Temporal analys av det kärn-till-Cytoplasmatisk translokationen av en Herpes Simplex Virus 1 Protein av Immunofluorescerande konfokalmikroskopi

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

ICP0 genomgår kärn-till-Cytoplasmatisk translokation vid HSV-1 infektion. Den molekylära mekanismen av denna händelse är inte känd. Här beskriver vi användningen av confocal Mikroskop som ett verktyg för att kvantifiera ICP0 rörelse i HSV-1 infektion, som lägger grunden för kvantitativt analysera ICP0 flyttning i framtida mekanistiska studier.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Samrat, S. K., Gu, H. Temporal Analysis of the Nuclear-to-cytoplasmic Translocation of a Herpes Simplex Virus 1 Protein by Immunofluorescent Confocal Microscopy. J. Vis. Exp. (141), e58504, doi:10.3791/58504 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Infekterad cell protein 0 (ICP0) av herpes simplex virus 1 (HSV-1) är en omedelbar tidiga protein som innehåller en RING-typ E3 ubiquitin ligase. Den ansvarar för proteasomen degraderingen av värd begränsande faktorer och efterföljande viral genen aktivering. ICP0 innehåller en kanonisk cellkärnelokalisering sekvens (NLS). Det in i kärnan omedelbart efter de novo syntes och exekverar dess anti värd försvar funktioner främst i kärnan. Dock senare i infektion finns ICP0 enbart i cytoplasman, vilket tyder på förekomsten av en kärn-till-Cytoplasmatisk flyttning under HSV-1 infektion. Förmodligen kan ICP0 flyttning ICP0 att modulera dess funktioner enligt dess subcellulär platser på olika infektion faser. För att avgränsa den biologiska funktionen och reglerande mekanism av ICP0 kärn-till-Cytoplasmatisk translokation, modifierade vi en Immunofluorescerande mikroskopi metod för att övervaka ICP0 människohandel under HSV-1 infektion. Detta protokoll innebär Immunofluorescerande färgning, confocal Mikroskop imaging, och kärn vs. cytoplasmisk fördelning analys. Målet med detta protokoll är att anpassa steady-state confocal bilder tagna i en dags kurs i en kvantitativ dokumentation av ICP0 rörelse i hela lytisk infektionen. Vi föreslår att denna metod kan generaliseras för att kvantitativt analysera nukleära vs. cytoplasmiska lokalisering av andra virus eller cellulära proteiner utan att involvera levande bildteknik.

Introduction

Herpes simplex virus 1 (HSV-1) orsakar ett brett utbud av mild till svår postherpetisk sjukdomar inklusive herpes labialis, genital herpes, stromal keratit och encefalit. När smittade, upprättar viruset ett livslångt latent infektion i ganglier nervceller. Ibland kan viruset reaktiveras av olika skäl såsom feber, stress och immunsystemet1, leder till återkommande herpesinfektion. Infekterad cell protein 0 (ICP0) är en nyckel viral regulator som är avgörande för både lytisk och latent HSV-1 infektion. Det transactivates nedströms virus gener via motverka den värd inneboende/medfödda antivirala försvar2,3. ICP0 har en E3 ubiquitin ligase verksamhet, som riktar sig till flera cell faktorer för proteasom-beroende nedbrytning3. Det samverkar också med olika cell vägar att reglera deras verksamhet och därefter att kompensera värd antivirala begränsningar3. ICP0 är känd för att hitta på olika subcellulär fack som infektionen fortsätter3,4,5. Proteinet har lysin/arginin-rika cellkärnelokalisering signal (NLS) ligger på rester 500 till 5066. Vid de novo syntes på tidiga HSV-1 infektion importeras ICP0 omedelbart in i cellkärnan. Det upptäcks först vid en dynamisk nukleära struktur kallas kärnkraftsområdet 10 (ND10)7. E3 ubiquitin ligase aktiviteten av ICP0 utlöser nedbrytningen av ND10 arrangör proteiner, promyeloisk leukemi (PML) protein och spräckliga protein 100 kDa (Sp100)8,9,10. Efter förlusten av arrangör proteiner, ND10 kärn organ är spridda och ICP0 sprids för att fylla hela kärnan4,11.

Intressant, efter uppkomsten av virala DNA-replikation försvinner ICP0 från kärnan. Det finns enbart i cytoplasman, vilket tyder på förekomsten av en kärn-till-Cytoplasmatisk flyttning sent i HSV-1 infektion4,12. Kravet på den DNA-replikationen innebär potentiella deltagande en sena viral proteinernas att underlätta den cytoplasmiska flyttning av HSV-1 ICP04,12. Tydligen ICP0 människohandel bland olika fack under infektion ger ICP0 att modulera dess interaktioner till olika cellulära vägar i en spatial-temporal mode, och därför samordna dess flera funktioner till fina finjustera balansen mellan lytisk och latent HSV-1 infektion13. För att bättre förstå ICP0 multifunktionalitet och samordning av ICP0 funktionella domäner i hela lytisk infektionen, dissekerade vi noggrant den molekylära basen för den dynamiska ICP0 flyttning12. För att genomföra den mekanistiska studier tidigare rapporterade12, har vi tillämpat en Immunofluorescerande färgningsmetod för att visualisera ICP0 subcellulär lokalisering på olika infektionsstatus confocal Mikroskop. Vi har också utvecklat ett kvantitativa protokoll för att analysera nukleära vs. cytoplasmiska fördelningen av ICP0 med hjälp av confocal programvara. Befolkningen av HSV-1-infekterade celler var i tabellform i hela infektion faser och utvecklingen av ICP0 rörelse analyserades, enligt olika biokemiska behandlingar12. Här beskriver vi de detaljerade protokollet som dokument ICP0 flyttning i HSV-1 infektion. Vi föreslår att denna metod kan antas som en generell metod att studera det nukleära vs. cytoplasmiska translokationen för andra virus eller cellulära proteiner, som kan fungera som ett alternativ till levande imaging när den levande bildteknik är tillämplig på grund problem såsom märkning metoden, signalintensitet eller protein överflöd.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. cell sådd och virusinfektion

  1. Vid 20 – 24 h innan virusinfektion, utsäde 5 x 104 av mänskliga embryon lung (HEL) fibroblast celler eller andra celler undersökas på en 4-väl 11 mm vacklade bild i odlingsmedium (Dulbeccos modifierade Eagle Medium (DMEM) kompletteras med 10% fostrets nötkreatur serum (FBS)). Inkubera cellerna vid 37 ° C med 5% koldioxid (CO2).
    Obs: Varje väl bör ha 70-80% cell konfluens vid tidpunkten för infektion.
  2. På nästa dag, ta bort odlingsmedium och infektera cellerna med virus i Medium-199 på en rad 4 – 10 pfu/cell. Inkubera virusinfekterade celler för 1 h vid 37 ° C. Hålla skaka bilden under inkubationstiden.
  3. Efter 1 h ruvning, ta bort Medium-199 och komplettera med odlingsmedium.
    Obs: Läkemedel som stör annan infektion faser kan läggas vid detta steg eller före viral absorption.
  4. Inkubera virusinfekterade cellerna vid 37 ° C med 5% CO2 för olika längder på infektion period.

2. fixering och permeabilisering

  1. Ordentlig infektion som helst, snabbt tvätta de infektera cellerna med fosfatbuffrad saltlösning (PBS) 3 gånger och tillsätt 200 μl av 4% PARAFORMALDEHYD nyberedda i PBS. Inkubera cellerna med PARAFORMALDEHYD under 8 – 10 minuter vid rumstemperatur fixar cellerna i varje brunn.
  2. Aspirera PARAFORMALDEHYD och Tvätta brunnarna med 200 μL av PBS för 3 gånger. Helt aspirera PBS efter 3rd tvätten.
  3. Tillsätt 100 μL av 0,2% icke-jonisk tensid till varje brunn för att permeabilize cellerna för 5 – 10 min.
  4. Uppsugning av icke-jonisk tensid och Tvätta brunnarna med 200 μL av PBS för 3 gånger.

3. Immunofluorescerande färgning

  1. Helt aspirera PBS och tillsätt 200 μl blockerande buffert (1% bovint serumalbumin (BSA) och 5% häst serum i PBS) i varje brunn och inkubera i rumstemperatur i 1 h eller vid 4 ° C över natten.
  2. Lägg till experimentellt bestämd koncentration av primär antikropp (kanin anti-ICP0 polyklonala antikroppar12) i blockerande buffert och inkubera primär antikropp i rumstemperatur i 2 h eller vid 4 ° C över natten.
  3. Tvätta med blockerande buffert 3 gånger med 10 min inkubering. Lägg till Alexa 594-konjugerad get-anti-kanin sekundär antikropp (1: 400 utspätt i blockerande buffert) och inkubera bilderna i rumstemperatur i 1 h. Tvätta sedan bilderna 3 gånger med blockerande buffert med 10 min intervall.
  4. Äntligen tvätta bilden en gång med PBS att ta bort kvarvarande BSA och häst serum.
  5. Tillsätt en droppe av antifade monteringsmedium med 4', 6-diamidin-2-fenylindol (DAPI) att montera bilden och försegla det med täckglas med genomskinligt nagellack.

4. confocal Imaging

  1. Med en confocal Mikroskop, ange våglängden på 590 – 650 nm för Alexa 594 och 410 – 520 nm för DAPI. Välj bildformat på 1024 x 1024 och linje genomsnittliga 8 att förvärva högupplösta bilder.
  2. Analysera varje brunn i 4-väl bilden under confocal Mikroskop. Förvärva representativa cell bilder under 100 X målet, som visas i figur 1 och figur 2.
  3. För att räkna antal celler, ta bilder av på varandra följande fält under den 40 X-objektiv.
    Obs: Det krävs 5 – 10 bilder samlas över 200 infekterade celler från varje tidpunkt varje infektion.
  4. Ta bilder med konstant confocal parametrar för alla prover behöver jämföras i varje experiment.

5. analysera nukleära vs. cytoplasmisk fördelning

  1. Öppna projektet i confocal programmet. Välj en bild från vilken celler behöver vara i tabellform för nukleära vs. cytoplasmisk fördelning av ICP0.
  2. Klicka på fliken ”kvantitet” i övre menyn och välj ”sortera ROIs” från Verktyg-menyn.
  3. Rita en längsgående linje över cellen ska analyseras genom att välja ”Rita linje” i övre menyn.
    Obs: Histogram visas visar fluorescensintensiteten längs linjen för både ICP0 och DAPI. I histogrammet, blå linjen representerar DAPI pixlar och markerar gränsen för kärnan medan den röda linjen representerar ICP0 pixlar.
  4. Baserat på bakgrundsfärgning, ställa in en konstant tröskel för ICP0 intensitet att analysera ICP0 subcellulär distribution i varje experiment.
    1. Som exemplifieras i figur 2, om röda signal i genomsnitt understiger tröskelvärdet i regionen kärnkraft men är tröskelvärdet för bortom den blå gränsen, kategorisera den röd signalen som huvudsakligen ligger i cytoplasman.
    2. Om röda signalen är tröskelvärdet för hela kärnan och bortom gränsen för blå signal, grupp röd signalen som kärnan plus cytoplasmiska lokalisering.
    3. Om de röd signalen är tröskelvärdet i kärnan men i genomsnitt understiger det utanför gränsen för blå signal, gruppera röd signal som cellkärnelokalisering.
  5. TABULERA mer än 200 infekterade celler från varje prov på olika infektion tid och tomt i stapeldiagram att illustrera ICP0 rörelse enligt tid (figur 3).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

För att förstå de molekylära och biologiska funktioner för ICP0 människohandel under HSV-1 infektion, använder vi en Immunofluorescerande mikroskopi metod för att analysera ICP0 subcellulär fördelning på olika infektion faser. Figur 1 visar representativa cellerna med distinkta ICP0 lokalisering som infektion fortskrider. För att kvantifiera den kärn-till-Cytoplasmatisk flyttning av ICP0, analyserar vi ICP0 fördelning i förhållande till kärnan genom att kategorisera infekterade celler in i tre grupper: cellkärnelokalisering, cytoplasmiska lokalisering och nukleära plus cytoplasmiska lokalisering ( (Se figur 2). För att förstå delar som krävs för ICP0 människohandel under infektion, spårar vi ICP0 rörelser i vildtyp eller mutant HSV-1 vid olika infektion faser. Figur 3 visar ett exempel på tabellering resultat för subcellulär fördelning av ICP0 vid olika tidpunkt av infektion.

Figure 1
Figur 1: dynamisk handel med ICP0 under HSV-1 infektion. HEL celler odlas på 4-bra bilder var infekterade med prototypen HSV-1 (stam F) vid 10 pfu/cell. På 1, 5 och 9 h post infektion (hpi), var celler fast, permeabilized, reagerat på kanin anti-ICP0 och musen anti-PML primära antikroppar och sedan reagerat på Alexa 594-konjugerad anti-kanin och Alexa 488-cojugated antimus sekundära antikroppar för Imaging under 100 X mål. Promyeloisk leukemi (PML) protein fungerar som en markör protein för ND10 kärn organ, som försvinner vid 5 och 9 hpi på grund av PML nedbrytning i infektion. Skalstapeln = 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2: analys av ICP0 subcellulär fördelningen. Vänstra panelen: med en confocal Mikroskop, representativa celler förstorades för att visa den längsgående linje dragen över cellen som definierar regionen av intresse (ROI). Högra panelen: fluorescens pixel stödnivåer i ROI var kvantifieras för både ICP0 och DAPI i enskilda celler och illustreras som histogram av confocal applikationsprogramvaran. En godtycklig tröskel (gröna linjen) angavs att återspegla den bakgrundsfärgning. Skalstapeln = 10 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.

Figure 3
Diagram 3: andelen subcellulär distribution för vildtyp och C-terminal trunkerade ICP0. HEL celler smittades av rekombinanta virus som innehåller wild-typ ICP0 (ICP0 WT) eller C-terminal avkortas ICP0 (ICP0 C-trunkering) på 4 pfu/cell. Vid angivna tidpunkter, var cellerna färgas och analyseras enligt ovan. Över 200 celler var tabell för ICP0 läge. Procentandel av celler som innehåller kärnkraft, cytoplasmiska, eller nukleära + cytoplasmiska ICP0 var ritas med ett kalkylprogram för uträkning. Detta är ett föredömligt experiment för att visa att använda denna metod, har vi identifierat ICP0 C-terminus som en domän krävs för ICP0 kärn-till-Cytoplasmatisk translokation. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Detta protokoll har använts för att studera på kärn-till-Cytoplasmatisk flyttning av HSV-1 ICP0. ICP0 genomgår subcellulär människohandel under HSV-1 infektion (figur 1). Troligt, ICP0 interagerar med olika cell vägar att utföra olika uppgifter på olika platser. Detta gör ICP0 att finjustera sina flera funktioner i dragkampen med mänsklig värd13. Men studerats hur ICP0 samordnar flera funktioner i en spatial-temporal sätt väl. Med fluorescerande mikroskopi protokollet beskrivs ovan, började vi analysera den molekylära basen för ICP0 kärn-till-Cytoplasmatisk translokation. Redan nu har vi identifierat ICP0 C-terminalen 35 aminosyror som krävs inslag viktigt för translokationen. I avsaknad av C-terminus, är ICP0 återhållsam inom kärnan i hela infektion (figur 3). Vi har också funnit att en ICP0 E3 ligase beroende av kärnkraft kvarhållande kraft förseningar den kärn-till-Cytoplasmatisk translokation i U2OS celler12. Dessutom har vi upptäckt att ICP0 C-terminus och uttrycket av sena virala proteiner samarbeta för att övervinna kärnkraft lagring och underlätta cytoplasmiska translokation12. För närvarande använder vi detta protokoll till skärmen för de sena virala proteinerna involverade i det ICP0 kärn-till-Cytoplasmatisk translokationen.

Protokollet utvecklades ursprungligen för att studera dynamiska människohandel ICP0 i HSV-1 infektion. Som visas i figur 1, tidigt i HSV-1 infektion, ICP0 är colocalized med ND10, där flera viktiga komponenter i cellulära begränsande faktorer och ND10 komponenter såsom PML och Sp1008, bryts. Efter förnedrande ND10 viktiga beståndsdelar, ICP0 diffunderar i hela kärnan och sent i infektion, ICP0 är flyttad till cytoplasman. Eftersom ICP0 genomgår de novo syntes vid infektion, den inledande protein abundancy är mycket låg och sedan en robust viral syntes snabbt kommer att skymma den rörligheten för alla enskilda molekyler, vilket gör det svårt att spåra en enda molekyl med levande bildteknik. Därför valde vi medvetet att inte använda live imaging. I stället antog vi ovan protokollet för att studera steady-state ICP0 lokalisering vid olika infektion punkter, som tjänat oss väl i spårning ICP0 temporal rörelse i en population av HSV-1-infekterade celler.

För hög signal-till-bakgrund förhållandet i confocal analys är två kritiska steg anmärkningsvärt i den våta-bänk delen av detta protokoll. Först, tillåta 4-väl vacklade bilder flera prover hanteras på en enda bild. Det sparar avsevärt användningen av dyrbara reagenser som virus och antikroppar. Men eftersom volymen hålls i varje brunn är så liten, kan kvarvarande buffert inte helt rensat under buffert förändringar störa efterföljande reagensen. I varje buffert switch behövs därför en grundlig strävan innan du lägger till nya bufferten. Andra, baserat på våra erfarenheter, omfattningen av cell crosslinking och membran permeabilitet är viktigt för tydligheten i fluorescens signaler. Vi har satt en empirisk antal 10 min för både PARAFORMALDEHYD och icke-jonaktivt ytaktivt ämne behandlingar. Vi hittade då mycket längre eller kortare än 10 min kan minska förhållandet signal-till-bakgrund. Som framgår i figur 1 och figur 2samt i en tidigare studie12, är bilder som erhållits i våra experiment kristallklart. Den framstående blå signal som tydligt beskriver den nukleära gränsen är avgörande för att fastställa subcellulär fördelningen av ICP0. I den computational delen av detta protokoll är ett avgörande steg att ställa in en konstant tröskel att eliminera bakgrunden. En lyckad färgning med hög signal till bakgrunden förhållande är nyckeln till en lägre tröskel linje och bättre signal kontrast. Att hålla en konstant tröskel för alla prover i samma experiment, men är grunden för den kvantitativa dokumentationen av ICP0 (figur 2 och figur 3).

Protokollet kan också fungera som ett allmänt verktyg för att studera subcellulär människohandel för andra virus eller cellulära proteiner när en lämplig levande bildgivande metod saknas. I levande bildteknik förvaras celler optimal fysiologisk miljö att upprätthålla cell metaboliska status14,15. Ett grundläggande krav för levande cell avbildning är att fluorescently märka målproteinet, som kan uppnås genom att smälta målproteinet med en fluorescerande tag16, eller för att leverera en fluorophore konjugerat molekyl som är specifika för målproteinet17 . I båda fallen stiga problem om fusion av fluorescerande tagg ändrar egenskapen target protein eller fluorophore konjugerade molekyl har svårt att passera cellmembranet. Fotoblekning som orsakar cellskador i processen är en ytterligare oro i levande imaging18. Därför att nya strategier för att övervinna begränsning av levande imaging fortsätta att vara gränsen för teknikutveckling. Det protokoll som vi beskrivit här ger temporal analys jämviktskoncentration confocal bilder, som kan tjäna som ett alternativt verktyg när en lämplig levande bildgivande metod är tillgänglig. Metoden är enkel och tillförlitlig. Det ger tydlig detektion av protein subcellulär lokalisering med minsta bakgrund. Med confocal programvara, kan vi att kvantitativt analysera andelen celler med olika distributioner av målproteinet i en cell befolkningen och dokumentera förflyttning av målprotein på annan cell faser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har något att avslöja.

Acknowledgements

Vi tackar finansiellt stöd från en NIH grant (RO1AI118992) tilldelas Haidong Gu. Vi tackar mikroskopi, bildbehandling och flödescytometri resurser (MICR) Core anläggningen vid Wayne State University för teknisk support.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cells and viruses
Human Embryonic Lung fibroblasts (HEL Cells) Dr. Thomas E. Shenk (Princeton University) HEL cells were grown in DMEM supplemented with 10% FBS
HSV-1 viral Stock (Strain F) Dr. Bernard Roizman Lab
Medium
Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) Invitrogen  11965-092
Fetal Bovine Serum (FBS) Sigma F0926-500ml
Medium-199 (10x) Gibco 11825-015
Reagents
4- well 11 mm staggered slide Cel-Line/Thermofisher Scientific  30-149H-BLACK
16% Paraformaldehyde solution(w/v) Methanol free Thermo Scientific 28908
Triton X-100 Fisher reagents BP151-1C0
Bovine Serum Abumin (BSA) Calbiochem CAS 9048-46-8
Horse Serum Sigma H1270
Phosphate Buffered Saline (PBS) (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, pH7.4) Dr. Haidong Gu lab
NaCl       Fisher Bioreagent BP358-212
KH2PO4             Fisher Bioreagent BP362-500
KCl              Fisher Scientific  BP366-500
Na2HPO4              Fisher Bioreagent BP332-500
Blocking buffer (PBS with 1% BSA and 5% Horse serum ) Dr. Haidong Gu lab
Rabiit Anti-ICP0 antibody Dr. Haidong Gu lab
PML (PG-M3)-Mouse monoclonal IgG santa Cruz Biotechnology SC-966
Alexa Fluor 594-goat anti-rabbit IgG invitrogen A11012
Alexa Fluor 488-goat anti-mouse IgG invitrogen A11001
Vectashield Mouting medium with DAPI Vector laboratories H-1200
Pasteur pipette Fisher Brand 13-678-20D
Nail Polish Sally Hansen
Equipment
Confocal Microscope Leica SP8
Confocal Software Leica LAS X Application suite
Excel software Microsoft Excel
HERAcell 150i CO2 incubator Thermo Scientific Order code 51026282

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Whitley, R., Kimberlin, D. W., Prober, C. G., et al. Pathogenesis and disease. Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. Arvin, A., et al. Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2007).
  2. Roizman, B., Knipe, D. M., Whitley, R. J., et al. Herpes simplex viruses. Fields' Virology. Knipe, D. M. 6th Edition, Lippincott-Williams & Wilkins. USA. 1823-1897 (2013).
  3. Gu, H. Infected cell protein 0 functional domains and their coordination in herpes simplex virus replication. World Journal of Virology. 5, (1), 1-13 (2016).
  4. Lopez, P., Van Sant, C., Roizman, B. Requirements for the nuclear-cytoplasmic translocation of infected-cell protein 0 of herpes simplex virus 1. Journal of Virology. 75, (8), 3832-3840 (2001).
  5. Kawaguchi, Y., Van Sant, C., Roizman, B. Herpes simplex virus 1 alpha regulatory protein ICP0 interacts with and stabilizes the cell cycle regulator cyclin D3. Journal of Virology. 71, (10), 7328-7336 (1997).
  6. Mullen, M. A., Ciufo, D. M., Hayward, G. S. Mapping of intracellular localization domains and evidence for colocalization interactions between the IE110 and IE175 nuclear transactivator proteins of herpes simplex virus. Journal of Virology. 68, (5), 3250-3266 (1994).
  7. Maul, G. G., Everett, R. D. The nuclear location of PML, a cellular member of the C3HC4 zinc-binding domain protein family, is rearranged during herpes simplex virus infection by the C3HC4 viral protein ICP0. Journal of General Virology. 75, (6), 1223-1233 (1994).
  8. Chelbi-Alix, M. K., de The, H. Herpes virus induced proteasome-dependent degradation of the nuclear bodies-associated PML and Sp100 proteins. Oncogene. 18, (4), 935-941 (1999).
  9. Zheng, Y., Samrat, S. K., Gu, H. A Tale of Two PMLs: Elements Regulating a Differential Substrate Recognition by the ICP0 E3 Ubiquitin Ligase of Herpes Simplex Virus 1. Journal of Virology. 90, (23), 10875-10885 (2016).
  10. Lanfranca, M. P., Mostafa, H. H., Davido, D. J. HSV-1 ICP0: An E3 Ubiquitin Ligase That Counteracts Host Intrinsic and Innate Immunity. Cells. 3, (2), 438-454 (2014).
  11. Zheng, Y., Gu, H. Identification of three redundant segments responsible for herpes simplex virus 1 ICP0 to fuse with ND10 nuclear bodies. Journal of Virology. 89, (8), 4214-4226 (2015).
  12. Samrat, S. K., Ha, B. L., Zheng, Y., Gu, H. Characterization of Elements Regulating the Nuclear-to-Cytoplasmic Translocation of ICP0 in Late Herpes Simplex Virus 1 Infection. Journal of Virology. 92, (2), e01673-e01617 (2018).
  13. Gu, H. What role does cytoplasmic ICP0 play in HSV-1 infection? Future Virology. 13, (6), (2018).
  14. Ettinger, A., Wittmann, T. Fluorescence live cell imaging. Methods Cell Biology. 123, 77-94 (2014).
  15. Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. Live-cell microscopy - tips and tools. Journal of Cell Science. 122, (6), 753-767 (2009).
  16. Chudakov, D. M., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging. Trends in Biotechnology. 23, (12), 605-613 (2005).
  17. Teng, K. W., et al. Labeling proteins inside living cells using external fluorophores for microscopy. Elife. 5, e20378 (2016).
  18. Stephens, D. J., Allan, V. J. Light microscopy techniques for live cell imaging. Science. 300, (5616), 82-86 (2003).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics