvære i mus til procedurer ved hjælp af generel anæstesi

Behavior

Your institution must subscribe to JoVE's Behavior section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Vi udviklede en protokol til at vurdere trivsel i mus under procedurer ved hjælp af generel anæstesi. En række adfærdsmæssige parametre som angiver niveauer af velvære såvel som glukokortikoid metabolitter blev analyseret. Protokollen kan tjene som en generel støtte til at anslå sværhedsgrad i en videnskabelig, dyr-centreret måde.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S., Palme, R., Fink, H., Thöne-Reineke, C. Systematic Assessment of Well-Being in Mice for Procedures Using General Anesthesia. J. Vis. Exp. (133), e57046, doi:10.3791/57046 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

I overensstemmelse med 3R princippet (udskiftning, reduktion, raffinement) udviklet af Russel og Burch, bør videnskabelig forskning bruge alternativer til dyreforsøg, hvor det er muligt. Når der ikke er noget alternativ til dyreforsøg, bør det samlede antal forsøgsdyr bruges det minimum, der er nødvendig for at opnå værdifulde data. Desuden bør der anvendes passende raffinement foranstaltninger for at minimere smerte, lidelse og angst, der ledsager forsøgsmetoden. Kategorier bruges til at klassificere graden af smerte, lidelse og nød er ikke-inddrivelse, mild, moderat, eller svær (EU-direktiv 2010/63). For at bestemme, hvilke kategorier gælder i individuelle sager, er det afgørende at bruge videnskabeligt Lydværktøjer.

Godt being vurdering protokollen præsenteres her er beregnet til procedurer under som generel anæstesi er brugt. Protokollen fokuserer på hjem bur aktivitet, mus grimasse skala og luksus adfærd såsom gravende og reden bygning adfærd som indikatorer for trivsel. Det bruger også de gratis sonderende paradigme for træk angst-relaterede adfærd. Fækal corticosterone metabolitter som indikatorer for akut stress er målt efter bedøvende perioden 24-h.

Protokollen indeholder videnskabeligt solide oplysninger om mus efter narkose trivsel. På grund af sin enkelhed, kan protokollen nemt tilpasses og integreret i en planlagt undersøgelse. Selv om det ikke indeholder en skala for at klassificere nød i kategorier efter EU-direktiv 2010/63, kan det hjælpe forskerne med at vurdere graden af sværhedsgraden af en procedure, ved hjælp af videnskabeligt funderet data. Det giver en måde at forbedre vurderingen af velvære på en måde, videnskabelige, dyr-centreret.

Introduction

EU 's direktiv 2010/631 fastsættes, at 3R-princippet (udskiftning, Reduction, Refinement) udviklet af Russel og Burch2 anvendes, når dyreforsøg er nødvendigt. Det endelige mål for EU-direktivet er at udfase alle dyreforsøg, men direktivet anerkender, at nogle dyreforsøg for tiden, stadig er nødvendige til gennemførelse af forskning, der vil beskytte menneskers og dyrs sundhed. Hvis et dyr eksperiment ikke kan erstattes af en alternativ metode, er kun det mindste antal forsøgsdyr således, skal bruges til at få pålidelige resultater. Mængden af smerte, lidelse og angst, der ledsager eksperimentelle procedurer bør desuden minimeres ved hjælp af passende raffinement foranstaltninger. EU 's direktiv 2010/63 fastsætter, at sværhedsgraden af en procedure fremadrettet skal klassificeres som ikke-inddrivelse, mild, moderat, eller svær1. Som sværhedsgraden klassificering er besluttet på et sag til sag grundlag, er det vigtigt at have videnskabeligt forsvarlig værktøjer til at vurdere sværhedsgraden af en bestemt procedure.

Score ark som foreslået af Morton og Griffith3 er et vigtigt redskab til at opdage eventuelle afvigelser fra normal status, herunder negative effekter på trivsel4. Score sheets er vant til med tilbagevirkende kraft bestemme smerte, lidelse, og lidelser forårsaget af et eksperiment og fokus på synlige ændringer i den fysiske tilstand af det enkelte dyr (fx, kropsvægt, pels, gangart). Selv om bilag VIII af EU-direktiv 2010/63 indeholder eksempler på hver sværhedsgraden kategori, forskerne stadig mangler værktøjer til at vurdere graden af sværhedsgraden af en given procedure ved hjælp af videnskabeligt baseret data.

Fravær af indikatorer, der viser negative trivsel er ikke den eneste måde at bestemme tilstanden af dyr; tilstedeværelsen af indikatorer peger på positive trivsel er også vigtige5,6,7,8. For eksempel dyr display luksus opførsel som gravende og reden bygning adfærd, kun når alle deres basale behov er opfyldt. Hvis trivsel er reduceret, er luksus adfærd først til at falde5,7. Protokoller skal anvendes ved vurderingen af trivsel bør omfatte indikatorer peger på det fysiske, fysiologiske/biokemiske og psykologiske tilstande af dyr med henblik på at evaluere deres trivsel i en detaljeret og omfattende måde9.

Inden for rammerne af raffinement, var en protokol udviklet til at opfylde disse krav og til at vurdere virkningerne af en procedure med generel anæstesi på trivsel af mus10. På samme tid var målet at minimere eventuelle yderligere stress for at aktivere protokollen nem integration i en given eksperiment. Protokollen finder gravende adfærd, hjem bur adfærd som aktivitet, fødeindtagelse og nesting og træk angst-relaterede adfærd. Derudover indeholder det mus grimasse skala (MGS) og non-invasiv analyse af corticosterone metabolitter i afføring. Protokollen er udviklet til at lette vurderingen af trivsel i en videnskabelig og dyr-centreret måde og give oplysninger om velvære, som støtter klassificeringen af sværhedsgrad. Ud over score sheets, kan det give nyttige oplysninger for alvor klassificering af en procedure. Protokollen er nemme at udføre og ikke kræver omfattende udstyr, kan det integreres i et igangværende eksperiment uden at påvirke resultaterne af en undersøgelse. Det skal bemærkes, at dyr forskning: rapportering af i Vivo eksperimenter (kommer) retningslinje11 er der skal overholdes i alle undersøgelser vedrørende dyreforsøg, med mål at forbedre design, analyse og rapportering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Undersøgelsen blev udført efter retningslinjer fastsat af tyske Animal Welfare Act og blev godkendt af Berlin statslig myndighed ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", tilladelse antal: G0053/15).

Bemærk: Hovedformålet med denne protokol var at undersøge effekten af gentagne anæstesi på glukokortikoid metabolitter. En stikprøve størrelse beregning blev udført for at bestemme antallet af dyr, der skal bruges: n ≥ 2 × (s / µ1- µ2)2 × (zα + zβ)2. µ1- µ2 er forskellen mellem populationsmiddelværdierne på hvilke magt og prøve størrelse beregninger er foretaget (α = 5%, β = 80%); zα = 1,96 og zβ = 0,84 er quantiles af standardnormalfordelingen. Figur 1 illustrerer tid linjen af denne protokol. Hvis en parameter i protokollen viser en forskel med kontrolniveauet, dyret bør overvåges nøje, og parameteren bør måles igen efter et passende tidsrum. For eksempel, hvis træk angst-relaterede adfærd er øget, bør denne adfærd testes igen en uge senere, for at hjælpe med at bestemme perioden indtil fuld helbredelse. Tidspunkter og perioder defineret i denne protokol kan tilpasses til brug med andre procedurer. Når du ændrer tidspunkter, bør tilvænning perioder holdes som beskrevet i protokollen. For at reducere faktorer, der kan påvirke den mus adfærd, bør prøver, som kræver mere manipulation udføres efter test, som ikke forstyrrer den normale opførsel af mus. Figur 2 opsummerer alle tests af protokollen ved hjælp af en scoring Analyseoversigt. Figur 3 giver forenklet skalaer i lønklasse af velvære, som giver et overblik over hvordan man skal fortolke testresultater.

1. habituating mus til håndtering af eksperimentatoren

  1. Tillad mus til habituate til det animalsk facilitet i mindst 2 uger efter de er opnået fra en anden facilitet eller leverandør.
  2. Hus mus i grupper og vedligeholde dem under standardbetingelser (stuetemperatur 22 ± 2 ° C, relativ luftfugtighed 55 ± 10%) på en lys: mørke cyklus af 12:12 h.
  3. Give alle grupper med en tunnel og bomuld nestlets som standard berigelse, og giver mad og vand ad libitum.
  4. Habituate alle mus til tunnelen og/eller cup håndtering mindst en uge før prøvningen12.
    Bemærk: Afhente mus ved halen kan fremkalde stress eller angst, som igen påvirker trivsel og også har en indvirkning på resultaterne af denne protokol12.

2. forberedelse af adfærdsmæssige test værelse og apparater

Bemærk: Give et separat rum til testning, ideelt i nærheden af det rum, hvor dyrene holdes. Transportere mus i deres hjem bure til den test værelse mindst 60 min, før proceduren føres. Hvis det er muligt, foretage alle tests af denne protokol i den samme test værelse hvor proceduren er foretaget.

  1. Forberede en observation bur til at teste gravende adfærd8 og tage billeder til brug i MGS13 (figur 4).
    1. Bruge en glaskasse med et etageareal på ca 220 mm × 290 mm og en højde på 390 mm.
    2. Dække gulvet med dette box med ca 0,5 cm af sengetøj materiale.
    3. Scatter-en håndfuld af brugt strøelse materiale fra hjem buret på toppen af det nye sengetøj materiale til at reducere angst forårsaget af det nye miljø.
    4. Give mad, den samme slags, der normalt leveres som kost og vand.
      Bemærk: hvis muligt, bruge vandflasker, fordi mus kan fylde vand skåle med sengetøj materiale.
  2. Forberede et bur (type III: 420 mm × 260 mm × 150 mm) for den 24-h observationsperiode, hvor mus er opstaldet enkeltvis (figur 5).
    Bemærk: For at minimere varigheden af individuelle boliger, indsamle data til reden bygning adfærd, hjem bur aktivitet, fødeindtagelse og fækal corticosterone metabolitter (FCM) i denne periode.
    1. Sted nyt sengetøj materiale i bur (ca 0,5 cm dyb) og scatter en håndfuld brugt strøelse materiale uden afføring fra hjem buret på toppen af det nye materiale, for at reducere angst.
    2. Give en standardiseret firkantede bomuld nestlet af definerede vægt, som miljøberigelse kun (Se tabel af materialer)14.
      Bemærk: Kommercielle nestlets kan variere i vægt. Derfor, vi ændret vægten af nestlet beskrevet af diakon og brugt 2,0 g i stedet for 2,7 g14.
    3. Montere den infrarøde sensor på toppen af buret, når du bruger en infrarød sensor kan måle hjem bur aktivitet (Se tabel over materialer).
    4. Give mad, den samme slags, der normalt leveres som kost, og vand ad libitum.

3. mus grimasse skala

Bemærk: Fotografier for MGS er taget i observation bur på tre tidspunkter: (i) 2 dage før at optage baseline MGS niveauer, (ii) 30 min efter proceduren, og (iii) 150 min efter proceduren procedure. Når velvære er nedsat, øge score på MGS. Hvis øget MGS scores er stadig observeret efter 150 min, tage yderligere fotografier på et senere tidspunkt.

  1. Bruge en high-definition kamera til fotografering.
  2. Forsigtigt overføre musen ind i observation buret og lad musen til habituate til det nye miljø for mindst 30 min.
  3. Løbende tager omkring 30-40 billeder for hver gang punkt inden for 1-2 min.
  4. Sortere alle fotografier ved at vælge de skarpe frontal eller laterale fotografier og kassere slørede billeder eller fotografier, der viser mus ansigter fra andre perspektiver end frontal eller lateral udsigt.
  5. Tilfældigt vælge et foto fra hvert tidspunkt, (dvs. 2 dage før proceduren, 30 min efter indgrebet og 150 min. efter proceduren) for hver mus.
  6. Beskære billeder for at vise kun hovedet af musen, så kropsstilling ikke er synlige13.
  7. Oprette en regnearksfil med et ark til hvert fotografi og tilføje en tabel, herunder de fem facial action enheder af MGS på hvert ark.
    Bemærk: Filen indeholder baseline fotografier samt fotografier post procedure.
  8. Randomisere rækkefølgen af arkene.
  9. Præsentere filen på en computerskærm til tre uafhængige personer, der tidligere var uddannet til at bruge MGS udviklet af Langford et al. og få dem til at score de facial action enheder ved hjælp af en 3-trins-skalaen (0 = ikke til stede, 1 = moderat til stede, 2 = selvfølgelig nuværende).
    Bemærk: Scoring er baseret på følgende parametre13: Orbital stramning ("forsnævring af orbital området med en tæt lukkede øjenlåg eller et øje squeeze"); næse bule ("afrundet udvidelse af huden synlig på broen på næsen"); kinden bule ("konvekse udseende af kind-musklen"); øre position ("ører trukket fra hinanden og tilbage fra deres oprindelige position eller featuring lodret ridges at form på grund af tips af ører trækkes tilbage"); bakkenbart ændring ("bevægelse af whiskers fra deres oprindelige position enten bagud mod ansigt eller fremad, som om stående på ende; knurhår kan også klumper sig sammen").
  10. Analysere partiturer, som følger (tilpasset fra Langford et al. 13).
    1. Gennemsnit alle facial action enheder for hvert fotografi for at generere MGS score.
      Bemærk: Hvis en af facial action enheder ikke kunne blive scoret, gennemsnittet af de resterende facial action enheder.
    2. Subtrahere betyder for de oprindelige fotografier fra middelværdien for at opnå en MGS forskellen score for hvert mus fotografier post procedure.
    3. Test for forskelle i MGS forskellen scorer mellem personer (ikke-parametrisk test for beslægtede prøver).
      Bemærk: Hvis der er en signifikant forskel (p < 0,05), bestemme, om snesevis af alle fotografier eller kun snesevis af et par fotografier varierer mellem personer. Hvis sidstnævnte er tilfældet, Gentag scoring af disse fotografier. Ellers, personer bør gentage MGS uddannelse og derefter score fotografier igen.
    4. Gennemsnitlige MGS forskellen score opnået fra de forskellige placeringer for hver mus, hvis resultaterne af alle personer ikke afviger væsentligt.
    5. Brug en ikke-parametrisk statistiske test for at sammenligne MGS forskellen scorer i gennemsnit mellem studiegrupperne.

4. gravende adfærd8,15,16

  1. Forberede burrows ved at placere 140 ± 2 g mad pellets normalt leveres som kost i en standard uigennemsigtigt plast drikkedunk (250 mL, 150 mm længde, diameter 55 mm, 45 mm i diameter i flaskehals)8.
    Bemærk: Som mus foretrækker bred rør, burrows med en diameter på 68 mm kan bruges som beskrevet af diakon16.
  2. Sted hule fyldt med mad pellets i burene 5 dage før proceduren til akklimatisering.
    Bemærk: Den almindelige food-dispenserenheder enhed i buret skal ikke tømmes men skal også forblive fyldt med mad pellets, som mus bruges til dette.
  3. Udføre testen to gange, 2 dage før proceduren (baseline); foretage den sidste 30 min post procedure så godt.
    1. Lad musen habituate til mindst 30 min til observation bur hvor fotografier til MGS blev taget.
    2. Placer plastflaske vand fyldt med mad pellets parallelt med bagvæggen af observation bur.
    3. Veje mad pellets (g) forbliver i hule efter 2 h.
  4. Beregn vægten af mad pellets fjernet fra hule af mus i forhold til oprindelige vægt (%).

5. 24-h observationsperiode

Bemærk: Mus er opstaldet individuelt, som beskrevet i punkt 2.2. (Figur 5), for en periode på 24 timer, for at måle mad indtag, hjem bur aktivitet, reden bygning adfærd, og FCM niveauer. 24-h observation finder sted to gange: (i) 2 dage før proceduren for baseline niveauer, (ii) på dagen for proceduren.

  1. Fødeindtagelse
    1. Veje musene med jævne mellemrum (f.eks. 2 dage før anæstesi, umiddelbart før anæstesi, 2 dage efter anæstesi og ugentlige efter anæstesi), for at vurdere eventuelle ændringer i kropsvægt (del af score-arket).
      Bemærk: Kropsvægt er forpligtet til at beregne fødeindtagelse per gram af kropsvægt. Indtagelse af vand kan også måles i 24-h observationsperioden. Hvis fødeindtagelse reduceres, kan trivsel være værdiforringet.
    2. Bestemme den oprindelige vægt af standard fødevarer kost (gram) i fødevarer enhed af bur (ca. 100 g).
    3. Bestemme vægten af standard fødevarer kost i slutningen af observationsperioden 24-h.
    4. Skan bur side under mad enheden omhyggeligt for mad spild og Tilføj eventuelle ekstra mad pellets fandt at vægten af mad pellets tilbage i mad enhed.
    5. Beregne fødeindtagelse pr. enhed kropsvægt.
  2. Hjem bur aktivitet
    Bemærk: Nedenstående instruktioner henviser til brugen af en infrarød sensor (Se tabel over materialer), men hjem bur aktivitet kan også vurderes med alternative programmer. Afvigelse af hjem bur aktivitet fra kontrolniveauer (f.eks. hypoactivity, hyperaktivitet) kan være et tegn på nedsat velfærd.
    1. Starte programmet.
    2. Vælg en prøveintervallet på 1 min. og en erhvervelse tid på 24 timer, hvilket betyder, at impulser registreres hvert minut i 24 timer.
      Bemærk: Hvis eksperimentatoren træder rummet flere gange efter optagelse startet, kun bruge data fra perioder, hvor mus ikke var forstyrret (dvs. den mørke periode).
    3. Opsummere 10-min intervaller af impulser.
    4. Beregne området under tid kurven (impulser × min).
  3. Reden bygning adfærd
    Bemærk: Komplekse og høj reder kan tjene som en indikator for trivsel.
    1. Placer en firkantet bomuld nestlet (Se Tabel af materialer) med en defineret vægt (fx 2,0 g) i midten af buret.
    2. Score reden på en 5-punkts skala (se nedenfor) Ifølge Deacon14 den følgende morgen, ca 2 h efter lyset tændes. Veje nogen untorn nestlet stykker, der er mindst 5% af den oprindelige nestlet vægt. Score reder som følger14
      1. Tildele score på "1" Hvis 90% af nestlet intakt.
      2. Tildele score på "2", hvis det er 50-90% intakt.
      3. Tildele score "3", hvis 50-90% af nestlet er makuleret.
      4. Tildele score "4" Hvis mere end 90% er makuleret men reden er flad, og mindre end 50% af sin omkreds er højere end mus krop højde når kruset op.
      5. Tildele score "5", hvis mere end 90% nestlet er makuleret og reden er høj, og mere end 50% af sin omkreds er højere end legemshøjde af en krøllet op musen.
  4. Fækal Corticosterone metabolitter
    Bemærk: Stigninger i FCM over kontrolniveauet afspejle akut stress niveauer over perioden 24-h postanesthetic.
    1. Indsamle alle tørre fækal pellets fra buret ved hjælp af pincet i slutningen af observationsperioden 24-h og fjerne våde pellets kontamineret med urin.
    2. Uddrag FCM ifølge Palme et al. 17, som følger.
      1. Tør fækal prøver ved en temperatur på 60-70 ° C.
      2. Homogeniseres fækal prøver ved hjælp af en morter.
      3. Ryste en alikvot af 0,05 g med 1 mL 80% methanol i et centrifugeglas på 30 min på en multi vortex.
      4. Der centrifugeres prøver ved 2500 x g i 15 min.
      5. 0,5 mL af supernatanten pipetteres i et andet centrifugeglas.
      6. Gemme fækal prøver (og uddrag) på et minimum på – 18 ° C.
      7. Analysere FCM ved hjælp af et 5α-pregnane-3b,11b,21-triol-20-one enzym immunoassay (VVM)18,19 eller en anden fuldt valideret VVM.
    3. Beregn den procentvise ændring af FCM koncentrationer i forhold til baseline FCM koncentrationer.

6. gratis sonderende paradigme

  1. Tage hjem buret ud af rack'et og placere det på et bord overflade i slutningen af observationsperioden 24-h.
  2. Placer en inddelte bur top (uden mad eller vand flasker) i bur i en vinkel på 45° ved længere siden af buret.
    Bemærk: Må ikke ødelægge reden, der tjener som skjulested for musen, men placere bur top diagonalt over reden.
  3. Skærm eller video-optage mus i 10 min. fra en afstand af ca. 1,5 m.
    1. Starte timeren.
    2. Bemærk alle gange når musen klatrer op på bur top (med alle fire poter ovenpå bur) eller forlader buret toppen (med en eller flere poter bur i stueetagen).
      Bemærk: Nogle mus kan kravle op i buret toppen og forlade det for at gå langs kanten af buret. Nogle mus også bageste ovenpå bur. Behandle disse sager, som om mus var stadig på toppen, bur.
  4. Vurdere parametre efter Bert et al. 20.
    1. Analysere ventetid til første udforskning (i sekunder).
    2. Analysere antallet af udforskninger.
    3. Analysere samlede varighed (sekunder) af udforskning.
      Bemærk: En høj latenstid til første udforskning, et lavt antal udforskninger, og en lav samlede varighed af udforskning kan indikere højere træk angst niveauer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Denne protokol blev oprindeligt udviklet for at vurdere trivsel af C57BL/6JRj mus efter en enkelt oplevelse af isofluran anæstesi (en 45-min anæstesi session, n = 13 hunner) eller gentagne isofluran anæstesi (seks 45-min anæstesi sessioner med 3-4 dage mellem anæstesi sessioner, n = 13 hunner) sammenlignet med kontrol mus trivsel (n = 6 hunner)10, som modtog ingen bedøvelse, men blev testet i overensstemmelse med de samme foranstaltninger. Vi vurderet virkningen af en enkelt oplevelse af isofluran anæstesi og gentagne isofluran anæstesi på C57BL/6JRj mus sammenlignet med ubehandlet kontrol mus trivsel. Her, repræsentative resultater af hunmus C57BL/6JRj, herunder nogle data tidligere offentliggjort i Hohlbaum et al. 10, som ikke tidligere udgivne resultater er vist.

Statistisk analyse

Udforskende dataanalyse og tests for normalitet blev udført for hver parameter. Forskelle mellem grupperne undersøgelse (dvs. kontrol, enkelt isofluran anæstesi, gentaget isofluran anæstesi blev analyseret ved hjælp af de respektive test, som anført i figur legender. Når data mødte normalfordelingen antagelser, blev 1-vejs ANOVA udført. Non-normalt distribuerede data blev analyseret ved hjælp af Kruskal-Wallis-Test. forskelle ansås signifikant på p < 0,05.

Baseline værdier

Baseline værdier, indsamlet før proceduren er udført, er afgørende for at bestemme om behandlingsgrupper er forskellige i de respektive parameter. Som vist i figur 6, figur 7, figur 8, figur 9 og figur 10, baseline niveauer af MGS score (p = 0.762, Kruskal-Wallis-Test), luksus opførsel lige gravende (p = 0.896, Kruskal-Wallis-Test) og nesting (p = 0.723, Kruskal-Wallis-Test), fødeindtagelse (p = 0.398, 1-vejs ANOVA), og hjem bur aktivitet (p = 0.208, Kruskal-Wallis-Test) ikke væsentligt afviger mellem grupperne. Derudover ingen væsentlige forskelle i baseline FCM koncentrationer blev ikke fundet (median, interkvartil udvalg i parentes [ng/50 mg]: kontrol: 123.01 (82.70-193.46); enkelt anæstesi: 118.31 (101.73-153.54), gentagne anæstesi: 129.55 (92.58-139.48)) (Pedersen = 0.904, Kruskal-Wallis-Test). Hvis forskelle i baseline niveauer forekommer, kan delta værdier beregnes.

Musen grimasse skala

Når de gennemsnitlige MGS scores sammenlignes, betydelig højere score versus kontrol blev fundet efter den indre oplevelse af anæstesi (p = 0,001) og efter sidst gentagen anæstesi session (p = 0.021) forårsaget på 30 min efter sidste anæstesi (figur 6A) . 150 min. efter sidste anæstesi, der ikke længere var forskelle mellem grupperne (p = 0.910).

For at tage hensyn til det faktum, at baseline MGS scorer ikke er lig med 0 i alle tilfælde, beregnedes MGS forskellen score, som beskrevet i protokollen. Både en enkelt oplevelse af anæstesi (p = 0,002) og gentagne anæstesi (p = 0,008) øget MGS forskellen scores versus kontrol på 30 min efter anæstesi. 150 min. efter den sidste anæstesi, alle mus var vendt tilbage til kontrolniveauer (p = 0.617) (fig. 6B)10.

Gravende adfærd

Gentaget anæstesi reducerede signifikant procentdel af vægten af mad pellets mus fjernet fra hule versus kontrol (p = 0,036, Kruksal-Wallis-Test) (figur 7)10.

Reden bygning adfærd

Der ikke var nogen betydelige forskelle i reden scorer mellem en enkelt oplevelse af anæstesi, gentagne anæstesi og kontrol (p = 0.240, Kruksal-Wallis-Test) (figur 8)10.

Fødeindtagelse

På 1 dag efter den sidste anæstesi, mus, der havde gennemgået gentagne anæstesi viste signifikant reduceret fødeindtagelse sammenlignet med mus, der havde oplevet enkelt anæstesi (p = 0.047, 1-vejs ANOVA). I modsætning, en uge senere, mus, der havde modtaget gentagne anæstesi forbruges betydeligt mere mad end kontrol (p = 0,012, 1-vejs ANOVA) eller mus, der havde modtaget en enkelt anæstesi (p = 0,001, 1-vejs ANOVA) (figur 9)10.

Hjem bur aktivitet

På 1 dag efter den sidste anæstesi, hjem bur aktivitet i den mørke periode, angivet af arealet under kurven aktivitet ikke væsentligt afviger blandt mus, der havde modtaget en enkelt anæstesi, gentagne anæstesi eller kontrol behandling (p = 0.498, Kruskal-Wallis-Test) (figur 10)10.

Gratis sonderende paradigme

Alle mus udforsket bur toppen, da testen blev gennemført. Men 1 dag efter den sidste anæstesi, mus, der havde modtaget gentagen anæstesi (median, interkvartil udvalg i parentes [s]: 78,00 (55.00-89,00)) udforskede bur top betydeligt senere i gang end gjorde kontrolelementer (31.00 (18.25-42,75); p = 0,009, Kruskal-Wallis-Test) og mus, der havde modtaget en enkelt anæstesi (27.00 (21,00-45.50), p = 0,001, Kruskal-Wallis-Test), som tidligere offentliggjort10. Parametre samlede varighed udforskning (fig. 11A) og antallet af udforskninger (fig. 11B) er analoge til ventetid til første udforskning. Gentaget anæstesi betydeligt reduceret antallet af udforskninger versus kontrol (p = 0,023, Kruskal-Wallis-Test) og den samlede varighed af udforskning (p = 0,032, Kruskal-Wallis-Test) versus en enkelt anæstesi på 1 dag efter den sidste anæstesi. 8 dage efter den sidste anæstesi, alle parametre, dvs ventetid til første udforskning (kontrol: 27,50 (13,50-47.25); enkelt anæstesi: 18.00 (9.50-38.50), gentagne anæstesi: 20,00 (12,50-42.00); p = 0.722, Kruskal-Wallis-Test), antallet af udforskninger (p = 0.057), og den samlede varighed af udforskning (p = 0.579), ikke længere afveg mellem studiegrupper (Figur 11).

Fækal corticosterone metabolitter

For at tage hensyn til de oprindelige værdier opnået, den procentvise ændring i forhold til baseline blev beregnet og fandtes ingen væsentlige forskelle mellem grupperne (p = 0,119, Kruskal-Wallis-Test) (figur 12)10.

Figure 1
Figur 1 : Tid linje af protokollen. Grå og hvid farvede felter symboliserer mørket og lyse perioder af døgnet, henholdsvis. Afhængigt af proceduren, kan denne protokol tilpasses. "Tilvænning til hule" betyder, at mus har at blive akklimatiseret til ved hjælp af den plast drikkedunk som en hule i deres hjem bur, før de gravende test kan udføres. B, baseline værdi; FCM, fækal corticosterone metabolitter. Dette tal er blevet ændret fra Hohlbaum et al. 10. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 : Scoring Analyseoversigt. Dette ark indeholder alle tests og kan udfyldes for hver enkelt mus. Dato og klokkeslæt skal tilføjes, når testen er udført. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 : Skalaer i lønklasse af trivsel. De skalaer spænder fra "velvære fejlfri" (grøn) til "velvære nedsat" (rød) og express betydningen af testresultaterne i en forenklet måde. På dette stadium af viden om indikatorer for trivsel, kan vi gøre en konkret erklæring i klasse af velvære for hver test, kun en generel erklæring. MGS, mus grimasse skala. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4 : Observation bur. Dette bur bruges til test af gravende adfærd og at tage fotografier skal analyseres efter mus grimasse skala (MGS). Forsiden af buret er klar, og de andre tre vægge afhængigt af pels farver af mus, bør være farvet enten sort eller hvid kontrast med mus. Gulvet i boksen glas er dækket med ca 0,5 cm af sengetøj materiale herunder brugt strøelse materiale fra burene. Der findes standard mad og vand. Hvis det er muligt, bør vandflasker snarere end skåle anvendes, fordi mus kan fylde skåle med sengetøj materiale. Efter en tilvænning periode på mindst 30 min tilsættes hule. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 5
Figur 5 : 24-h observationsperiode. At vurdere reden bygning adfærd, hjem bur aktivitet og fødeindtagelse og indsamle fækal prøver at måle fækal corticosterone metabolitter (FCM) mus er opstaldet enkeltvis i 24 timer (bur type III: 420 mm × 260 mm × 150 mm, sengetøj materiale ca. 0,5 cm dyb med brugt strøelse materiale fra burene spredt på toppen, en bomuld nestlet, vand fra hanen og standard mad kost ad libitum). En infrarød sensor er monteret på toppen af buret. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 6
Figur 6 : Musen grimasse skala (MGS). Boksen repræsenterer den interkvartil vifte (IQR), boks kanter er de 25th og 75th kvartil. Knurhår repræsenterer værdier, der er ikke mere end 1,5 × IQR. Prikker er outliers med værdier mellem 1,5-3,0 × IQR. Farvede stjerner er outliers med værdier større end 3,0 × IQR. (A) betyde MGS score. (B) mener MGS forskel score. p værdier blev beregnet ved hjælp af Kruskal-Wallis-Test: * p < 0,05; ** p < 0,01. På grund af en teknisk fejl (kamera, skala) måtte fire mus i gruppen enkelt anæstesi udelukkes fra statistikken. Dette tal er blevet ændret fra Hohlbaum et al. 10. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 7
Figur 7 : Gravende opførsel. Boksen repræsenterer den interkvartil vifte (IQR), boks kanter er de 25th og 75th kvartil. Knurhår repræsenterer værdier, der er ikke mere end 1,5 × IQR. Farvede stjerner er outliers med værdier større end 3,0 × IQR. p værdier blev beregnet ved hjælp af Kruskal-Wallis-Test: * p < 0,05. På grund af en teknisk fejl (kamera, skala) havde fire mus i gruppen enkelt anæstesi skal udelukkes fra den statistiske analyse. Dette tal er blevet ændret fra Hohlbaum et al. 10. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 8
Figur 8 : Reden bygning opførsel. Boksen repræsenterer den interkvartil vifte (IQR), boks kanter er de 25th og 75th kvartil. Knurhår repræsenterer værdier, der er ikke mere end 1,5 × IQR. Prikker er outliers med værdier mellem 1,5-3,0 × IQR. p værdier blev beregnet ved hjælp af Kruskal-Wallis-Test; d, dag. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 9
Figur 9 : Fødeindtagelse. Data er gennemsnit ± standardafvigelse. p værdier blev beregnet ved hjælp af 1-vejs ANOVA (post-hoc Tukey-HSD): * p < 0,05; ** p < 0,01. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 10
Figur 10 : Forside bur aktivitet. Boksen repræsenterer den interkvartil vifte (IQR), boks kanter er de 25th og 75th kvartil. Knurhår repræsenterer værdier, der er ikke mere end 1,5 × IQR. Prikker er outliers med værdier mellem 1,5-3,0 × IQR. p værdier blev beregnet ved hjælp af Kruskal-Wallis-Test. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 11
Figur 11 : Gratis sonderende paradigme. Boksen repræsenterer den interkvartil vifte (IQR), boks kanter er de 25th og 75th kvartil. Knurhår repræsenterer værdier, der er ikke mere end 1,5 × IQR. Prikker er outliers med værdier mellem 1,5-3,0 × IQR. Farvede stjerner er outliers med værdier større end 3,0 × IQR. (A) samlede varighed af udforskning. (B) antallet af udforskninger. p værdier blev beregnet ved hjælp af Kruskal-Wallis-Test: * p < 0,05. Dette tal er blevet ændret fra Hohlbaum et al. 10. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 12
Figur 12 : Fækal corticosterone metabolitter (FCM). Boksen repræsenterer den interkvartil vifte (IQR), boks kanter er de 25th og 75th kvartil. Knurhår repræsenterer værdier, der er ikke mere end 1,5 × IQR. Farvede stjerner er outliers med værdier større end 3,0 × IQR. FCM niveauer blev målt 2 dage før og 1 dag sende procedure. Den procentvise ændring [%] af FCM koncentrationer i forhold til respektive baseline værdi blev beregnet. Data blev analyseret ved hjælp af Kruskal-Wallis-Test. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Protokollen blev oprindeligt udviklet for at vurdere trivsel af C57BL/6JRj-mus, der fik enten et enkelt anæstesi eller gentagne isofluran anæstesi. Resultaterne bekræfte at test af luksus adfærd samt andre foranstaltninger (f.eks. den frie sonderende paradigme, MGS, gravende fødeindtagelse), som var følsomme metoder til vurdering af velfærd. Gentagne isofluran anæstesi forårsaget kortsigtede virkninger på træk angst-relaterede adfærd, MGS og gravende adfærd. Desuden syntes gentagne isofluran anæstesi at påvirke mad indtag10.

Den gratis sonderende paradigme angivet reduceret sonderende adfærd, og derfor højere træk angst niveauer i mus, der var gentagne gange bedøvede sammenlignet med mus bedøvede kun én gang, og kontrollen. Men, mus i alle grupper udforsket inddelte bur top10,20. Når undersøger angst-relaterede adfærd, er det vigtigt at skelne mellem træk og stat angst21,22. Anbring musen i et uvant miljø inducerer stat angst. Derimod gratis sonderende paradigme tillader dyr at bo i deres hjem bure, og dermed, undersøger træk angst.

Reduktion i sonderende adfærd blandt mus efter gentagne anæstesi ikke kan forklares ved nedsat motorisk aktivitet. Hjem bur aktivitet i den mørke periode afviger ikke betydeligt mellem studiegrupperne. Dette indikerer, at musene havde allerede fysisk inddrives fra anæstesi når gratis sonderende paradigme test blev udført.

MGS blev faktisk udviklet til at vurdere smerter, men der er tegn på at de ansigtsudtryk, også ændres ved stress og positive følelser13,23. Fotografier af musen ansigter anført, at både enkelt og gentagen isofluran anæstesi øget scorer på MGS over den kortsigtede i perioden umiddelbart efter narkose. Som MGS forskellen score forblev under 1, syntes niveau af stress at være mild10. Resultaterne er enig med de seneste observationer af Miller et al. 24 , 25 og viste, at mus vendte tilbage til at styre niveau 150 min post anæstesi10.

Luksus opførsel lige gravende og reden bygning adfærd er artsspecifik og kan tjene som indikatorer for velbefindende7 og generelle sundhed i mus26. Mus viser kun luksus adfærd, når alle deres basale behov er opfyldt. Hvis trivsel er reduceret, er luksus adfærd først til at blive forringet5,7. Tidligere undersøgelser har vist, at både gravende og reden bygning kan blive forringet af smerte og nød6,8, men der er også beviser at hippocampus læsioner kan påvirke disse to opførsel15,27 , 28 , 29 , 30 , 31.

Luksus adfærd blev undersøgt i den tidlige post bedøvelsesmiddel periode (gravende adfærd) og om morgenen den følgende dag (rede bygning adfærd). Test for gravende adfærd er udviklet af diakon et al. og vedtaget af Jirkof et al. blev ændret akklimatisering (gruppe boliger i stedet for individuelle boliger) og varighed af adfærdsmæssige måling (kun 2 h i stedet for 24 h) 8 , 15 , 16.

Det er bemærkelsesværdigt, at gentagne anæstesi reduceres gravende adfærd, tyder på, at der var en forringelse af velvære med det samme bogføre anæstesi10, som blev også rapporteret af Jirkof et al. 8. men om morgenen den følgende dag, når musene havde haft mere tid til at inddrive fra anæstesi, høje og komplekse reder de havde bygget indikerede at de oplever trivsel10. Disse resultater afviger fra tidligere rapporter, der scorede reder på et tidligere tidspunkt32. Derfor kan det være nyttigt at tilpasse protokollen og score reder tidligere i gang. Dog skal døgnrytme af reden bygning adfærd stadig betragtes, som musene har tendens til at forberede deres reder i slutningen af den mørke fase32.

Fødeindtagelse var marginalt faldt 1 dag efter gentagne anæstesi, men det var steget en uge senere. Da musene ikke tabte kropsvægt (Se Hohlbaum et al. 10) en form for kompensationsordning kan forekommende, og forringelse af velvære med hensyn til fødeindtagelse bør klassificeres som mild10. Fødeindtagelse giver indblik i postoperative nød, velvære og appetit i mus, som kan blive forringet af postoperativ kvalme26 og postoperative stress27.

FCM angive pålideligt stress i mus33,34,35. Peak FCM koncentrationer typisk forekomme 8-10 h efter en stressor men afhænger af intestinal transit tid18. Derfor er det afgørende at også overvåge hjem bur aktivitet, som indgår i denne protokol. På grund af døgnrytme effekten på udskilte FCM18er det tilrådeligt at indsamle fækal prøver over en periode på 24 h. FCM koncentrationer afspejles akut stress efter bedøvende perioden 24-h. Da FCM niveauer varierer fra individ til individ, beregnedes den procentvise ændring af FCM niveauer i forhold til grundlinjen. FCM resultaterne af denne undersøgelse viste, at hverken en oplevelse af anæstesi eller gentagne anæstesi steget betydeligt hypothalamus-hypofyse-binyrer (HPA) aksen aktivitet10.

I alt afslørede resultaterne, der gentages isofluran anæstesi forårsaget kortsigtede mild nød og forringet velfærd i den tidlige postanesthetic periode lidt mere end en enkelt oplevelse af isofluran anæstesi10.

En protokol til at vurdere trivsel bør ikke pålægge yderligere nød på dyrene. En begrænsning af denne protokol er, at det omfatter individuelle boliger i observationsperioden 24-h, som er kendt for at øge plasma corticosterone niveauer36. Individuelle boliger er imidlertid nødvendigt at indsamle gyldige data for personer hjem bur aktivitet, fødeindtagelse, reden bygning adfærd og FCM niveauer. Varigheden af individuelle boliger blev minimeret ved at undersøge de fire parametre på samme tid (dvs. perioden 24-h observation). For at forhindre, at resultaterne fra at være partisk ved individuelle boliger, kontrol mus undergik de samme tests og deres resultater blev taget i betragtning. Hvis der findes metoder til at måle disse parametre i en gruppe-bolig-miljø, skal de anvendte (f.eks.en automatiseret hjem-bur analyse systemet for hjem bur aktivitet37 og fødeindtagelse). Automatiseret hjem bur analyse systemer kræver dog ekstra udstyr, som ikke er tilgængelige. I undersøgelser med fokus på grupper af dyr i stedet for individer, hjem bur aktivitet, fødeindtagelse, reden bygning adfærd og FCM niveauer kan også blive vurderet for en gruppe af mus. Det samme gælder for den frie sonderende paradigme, som kun kræver en mus skal mærkes tydeligt, således at de kan skelnes. Hvis trivsel er reduceret i en gruppe, alle mus i gruppen bør kontrolleres omhyggeligt (ved hjælp af score-arket og klinisk undersøgelse) til at identificere den mus eller musene pågældende. Yderligere bemærkninger på koncernniveau er nødvendige for at bestemme følsomheden af gruppeværdier.

Hvad angår raffinement, kan denne protokol tilpasset og integreret i igangværende undersøgelser at vurdere virkningen af en bestemt procedure på mus trivsel. Afhængigt af den særlige procedure og undersøgelsen design, bør man vælge de mest velegnede prøver fra denne protokol. Her, syntes gravende og reden bygning test, MGS, gratis sonderende paradigme og måling af fødeindtagelse at være særligt gavnligt. Således opførsel af mus døgnrytmen38, anbefales det at udføre adfærdsmæssige test i mus af alle grupper for en defineret tidspunkt. Mus er mere aktiv end om morgenen i eftermiddag38. Hvis undersøgelsen design ikke tillader test i morgen, kan testen gøres på et andet tidspunkt. Det er også vigtigt at sikre, at hver enkelt test er gennemført på de samme tidspunkter for alle grupper. Ellers kan konsekvenserne af døgnrytme af parametre resultere i intra- eller tværpolitiske forskelle. Derudover bør kontrol mus medtages i undersøgelsen, således at resultaterne fra behandlede mus og kontrol mus kan sammenlignes. Control mus skal testes på det samme tidspunkt som behandlede mus. Hvis protokollen viser, at trivsel er nedsat, proceduren, der skal raffineres, og protokollen gentages. Denne tilgang kan vise, om bestræbelserne på at forfine proceduren var effektiv.

Denne protokol kan tjene som en generel støtte til at vurdere graden af alvorlighed forårsaget af en procedure. Derfor, det hjælper til at klassificere sværhedsgraden af en procedure på en videnskabelig - og dyre-centreret niveau. Protokollen indeholder imidlertid ikke en skala for klassificering af en procedure som mild, moderat, eller svær. For at klassificere sværhedsgraden af en procedure, er det nødvendigt at henvise til eksempler i bilag VIII af EU-direktiv 2010/63.

Afslutningsvis, understøtter denne protokol en systematisk vurdering af velfærd i mus i en videnskabelig, dyr-centreret måde efter procedurer under som generel anæstesi er brugt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgements

Takket være Sabine Jacobs bistå med prøvetagning, Edith Klobetz-Rassam for analyse af FCM, PD Dr. med. vet. Heisel. Roswitha Merle bistå med statistiske analyser, og Wiebke Gentner for korrekturlæsning håndskriftet. Undersøgelsen er en del af Berlin-Brandenburg forskning platform BB3R (www.bb3r.de) og blev finansieret af den tyske føderale ministerium for uddannelse og forskning (giver nummer: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isofluran CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH 1214
InfraMot - Sensore Units TSE Systems 302015-SENS
InfraMot - Control Units TSE Systems 302015-C/16
InfraMot - Software TSE Systems 302015-S
Nestlet N Ancare - Plexx NES3600
Camera EOS 350D Canon

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. 2010 EU. Directive 2010/63/EU. Official Journal of the European Union. L276/33-L276/29 (2010).
  2. Russell, W. M. S., Burch, R. The principles of humane experimental technique. London: Methuen. (1959).
  3. Morton, D. B., Griffiths, P. H. Guidelines on the recognition of pain, distress and discomfort in experimental animals and an hypothesis for assessment. Vet Rec. 116, (16), 431-436 (1985).
  4. Bugnon, P., Heimann, M., Thallmair, M. What the literature tells us about score sheet design. Lab Anim. 50, (6), 414-417 (2016).
  5. Boissy, A., et al. Assessment of positive emotions in animals to improve their welfare. Physiol Behav. 92, (3), 375-397 (2007).
  6. Arras, M., Rettich, A., Cinelli, P., Kasermann, H. P., Burki, K. Assessment of post-laparotomy pain in laboratory mice by telemetric recording of heart rate and heart rate variability. BMC Vet Res. 3, 16 (2007).
  7. Jirkof, P. Burrowing and nest building behavior as indicators of well-being in mice. J Neurosci Methods. 234, 139-146 (2014).
  8. Jirkof, P., et al. Burrowing behavior as an indicator of post-laparotomy pain in mice. Front Behav Neurosci. 4, 165 (2010).
  9. Hawkins, P., et al. A guide to defining and implementing protocols for the welfare assessment of laboratory animals: eleventh report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Lab Anim. 45, (1), 1-13 (2011).
  10. Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S., Palme, R., Fink, H., Thöne-Reineke, C. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in C57BL/6JRj mice-Assessing the degree of distress. PLoS ONE. 12, (6), e0179588 (2017).
  11. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 8, (6), e1000412 (2010).
  12. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat Methods. 7, (10), 825-826 (2010).
  13. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7, (6), 447-449 (2010).
  14. Deacon, R. M. Assessing nest building in mice. Nat Protoc. 1, (3), 1117-1119 (2006).
  15. Deacon, R. M., Raley, J. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Burrowing into prion disease. Neuroreport. 12, (9), 2053-2057 (2001).
  16. Deacon, R. M. Burrowing in rodents: a sensitive method for detecting behavioral dysfunction. Nat Protoc. 1, (1), 118-121 (2006).
  17. Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M. F., Lepschy, M. Steroid extraction: get the best out of faecal samples. Wien Tierarz Monats. 100, (9-10), 238-246 (2013).
  18. Touma, C., Palme, R., Sachser, N. Analyzing corticosterone metabolites in fecal samples of mice: a noninvasive technique to monitor stress hormones. Horm Behav. 45, (1), 10-22 (2004).
  19. Touma, C., Sachser, N., Mostl, E., Palme, R. Effects of sex and time of day on metabolism and excretion of corticosterone in urine and feces of mice. Gen Comp Endocrinol. 130, (3), 267-278 (2003).
  20. Bert, B., Schmidt, N., Voigt, J. P., Fink, H., Rex, A. Evaluation of cage leaving behaviour in rats as a free choice paradigm. J Pharmacol Toxicol Methods. 68, (2), 240-249 (2013).
  21. Lister, R. G. Ethologically-based animal models of anxiety disorders. Pharmacol Ther. 46, (3), 321-340 (1990).
  22. Belzung, C., Berton, F. Further pharmacological validation of the BALB/c neophobia in the free exploratory paradigm as an animal model of trait anxiety. Behav Pharmacol. 8, (6-7), 541-548 (1997).
  23. Finlayson, K., Lampe, J. F., Hintze, S., Wurbel, H., Melotti, L. Facial indicators of positive emotions in rats. PLoS ONE. 11, (11), e0166446 (2016).
  24. Miller, A., Kitson, G., Skalkoyannis, B., Leach, M. The effect of isoflurane anaesthesia and buprenorphine on the mouse grimace scale and behaviour in CBA and DBA/2 mice. Appl Anim Behav Sci. 172, 58-62 (2015).
  25. Miller, A. L., Golledge, H. D., Leach, M. C. The influence of isoflurane anaesthesia on the rat grimace scale. PLoS ONE. 11, (11), e0166652 (2016).
  26. Deacon, R. Assessing burrowing, nest construction, and hoarding in mice. J Vis Exp. (59), e2607 (2012).
  27. Felton, L. M., Cunningham, C., Rankine, E. L., Waters, S., Boche, D., Perry, V. H. MCP-1 and murine prion disease: separation of early behavioural dysfunction from overt clinical disease. Neurobiol Dis. 20, (2), 283-295 (2005).
  28. Deacon, R. M., Croucher, A., Rawlins, J. N. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviours in mice. Behav Brain Res. 132, (2), 203-213 (2002).
  29. Filali, M., Lalonde, R., Rivest, S. Subchronic memantine administration on spatial learning, exploratory activity, and nest-building in an APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease. Neuropharmacology. 60, (6), 930-936 (2011).
  30. Guenther, K., Deacon, R. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Early behavioural changes in scrapie-affected mice and the influence of dapsone. Eur J Neurosci. 14, (2), 401-409 (2001).
  31. Deacon, R. M., Reisel, D., Perry, V. H., Nicholas, J., Rawlins, P. Hippocampal scrapie infection impairs operant DRL performance in mice. Behav Brain Res. 157, (1), 99-105 (2005).
  32. Jirkof, P., et al. Assessment of postsurgical distress and pain in laboratory mice by nest complexity scoring. Lab Anim. 47, (3), 153-161 (2013).
  33. Atanasov, N. A., Sargent, J. L., Parmigiani, J. P., Palme, R., Diggs, H. E. Characterization of train-induced vibration and its effect on fecal corticosterone metabolites in mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 54, (6), 737-744 (2015).
  34. Voigt, C. C., et al. Hormonal stress response of laboratory mice to conventional and minimally invasive bleeding techniques. Anim Welf. 22, (4), 449-455 (2013).
  35. Walker, M. K., et al. A less stressful alternative to oral gavage for pharmacological and toxicological studies in mice. Toxicol Appl Pharmacol. 260, (1), 65-69 (2012).
  36. Miyashita, T., et al. Social stress increases biopyrrins, oxidative metabolites of bilirubin, in mouse urine. Biochem Biophys Res Commun. 349, (2), 775-780 (2006).
  37. Bains, R. S., et al. Analysis of individual mouse activity in group housed animals of different inbred strains using a novel automated home cage analysis system. Front Behav Neurosci. 10, (106), (2016).
  38. Saibaba, P., Sales, G. D., Stodulski, G., Hau, J. Behaviour of rats in their home cages: daytime variations and effects of routine husbandry procedures analysed by time sampling techniques. Lab Anim. 30, (1), 13-21 (1996).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics