Menselijk Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G detectie van cel-gebaseerde Assay

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Cel-gebaseerde bepaling is een veel gebruikte methode om te detecteren serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin G. Deze methode kan worden toegepast op de klinische diagnose en wetenschappelijk onderzoek van neuromyelitis optisch spectrum stoornissen.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Liu, C., Zhu, M., Wang, Y. Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay. J. Vis. Exp. (146), e59014, doi:10.3791/59014 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobuline G (IgG) is de kern van diagnostische biomerker voor neuromyelitis optica spectrum stoornissen (NMOSD). De cel-gebaseerde bepaling (CBA) is een veel gebruikte methode om anti-AQP4 IgG detecteren in menselijk serum met hoge gevoeligheid en specificiteit. Kort, serum anti-AQP4 IgG is gevangen genomen door AQP4-transfected cellen die gefixeerd op de biochip wordt gedetecteerd door een fluoresceïne-gelabeld secundair antilichaam. Fluorescentie microscopie is gebruikt om de fluorescentie te visualiseren, en de intensiteit van de fluorescentie is beoordeeld door ten minste twee ervaren clinici. Een definitieve diagnose van NMOSD kan worden gemaakt op basis van de combinatie van anti-AQP4 IgG detectie resultaten, Klinische manifestaties en neuroradiologische bevindingen. Volgens eerdere studies, CBA is gevoeliger en specifieke dan andere anti-AQP4 IgG detectiemethoden en het kan worden toegepast op zowel de klinische diagnose en de studies van NMOSD. De methode kent beperkingen; bijvoorbeeld, ontbreekt een internationale schaal te evalueren van serum anti-AQP4 IgG titers nog. Hier, wordt een gedetailleerd protocol voor menselijk serum anti-AQP4 IgG detectie met behulp van CBA beschreven.

Introduction

Serum AQP4 IgG is een kern van diagnostische biomerker voor neuromyelitis optica spectrum stoornissen (NMOSD)1. De cel-gebaseerde bepaling (CBA) is een veel gebruikte anti-AQP4 IgG detectiemethode met hoge gevoeligheid en specificiteit. Hier, wordt een gedetailleerd protocol voor CBA ingevoerd.

AQP4, een water kanaal eiwit, heeft zes membraan-spanning eenheden en twee spiraalvormige domeinen rondom een waterige poriën2. Anti-AQP4 IgG is betrokken bij de pathogenese van NMOSD door middel van binding aan haar doelstelling van AQP4, die vooral op de endfeet van astrocyten3 ligt. Het is aangetoond dat anti-AQP4 IgG positief in ongeveer tweederde van de NMOSD patiënten4is. In de meest recente internationale diagnostische criteria voor NMOSD, anti-AQP4 IgG wordt beschouwd als een kern diagnostische biomerker5. Het is in dit verband van cruciaal belang om een betrouwbaar protocol voor het detecteren van menselijk serum anti-AQP4 IgG en vergemakkelijken klinische diagnose van NMOSD.

Momenteel zijn de verschillende anti-AQP4 IgG detectiemethoden beschikbaar, zoals CBA, weefsel gebaseerde assay, enzym-verbonden immunosorbent analyse en stroom cytometry6,7. CBA maakt gebruik van EU90 cellen, die zijn transfected met menselijke AQP4, om vast te leggen van de anti-AQP4 IgG. De vastgelegde anti-AQP4-IgG is ontdekt door fluorescente secundaire antilichamen en vervolgens gevisualiseerd door microscopie. Het vergaren van bewijsmateriaal blijkt dat CBA gevoeliger en specifieke dan andere anti-AQP4 IgG detectie methoden6,7. Volgens een meta-analyse, de gevoeligheid en specificiteit van CBA bleken te zijn 76% en 99%, die hoger dan het weefsel gebaseerde waren en enzyme-linked immunosorbent testen6. Bovendien was een multicenter vergelijking van diagnostische tests van anti-AQP4 IgG transiënte7. Een totaal van 193 studie onderwerpen uit 15 Europese diagnostische centra werden ingeschreven7. Vier verschillende methoden werden gebruikt om het detecteren van serum anti-AQP4 IgG7. Het bleek dat CBA gevoeliger en specifieke dan de andere methoden7 was. Als AQP4 wordt uitgedrukt in twee grote isoforms (AQP4-M1 en AQP4-M23), is anti-AQP4 IgG vangen cel met AQP4-M1 of AQP4-M23 transfected. Welk type van capture cel is echter beter blijft controversieel. Een onderzoek heeft steun verleend aan AQP4-M1 gebaseerde CBA8, terwijl anderen hebben aangegeven dat AQP4-M23 gebaseerd CBA is beter7,9,10. AQP4 M23-gebaseerde CBA kan echter vals-positieve resultaten als gevolg van aspecifieke IgG bindende8opleveren. Jarius et al.. 11 gemeld dat er geen significant verschil in anti-AQP4 IgG opsporingstarieven tussen AQP4-M1 en AQP4 M23-gebaseerde CBAs was.

In samenvatting, serum anti-AQP4 IgG is een kern biomerker voor NMOSD. CBA heeft een hogere gevoeligheid dan andere anti-AQP4 IgG detectiemethoden en specificiteit. Het blijft controversieel of AQP4-M1 - of AQP4-M23-gebaseerde CBA beter is. In dit artikel wordt wordt een gedetailleerd protocol voor AQP4-M1 gebaseerde CBA beschreven, die u op de klinische diagnose en onderzoek van NMOSD toepassen kunt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Deze procedure werd goedgekeurd door de ethische commissie van de eerste ziekenhuis van Jilin Universiteit en werd uitgevoerd op ongeveer 1.500 onderwerpen.

1. de patiënt inschrijving en bloed monster collectie

  1. De laboratorium-detectie van serum die anti-AQP4 IgG aan patiënten van de kliniek met de belangrijkste klachten en symptomen onderstaande van toepassing. Verricht lichamelijke onderzoeken ook.

    Optische neuritis: patiënten lijden met visuele tekorten, zoals verlies van visual velden en vermindering van de gezichtsscherpte.
    Acute myelitis: patiënten kunnen presenteren met verlamming, zintuiglijke tekorten en autonome dysfunctie.
    Gebied postrema syndroom: patiënten symptomen van onverklaarbare hik, misselijkheid of braken kunnen hebben.
    Acute hersenstam syndroom: hersenstam letsels kunnen leiden tot verschillende symptomen en lichamelijke tekens afhankelijk van de locatie van de laesies.
    Symptomatische narcolepsie of acuut diencephalic klinisch syndroom met NMOSD-typische diencephalic MRI laesies.
    Symptomatische cerebrale syndroom met NMOSD-typische laesies van de hersenen.

    Opmerking: Volgens de internationale consensus diagnostische criteria voor NMOSD5, een diagnose van NMOSD kan worden gemaakt indien de patiënt serum anti-AQP4 IgG-positief en heeft ten minste één van de core klinische kenmerken hierboven vermeld. We raden echter niet testen van anti-AQP4 IgG bij patiënten met optische neuritis alleen.
  2. Bloed monster collectie
    Opmerking:
    patiënten hoeven niet te worden vasten.
    1. 2-3 mL veneuze bloed trekken in een tube 4 mL vacuüm bloed collectie.
    2. Het toestaan van het serum stollen gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur (RT).
      Opmerking: Langdurige stolling kan verhogen serum als gevolg van het laten weglekken van bloedplaatjes.
    3. Centrifugeer bij 2100 x g gedurende 5 min. zorgvuldig overbrengen in het serum een nieuwe buis.
    4. Analyseren van de serum onmiddellijk of aliquot en bewaren bij -20 of -80 ° C.
      Opmerking: Opslag bij-20 ° C is voor opslag van maanden, terwijl-80 ° C voor de opslag van het jaar is.

2. anti-AQP4 antistofdetectie

Let op: Patiënt monsters en gebruikte kit reagentia moeten besmettelijke materialen te worden beschouwd. Natrium azide-bevattende reagentia in de kit zijn giftig. Een stroomschema van het protocol wordt gegeven in Figuur 1.

  1. Voorbereiding
    1. Breng de kit aan RT vóór gebruik.
      Opmerking: Winkel de kit bij 2-8 ° C.
    2. Bereiden van ten minste 200 mL PBS was buffer met 0,2% tween-20. Giet 100 mL was buffer in een bekerglas van 500 mL.
    3. Verdund serum monsters 10 x met was buffer. De positieve en negatieve controles volgens de instructies van de distributeur voor te bereiden.
  2. Monster incubatie
    1. Voeg 30 µL van het vooraf verdunde monsters, positieve controle of negatieve controle op de velden van de reactie van de reagens lade (Figuur 2).
      Opmerking: Vermijd luchtbellen.
    2. Verwijder de beschermende cover op de biochip dia's.
      Opmerking: Raak niet de biochips om te voorkomen dat de onthechting en besmetting van vaste cellen. Houd de dia side-by-side voordat het verwijderen van de afdekking.
    3. De biochip dia toepassen in het reagens lade (Figuur 2). Start een incubatieperiode van 30 min bij RT.
      Opmerking: Elk monster moet een individuele druppel verbonden met de bijbehorende biochip zonder mengen met andere druppels.
    4. Spoel zachtjes de biochip dia eens met was buffer. Dompel de biochip dia in de 500 mL-bekerglas gevuld met 100 mL was buffer voor ten minste 5 min. plaats het bekerglas op een shaker indien mogelijk.
    5. Haal de biochip dia uit de buffer wassen. Zorgvuldig veeg weg de residuele was buffer buiten de reactie velden met een papieren handdoek. Bloot de biochip dia in open lucht voor 1-2 min te verdampen de residuele was buffer op het reactie-veld.
      Opmerking: Niet de reactie velden uitdrogen. Raak niet de biochips met papieren handdoek.
  3. Incubatie van secundair antilichaam
    1. Bereid de secundair antilichaam oplossing volgens de instructies van de distributeur.
    2. 25 µL van fluorescerende secundair antilichaam aan de reactie velden voor een schone reagens tray toevoegen.
    3. Toepassing de biochip dia aan het Dienblad van de reagens geladen met secundair antilichaam. Incubeer gedurende 30 min op RT.
  4. Montage
    1. De gebruikte was buffer uitstorten en voeg 100 mL vers was buffer af in het bekerglas. Herhaal het wassen zoals beschreven in stappen 2.2.4 en 2.2.5 gelden.
    2. Voeg voorzichtig insluiten medium naar de velden van de reactie op een biochip dia (1 druppel per reactie veld). Verzegel de biochip dia met één stuk cover glas. Vermijd luchtbellen.
  5. Fluorescentie detectie
    1. De TL-lamp van Microscoop en pre warmte voor 15 min. Kies een 488 nm-filter inschakelen.
    2. Open foto software. Neem foto's van zowel transfected en untransfected gebieden van alle reactie velden met verschillende vergrotingen. Eerst neem een foto met 4 x vergroting voor een overzicht, waarna meer foto's nemen met 10 x en 20 x vergrotingen.
      Opmerking: Het gedetailleerd protocol wordt weergegeven in tabel 1. Interpretatie van de resultaten wordt besproken in de sectie representatieve resultaten.

3. diagnose van patiënten

  1. Indien de patiënt serum anti-AQP4 IgG-positief en toont ten minste één kern klinische kenmerk van NMOSD (zie sectie discussie), de patiënt met NMSOD5te diagnosticeren. Echter, indien de patiënt anti-AQP4 IgG-negatief, een diagnose van NMOSD niet mogen worden uitgesloten.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Gebruik de procedure hier, is specifieke anti-AQP4 IgG in het serum aantoonbaar. Tijdens de procedure werden vooraf verdunde monsters, een positieve controle en een negatieve controle toegevoegd aan de reactie velden, waarin transfected en untransfected gebieden (Figuur 2). Fluorescentie van de negatieve controle op een transfected gebied aangegeven vooral de aspecifieke binding van secundair antilichaam transfected cellen op biochips (Figuur 3). Homogeen zwakke fluorescentie was zichtbaar (Figuur 3). Wat betreft de positieve controle, is anti-AQP4 antilichaam aan het reactie-veld toegevoegd. Sterke fluorescentie werd waargenomen in het transfected gebied, dat de specifieke binding van anti-AQP4 IgG aan AQP4-M1 in transfected cellen (Figuur 4) aangegeven. Fluorescentie van de positieve controle op een untransfected gebied toonde hints van aspecifieke binding van anti-AQP4 IgG naar vaste cellen op biochips (Figuur 4). Voor 10 x verdunde monsters, anti-AQP4 IgG-negatief serum toonde een fluorescerende patroon vergelijkbaar met de negatieve controle, terwijl de positief serum een patroon vergelijkbaar met de positieve controle (Figuur 5 toonde). De intensiteit van de fluorescentie werd geassocieerd met de anti-AQP4 IgG titer. Voorbeelden van verschillende intensiteit van de fluorescentie worden gepresenteerd in Figuur 5. Figuur 5 A en 5B werden van anti-AQP4 IgG-negatieve monsters, terwijl Figuur 5C-H van anti-AQP4 IgG-positieve monsters waren. Zolang de heterogene en korrelig fluorescentie verscheen in transfected gebieden, de steekproef werd beschouwd als anti-AQP4 IgG-positief, ongeacht de sterkte van de fluorescentie. De diagnostische criteria voor NMOSD, die is gebaseerd op de serum anti-AQP4 IgG, wordt verder beschreven in de sectie discussie.

In een paar monsters, slechts een klein aantal cellen was sterk gekleurd in transfected gebieden, en het was moeilijk om te bepalen of het serum anti-AQP4 IgG-positief of negatief (Figuur 6 was). In dit geval kan "waarschijnlijke positieve" worden gemeld. In zeldzamer gevallen was de fluorescentie van een monster in transfected gebieden homogeen sterker dan in untransfected gebieden (Figuur 7). In dit geval moet het monster worden beschouwd als anti-AQP4 IgG-negatief. De hoge intensiteit van de fluorescentie van de achtergrond mogelijk niet-specifieke. Een betrouwbare als rapport wilt maken, moeten alle foto's blindelings worden beoordeeld door ten minste twee clinici. De clinici moeten worden opgeleid voor evaluatie. In dit protocol, ze bleken representatieve foto's van verschillende monster typen en werden geïnformeerd over de vraag hoe om resultaten te evalueren. Ze geëvalueerd dan foto's samen met een ervaren behandelaar. Tot slot de opgeleide clinici werkte onafhankelijk. In een ideale situatie moet het altijd de dezelfde clinici die resultaten evalueren.

Figure 1
Figuur 1 : Stroomschema van anti-AQP4 IgG detectie protocol. AQP4-M1-transfected of untransfected EU 90 cellen zijn gefixeerd op de biochips. Bij het toevoegen van serum aan biochips, wordt anti-AQP4 IgG in serum vastgelegd door vaste transfected cellen. Fluoresceïne-gelabeld secundair antilichaam wordt vervolgens toegepast om te detecteren van anti-AQP4 IgG. De fluorescentie kan worden gevisualiseerd door microscopie met verschillende vergrotingen. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 2
Figuur 2 : Proeven van incubatie. (A) bovenaanzicht van reagens lade. Elk reagens lade bevat vijf afzonderlijke reactie velden. De positieve controle, voorbeelden en negatieve controle moeten worden toegevoegd aan de reactie van de afzonderlijke velden. (B) bovenaanzicht van biochip dia. Elke dia biochip bevat vijf reactie velden, die twee subsecties hebben. De transfected subsectie bevat vaste AQP4-M1-transfected cellen, terwijl de untransfected Subsectie untransfected cellen bevat. (C) Front van reagens lade en biochip dia bekijken Reactie velden op de reagens lade en biochip dia worden gecombineerd met elkaar. Het monster toegevoegd aan het veld reactie op reagens lade moet worden aangesloten op het overeenkomstige veld van de reactie op de dia biochip. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 3
Figuur 3 : Representatieve cijfers voor de negatieve controle. (A) een overzicht van de transfected ruimte van de negatieve controle werd verkregen door 4 x vergroting microscopie. Homogeen zwakke fluorescentie werd waargenomen in het hele gebied. (B, C) Meer details werden waargenomen in 10 x (B) en x (C) vergroting foto's. In het algemeen de celmembraan en plasma waren enigszins gekleurd, en de celkern onbevlekt was. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 4
Figuur 4 : Representatieve cijfers voor de positieve controle. (A, B) Transfected (A) en untransfected (B) gebieden van positieve controle staan. Homogeen zwakke fluorescentie werd waargenomen in untransfected gebieden, die aspecifieke binding van anti-AQP4 IgG naar vaste cellen aangeeft. Omgekeerd, heterogene sterke fluorescentie werd waargenomen in transfected gebieden, die specifieke binding van anti-AQP4 IgG aan AQP4-M1 uitgedrukt op vaste cellen aangeeft. (C-F) Meer details van transfected (C, E) en untransfected (D, F) gebieden worden waargenomen met 10 x (C, D) of 20 x vergroting (E, F). Zwak en zelfs fluorescentie verscheen in untransfected gebieden. Een groot percentage van cellen transfected gebieden toonde echter intensieve fluorescentie. In het plasma van sterk gekleurde cellen toonde anti-AQP4 IgG glad en korrelig fluorescentie. De celkern was onbevlekt of licht gebeitst. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 5
Figuur 5 : Representatieve cijfers voor anti-AQP4 antistof negatieve of positieve monsters. Monsters waren 10 x verdund, en alle cijfers vermeld werden genomen met een 10 x doelstelling. (A, B) Negatieve fluorescentie monster: de fluorescentie was homogeen zwak in beide (A) transfected en (B) untransfected gebieden. (C, D) Zwakke fluorescentie monster: in vergelijking met untransfected gebieden (D), een kleine hoeveelheid cellen (ongeveer 25% tot 50%) in transfected gebieden (C) toonde intenser fluorescentie. (E, F) Matige fluorescentie monster: in transfected gebieden (E), sterke granulaire fluorescentie werd waargenomen in een middelgrote hoeveelheid cellen (ongeveer 50% tot 75%). (G, H) Sterke fluorescentie monster: cellen in untransfected gebieden (H) waren zwak gekleurd. Echter in transfected gebieden (G) verscheen granulaire fluorescentie met hoge intensiteit in een groot aantal cellen (ongeveer meer dan 75%). In het algemeen, zoals de titer van anti-AQP4 IgG verhoogd, zowel de intensiteit van de fluorescentie als percentage van sterk gekleurde cellen verhoogde dienovereenkomstig. De fluorescentie van untransfected gebieden was altijd homogeen zwak. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 6
Figuur 6 : Representatieve cijfers voor anti-AQP4 antistof "waarschijnlijke positieve" monsters. (A, B) Geen significante verschillen in fluorescentie patronen werden waargenomen tussen transfected (A) en untransfected (B) gebieden op 4 x vergroting. (C-E) Met 10 x (C, D) of 20 x (E, F) vergroting, een paar cellen transfected gebieden (C, E) toonde sterke granulaire fluorescentie. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer. 

Figure 7
Figuur 7 : Voorbeeld van Limburgse anti-AQP4 IgG-negatief monster. Zowel transfected (A) en untransfected (B) gebieden werden homogeen gekleurd. De fluorescentie in transfected gebieden was echter sterker dan in untransfected gebieden. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Vergroting Transfected gebied Untransfected gebied
4 x 1 foto 1 foto
10 x 4 foto 's 1 foto
00: 5 foto 's 1 foto

Tabel 1: fluorescentie microscopie. Het is aanbevolen om gebruik van 4 x, 10 x en 20 x doelstellingen voor beeldvorming van transfected en untransfected gebieden.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Wij hebben een breed toegankelijke methode voor het detecteren van anti-AQP4 IgG in menselijk serum beschreven. Anti-AQP4 IgG is nauw verwant aan NMOSD, en tot vaststelling van een betrouwbare anti-AQP4 IgG detectiemethode is cruciaal voor de klinische diagnose van NMOSD. Ten eerste, anti-AQP4 IgG is specifiek voor de NMOSD. Multiple sclerose is ook een immuun-gemedieerde ziekte van het centrale zenuwstelsel en deelt veel overeenkomsten met NMOSD12. Anti-AQP4 IgG is echter alleen positieve in NMOSD13. Ten tweede, anti-AQP4 IgG is gebruikelijk onder NMOSD patiënten. Ongeveer tweederde van de NMOSD patiënten zijn serum anti-AQP4 IgG-positief4. Ten derde, de meest recente diagnose criteria voor NMOSD is gebaseerd op serum anti-AQP4 IgG testen5. Tezamen, kan serum anti-AQP4 IgG detectie vergemakkelijken de klinische diagnose van NMOSD.

Onder de diverse anti-AQP4 IgG detectiemethoden, wordt CBA veel gebruikt voor klinische diagnose vanwege de hoge gevoeligheid en specificiteit6,7. Hoewel CBA een snelle en eenvoudige methode is, moeten enkele belangrijke punten worden aangepakt. Eerst, onderzoekers moeten voorzichtig zijn bij het werken met biochips, zoals AQP4-M1-transfected en untransfected cellen zijn gefixeerd op de biochips. Tijdens de hele procedure, moeten biochips niet worden aangeraakt met de hand of uitgedroogd. Bovendien, dia's met biochips moeten voorzichtig worden omgegaan, anders de vaste cellen op de biochips naar beneden kunnen vallen of besmet raken, waardoor de fluorescentie defecte zones of een hoge, fluorescerende achtergrond. Ten tweede, wanneer monsters toegevoegd aan de velden van de reactie op de lade reagens, onderzoekers moeten ervoor zorgen dat de druppels van de monsters niet met elkaar worden gemengd. Luchtbellen tussen de monsters en biochips moeten worden vermeden.

Deze methode heeft beperkingen; bijvoorbeeld, als u CBA voor het detecteren van anti-AQP4 IgG, is het moeilijk te kwantificeren van de intensiteit van de fluorescentie en beschrijven van de IgG titer van de anti-AQP4 in het serum. Op dit moment in ons diagnostisch centrum, is de intensiteit van de fluorescentie subjectief gemeld door twee clinici na het vergelijken van foto's van monsters vs. besturingselementen. In de meeste gevallen is het niet moeilijk om te bepalen of het serum anti-AQP4 IgG-positief of negatief. Echter, in zeldzame gevallen de fluorescentie van monsters lijkt misschien alleen iets sterker dan de negatieve controle, en het monster wordt beschouwd als "waarschijnlijk positief". Clinici, moeten meer voorzichtig zijn in het maken van een diagnose zijn in deze situatie. Een andere mogelijke oplossing is het herhalen van de kosten-batenanalyse. Een nauwkeuriger methode te kwantificeren van de intensiteit van de fluorescentie en een internationale definitie van "Anti-AQP4 IgG-positief" gerechtvaardigd zijn. Met name de positieve koers van anti-AQP4 IgG in de cerebrospinale vloeistof is veel lager dan in serum, en testen voor IgG van de anti-AQP4 in de cerebrospinale vloeistof is niet informatief14,15.

CBA kan worden toegepast op zowel de klinische diagnose en de wetenschappelijke studies van NMOSD. Klinische diagnose van NMOSD is gemaakt op basis van de combinatie van klinische manifestaties, serum anti-AQP4 IgG en neuroradiologische bevindingen. Serum anti-AQP4 IgG-positieve patiënten met ten minste één kern klinische kenmerk van NMOSD kunnen worden gediagnosticeerd met NMOSD5; echter als de patiënt anti-AQP4 IgG-negatief, een diagnose van de NMOSD mag niet uitgesloten5en clinici moeten verdere evaluatie van de klinische manifestaties en neuroradiologische bevindingen5,16,17 . Serum myeline Oligodendrocyt glycoproteïne antilichamen worden gedetecteerd om te helpen de diagnose18,19,20. Met name, hoewel de serum anti-AQP4 IgG titer kan worden veranderd met rituximab behandeling21, is het geen voorspellende ziekte natuurlijk en reactie op immunotherapie22,23. CBA wordt ook op grote schaal gebruikt voor wetenschappelijk onderzoek. Bijvoorbeeld beschreven Yang et al.24 de klinische kenmerken van anti-AQP4 NMOSD van de IgG-positieve patiënten. Kitley et al.25 geanalyseerd bovendien de prognostische factoren voor anti-AQP4 NMOSD van de IgG-positieve patiënten25. Beide studies CBA gebruikt voor het opsporen van serum anti-AQP4 IgG.

Kortom, CBA is een veel gebruikte methode om de anti-AQP4 IgG detecteren en kan worden toegepast op de klinische diagnose en wetenschappelijk onderzoek van NMOSD.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgments

De auteurs zijn dankbaar voor de steun van subsidies uit de National Science Foundation of China (nr. 31600820), de gezondheid en gezinsplanning Commissie van provincie Jilin (nr. 2016Q036), en de wetenschap en technologie Planning Project van provincie Jilin (nr. 20180520110JH).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anti-aquaporin-4 IIFT Euroimmun FA 1128-2005-50 Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. 
CellSens Dimension OLYMPUS N/A photograph software
Gel & clot activator tube Improve medical 623040202 From a local Chinese company

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Zekeridou, A., Lennon, V. A. Aquaporin-4 autoimmunity. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 2, (4), 110 (2015).
  2. Ho, J. D., et al. Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, (18), 7437-7442 (2009).
  3. Takeshita, Y., et al. Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro. in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4, (1), 311 (2016).
  4. Sato, D. K., et al. Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders. Neurology. 82, (6), 474-481 (2014).
  5. Wingerchuk, D. M., et al. International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders. Neurology. 85, (2), 177-189 (2015).
  6. Ruiz-Gaviria, R., et al. Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4, (4), 345-349 (2015).
  7. Waters, P., et al. Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87, (9), 1005-1015 (2016).
  8. Fryer, J. P., et al. AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1, (1), 11 (2014).
  9. Long, Y., et al. Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China. The International Journal of Neuroscience. 127, (9), 790-799 (2017).
  10. Pisani, F., et al. Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity. PloS One. 8, (11), 79185 (2013).
  11. Jarius, S., et al. Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate. Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).
  12. Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86, (1), 20-25 (2015).
  13. Chen, H., et al. Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders. Chinese Medical Journal. 129, (17), 2079-2084 (2016).
  14. Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3, (3), 231 (2016).
  15. Jarius, S., et al. Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance. Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).
  16. Asgari, N., et al. Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4, (4), 343 (2017).
  17. Kim, H. J., et al. MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update. Neurology. 84, (11), 1165-1173 (2015).
  18. Jarius, S., et al. MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing. Journal of Neuroinflammation. 15, (1), 134 (2018).
  19. Narayan, R., et al. MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).
  20. Ogawa, R., et al. MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4, (2), 322 (2017).
  21. Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4, (2), 317 (2016).
  22. Kessler, R. A., et al. Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).
  23. Mealy, M. A., et al. Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders. Multiple Sclerosis. (2017).
  24. Yang, Y., et al. The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica. Journal of Clinical Neuroscience. 20, (1), 94-98 (2013).
  25. Kitley, J., et al. Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan. Brain. 135, (6), 1834-1849 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics