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Una técnica de oclusión de la arteria cerebral media para inducir la depresión post-accidente cerebrovascular en ratas
Chapters
Summary May 22nd, 2019
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Aquí presentamos un protocolo para inducir la depresión post-accidente cerebrovascular en ratas, ocluendo la arteria cerebral media a través de la arteria carótida interna. Usamos la prueba de natación forzada de Porsolt y la prueba de preferencia de sacarosa para confirmar y evaluar Estados de ánimo depresivos inducidos.
Transcript
Nuestro protocolo propone una nueva técnica de oclusión de la arteria cerebral medial en ratas para ayudar a estudiar el mecanismo del desarrollo de la depresión post-accidente cerebrovascular y encontrar una terapia más eficiente. La principal ventaja de nuestra técnica es su capacidad para reducir la variabilidad en los cambios de peso, el edema cerebral y el volumen de infarto, y para minimizar las muertes relacionadas con procedimientos. Después de confirmar una falta de respuesta al pellizco de cola en un macho de 300 a 350 gramos de rata Sprague Dawley, coloque el animal en una placa de calentamiento de 37 grados Celsius y utilice una sonda rectal para monitorear la temperatura corporal del núcleo.
Aplicar pomada en los ojos del animal y afeitar el cabello del cuello. A continuación, desinfectar la piel expuesta con 70 por ciento de alcohol clorhexidina, y cubrir la rata con la cortina quirúrgica estéril antes de realizar la oclusión de acuerdo con las técnicas estándar. Para obtener la puntuación de gravedad neurológica, coloque una rata ocluida sobre una superficie plana y permita que el animal se mueva libremente.
Después de un minuto, tire suavemente de la rata hacia atrás por la cola y eriga la respuesta de marcha del animal. Para medir el volumen del infarto, escanee las rebanadas cerebrales manchadas preparadas a una resolución de 1.600 por 1.600 puntos por pulgada y recorte y estandarice la escala para todas las imágenes. A continuación, cargue las imágenes estandarizadas en un programa de software de análisis de imágenes adecuado y utilice una herramienta de rastreo para medir el área de palidez marcada en seis sectores consecutivos de dos milímetros para determinar el tamaño del infarto como un porcentaje de toda la rebanada cerebral.
30 a 33 días después de la cirugía, transfiera a los animales a una habitación cerrada, tranquila y controlada por la luz en jaulas individuales, y coloque una botella que contenga 100 mililitros de 1% de solución de sacarosa a cada jaula durante 24 horas. Al día siguiente, retire las botellas, así como los alimentos y el agua potable durante 12 horas. Al final del período de privación, coloque una botella que contenga 100 mililitros de 1% de solución de sacarosa y una botella que contenga 100 mililitros de agua del grifo en cada jaula durante cuatro horas.
A continuación, registre el volumen de la solución de sacarosa y el agua consumida para permitir el cálculo de la afinidad a la preferencia de sacarosa para cada animal. Para la prueba de natación forzada de Porsolt, 30 a 33 días después de la cirugía, coloque primero a cada rata en un cilindro de plexiglás vertical que contenga 80 centímetros de 25 grados centígrados de agua durante 15 minutos. Al final del período de habituación, deje que la rata se seque durante 15 minutos en el recinto calentado a 32 grados centígrados antes de devolver al animal a su jaula de origen.
Al día siguiente, devolver la rata al cilindro durante cinco minutos finales, registrando la prueba de cinco minutos para permitir el cálculo de la duración total de la inmovilidad durante ese período. El análisis histológico revela un volumen de infarto estadísticamente significativo como porcentaje del volumen total del cerebro después de MCAO en comparación con los animales del grupo de control falso. También se observa un edema cerebral estadísticamente significativo en los animales experimentales en comparación con el grupo de control falso.
Los animales MCAO demuestran un rendimiento neurológico más bajo en comparación con los animales operados por simulaciones a los 50 minutos, las 24 horas y los siete días posteriores a la cirugía. Las ratas MCAO también consumen una cantidad significativamente menor de sacarosa y exhiben una inmovilidad más larga durante las pruebas de natación forzada de Porsalt en comparación con los animales operados por la farsa. Este es un modelo importante para los estudios de accidente cerebrovascular conductual y podría servir como una herramienta para evaluar futuras terapias o proporcionar datos preclínicos críticos sobre la eficacia de las sustancias terapéuticas.
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