चूहों में Anhedonia उत्प्रेरण के लिए अप्रत्याशित जीर्ण हल्के तनाव प्रोटोकॉल

Behavior

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Summary

यहां हम चूहों में अप्रत्याशित जीर्ण हल्के तनाव प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । इस प्रोटोकॉल एक लंबी अवधि के अवसादग्रस्तता phenotype की तरह लाती है और व्यवहार और neuromolecular अवसादग्रस्तता की तरह घाटे के पीछे में ख्यात अवसादों की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए सक्षम बनाता है ।

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Burstein, O., Doron, R. The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice. J. Vis. Exp. (140), e58184, doi:10.3791/58184 (2018).

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Abstract

अवसाद एक अत्यंत प्रचलित और दुर्बल स्थिति है, केवल आंशिक रूप से वर्तमान pharmacotherapies द्वारा संबोधित किया । कई रोगियों द्वारा उपचार के लिए प्रतिक्रिया की कमी के लिए नए चिकित्सकीय विकल्प विकसित करने के लिए और बेहतर विकार के एटियलजि को समझने की आवश्यकता का संकेत देता है । शोधों की खूबियों के साथ पूर्व नैदानिक मॉडल इस कार्य के लिए मौलिक हैं. यहां हम चूहों में अप्रत्याशित जीर्ण हल्के तनाव (UCMS) विधि के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । इस प्रोटोकॉल में, किशोर चूहों लंबे रूप से अप्रत्याशित हल्के तनाव को बदलने के लिए उजागर कर रहे हैं । मनुष्य में अवसाद की रोगजनन जैसी, चूहों किशोरावस्था की संवेदनशील अवधि के दौरान तनाव जोखिम वयस्कता में एक अवसादग्रस्तता की तरह phenotype स्पष्ट भड़काती । UCMS अवसाद की तरह व्यवहार और neuromolecular सूचकांक की विविधता पर एंटी की स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । और अधिक प्रमुख परीक्षणों में कुतर की तरह व्यवहार का आकलन करने के लिए सुक्रोज वरीयता परीक्षण (SPT) है, जो anhedonia (अवसाद के मुख्य लक्षण) को दर्शाता है । इस प्रोटोकॉल में SPT भी प्रस्तुत किया जाएगा । UCMS की क्षमता anhedonia प्रेरित करने के लिए, लंबी अवधि के व्यवहार घाटे भड़काने और जीर्ण के माध्यम से इन घाटे के उत्क्रमण सक्षम (लेकिन तीव्र नहीं) अवसाद के साथ उपचार के लिए अंय पशु प्रोटोकॉल की तुलना में प्रोटोकॉल की वैधता को मजबूत अवसाद की तरह व्यवहार उत्प्रेरण ।

Introduction

प्रमुख अवसादग्रस्तता विकार (MDD) एक दुर्बल हालत है, जो 11-16%2,3के जीवन की व्यापकता के साथ,1रोग से वैश्विक बोझ के 11वें कारण के रूप में संकेत दिया गया है । MDD रोगियों के सामाजिक और व्यावसायिक कामकाज, जीवन की गुणवत्ता, कई मानसिक और शारीरिक विकारों और मृत्यु के लिए बढ़ा जोखिम पर गंभीर दोष के साथ संबद्ध किया गया है4,5,6 , 7. MDD के लिए कई प्रभावोत्पादक pharmacotherapies और मनोवैज्ञानिक हस्तक्षेप होते हैं; हालांकि, रोगियों के तीसरे से अधिक मौजूदा चिकित्सीय विकल्प8,9,10,11के साथ छूट हासिल नहीं है । इसलिए, MDD और उपंयास दवाओं के विकास के pathophysiology की बेहतर मानचित्रण अभी भी अत्यंत महत्व के हैं । इन कार्यों को संबोधित करने के लिए वैज्ञानिक रूप से मान्य पशु मॉडलों का उपयोग करने की जरूरत है ।

अप्रत्याशित जीर्ण हल्के तनाव (UCMS) एक प्रसिद्ध चूहे को अवसाद और चिंता की तरह व्यवहार12,13,14,15के लिए प्रेरित किया प्रतिमान है । UCMS का मुख्य उद्देश्य व्यवहार घाटे (जैसे anhedonia और व्यवहार निराशा12,15) चूहों और चूहों में उत्पन्न करने के लिए है, और संभावित चिकित्सकीय औषधीय एजेंटों के लिए प्रदर्शन को बढ़ावा देने के. प्रक्रिया पहले16 Katz द्वारा शुरू की और बाद में Willner17,18द्वारा विकसित किया गया था, विशाल व्यवहार और neurobiological परिणाम याद अवसादग्रस्तता लक्षण12उपज । यह शुरू में चूहों के लिए तैयार किया गया था और बाद में13,19चूहों को समायोजित. प्रक्रिया में, किशोर जानवरों लंबे रूप से अलग अप्रत्याशित हल्के तनाव को उजागर कर रहे हैं । इसके बाद, औषधीय एजेंटों का प्रबंध किया जाता है । व्यवहार और जैविक सूचकांक उपचार समाप्ति पर प्राप्त कर रहे हैं । UCMS के बाद आयोजित अधिक प्रमुख परीक्षणों में से एक सुक्रोज वरीयता परीक्षण (SPT) है । SPT पानी के बजाय मीठा समाधान के लिए कुतर ' सहज प्राथमिकता पर आधारित है और व्यापक रूप से anhedonia12,18,20का आकलन करने के लिए एक अनिवार्य शोधों मॉडल के रूप में स्वीकार किया है, 21 (जो मानव अवसाद22,23में एक कोर लक्षण है) ।

अपने परिचय के बाद से चौथे दशक में प्रवेश करते हुए, UCMS असंख्य अध्ययनों में चूहों और चूहों पर लागू किया गया है. इन अध्ययनों के बहुमत के लिए एक विधि के रूप में UCMS कार्यरत अवसादग्रस्तता-व्यवहार की तरह12,13,21,24। अध्ययनों से भी मॉडल anxiogenic प्रभाव उत्पंन करने के लिए नियोजित किया है25,26,27,28,29। सुक्रोज और साकारीन वरीयताओं मुख्य UCMS12,18,30,31,३२,३३के बाद anhedonia का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया परीक्षण कर रहे हैं । अंय उल्लेखनीय परिणाम उपाय है कि उच्च UCMS साहित्य में शामिल कर रहे हैं: पूंछ निलंबन टेस्ट (TST)28,३४,३५, मजबूर तैरना परीक्षण (FST)28,३४ , ३६ , ३७ (दोनों को मापने के तनाव मुकाबला/व्यवहार निराशा), ओपन फील्ड टेस्ट (बहुधा; मापने खोजपूर्ण व्यवहार, चिंता की तरह व्यवहार और हरकत गतिविधि)25,28,३८, ऊंचा प्लस भूलभुलैया (EPM; चिंता की तरह व्यवहार को मापने)25,३९,४० और अतिरिक्त अवसाद को मापने परीक्षण की तरह व्यवहार, चिंता की तरह व्यवहार, संज्ञानात्मक कार्य और सामाजिक व्यवहार12 . tricyclic एंटी के जीर्ण प्रशासन (TCAs; imipramine३५,४१,४२,४३, desipramine18,४४,४५ ), tetracyclic एंटी (TeCAs; maprotiline४६,४७, mianserin४८), चुनिंदा सेरोटोनिन reuptake अवरोधकों (SSRIs; fluoxetine४६,४७,४९ , escitalopram30,५०, paroxetine५१,५२), मेलाटोनिन४३,४९, agomelatine५३, फैटी एसिड के बीच hydrolase (FAAH) अवरोध करनेवाला URB597५४ और कई प्राकृतिक यौगिकों30,३७,५०,५५,५६,५७,५८ UCMS-प्रेरित अवसादग्रस्तता और चिंता की तरह लक्षण रिवर्स करने के लिए प्रदर्शन किया । कुल मिलाकर, इन चिकित्सीय प्रभाव तीव्र उपचार के माध्यम से प्राप्त नहीं किया गया है12 (जैसे, paroxetine५१,५२, imipramine५३,५४,५९ ,६०, fluoxetine५३, agomelatine५३, URB597५४, brofaromine६०).

बचपन और किशोरावस्था के दौरान तनाव जोखिम MDD के पूर्वकाल गठन के लिए एक प्रमुख जोखिम कारक है (कई अंय मनोरोग विकारों के बीच) वयस्कता में६१,६२,६३। हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-अधिवृक्क (HPA) धुरी तनाव६४के लिए जैव व्यवहार प्रतिक्रिया विनियमन एक प्रमुख neuroendocrine प्रणाली है । बचपन और किशोरावस्था के संवेदनशील neurodevelopmental अवधि के दौरान लंबे समय तक तनाव HPA धुरी का संतुलन बिगड़ जाता है । यह बढ़ाया सहानुभूति सक्रियण, असंतुलित जेट और आराम राज्य के माध्यम से स्थाई hypercortisolemia के एक राज्य भड़काने सकता है; इस प्रकार, प्रतिपादन व्यक्तियों अवसाद या चिंता से संबंधित psychopathologies६५,६६,६७,६८। UCMS पर्याप्त रूप से इस रोगजनन का अनुवाद करता है: ' चूहों किशोरावस्था के दौरान तनाव आवेदन एक दीर्घकालिक अवसाद की तरह संवेदनशीलता लाती है । इसके अलावा, व्यवहार UCMS द्वारा प्रेरित घाटे, HPA धुरी कार्य में महत्वपूर्ण परिवर्तन द्वारा underlain है (जैसे, हिप्पोकैम्पस मस्तिष्क में कमी के कारण से व्युत्पंन neurotrophic फैक्टर [बीडीएनएफ; एक उच्च संतुलन में शामिल प्रोटीन HPA अक्ष के६९,७०]30, या रक्त७१,७२के लिए corticosterone स्राव के विनियमन बिगड़ने से),12मनुष्यों में pathophysiology के लिए समानता में, ५०,७३.

UCMS अवसाद के लिए एक मॉडल के रूप में कई मजबूत सुविधाओं है: (i) anhedonia के सं (जो MDD23,७४के एक endophenotype माना जाता है) जैसे ; (ii) UCMS व्यवहार निराशा, कम सामाजिक व्यवहार, फर राज्य में गिरावट और३४से अधिक के रूप में अवसाद जैसे व्यवहार की व्यापक विविधता का आकलन करने के लिए सक्षम बनाता है; और (iii) जीर्ण (2-4 सप्ताह), लेकिन तीव्र नहीं, तनाव जोखिम निम्नलिखित अवसाद के प्रशासन एक ही एजेंटों द्वारा मानव रोगियों में प्राप्त प्रभाव के समानांतर एक लंबी चिकित्सीय प्रभाव उत्पन्न कर सकता है30,७५ ,७६,७७.

ये फीचर्स डिप्रेशन के अन्य एनिमल मॉडल्स की तुलना में UCMS की वैधता को मजबूत बनाते हैं । FST७८ और TST७९ दो मॉडल है कि या तो या प्रेरित करने के लिए उपयोग किया जाता है अवसाद की तरह व्यवहार का आकलन कर रहे हैं । अवसादग्रस्तता की तरह व्यवहार उत्प्रेरण के लिए मॉडल के रूप में वे UCMS की तुलना में स्पष्ट कमी है; वे दीर्घकालिक व्यवहार में परिवर्तन संकेत नहीं है और केवल तीव्र तनाव के लिए एक समायोजन के बजाय एक टिकाऊ अवसादग्रस्तता-७६अभिव्यक्ति की तरह उपज को प्रतिबिंबित हो सकता है ।

अवसाद का एक वैकल्पिक पशु मॉडल सामाजिक हार मॉडल है । FST और TST इस मॉडल (UCMS की तरह) के विपरीत क्रोनिक तनाव के आवेदन की आवश्यकता होती है (आईडी est [अर्थात्], पशु के आवर्तक व्यक्तिपरक प्रमुख समकक्षों के साथ सामाजिक मुठभेड़ों aversive के लिए)७६,७७ , ८० , ८१ , ८२. सामाजिक हार मॉडल का मुख्य लाभ यह है कि यह तनाव के रूप में सामाजिक उत्तेजनाओं को रोजगार देता है, इस प्रकार मानव अवसाद के रोगजनन में मनोसामाजिक तनाव की भूमिका को प्रतिबिंबित करता है. UCMS के लिए इसी तरह, सामाजिक हार मॉडल लंबे समय तक अवसादग्रस्तता-व्यवहार और neuroendocrine परिवर्तन की तरह बटोरता है । फिर भी UCMS के समानांतर, सामाजिक हार प्रेरित घाटे जीर्ण के माध्यम से उलट जा सकता है, लेकिन तीव्र नहीं, अवसाद के प्रशासन । कुल मिलाकर, अवसाद के pathophysiology की जांच के लिए पूर्व नैदानिक उपकरणों के रूप में UCMS और सामाजिक हार दोनों के उपयोग के लिए बड़ा समर्थन है७६,७७,८१,८२ . हालांकि, सामाजिक हार मॉडल की एक प्रमुख कमी यह है कि यह केवल पुरुष कुतर पर लागू किया जा सकता है, के रूप में महिलाओं के एक दूसरे८३की ओर पर्याप्त आक्रामक व्यवहार प्रदर्शित नहीं है । इसके विपरीत, UCMS दोनों पुरुष और मादा चूहों३४पर कई अवसादग्रस्तता की तरह प्रभाव का उत्पादन करने के लिए दिखाया गया है ।

पूर्वानुमानित जीर्ण हल्के तनाव (PCMS) एक और कुतर मॉडल है कि संयम तनाव28,८४,८५,८६,८७के लिए दैनिक आवर्ती जोखिम के एक आहार लागू करता है । कई अध्ययनों से पता चला है कि PCMS वृद्धि की चिंता की तरह व्यवहार28,८७; हालांकि, वहां विरोधाभासी रिपोर्ट विज़-à-विज़ PCMS की क्षमता के लिए लंबे समय तक अवसादग्रस्त व्यवहार की तरह प्रेरित कर रहे हैं । UCMS के विपरीत, PCMS कम संतोषजनक अपने एक anhedonic को प्रेरित करने की क्षमता की चर्चा करते हुए परिणाम का उत्पादन किया है-राज्य की तरह28,८४,८६। यह मानव phenomenology के अनुरूप है, जिसमें अप्रत्याशित तनाव के पूर्वानुमान लगाने वालों की तुलना में अधिक हानिकारक है८८

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Protocol

सभी तरीकों यहां वर्णित संस्थागत पशु देखभाल और अकादमिक कॉलेज तेल-अवीव-Yaffo की उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है ।

1. पशु

  1. का प्रयोग करें पूर्व किशोर (यानी, 3 सप्ताह पुरानी) कैंसर अनुसंधान संस्थान (ICR) पुरुष चूहों नस्ल ।
  2. दो समान रूप से आकार तनाव समूह के लिए चूहों यादृच्छिक करें (UCMS बनाम भोली). प्रति उपचार समूह 15 चूहों का उपयोग करें (उदा: यदि 3 औषधीय उपचार समूह है ९० चूहों समग्र का उपयोग करें; 2 [UCMS बनाम भोली] 3 × [उपचार] × 15 [चूहों] = ९०)
  3. तनाव समूह के अनुसार घर चूहों; अर्थात्, भोली चूहों के साथ घर भोले चूहों केवल, और UCMS समूह से चूहों के साथ घर UCMS समूह चूहों केवल.
  4. मानक घर पिंजरों में घर जानवरों (30 × 15 × 14 सेमी; पिंजरे प्रति 5 चूहों; प्रत्येक सभी उपचार समूहों से चूहों युक्त पिंजरे [यानी, औषधीय उपचार समूह]; प्रयोग भर में एक ही पिंजरे में चूहों को बनाए रखने के अलावा जब अंयथा संकेत दिया) .
  5. ताजा चूरा के साथ घर पिंजरों भरें (सप्ताह में दो बार प्रतिस्थापित) और संवर्धन के लिए कपास ऊन का एक टुकड़ा जोड़ें ।
  6. घर के पिंजरे में एक सप्ताह के एक acclimation अवधि के लिए घर जानवरों । (UCMS चाले अनुप्रयोगों के दौरान) को छोड़कर, libitum चाउ और पानी के लिए विज्ञापन एक्सेस की अनुमति दें ।
  7. एक सुसंगत 12 ज प्रकाश/अंधेरे चक्र रखें (सिवाय जब अंयथा संकेत दिया) । UCMS प्रक्रियाओं के दौरान अपने घर पिंजरे में भोले चूहों को बनाए रखने.

2. UCMS

  1. UCMS प्रोटोकॉल के एकमात्र उपयोग के लिए, प्रयोगशाला में एक अलग कमरे नामित ।
  2. डिजाइन एक 4 सप्ताह चाले आहार जिसमें सात तनाव में से प्रत्येक (यानी, गीले पिंजरे, भीगा हुआ चूरा, झुका हुआ पिंजरा, खाली पिंजरा, सामाजिक तनाव, चूहे संयम और प्रकाश/अंधेरे चक्र के विघटन) एक सप्ताह में एक बार उपयोग किया जाता है, एक अलग दिन पर प्रत्येक सप्ताह (के लिए एक संभव डिजाइन पूरक तालिका 1 देखें)
  3. acclimation के 1 सप्ताह के बाद (१.६ देखें) तनाव आवेदन आरंभ (यह सुनिश्चित करें कि चूहों लगभग 4 सप्ताह पुराने हैं) ।
  4. प्रत्येक दिन, तनाव से पहले आवेदन, आवास कमरे से UCMS समूह के पिंजरों UCMS कमरे में स्थानांतरण ।
  5. तनाव वाले अनुप्रयोगों के दौरान, UCMS समूह के लिए कुतर चाउ और पानी के लिए ब्लॉक का उपयोग (प्रकाश के उत्क्रमण के दौरान छोड़कर/
    नोट: यह मूल पिंजरे ढक्कन के प्रतिस्थापन द्वारा प्राप्त किया जा सकता है (जो भोजन और पानी होता है), एक खाली पिंजरे ढक्कन के लिए ।
  6. पहले डिजाइन आहार के अनुसार निंनलिखित तनाव लागू करें (२.२ देखें):
    1. गीला पिंजरे
      1. चूहों एक खाली पिंजरे में उनके घर पिंजरे समकक्षों के साथ एक साथ प्लेस (यानी, चूरा के बिना पिंजरे).
      2. पानी के साथ खाली पिंजरे 24 ± 1 डिग्री सेल्सियस पर रखा 1 सेमी की गहराई के लिए भरें (चूहों पर सीधे पानी छलकने से बचने के लिए सावधानी के साथ डालो) । चूहों को गीले पिंजरे में 4 ज के लिए रखें ।
      3. इसके बाद के संस्करण एक गर्मी चिराग, यह और कागज तौलिया बिस्तर के तहत एक हीटिंग पैड के साथ एक अलग व्यक्ति क्षणिक सुखाने पिंजरे में प्रत्येक माउस स्थानांतरण । तापमान ३७ डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं है सत्यापित करने के लिए क्षणिक पिंजरे में एक थर्मामीटर प्लेस ।
      4. क्षणिक पिंजरे में प्रत्येक माउस रखें जब तक यह सूखा है और लग रहा है (लगभग 10-15 मिनट) मज़बूत । एक ही समकक्षों के साथ घर पिंजरे में चूहे लौटें ।
    2. भीगा चूरा
      1. पानी डालने के 24 ± 1 डिग्री सेल्सियस से घर पिंजरे में रखा जब तक चूरा मामूली भीगा है (चूहों पर सीधे पानी छलकने से बचने के लिए सावधानी के साथ डालो) ।
        नोट: पानी डालने से पहले ताजे चूरा का इस्तेमाल करना जरूरी नहीं है ।
      2. 4 एच के बाद, 2.6.1.3 में वर्णित के रूप में क्षणिक पिंजरों में सूखे चूहों । ताजा चूरा के साथ एक बाँझ पिंजरे में घर पिंजरे समकक्षों के साथ चूहों प्लेस.
    3. झुका पिंजरा
      1. 4 एच के लिए दीवार के खिलाफ ४५ डिग्री पर झुकाव पिंजरों ।
        नोट: इस अवधि के दौरान, चाले चूहों उनके समकक्षों के साथ अपने घर पिंजरे में रहते हैं ।
    4. खाली पिंजरा
      1. स्थानांतरण चूहों, उनके विशिष्ट घर पिंजरे समकक्षों के साथ, घर पिंजरे से 4 एच के लिए एक खाली पिंजरे के लिए ।
    5. सामाजिक तनाव
      1. स्थानांतरण चूहों, उनके विशिष्ट घर पिंजरे समकक्षों के साथ साथ, घर पिंजरे से एक पिंजरे जो चूहों के एक अलग समूह द्वारा कम 3 डी की अवधि के लिए घर में था से पहले चाले आवेदन करने के लिए । चूहों को अपरिचित पिंजरे में 4 ज के लिए रखें ।
        नोट: अनिश्चितता से बचने के लिए एक पिंजरे पर एक स्टीकर जगह चूहों मूल पिंजरे संकेत मिलता है ।
    6. चूहों का संयम
      1. प्रत्येक माउस को अलग से एक साफ माउस निरोधक में जगह 4 घंटे के लिए एक ही समकक्षों के साथ घर पिंजरे में चूहों वापसी ।
    7. प्रकाश के विघटन/
      1. स्थानांतरण चूहों, उनके घर पिंजरे में उनके विशिष्ट समकक्षों के साथ, UCMS कमरे में । पर प्रकाश रखें, के लिए 24 लगातार एच ।
        नोट: केवल इस तनाव के दौरान चूहों को कुतर चाउ और पानी के लिए विज्ञापन libitum पहुंच की अनुमति दी जाएगी ।
  7. निंनलिखित चाले आवेदन, UCMS कमरे से आवास कमरे में UCMS समूह के वापस पिंजरों ।
  8. तनाव जोखिम के 4 हफ्तों के दौरान, उनके घर आवास कमरे में स्थित पिंजरों में भोली समूह रखो ।
    नोट: भोली चूहों UCMS कमरे में स्थानांतरित नहीं कर रहे है क्योंकि अंय तनाव प्रक्रिया के दौर से गुजर चूहों के लिए जोखिम एक stressogenic प्रभाव पैदा कर सकता है, यहां तक कि सीधे जोखिम के बिना चाले८९,९०
  9. UCMS के दौरान पशुओं का निरीक्षण
    1. तनाव वाले अनुप्रयोगों के दौरान (प्रकाश/अंधेरे चक्र के विघटन के दौरान) एक अनुभवी प्रयोगकर्ता द्वारा हर 30 मिनट चूहों की निगरानी. यदि एक असामान्य संकट (जैसे, कांप, सुस्ती, आंदोलन की कमी) मनाया जाता है (विशेष सावधानी संभावित हाइपोथर्मिया पर ' गीले पिंजरे ' और ' भीगा हुआ चूरा ' के दौरान रखा जाना चाहिए) तनाव से माउस को तुरंत राहत ।
    2. प्रत्येक माउस घावों या अंय शारीरिक या व्यवहार विषमता के लिए दैनिक निरीक्षण । यदि ऐसे निरीक्षण प्रयोगशाला के पशुचिकित्सा के साथ परामर्श करने के लिए तय है कि क्या माउस प्रयोग से बाहर रखा जाना चाहिए रहे हैं ।
    3. प्रत्येक माउस हर 3 दिन तौलना । शरीर के वजन में मजबूत कमी (यानी, > 10% बेसलाइन वजन से कमी या > पिछले मापा वजन से 15% कमी) प्रयोगशाला के पशुचिकित्सा को सूचित किया जाना चाहिए और माउस प्रयोग से बाहर रखा जाना चाहिए ।

3. अवसादों के लिए स्क्रीनिंग

  1. दिन पर UCMS प्रोटोकॉल की समाप्ति के बाद, ख्यात चिकित्सीय औषधीय एजेंटों (यानी, escitalopram [15 मिलीग्राम/kg; आईएफसआई; 3 सप्ताह; प्रति दिन प्रशासन पर]30,५०, या उपंयास हर्बल उपचार [NHT; 30 mg/किग्रा; आईएफसआई; 3 सप्ताह; प्रति दिन एक प्रशासन]30,५०) ।
    नोट: अन्य दवाओं की खुराक के लिए इस प्रोटोकॉल में शामिल नहीं देखें:flouxetine ४६, ४७, ४९, ८९, ९०, paroxetine५१,imipramine 35, 41, 42, 43, desipramine18, 44, 45, maprotiline46, 47, mianserin४८, मेलाटोनिन43, 49, URB59754 और अन्य प्राकृतिक यौगिकों37, 55, 56, 57, 58.
    नोट: NHT एक हर्बल फार्मूला है कि हमारी प्रयोगशाला में विकसित किया गया है । यह 4 घटकों से बना है:
    Crataegus Pinnatifida, Triticum Aestivum, लिलियम ब्राउनी, आणि Fructus Zizyphi ज़ज्बे. सूत्र के घटकों को भंग करके तैयार किया जाता है (फ्रीज-सूखे granules के रूप में अधिग्रहीत) एक साथ खारा में 1% DMSO ०.४७ मिलीग्राम/एमएल (प्रत्येक)27, 50के एक अंतिम एकाग्रता देने के लिए ।
  2. नियंत्रण उपचार समूह शामिल करें और खारा (आईएफसआई; 3 सप्ताह; प्रति दिन एक इंजेक्शन) इस समूह के लिए ।
  3. चूहों के वजन के अनुसार दवा खुराक की गणना, के रूप में पूर्ववर्ती वजन में प्राप्त की.
  4. प्रशासन दवाओं जीर्ण (आमतौर पर intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से प्रति दिन एक दवा प्रशासन [आईएफसआई] 3 सप्ताह के लिए) ।
    नोट: आईएफसआई इंजेक्शन से पहले चूहों को anesthetize की कोई जरूरत नहीं है ।
  5. हर 3 डी चूहों वजन करने के लिए जारी; आखिरी तौल अंतिम दवा प्रशासन से पहले 3 डी होना चाहिए ।

4. SPT में सुख-विषयक टोन का आकलन

  1. उपचार के चरण के बाद, घर पिंजरे से प्रत्येक माउस को हटाने और यह व्यक्तिगत रूप से एक ताजा चूरा और संवर्धन के लिए कपास ऊन का एक टुकड़ा से भरा पिंजरे में जगह है ।
  2. दो बोतलें, आसुत पानी के साथ एक और 2% सुक्रोज समाधान के साथ एक और तैयार (अंय पदार्थ इस्तेमाल किया जा सकता है: उदा, साकारीन९१,30इथेनॉल) ।
    नोट: प्रत्येक बोतल द्रव की एक ही मात्रा में शामिल होना चाहिए । तरल पदार्थ की शुरूआत से पहले न तो पूर्व acclimation और न ही आदी होना चरणों की जरूरत है ।
  3. दो बोतलों तौलना और उंहें पिंजरे के ढक्कन पर सेट के लिए चूहों विज्ञापन libitum की अवधि के लिए दोनों के समाधान के लिए उपयोग की अनुमति (निंनलिखित में से एक): 24/48/72/144 एच ।
  4. पिंजरे के ढक्कन के दोनों सिरों पर दो बोतलें रखें । दो बोतलों के बीच जगह कुतर चाउ भोजन के लिए विज्ञापन libitum पहुंच अनुमति देते हैं ।
  5. हर 24 घंटे की बोतलों की जगह, ताजा तरल पदार्थ के साथ बाँझ बोतलों का उपयोग.
    नोट: के रूप में चूहों व्यक्तिगत रूप से घर में है वहां कोई चूरा १४४ एच९२के बाद भी बदलने की जरूरत है ।
  6. स्विच ' नलिका पदों हर 12 घंटे (जब परीक्षण की अवधि 24 घंटे है) या एक बार एक दिन (जब परीक्षण अवधि 24 घंटे से अधिक है) के लिए संभावना है कि परिणाम स्थिति वरीयता द्वारा counterbalance थे ।
  7. प्रत्येक बोतल से खपत का अनुमान लगाने के लिए प्रत्येक दिन की बोतलें तौलना ।
  8. कुल द्रव सेवन से सुक्रोज सेवन के theratio के रूप में सुक्रोज वरीयता की गणना (यानी, सुक्रोज/सुक्रोज + पानी).

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Representative Results

आदेश में अवसाद की तरह घाटे उत्प्रेरण के लिए UCMS प्रक्रिया की प्रभावकारिता पुष्ट करने के लिए, एक हेरफेर की जांच का आयोजन किया गया था । पुरुष ICR नस्ल चूहों बेतरतीब ढंग से या तो UCMS या भोली शर्तों (4 सप्ताह, के रूप में प्रोटोकॉल २.२ में वर्णित) को सौंपा गया । बाद में, SPT (6 दिन, जैसा कि प्रोटोकॉल 4 में वर्णित है) का आकलन करने के लिए किया गया था कि क्या चूहों UCMS के दौर से गुजर सुख-विषयक घाटे का प्रदर्शन के बाद । कुछ ही समय बाद, चूहों और बलिदान हिप्पोकैम्पस बाहर बीडीएनएफ के लिए पूरी तरह से विच्छेदित किया गया था (एक प्रोटीन अत्यधिक७०अवसाद,९३) एंजाइम के माध्यम से मूल्यांकन से जुड़े immunosorbent परख (एलिसा) के pathophysiology में फंसाया । अध्ययन डिजाइन के लिए चित्रा 1 देखें ।

स्वतंत्र नमूनों टीपरीक्षण उनके सुक्रोज वरीयता में समूहों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का पता चला (टी(23) = २.३२, पी < ०.०५) । UCMS समूह भोली समूह की तुलना में कम सुक्रोज वरीयता का प्रदर्शन किया ( चित्रा 2aदेखें) । यह पता चलता है कि UCMS प्रोटोकॉल anhedonia उत्प्रेरण में प्रभावी था । हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तरों पर स्वतंत्र नमूनों टीपरीक्षण समूहों (टी(23) = २.४३, पी < ०.०५) के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का पता चला । UCMS समूह भोली समूह की तुलना में कम हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तर का प्रदर्शन किया ( चित्र बीसी देखें) । यह पता चलता है कि UCMS प्रोटोकॉल हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तर में diminution के नेतृत्व में, के रूप में मानव अवसाद९४में स्पष्ट है ।

हमारे प्रयोगशाला से एक और अध्ययन में, हम UCMS प्रोटोकॉल निंनलिखित दो दवाओं के संभावित एंटी तरह के प्रभाव की जांच की । 30 UCMS प्रक्रिया के बाद (के रूप में वर्णित 2.) पुरुष ICR नस्ल चूहों क्रोनिक प्राप्त (3 सप्ताह) SSRI escitalopram के साथ उपचार (15 मिलीग्राम/किग्रा; आईएफसआई), NHT (30 mg/आईएफसआई; NHT के संबंध में अधिक जानकारी के लिए देखें संदर्भ25 ,30,५०,७५) या खारा है । उपचार चरण के बाद, SPT का आयोजन किया गया था और हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तर का मूल्यांकन किया गया । अध्ययन डिजाइन के लिए चित्रा 3 देखें ।

सुक्रोज वरीयता पर प्रसरण (ANOVA) का दो-तरफ़ा विश्लेषण महत्वपूर्ण उपचार (f(2, 92) = ४.०१, p < ०.०५) और UCMS × उपचार सहभागिता (f(2, 92) = ४.९२, p < ०.०१) प्रभाव से पता चला (देखें चित्र 4a) । Sidak पोस्ट-हॉक विश्लेषण से पता चला कि UCMS-खारा समूह भोली-खारा समूह की तुलना में सुक्रोज वरीयता में एक महत्वपूर्ण कमी का प्रदर्शन किया (पी < ०.००१); कोई कमी नहीं UCMS में मनाया गया-escitalopram और UCMS-NHT समूहों में भोली समूहों की तुलना में (महत्वपूर्ण नहीं [एन एस]) । साथ ही, UCMS-खारा समूह दोनों UCMS-escitalopram (p < ०.०५) और UCMS-NHT (p < ०.००१) समूहों की तुलना में घटी हुई सुक्रोज वरीयता का प्रदर्शन किया । ये सुझाव है कि दोनों escitalopram और NHT UCMS-प्रेरित anhedonia सामान्यीकृत ।

हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तरों पर दो-तरफा ANOVA से पता चला महत्वपूर्ण UCMS (f(1, 22) = ८.९२, p < ०.०१), उपचार (f(2, 22) = १८.३६, p < ०.००१) और UCMS × उपचार इंटरैक्शन (f(2, 22) = ५.१९, p < ०.०५) प्रभाव ( चित्र 4Bदेखें) । Sidak पोस्ट-हॉक विश्लेषण से पता चला कि UCMS-खारा समूह भोली-खारा समूह की तुलना में हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तर में एक महत्वपूर्ण कमी का प्रदर्शन किया (p < ०.००१); UCMS-escitalopram में और UCMS-NHT समूहों में भोले समूहों (एन एस) की तुलना में कोई समान कमी नहीं देखी गई । साथ ही, UCMS-खारा समूह दोनों UCMS-escitalopram और UCMS-NHT समूह (p < ०.००१ दोनों विषमताओं में) की तुलना में घटी हुई हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तर का प्रदर्शन किया । ये सुझाव है कि दोनों escitalopram और NHT हिप्पोकैम्पस में बीडीएनएफ के स्तर में UCMS प्रेरित कमी सामान्यीकृत ।

Figure 1
चित्रा 1: एक संभव प्रयोगात्मक डिजाइन चित्रण चित्र । acclimation के 1 सप्ताह के बाद, चूहों बेतरतीब ढंग से या तो UCMS या भोली शर्तों को सौंपा गया (4 सप्ताह बनाए) । तत्पश्चात सुक्रोज वरीयता की जांच की गई और चूहों को बीडीएनएफ असेसमेंट के लिए तैयार किया गया । SPT: सुक्रोज वरीयता परीक्षण; सीडी: ग्रीवा अव्यवस्था । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: सुक्रोज वरीयता और हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तरों पर UCMS के प्रभाव । (क) चूहों के अधीन ४ सप्ताह के UCMS ने भोले चूहों की तुलना में सुक्रोज वरीयता में उल्लेखनीय कमी का प्रदर्शन किया. (ख) UCMS के 4 सप्ताह के अधीन चूहों भोले चूहों की तुलना में हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तर में एक महत्वपूर्ण कमी का प्रदर्शन किया । n = 12-प्रति समूह 13 चूहों । परिणाम के रूप में व्यक्त कर रहे है ± SEM. *p < ०.०५ कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें

Figure 3
चित्रा 3: एक संभव प्रयोगात्मक डिजाइन चित्रण एक चित्र । acclimation के 1 सप्ताह के बाद, चूहों बेतरतीब ढंग से या तो UCMS या भोली शर्तों को सौंपा गया (4 सप्ताह बनाए) । बाद में, चूहों खारा के साथ जीर्ण उपचार प्राप्त किया, escitalopram (15 मिलीग्राम/किग्रा; आईएफसआई) या NHT (30 मिलीग्राम/kg; आईएफसआई), स्थाई 3 सप्ताह (प्रति दिन एक प्रशासन) । उपचार के बाद सुक्रोज वरीयता की जांच की गई और चूहों को बीडीएनएफ आकलन के लिए तैयार किया गया । SPT: सुक्रोज वरीयता परीक्षण; सीडी: ग्रीवा अव्यवस्था । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: सुक्रोज वरीयता और हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तरों में UCMS-प्रेरित कटौतियों पर escitalopram और NHT के साथ जीर्ण उपचार के प्रभाव । () escitalopram और NHT दोनों ने सुक्रोज वरीयता में UCMS-प्रेरित कमी को रोका; n = 15-समूह प्रति 17 चूहों । () दोनों escitalopram और NHT ने हिप्पोकैम्पस बीडीएनएफ स्तरों में UCMS-प्रेरित कमी को रोका; n = 4-प्रति समूह 6 चूहों । परिणाम के रूप में व्यक्त कर रहे है मतलब ± SEM *p < ०.०५ * * *p < ०.००१ । यह आंकड़ा हमारी प्रयोगशाला से एक पहले प्रकाशित अध्ययन से संशोधित किया गया है और PLoS एक ओपन एक्सेस लाइसेंस ("CC-BY"), जो30पुनर्मुद्रण की अनुमति देता है के तहत पुनर्मुद्रित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

पूरक तालिका 1: अप्रत्याशित जीर्ण हल्के तनाव (UCMS) की अनुसूची । कृपया यहां क्लिक करें इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए ।

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Discussion

Insofar के रूप में MDD एक व्यापक अत्यधिक दुर्बल विकार है, केवल आंशिक रूप से वर्तमान चिकित्सकीय विकल्प द्वारा संबोधित किया, बेहतर उपचार के लिए वैज्ञानिक खोज अभी भी एक मुद्दा दबाने है । मनोवैज्ञानिक तकनीकों में नवाचारों के साथ साथ, अतिरिक्त pharmacotherapies रोगियों जो मौजूदा दवाओं का जवाब नहीं है के बड़े हिस्से के लिए आवश्यक हैं । अवसाद के लिए सावधानीपूर्वक पशु मॉडल इस कार्य में प्रमुख तत्व हैं । ऐसे मॉडल अभिनव एंटी के लिए स्क्रीन की सुविधा और विकार के एटियलजि की समझ का विस्तार । UCMS अवसाद के अधिक प्रमुख कुतर मॉडलों में से एक है । ' इसका कद विशाल प्रकाशनों और उल्लेखनीय अंतर्दृष्टि द्वारा प्रदर्शित किया जाता है12,18,८२,९५,९६,९७

Anhedonia MDD22,23,७४के मुख्य लक्षणों में से एक है । एक और अधिक गंभीर anhedonic टोन MDD रोगियों७४,९८के लिए गरीब रोग का निदान के साथ जुड़ा हुआ है । अवसाद के एक मॉडल के रूप में UCMS की एक प्रमुख शक्ति SPT में उदाहरण के रूप में31 anhedonia उत्पन्न करने की क्षमता है. सुक्रोज विभिन्न कुतर प्रजातियों के लिए एक सहज मजबूत है५१,५२,५९, ९९; यह सुख-विषयक टोन के एक यथार्थवादी मॉडल के रूप में SPT के समग्र समर्थन को कुतर14,31,१००में बताते हैं । अवसाद के किसी भी जानवर मॉडल में anhedonia की फोकल भूमिका के कारण, यह सुझाव दिया गया है कि जब एक प्रयोगशाला में UCMS को लागू करने पर विचार, पहला कदम प्रक्रिया एक anhedonic राज्य12प्रेरित करने की क्षमता का सत्यापन होना चाहिए । यह प्रयोगशालाओं में एक बेहतर मानकीकरण की सुविधा होगी और भविष्य के अध्ययन के लिए नींव हो सकता है विकार पर अधिक प्रकाश बहा ।

एक और विशेषता है कि अवसाद का एक मॉडल के रूप में UCMS की वैधता का समर्थन करता है कि व्यवहार और आणविक UCMS द्वारा प्रेरित परिवर्तन जीर्ण द्वारा उलट रहे हैं, लेकिन तीव्र नहीं, एजेंटों है कि पहले से प्रभावी के रूप में सत्यापित किया गया है के साथ उपचार एंटी12। लंबी चिकित्सीय प्रभाव मनुष्यों में अवसाद के प्रभाव के समान है, जो आमतौर पर केवल 2-3 सप्ताह के उपचार के बाद प्रकट शुरू१०१,१०२। इस संबंध में, UCMS FST७८ और TST१०३, जिसमें प्रभाव भी तीव्र उपचार के बाद प्राप्त कर रहे है की तुलना में एक बेहतर चेहरा वैधता अधिकारी । TST और FST के विपरीत, इस कमी अवसाद के सामाजिक हार मॉडल में स्पष्ट नहीं है, जो (UCMS के साथ) अवसाद के एक उत्कृष्ट पशु मॉडल के रूप में बाहर खड़े हो जाओ । हालांकि, FST और TST, UCMS और अंय पुरानी तनाव मॉडल की तुलना में अधिक लंबा और महंगा कर रहे हैं ।

उल्लेखनीय चूहों उपभेदों UCMS अध्ययन में नियोजित किया गया है । अधिक बार उपभेदों के अलावा C57BL/6 और बालब/मुख्य ंयायाधीश21,३४। हम उपयोग किया है पुरुष ICR के रूप में कई अध्ययनों ने इस तनाव में UCMS की क्षमता का प्रदर्शन किया चूहों को पैदा करना । इसके अलावा, ICR के उपयोग के लिए चूहे की पारिस्थितिकी वैधता सिलेंडर, इस तनाव की आनुवंशिक परिवर्तनशीलता जानवरों के बीच उच्च के कारण (ट्रांसजेनिक चूहों उपभेदों की तुलना में)30,७५,१०४ , १०५ , १०६.

अंय दवाओं का सुझाव दिया खुराक के लिए इस प्रोटोकॉल में शामिल नहीं है, लेकिन अंय UCMS प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया गया देखें: flouxetine४६,४७,४९,१०४,१०५, paroxetine५१, imipramine३५,४१,४२,४३, desipramine18,४४,४५, maprotiline४६,४७, mianserin४८, मेलाटोनिन४३,४९, URB597५४ और अन्य प्राकृतिक यौगिकों३७,५५,५६,५७,५८ .

वहां कई अतिरिक्त परिणाम UCMS प्रोटोकॉल में अक्सर लागू उपाय कर रहे हैं, उनमें से: (i) FST: व्यवहार निराशा के लिए एक उपाय (देखें संदर्भ७८ प्रोटोकॉल के लिए रेखांकित); (ii) TST: व्यवहार निराशा के लिए एक और उपाय (देखें प्रोटोकॉल के लिए संदर्भ१०३ रेखांकित); (iii) छप परीक्षण और कोट राज्य के मूल्यांकन: व्यवहार और उदासीनता के ख्यात उपायों को संवारने के दो संकेतक (देखें संदर्भ१०७ प्रोटोकॉल के लिए रेखांकित); (iv) सुजनता/सामाजिक नवीनता के लिए वरीयता: सामाजिक व्यवहार के लिए उपाय१०८ (देखें संदर्भ१०९ प्रोटोकॉल के लिए रेखांकन); और (v) यौन व्यवहार: सुख-विषयक टोन के लिए एक और उपाय (संदर्भ७५ प्रोटोकॉल के लिए देखें) । इसके अलावा, UCMS neuromolecular, अंत-स्रावी और अंय जैविक अवसाद के लिए प्रासंगिक उपायों का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है५०,७२,११०,१११,११२, ११३ , ११४ , ११५ , ११६ (विशेष रूप से, देखें११७,११८ एलिसा प्रोटोकॉल के माध्यम से बीडीएनएफ आकलन के लिए संदर्भ) ।

UCMS प्रोटोकॉल के भीतर कई महत्वपूर्ण कदम हैं: (i) यह महत्वपूर्ण है कि सभी उपचार समूहों से चूहों को एक साथ घर में और नहीं अलग पिंजरों में किया जाएगा । उदाहरण के लिए, अगर वहां 3 उपचार समूह (जैसे, escitalopram, NHT, और खारा) वहां समूहों के 2 से 2 चूहों और प्रत्येक पिंजरे में शेष समूह से 1 माउस होगा । संकर समूह आवास संभावना है कि परिणाम आवास की स्थिति से underlain थे और नहीं उपचार के प्रति एसईको विफल कर देंगे । (ii) भोले चूहों तनाव माउस से अलग से घर होना चाहिए, के बाद से बल चूहों के साथ आवास तनावपूर्ण है९०,११९,१२० और, इसलिए, बाधा या तनाव हेरफेर क्षीण करना सकता है. (iii) पिछले UCMS प्रोटोकॉल समूह आवास३२,१२१के बजाय एकल आवास का निर्देश दिया है; हम बाद एक आवास के रूप में सुझाव दिया है और चूहों और चूहों१२२,१२३,१२४,१२५में तनाव को संवेदनशीलता का कारण हो सकता है । (iv) UCMS अनुसूची एक सप्ताह में एक बार (यानी, प्रत्येक तनाव के लिए यादृच्छिक जोखिम) अनिश्चितता सुनिश्चित करने के लिए लगन से डिजाइन किया जाना चाहिए; हालांकि, जब तक अनिश्चितता रखी जाती है तब तक प्रयोग के दौरान शेड्यूल्स को संशोधित किया जा सकता है ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखक वीडियो उत्पादन में उसकी सहायता के लिए Gali Breuer शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । इस शोध को इस्राइल के विज्ञान मंत्रालय, प्रौद्योगिकी एवं अंतरिक्ष (ग्रांट no. ३१३५५२) द्वारा समर्थित किया गया था, जिसे नेशनल इंस्टिट्यूट फॉर Psychobiology ने इजरायल में (निपी-208-16-17b) और ओपन यूनिवर्सिटी फाउंडेशन द्वारा समर्थन दिया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Heating lamp Ikea AA-19025-3
Heating pillow Sachs EF-188B
Mice restrainer
Portable electronic balance (*.** g)
Standard rubber stopper, size 5 Ancare #5.5R To avoid spillage during SPT
Straight open drinking tube (2.5") Ancare OT-100 To avoid spillage during SPT (insert drinking tube into rubber stopper)
2% sucrose solution
50 mL conical centrifuge tube For the SPT
Pre-adolescent (approximately 20-days old) ICR outbred mice Envigo Hsd:ICR (CD-1)

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