Un nuevo método para la inducción de un depresión-como comportamiento en ratas

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Behavior

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Summary

Este protocolo describe un nuevo modelo por el cual ratas saludables podrían contratar depresión durante un tiempo determinado periodthrough contagio por exposición a crónico imprevisible hizo hincapié en las ratas (CUS).

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Zeldetz, V., Natanel, D., Boyko, M., Zlotnik, A., Shiyntum, H. N., Grinshpun, J., Frank, D., Kuts, R., Brotfain, E., Peiser, J. A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats. J. Vis. Exp. (132), e57137, doi:10.3791/57137 (2018).

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Abstract

Contagiosa la depresión es un fenómeno que aún debe ser reconocido plenamente y esto se debe a insuficiente material sobre el tema. Por el momento, no hay ningún formato existente para estudiar el mecanismo de acción, prevención, contención y tratamiento de la depresión contagiosa. Por lo tanto, el propósito de este estudio fue establecer el primer modelo animal de depresión contagiosa.

Ratas sanas pueden contraer comportamientos depresivos si se exponen a las ratas deprimidas. Depresión es inducida en ratas sometiéndolos a varias manipulaciones de estrés crónico impredecible (CUS) durante 5 semanas, como se describe en el protocolo. Una prueba de preferencia de sacarosa éxito confirmó el desarrollo de la depresión en las ratas. Las ratas expuestas al CUS entonces fueron enjauladas con las ratas de la ingenua del grupo contagio (ingenuo 1 rata/2 depresión ratas en una jaula) por un adicional de 5 semanas. 30 grupos sociales fueron creados de la combinación de ratas expuestas al CUS y ratas de ingenuo.

Este protocolo propuesto depresión-contagio en animales consiste principalmente en las ratas expuestas al CUS y saludables durante 5 semanas. Para asegurar que este método funciona, una serie de pruebas se llevan a cabo - en primer lugar, la prueba de preferencia de sacarosa a inducir depresión a las ratas, entonces, la preferencia de sacarosa prueba, junto con el campo abierto y pruebas de nado forzado el final del período de convivencia. Durante todo el experimento, las ratas se dan etiquetas y siempre vuelven a sus jaulas después de cada prueba.

Algunas limitaciones a este método son las débiles diferencias registradas entre el experimental y el control de grupos en la prueba de preferencia de sacarosa y el resultado traumático irreversible de la prueba de nado forzado. Estos pueden ser dignas de consideración de conveniencia antes de cualquier futura aplicación del protocolo. Sin embargo, tras el experimento, las ratas ingenuo desarrollaron depresión de contagio después de 5 semanas de compartir la misma jaula con las ratas expuestas al CUS.

Introduction

Pruebas llevadas a cabo en los últimos tiempos han sugerido que enfermedades psiquiátricas podrían ser fácilmente extendidas a individuos sanos mediante contagio1. En este caso, se llama contagio social y se propaga a través del afecto, actitud o comportamiento. Esto sólo requiere un individuo deprimido para interactuar con uno o más individuos sanos, lo que facilita el intercambio de emociones. Las relaciones sociales son por lo tanto, un componente muy importante del estado de ánimo, como definen a la transferencia de emociones de un individuo a otro, a través de la mímica y el "contagio emocional". Plazos para contagio tenga efecto variar2, inevitablemente dependiendo de la severidad de la emoción y la fuerza de resistencia del receptor.

Las consecuencias importantes de contagio emocional han asegurado que los estudios realizados en el pasado principalmente centran en los aspectos negativos. El resultado de efectos negativos aseguró depresión contagio recibido enorme atención, con estudios que demuestran que la depresión de contagio aumenta las posibilidades de las familias y amigos de una persona deprimida exhibiendo comportamientos depresivos3 , 4 , 5 , 6.

Hay razones tanto personales como económicos para hacer frente a la depresión. Comúnmente causa morbilidad; y su incidencia de por vida entre 13,3 y 17,1% en los Estados Unidos7. Los archivos de la Organización Mundial de la salud muestran que la depresión es cuarta en la lista de enfermedades globales con enormes cargas, que se producen en las personas de todos los géneros, edades, estratos sociales y es igualmente capaz de causar problemas de salud, afecta la capacidad para interactuar con otros8,9,10,11y causando exceso de discapacidad12,13. 850.000 vidas se estiman que se pierde al suicidio depresivo cada año14. Pacientes típicamente se prescriben medicamentos antidepresivos o aconsejó someterse a terapia cognitiva-conductual. Estos treatmentshelp alrededor del 60-80% de los pacientes. Sin embargo, ocuparse de la enfermedad todavía plantea un gran problema; tratamiento no está disponible para todos los pacientes deprimidos. Para aquellos que reciben tratamiento, algunos sufren efectos secundarios, mientras que otros mal cumplan con directrices15. Es el número de pacientes resistentes al tratamiento hasta 40%14. Con la depresión, la economía ha sufrido con frecuencia en forma de un tratamiento costoso, una disminución en la fuerza laboral y las jubilaciones anticipadas16. Una pérdida anual estimada de $ 44 billones en los Estados Unidos es causada por depresión, representa casi la mitad de de pérdida de productividad del país17. Tratamiento costoso requiere de atención médica cuidadosa, que incurre en una variedad de aumento de los costos médico y exige una anticipación de resultados indeseables, así como mala respuesta al tratamiento18.

No haber venido a través de un modelo animal ya probado para estudiar el mecanismo de depresión-contagio, su prevención y tratamiento, este protocolo animal hipotético fue utilizado por primera vez. Sugiere que a través de la convivencia con ratas expuestas al CUS, ratas saludables tienden a manifestar comportamientos depresivos. El objetivo principal de este experimento fue establecer un procedimiento de laboratorio que la transferencia de la depresión, por contagio, de las ratas expuestas al CUS las sanas. A continuación, los resultados se evaluaron para determinar si la depresión contagio fue limitado solamente a los síntomas depresivos, o si estaba relacionada con otros trastornos del ánimo, como ansiedad. El objetivo final del experimento es acercarse a mejor comprender el mecanismo de contagio de la depresión en la carrera por desarrollar nuevos enfoques terapéuticos19.

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Protocol

El procedimiento se realizó según las recomendaciones de la declaración de Helsinki y Tokio y las directrices para el uso de animales experimentales de la Comunidad Europea. Los experimentos también fueron aprobados por el Comité de cuidado del Animal en la Universidad Ben-Gurion del Negev.

1. preparación de las ratas para el procedimiento Experimental

Nota: Para el procedimiento experimental, selección masculina ratas Sprague-Dawley con ninguna patología evidente, cada uno pesa entre 300 y 350 g.

  1. Casa tres ratas por jaula, con chow y agua ad libitum, disponibles y permiten por lo menos dos semanas de adaptación, alternando entre 12 h de luz y 12 h de oscuridad.
  2. Antes de la iniciación del experimento, todas las ratas de la presencia de comportamientos depresivos usando un 3 días de prueba prueba de preferencia de sacarosa (véase paso 4).
  3. Excluir las ratas que se perciben Mostrar comportamientos depresivos y los que son alojados en las mismas jaulas como tal ratas, para evitar la posible propagación de la depresión a las ratas antes de que el experimento ha comenzado en primer lugar, eliminan las ratas que un resultado positivo para depresión; Luego, eliminar las ratas que se encuentran en las mismas jaulas como las ratas deprimidas.
  4. Si es necesario, excluir ratas adicionales al azar para crear finales grupos de 60 ratas para el experimento de la depresión, 30 ratas del grupo de contagio y grupo de control de ratsforthe 30.
  5. Etiqueta de ratas (con pegatinas numeradas), a través de los procedimientos experimentales. Temporalmente transferir las ratas en jaulas individuales durante los experimentos (en la misma habitación y oscuro ciclo de CUS, sacarosa y pruebas de campo abierto y en una habitación diferente y oscuro ciclo de la prueba de nado forzado y uno de los factores de estrés (consulte 2.1.7)) y devolverlos a la grupos sociales original de ir al final.

2. el procedimiento para la inducción de la depresión en ratas

Nota: Con el fin de inducir depresión, sujeto las 60 ratas en el grupo expuesto de CUS a varias manipulaciones de CUS por cinco semanas20.

  1. Exponer a las ratas diariamente a cualquier 2 de los siguientes 7 estresores, en un orden aleatorio; a un factor estresante durante el día y a la otra por la noche, durante 5 semanas consecutivas.
    1. Casa de las ratas en grupos (seis ratas, en vez de los tres generalmente, por jaula de 18 h);
    2. Coloca las ratas en una jaula inclinada (45° sobre el eje vertical para 3 h);
    3. Privar a las ratas de los alimentos (18 h);
    4. Privar a las ratas de agua (18 h) y exponerlas a botellas vacías de agua inmediatamente después de un período de privación de agua agudo (1 h);
    5. Coloca las ratas en una jaula, lecho húmedo (con 300 mL de agua derramado en la ropa de cama) para 8 h (ciclo de la noche);
    6. Exponer a las ratas para iluminación continua (24 h) y revertir el ciclo luz/oscuridad (12 h) dos veces por semana;
    7. Coloca las ratas en un ambiente caluroso (40° C, 5 minutos - ciclo nocturno), con otro aparato utilizado para aumentar el calor.
  2. Confirmar el desarrollo de la depresión mediante la realización de un test de preferencia de sacarosa (véase paso 4).
    Nota: El protocolo puede ser hizo una pausa después de cada uno de los pasos anteriores. Además, si se muestra algún comportamiento aberrante por cualquier rata, luego, eliminar la rata y cualquier otra rata que podría han sido afectada por la rata errática.

3. el procedimiento para el establecimiento de depresión-contagio en ratas ingenuas

  1. Establecer 30 grupos sociales con las ratas de la CUS-expuestas (60) y depresión-contagio (30):
    1. Casa dos CUS expuesto ratas por jaula en 30 jaulas diferentes.
    2. Añadir una rata del grupo contagio depresión a cada jaula dos CUS - expuesto ratas.
  2. Permite la convivencia durante 5 semanas , bajo condiciones estándar, con chow y agua disponible ad libitum.
  3. Después de 5 semanas de convivencia, tema todos los grupos la preferencia de la sacarosa, campo abierto y pruebas de nado forzado en el orden mostrado en la figura 1.

4. la preferencia de sacarosa prueba21

  1. Durante el ciclo oscuro, coloca las ratas en jaulas individuales en la misma habitación que la vivienda.
  2. Coloque una botella de solución de sacarosa de 1% (p/v) de 100 mL en cada jaula para 24 h y permitir la adaptación.
  3. Quitar las botellas y privar a las ratas de comida y agua por 12 h.
  4. Coloque dos botellas, una que contiene 100 mL de solución de sacarosa (1%, w/v) y el otro, 100 mL de agua, en cada jaula para 4 h.
  5. Registrar el volumen (en mL) de solución de sacarosa consumida y agua y calcular la afinidad a la preferencia de sacarosa como se indica a continuación:
    Equation 1

5. la prueba de campo abierto

Nota: La prueba estándar de campo abierto se utiliza comúnmente para evaluar comportamientos locomotores, exploratorios y ansiedad-como y las respuestas del comportamiento a la novedad en animales de laboratorio,22, 23. Esta prueba también se ha demostrado para analizar comportamientos depresivos24. La prueba de campo abierto analiza dos parámetros opuestos; miedo a los roedores para la luz brillante en el centro del campo contra su voluntad expresiva hacia la novedad. Cuando ansioso, roedores tienden a evitar el descubrimiento y la estancia por las paredes (thigmotaxis). Esta ansiedad es determinada por el grado de evitar el campo central iluminado. El campo abierto, que consiste en una caja de acrílico negro mate (120 cm × 60 cm × 60 cm), se divide en la parte central (25%) y el resto de la caja (75%). Esta prueba lleva a cabo en la misma habitación que la vivienda durante el ciclo oscuro. Una cámara de vídeo suspendida unos 200 cm sobre el campo, se utiliza para la grabación de la prueba de campo abierto22, 23.

  1. Limpie el aparato con alcohol al 5% antes de la introducción de cada animal. Colocar la rata en la esquina de campo abierto frente a la pared.
  2. Registrar el comportamiento de la rata con una cámara de vídeo de 5 minutos.
  3. Analizar las grabaciones de los siguientes parámetros: distancia de recorrido total, velocidad en la parte central del campo y el tiempo invertido en la parte central del campo.

6. la prueba de nado forzado

Nota: El principio de la prueba de nado forzado es basa en el hecho de que cuando las ratas se ven obligadas a nadar en un espacio confinado, finalmente renunciar y permanecer inmóviles, de vez en cuando sus cuerpos en movimiento para evitar ahogamiento21, 23. Debido a la enormidad del aparato ya montado, esta prueba se realizó en la sala diferentes durante el ciclo oscuro.

  1. Para la habituación, colocar la rata en un cilindro de vidrio (100 cm de altura, 40 cm de diámetro y 40 cm de profundidad) que contiene agua a temperatura ambiente, durante 15 minutos sesión de natación.
  2. Quite la rata del cilindro, seque con toallas de papel y en una jaula caliente durante 15 minutos.
  3. La rata de retorno a su hogar jaula (original);
    Nota: El protocolo se puede detener aquí. También, si alguna rata en el curso de este examen se está ahogando, retírela inmediatamente.
  4. Al día siguiente, grabar una sesión de baño de 5 minutos y analizar las grabaciones de los parámetros siguientes: inmovilidad, escalada y defecación.

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Representative Results

La prueba de preferencia de la sacarosa: Después de exponer a ratas a 5 semanas de CUS para la inducción de la depresión y luego posteriormente exponiendo ratas sanas a las ratas expuestas al CUS de otras 5 semanas, ambos grupos de ratas muestran depresivo-como behaviorsat al final del experimento (figura 2). La evidencia de este comportamiento se observó en la menor preferencia por sacarosa por las ratas deprimidas después de CUS (65 ± 2,8%, p < 0.001, figura 2), cuando en comparación con las 30 ratas en el grupo control (101 ± 7%, (figura 2). Después de 10 semanas, las ratas expuestas al CUS 60 demostraron un cambio estadísticamente significativo (72 ± 3,3%, p < 0.001, figura 2) cuando en comparación con las 30 ratas en el grupo control (95 ± 3.4%, figura 2), como lo hizo las 30 ratas depresión-contagio (76 ± 4,7% p) < 0.001, figura 2), después de 5 semanas de convivencia con las ratas expuestas al CUS.

La prueba de campo abierto: Ratas en ambos el CUS-expuestos y los grupos de depresión-contagio habían disminuido distancias de recorrido total (depresión-contagio - p < 0.05 y CUS-expuesto - p < 0.01, figura 3A) y velocidades promedios (CUS-expuesto - p < 0.05, Figura 3C), en comparación con el grupo de control. El tiempo de permanencia en el centro de las ratas líneaPor abierto del grupo de control y los dos grupos experimentales fue no significativamente diferente (figura 3B).

La prueba de nado forzado: Resultados de la evaluación de la inmovilidad fueron como se esperaba. Ambos expuestos al CUS y depresión-contagio ratas mostraron inmovilidad prolongada después de la prueba de nado forzado. Sin embargo, un tiempo considerablemente prolongado de inactividad fue registrado sólo en las ratas expuestas al CUS (p < 0.01) cuando comparados con el grupo control (figura 4A). En otro parámetro de la prueba de nado forzado investigados, escalada tiempo, grupos de expuestos al CUS y las ratas de contagio-depresión exhiben propiedades escaladas muy limitados (p < 0.01) cuando comparado con el grupo control (figura 4B). La evaluación de la tasa de defecación resultó en el registro de altas cantidades de materia fecal para ambos grupos experimentales (p < 0,01), en comparación con el control (figura 4C).

Figure 1
Figura 1 : El diseño del protocolo experimental. Muestra el orden y la sincronización de los protocolos experimentales respectivos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 2
Figura 2 : El test de preferencia de sacarosa El cambio porcentual en la prueba de preferencia de sacarosa disminuida significativamente en las 60 ratas expuestas al CUS (65 ± 2.8% vs 101 ± 7%, p < 0.001) en comparación con las 30 ratas en el grupo control, después de 5 semanas de CUS. Hubo un porcentaje significativo cambio en la prueba de preferencia de sacarosa en lo 60 CUS-expuestas (72 ± 3,3%, p < 0.001) y 30 depresión-contagio (76 ± 4,7%, p < 0.001) ratas después de 10 semanas, en comparación con las 30 ratas en el grupo control (95 ± 3.4%). El análisis estadístico se realizó con ANOVA unidireccional con prueba post hoc de Bonferroni. Los datos se presentan como porcentajes de la base de referencia y expresados como media ± SEM. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 3
Figura 3 : El test de campo abierto La depresión-contagio (68,1 ± 6.5% p < 0.05, figura 3A) y las ratas expuestas al CUS (59,6 ± 5,7%, p < 0.01, figura 3A) habían disminuido distancias de recorrido total, en comparación con las ratas control (100 ± 13%, figura 3 A). No hubo diferencias significativas encontradas para tiempo pasado por los 3 grupos de ratas en la parte central del campo abierto (figura 3B). El CUS-expuestas (75,4 ± 6%, p < 0.05, figura 3C) y depresión-contagio (88 ± 5.6%, p < 0.005, figura 3C) ratas ambos habían disminuido a velocidades medias, pero un cambio significativo se registró sólo en CUS-expuesto Grupo, en comparación con las ratas del grupo control. En todas las 3 pruebas, se utilizaron la Kruskal-Wallis seguido del test de Mann-Whitney. Los datos se presentan como porcentajes del grupo control y expresados como media ± SEM. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 4
Figura 4 : El test de nado forzado CUS-expuesto (151 ± 3.3%; p < 0.01, figura 4A) y depresión-contagio (107 ± 6.7%, figura 4A) ratas eran ambos encontrados para ser muy inmóvil, pero se registró un cambio significativo en el grupo expuesto de CUS, en comparación con las ratas del grupo control. El CUS-expuestas (46 ± 5.5%, p < 0.01, figura 4B) y la depresión-contagio (64 ± 5,4% p < 0.01, figura 4B) ratas ambos expresadas reducción los tiempos de escalada. Las tasas de defecación de las ratas expuestas al CUS 60 (278 ± 32%, p < 0.01,figura 4C) y 30 ratas depresión-contagio (131 ± 37% figura 4C) fueron significativamente mayores en comparación con la tasa de defecación del control 30 ratas (100 ± 22.5% p < 0.01). Análisis post hoc no encontró diferencias significativas entre las ratas de contagio de la depresión y los controles, pero mostró una diferencia significativa entre CUS expuestos en comparación con las ratas control (p < 0,01 figura 4C). El análisis estadístico se realizó con ANOVA unidireccional. Los datos se presentan como porcentajes de los paneles de control expresadas como media ± SEM. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Discussion

Según los resultados obtenidos con la aplicación del presente Protocolo, las ratas sanas, como los seres humanos, fueron perjudicadas por ratas deprimidas cuando encuentra juntos durante un período prolongado. Las ratas contagiosamente deprimidas fueron afectadas por sus contrapartes ya deprimidos después de cinco semanas de convivencia, estableciendo un modelo de depresión-contagio animal distinto por primera vez. Un estudio anterior con los cerdos también sugirió estatutos emocionales compartidas entre cerdos sanos y deprimido25.

La inducción de la depresión en ratas fue alcanzada con la aplicación de CUS. Este método expresa rasgos comunes a estresores socio-ambientales de cada día. Archivos demuestran que el CUS es el método más usado de inducir depresión en animales. Los resultados obtenidos con esta semejanzas fuertes del parte del método con síntomas clínicos y comportamientos depresivos. Si se usa correctamente en las ratas, las ratas canexpress todos conocidos signos depresivos26. La capacidad de llevar a cabo todos los comportamientos depresivos cuando se aplica en las ratas valida CUS como un método de inducir depresión confiable con alta previsibilidad y construir validez27, 28. Igualmente se utiliza el método CUS como modelo animal de depresión para analizar los mecanismos celulares y moleculares de la patofisiología de la depresión, así como para estudiar el mecanismo de acción de los antidepresivos29,30,31 , 32 , 33.

La prueba de preferencia de sacarosa aplicada después de cohabitación de los deprimidos e ingenuo ratas permitió la evaluación de la propagación de la depresión, dando por resultado la expresión de comportamientos depresivos en ambos grupos de ratas después de 5 semanas (figura 2, figura 3, Figura 4). El nado obligado probar20 y el campo abierto prueba34,35,36,37,38,39,40 también fueron utilizados para investigar depresión en ratas41. Estos métodos reflejan una amplia gama de irregularidades conductuales. El hecho de que no hay ningún mecanismo específico de contagio significa que componentes conscientes e inconscientes podrían ser avanzados como los posibles resultados hipotéticos. Inconsciencia podría manifestar a través de la mímica42, por medio de las ratas sanas copiando los movimientos del cuerpo de las ratas deprimidas. Probablemente a reproducir los movimientos es como expresiones faciales y la neurona sistema43. Conciencia, por el contrario, podría surgir por medio de métodos de comunicación. Un tal método es trabajo rumia44.

Aunque las ratas sanas se deprimió cuando comparten la vivienda con las ratas deprimidas, ratas deprimidas también se convirtió en menos deprimidas, en comparación con su estado después de CUS, como resultado de la cohabitación con sus homólogos sanos. Esto sigue un patrón que se observó en los resultados anteriores cuando estudiantes universitarios pudieron se contagiosamente deprimida después de pasar tiempo con sus compañeros sanos4. Hay, por lo tanto, no sólo un impacto negativo con la depresión contagiosa, sino también un efecto recíproco. Personas deprimidas influyen negativa en las sanas, mientras que ellos mismos recuperan un poco de depresión en virtud de ser expuesto a colegas no deprimido. Tal hallazgo podría ser un impulso a la psiquiatría frente a personas deprimidas y las poblaciones.

Antes de esta prueba, modelos animales de depresión-contagio eran inexistentes, y a pesar de un avance se hizo aquí, esta prueba tiene sus limitaciones. Se puede considerar algo débil por varias razones. La diferencia entre la absorción de la sacarosa y la absorción de agua en las ratas supuestamente deprimidas, comparado con ratas controladas, no es muy significativa y no es demostrativa de un estado muy deprimido en las ratas experimentales. Además, el uso de la prueba de nado forzado no sería aconsejable si se pueden encontrar mejores alternativas. Los daños causados por esta prueba son traumáticas, permanente e irreversible. En consecuencia, animales sometidos a la prueba de nado forzado no reciclados o usados para experimentos adicionales. Independientemente de los inconvenientes del método, sigue siendo un método pionero que produjo resultados decentes.

Mucho ha sido dicho y hecho para llegar a un acuerdo con la depresión, pero sigue siendo una causa importante de preocupación, con el creciente número de situaciones potencialmente mortales destacando su severidad en la sociedad de hoy. La complejidad de definir las interacciones entre los seres humanos hace problemático evaluar sistemáticamente el contagio de la depresión. Por lo tanto, una comprensión avanzada de un modelo animal puede ser clave para desbloquear el mecanismo de la depresión en la población humana, posteriormente establecer respuestas terapéuticas para esta enfermedad problemática.

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Disclosures

Los autores no tienen nada que revelar.

Acknowledgements

Los autores reconocen con gratitud Dr. R. Bilyar, residente, Departamento de Urología, Soroka Medical Center, por su ayuda en el laboratorio, así como en el análisis de vídeo. El apoyo de Shira Ovadia, Director de la unidad de recursos animales, es también agradece. Muchas gracias a A. Alir y el personal de la unidad de cuidado crítico, Soroka Medical Center por su apoyo y discusiones útiles.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rat Cages Techniplast 2000P Conventional housing for rodents. Was used for housing rats throughout the experiment
Water - - Common tap water used througout the experiment at different stages
Purina Chow Purina 5001 Rodent laboratory chow given to rats, mice and hamster is a life-cycle nutrition that has been used in biomedical researc for over 5 decades. Provided to rats ad libitum in this experiment
Bottles Techniplast ACBT0262SU 150 ml bottles filled with 100 ml of water and 100 ml 1%(w/v) sucrose solution
Black lusterless perspex box - - (120 cm × 60 cm × 60 cm), divided into a 25% central zone and the surrounding border zone
Video Camera Canon - Digital video camera for high definition recording of rat behavior under open field test
Alcohol Pharmacy - 99% pharmaceutical alcohol diluted to 5% and used for lceaning the open field test box before the introduction of each rat
Glass cylinder - - 100 cm tall, 40 cm in diameter, and 40 cm deep cylinder used for carrying out the forced swim test
Paper towels Pharmacy - Dry towels used for keeping rats dry after immersing them in water
Bold markers - - Common bold markers used for labeling rats

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References

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