Author Produced

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

* These authors contributed equally
JoVE Journal
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

We introduceren een binnenband benadering van de manchettechniek voor muis cervicale heterotopische harttransplantatie om evert het vat over de manchet te helpen. We ontdekten dat de samenwerking tussen twee ervaren chirurgen de operatietijd aanzienlijk verkort.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Ma, Y., Xie, B., Dai, H., Wang, C., Liu, S., Lan, T., Xu, S., Yan, G., Qi, Z. Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation. J. Vis. Exp. (160), e61103, doi:10.3791/61103 (2020).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Murine harttransplantatie is uitgevoerd voor meer dan 40 jaar. Met de vooruitgang in de microchirurgie, zijn bepaalde nieuwe technieken gebruikt om chirurgische efficiëntie te verbeteren. In ons lab hebben we de manchettechniek geoptimaliseerd met twee grote stappen. Eerst gebruikten we de binnenbandtechniek om een tijdelijke binnenband in de externe halsader en halsslagaderbloedvat te plaatsen om de edlijsie van het vat over de manchet te vergemakkelijken. Ten tweede hebben we volledige heterotopische harttransplantatie uitgevoerd door de samenwerking van twee ervaren chirurgen. Deze wijzigingen hebben de bedrijfstijd effectief teruggebracht tot 25 minuten, met een slagingspercentage van 95%. In dit rapport beschrijven we deze procedures in detail en geven we een aanvullende video. Wij zijn van mening dat dit verslag over de verbeterde manchettechniek praktische richtlijnen zal bieden voor murine heterotopische harttransplantatie en het nut van dit muismodel voor fundamenteel onderzoek zal verbeteren.

Introduction

De oprichting van muis heterotopische harttransplantatie door end-to-end anastomose in de buik in 1973 was een belangrijke mijlpaal in de fundamentele transplantatie immunologie onderzoek1. Dit model bood een belangrijk en geldig hulpmiddel voor het analyseren van de mechanismen van ischemie reperfusieletsel2, immunologische afstoting en tolerantie3,4. Echter, de complexe en tijdrovende aard van de operatie, alsmede het potentieel voor infecties kan resulteren in ernstige perioperatieve buikverklevingen en ontstekingsreacties, wat resulteert in een lage efficiëntie voor heterotopische harttransplantatie model.

De cervicale heterotopische harttransplantatie techniek werd voor het eerst beschreven door Chen in 19915. In dit model wordt de externe halsader van de ontvanger anastomosed aan de longslagader van de graft en de halsslagader is anastomosed aan de stijgende aorta. De belangrijkste voordelen van deze methode zijn het gemak van monitoring en het verminderen van trauma aan de ontvanger. In hetzelfde jaar beschreef Matsuura een verbeterde techniek, waarbij het einde van de externe halsader en halsslagader over een Teflon manchet werden gefixeerd en met een omtrekvormige zijdeligbondtuur6werden bevestigd. Sommige onderzoekers bevestigden ook de manchet aan de juiste longslagader in het donorhart alvorens de manchet in de externe halsader van de ontvanger7te plaatsen. Tot nu toe is de manchettechniek op grote schaal toegepast in verschillende vasculaire pedicletransplantatiemodellen, waaronder die voor long8,lever9en nier10-transplantatie.

Tot op heden zijn er verschillende problemen in verband met de manchettechniek. Bijvoorbeeld, de halsslagader is moeilijk te evert over de manchet als gevolg van de extra elasticiteit, wat resulteert in het weefsel naar achteren draaien. Daarom kan extra praktijk en een microchirurgische dilatator nodig zijn om deze stap te voltooien. Bovendien kan de voorbereiding van het cervicale vat tot 25 minuten duren.

Om deze problemen op te lossen, introduceren we de binnenbandtechniek, die is gebaseerd op de manchettechniek en omvat het bevestigen van de manchet op de externe halsader en halsslagader met behulp van een binnenband om te helpen bij de edsie van de vaatwand. Bovendien, met eenvoudige training, de ontvanger voorbereiding wordt teruggebracht tot 15,5 minuten. Deze techniek vermindert de complexiteit van de operatie en vereist geen extra oefening of het gebruik van een vasculaire dilatator. Het kan worden toegepast in alle transplantatie immuunonderzoek, vooral voor het verifiëren van derden immuuntolerantie waarbij de ontvanger ontvangt twee cardiale allografts, een in de buik en de andere in de nek11. We raden ook samenwerking aan tussen twee ervaren chirurgen om dit model vast te stellen, waarbij een chirurg het ontvangende dier voorbereidt en het andere het donorhart oogst en implanteert. Een dergelijke samenwerking kan de bewerkingstijd verkorten tot 25 minuten. Met behulp van deze geoptimaliseerde procedure hebben we syngene, allogene12,13,,14,15,16,17,18,19en xenogeneic muisharttransplantatiemodellen20vastgesteld .,

De reden voor de ontwikkeling van de binnenbandtechniek was om de verrichtingstijd voor de totstandbrenging van een model van de muisharttransplantatie met een hoog slagingspercentage te verminderen. Optimalisatie van het cervicale harttransplantatiemodel vergemakkelijkt de verwerving van hoge slagingspercentages in een korte periode van operatietijd in vergelijking met de traditionele hechtings- en manchettechniek21. Verder kan het samenwerkingsmodel de warme ischemische tijd van het donorhart verder verkorten in vergelijking met operaties die met één operator worden uitgevoerd.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Dieren (BALB/c, C57BL/6, man, 8-12 weken) zijn ondergebracht in een specifieke ziekteverwekkervrije faciliteit in het Xiamen University Laboratory Animal Center. C57BL/6 wordt gebruikt als ontvanger en BALB/c wordt gebruikt als donor. Alle procedures worden uitgevoerd volgens de richtlijnen van het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).

OPMERKING: Voor de bewerking is een reeks microchirurgische instrumenten nodig, waaronder een microschaar, micro straight tang,Table and Materialsmicrogebogen Figure 1tangen en micronaaldhouders. Er is één paar bulldogklemmen voor eenmalig gebruik nodig(figuur 1F). Twee manchetten voor de externe halsader en halsslagader worden bereid door het snijden van de aangepaste polyamide buizen met een no. 10 scalpel onder een microscoop. De diameter van de ader en de slagader manchet is respectievelijk 0,9 mm en 0,55 mm. Bovendien is de diameter van de binnenband voor de overeenkomstige ader manchet 0,6 mm, en deze van de binnenband voor de overeenkomstige slagader manchet is 0,28 mm (Figuur 1G).

1. Voorbereiding van de ontvanger

  1. Verdoes de ontvangermuis met pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Gebruik atraumatische mechanische tondeuses om het haar te verwijderen in het rechter zijwaartse cervicale gebied.
  2. Gebruik een steriele katoenen tip applicator om het chirurgische gebied af te vegen met jodium antiseptisch gevolgd door 70% ethanol.
  3. Plaats de muis in de supinepositie op het bedieningsplatform. Bedek de muis met steriel gaas.
  4. Gebruik een oogheelkundige schaar om een dwarse incisie te maken van de onderste een derde nek middellijn naar het rechter schouder-sleutelbeen gewricht.
  5. Isoleer de juiste externe halsader met micro gebogen tangen om voldoende lengte bloot te leggen, de takken af te snijden via elektrocoagulatie en het vat aan het distale uiteinde te kruisen met behulp van een 6-0 zijden hechting.
  6. Klem de externe halsader proximally met behulp van een bulldog klem en vervolgens transect de ader proximally aan de ligatuur met behulp van een micro schaar.
  7. Was het vat lumen met 100 U/mL 0-4 °C gehepariniseerde zoutoplossing om eventueel restbloed te verwijderen.
  8. Trek de externe halsader door de ader manchet met behulp van micro rechte tangen; steek de ader binnenband in het lumen als een stent, en evert het vat muur over de manchet met micro rechte tangen (Figuur 2A).
  9. Bevestig het everted schip endotheel aan het proximale uiteinde van de manchet met behulp van een omtrek 8-0 zijden hechting (figuur 2B).
  10. Gebruik micro rechte tangen om de binnenband van de ader uit het adervat te halen.
  11. Voer stompe dissectie uit met microgebogen tangen om de rechter halsslagader naast de binnenrand van de sternocleidomastoïde te isoleren.
  12. Klem de rechter halsslagader proximally met behulp van een bulldog klem, ligate de halsslagader distaal met behulp van een 6-0 zijden hechting, en gebruik een micro schaar om de halsslagader proximaal transect aan de ligatuur.
  13. Was de halsslagader met 100 U/mL 0-4 °C gehepariniseerde zoutoplossing om eventueel restbloed te verwijderen.
  14. Geef de halsslagader door de slagader manchet en steek de binnenband van de slagader in het slagadervat met behulp van micro rechte tangen(figuur 2C).
  15. Evert het vat over de manchet met behulp van micro rechte tangen; vast te stellen het everted schip endotheel met behulp van een omtrek 8-0 zijden hechting (Figuur 2D).
  16. Haal de binnenband van de slagader met micro rechte tangen uit het slagadervat.
    OPMERKING: Bewaar de submandibulaire klier van de ontvanger.

2. Voorbereiding van de donor

  1. Verdoven de donormuis met pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Gebruik atraumatische mechanische tondeuses om het haar in de buikstreek te verwijderen.
  2. Plaats de muis in de supinepositie op het bedieningsplatform. Bedek de muis met steriel gaas.
  3. Gebruik een steriele katoenen tip applicator om het chirurgische gebied af te vegen met jodium antiseptisch gevolgd door 70% ethanol.
  4. Maak een abdominale middellijn incisie met een oogheelkundige schaar en bloot de buikholte.
  5. Gebruik micro gebogen tangen om de inferieure vena cava bloot te stellen, en vervolgens intraveneus injecteren 200 μL van 100 U / mL 0-4 ° C heparinized zout lijn per 20 g lichaamsgewicht door de inferieure vena cava.
  6. Voer thoracotomie uit met oogheelkundige schaar, snijd de ribben door de bilaterale midaxillaire lijn insnijdingen, draai de voorste borstwand naar buiten om de borstholte bloot te leggen.
  7. Accijns de thymus met micro gebogen tangen.
  8. Stel de aorta bloot en doorsneed vervolgens 200 μL van 100 U/mL 0-4 °C en vervolgens zout aan de kransslagader door de aortaboog.
    OPMERKING: Voorkom dat er gasbellen in het donorhart worden doorzeefd.
  9. Gebruik een microschaar om de opgaande aorta aan het begin van de aortaboog te transecteren.
  10. Transect de longslagader aan het begin van de twee belangrijkste takken met een micro schaar.
  11. Ligate de superieure vena cava en inferieure vena cava proximally met behulp van een 6-0 zijden hechting en gebruik een micro schaar om ader distally transect aan de ligatuur.
  12. Ligate de longaders aan elkaar, omtrek, met behulp van een enkele 6-0 zijden hechting, en afgesneden van de ader takken distally aan de ligatuur met behulp van een micro schaar.
  13. Verwijder het harttransplantatie uit de omliggende zachte weefsels; bewaren in 0-4 °C heparinized zoutoplossing.

3. Hartimplantatie

  1. Plaats het donorhart ondersteboven in het rechter nekgebied van de ontvanger.
  2. Voer de longslagader van het donorhart in tot een 6-0 zijden lus met micro rechte tangen.
  3. Wikkel het vat lumen rond de ader manchet, en draai vervolgens de 6-0 zijden hechting lussen rond de manchet om het vat gezamenlijke band.
  4. Voer anastomose uit van de aorta van het transplantaat en de slagaderboechet door de in stap 3.2 beschreven stappen te volgen.
  5. Laat de geklemde halsader los, gevolgd door de geklemde halsslagader. Houd het vat gewricht ontmoedigd en zorg ervoor dat de bloedstroom vrij is.
    LET OP: Het sinusritme dat binnen 1 min terugkeert naar meer dan 200 keer, wordt als normaal beschouwd.
  6. Bevochtig het donorhart met warme (37 °C) zoutoplossing en controleer of het transplantaat bloedt. Stel het pulserende hart graft in de onderhuidse ruimte, en dan hecht de incisie.

4. Postoperatieve zorg- en graftbeoordeling

  1. Noteer de tijd tot normaal sinusritme en het behoud van het normale sinusritme gedurende ten minste 5 minuten na het loslaten van de klem om de postoperatieve graftfunctie te controleren.
  2. Plaats de ontvanger alleen op een warme deken totdat de ontvanger wakker wordt van anesthesie. Toleer buprenorfine analgesie, 0,05 mg/kg, s.c, aan het einde van de operatie en elke 12 uur gedurende 72 uur na de operatie.
  3. Nota dagelijks het gewicht en de postoperatieve herstelstatus van de ontvanger. In het geval van >15% gewichtsverlies ten opzichte van die op de operatiedatum, hemiplegische verlamming, of infectie, euthanaseren de ontvanger via terminale isoflurane inhalatie21.
  4. Monitor graft overleving door palpatie dagelijks. De operatie wordt beschouwd als succesvol als de murine allograft overleeft voor >72 uur. Rangschik de graftfunctie, zoals eerder gemeld22: Schaal 3 - krachtig pulseren en frequentie; Schaal 2 - minder pulseren; Schaal 1- fibrillatie en dreigende afwijzing; of Schaal - 0, verlies van hartslag en volledige afwijzing.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Chirurgische operatietijd

Na de training kan een ervaren chirurg de operatie met succes binnen 35 minuten uitvoeren met behulp van de binnenbandtechniek, waarbij ongeveer 15,5 minuten nodig zijn voor de voorbereiding van de ontvanger, 10,9 minuten nodig zijn voor de voorbereiding van de donor en 4,4 minuten nodig zijn voor donorhartanastos. De koude en warme ischemietijd (van donorpreparaat tot hartimplantatie) wordt teruggebracht tot 15,3 minuten in vergelijking met de operatie met behulp van de manchettechniek zonder de binnenbandtechniek en hechtingstechniek(tabel 1)21.

We ontwierpen een samenwerkingsmodel om de efficiëntie van de operatie verder te verbeteren. Zoals blijkt uit het schema (Figuur 3), begint een chirurg eerst met het uitvoeren van de voorbereiding van de ontvanger, gevolgd door de inleiding van de donorvoorbereiding door een tweede chirurg na 4-5 minuten. Na 15-16 minuten moet de eerste chirurg klaar zijn met het preparaat van de ontvanger, waarna de tweede chirurg die klaar is met het oogsten van het donorhart, moet beginnen met het anastomosing van het donorhart binnen de ontvanger. Dit samenwerkingsmodel vereist dat elke chirurg slechts in één deel van de manchettechniek wordt opgeleid en de totale operatietijd verder verkort tot ongeveer 25 minuten. Een analyse van >600 heterotopische murinetransplantaties uitgevoerd via samenwerking tussen twee chirurgen in de afgelopen twee jaar aan het Orgaantransplantatie Instituut van de Universiteit van Xiamen wijst op een slagingspercentage voor harttransplantatie met behulp van deze techniek van maximaal 95%.

Survival of Major Histocompatibility Complex Cardiac Mismatched and Matched Cardiac Grafts

Major Histocompatiibility Complex (MHC), aangeduid als "H-2", is gebruikt om genetische verschillen en overeenkomsten te bepalen. Donor-mismatched MHC antigenen kunnen leiden tot graft afwijzing door rechtstreeks interactie met de ontvanger T-cellen of indirect als donor MHC-afgeleide peptiden uitgedrukt op ontvanger MHC moleculen23. Een volledig MHC mismatch balb/c (H-2d)allograft hart kan worden afgewezen, met een mediane overlevingstijd van 7,5 dagen na transplantatie in C57BL/6 (H-2b) ontvanger muizen (Figuur 4A). In onze studies, syngeneic harttransplantaties overleefden meer dan 100 dagen, behalve in een zeldzaam geval als gevolg van een 15% gewichtsverlies in vergelijking met normaal gewicht voor de operatie.

Hartalografts kunnen worden geoogst voor histopathologisch onderzoek op het moment van afwijzing. Figuur 4B toont het uiterlijk van gemarkeerde celgemedieerde afstotingskenmerken, zoals ontstekingscelinfiltratie, weefseloedeem en microvasculaire occlusie. Syngeneic grafts zijn bijna normaal zonder bewijs van myocyte necrose of inflammatoire celinfiltratie.

Effect van binnenband op vasculair Endothelium

Om de schade op het vasculaire endotheel te evalueren na het inbrengen van de binnenband in het lumen, 100 dagen na syngeneïsche harttransplantatie, kan het vasculaire endotheel van anastomoseplaats worden verzameld en gekleurd door immunofluorescent. In deze analyse werden geen duidelijke vernauwing van de vaatwand, trombose of verdikking van de intima waargenomen(figuur 4C). Elektronenmicroscopische beeldvorming toonde aan dat een glad endotheel en een regelmatige longitudinale kamvorming, met de endotheelcellen netjes en dicht gerangschikt, zonder duidelijke sedimenten op het oppervlak (Figuur 4D).

Figure 1
Figuur 1: Een set steriele chirurgische instrumenten:
aA) Fijne tangen en oogheelkundige scharen; bB) Micro gebogen tangen; cC) Micro rechte tangen; (D) Micronaaldenhouders; (E) Microschaar; (F) Bulldog klemmen; (G) Een slagader binnenband (rode gestippelde pijl) en manchet (rode vaste pijl), samen met een ader binnenband (zwarte gestippelde pijl) en manchet (zwarte vaste pijl). Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 2
Figuur 2: Voorbereiding van de ontvanger.
(A) Plaats de aderbinnenband in het externe halsadervat; (B) Evert de ader schip over de manchet en bevestig het met behulp van een omtrek 8-0 zijdehechting; cC) Plaats de binnenband van de slagader in het lumen van het slagadervat; (D) Evert de ader schip over de manchet en bevestig het met behulp van een omtrek 8-0 zijden hechting. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 3
Figuur 3: Operatietijd van elke stap in heterotopische MurineTransplantatie. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 4
Figuur 4: (A) Harttransplantatie Overlevingstijd. Kaplan-Meier plot toont het voortbestaan van hartalgrafts (BALB/c) en syngeneic grafts (C57BL/6) van donormuizen getransplanteerd in C57BL/6 ontvanger muizen (n = 12 muizen / groep); bB) Microscopisch onderzoek van C57BL/6 (links) Isograft en Wild Type BALB/c Allograft (rechts) op dag 7 na transplantatie (schaalstaven, 50 um; vergroting ×400); (C) Immunofluorescentie (schaalstaven, 50 μm; vergroting ×400) (D) Elektronenmicroscopie scanning van vasculair Endotheel bij Transplantatie (links) en Naïeve (rechts) Ontvanger. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Anastomose techniek Voorbereidingstijd van de ontvanger Voorbereidingstijd van de donor De implantatietijd van het hart Koude en warme ischemietijd Totale bewerkingstijd
5. Cervicale heterotopisch Hechting N N N < 45 min N
6. Cervicale heterotopisch Manchet 45 min 15 min 10 min N N
24. Cervicale heterotopisch Manchet 15 min 20 min 15 min 25-40 min < 60 min
25. Buik Heterotopisch Hechting N N N N 35 min
7. Cervicale heterotopisch Manchet N 20 min N 30 min 35 min
26. Cervicale heterotopisch Manchet N 20 min 20 min < 35 min N
4. Buik Heterotopisch Hechting 60-70 min 6-7 min N N 75 min
21. Cervicale heterotopisch Manchet N N 7 min 20 min 45 min
27. Buik Heterotopisch Hechting N 10-15 min N N 45-60 min
28. Cervicale heterotopisch Manchet 25 min 20 min 15 min 20 min 60 ± 8 min
29. Cervicale heterotopisch Manchet 31,9 min 21,1 min 5,1 min 28,5 min 57,8±3,9 min
29. Cervicale heterotopisch Hechting 25,2 min 20,5 min 30,8 min 51,3 min 83,9±2,9 min
Cervicale heterotopische in ons protocol Manchet 15,5 min 10,9 min 4,4 min 15.3 min 35 min
(Enkelvoudige bewerking)
23 min
(Samenwerking)

Tabel 1: Vergelijking van de tijd van verschillende fasen in verschillende muis harttransplantatie technieken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Muisharttransplantaties modellen zijn belangrijke instrumenten voor transplantatie immunologie onderzoek, als instrumenten en materialen voor de evaluatie van de immuunmechanismen van dit model en een groot aantal gen-gemodificeerde muizen beschikbaar zijn. Microchirurgische technische uitdagingen, zoals de hechting en de edsie van schepen, hebben echter het wijdverbreide gebruik ervan beperkt. In deze studie hebben we bepaalde technische belangrijkste uitdagingen van murineharttransplantatie onderzocht en goede resultaten behaald. Een kritische stap van het protocol het inbrengen van een binnenband in het lumen als een stent om de vaatwand over de manchet te everten. Deze optimalisatiestap lost de technische uitdaging van het slagadervat op vanwege de noodzaak van een uitgebreid stuk. Personen zonder microchirurgische vaardigheid kunnen beginnen met het uitvoeren van de techniek na twee maanden training, die ook zal helpen bij de brede toepassing van dit model.

In onze ervaring zal een geschikte binnenband de transplantatieresultaten verbeteren. De buitendiameter van de binnenband moet iets kleiner zijn dan de binnendiameter van het ontvangende bloedvat. Bovendien moeten stompe polypropyleenbuizen of cilinders met een glad oppervlak worden gebruikt als de tijdelijke binnenkernen om beschadiging van het vasculaire endotheel te voorkomen. In onze handen, geen trombose opgetreden in de 5% van de modellen die mislukt, hoewel trombus is een belangrijke factor voor falen na anastomose met behulp van de hechting techniek. Met behulp van deze volwassen modellen, onze laboratoria hebben gepubliceerd verschillende fundamentele onderzoeksartikelen die zijn erkend door peer reviewers14,15,16,17,18,19.

Operaties die binnen 35 minuten werden uitgevoerd, waren niet significant verschillend in vergelijking met de traditionele manchettechniek, maar de koude en warme ischemietijd waren aanzienlijk lager dan andere technieken(tabel 1). Met behulp van het samenwerkingsmodel wordt de gemiddelde bewerkingstijd verder verkort tot 23-25 minuten, wat tot uiting komt in de anesthesietijd van de ontvangende muis en in de implantatietijd van het donorhart. Een ander voordeel van de manchettechniek dat het de warme ischemische tijd beperkt(tabel 1). Omdat er geen ijszak wordt gebruikt om het harttransplantatie te beschermen tegen de warme lichaamstemperatuur van de muisontvanger, is de warme ischemische tijd gelijk aan de anastomosetijd. De geoptimaliseerde manchettechniek omvat de voorbereiding van beide manchetten op de ontvanger om de anastomoseprocedure te vereenvoudigen en verkort dienovereenkomstig de anastomosetijd. Daarom beperkt de manchettechniek de warme ischemische tijd tot gemiddeld slechts 4,4 minuten.

Er zijn echter enkele belangrijke stappen op te merken met de nieuwe techniek besproken. Zorg ervoor dat u de submandibulaire klier van de ontvangende muis in cervicale heterotopische harttransplantatie30te behouden, als de submandibulaire klier kan worden gebruikt om het hart graft vast te stellen en te voorkomen dat draaien van de vaten. Vermijd beschadiging van de nervus vagus bij het isoleren van de externe halsader en halsslagader, omdat letsel kan leiden tot nekhemiplegie bij de ontvanger. De druk van de bulldog klemmen moet worden gehandhaafd op 20-25 gram om clip letsel of lekkage van het vat te voorkomen. Was het lumen van de vaten en de manchetten met 0-4 °C gehepariniseerde zoutoplossing om eventuele resterende bloed- en gasbellen te verwijderen; dit voorkomt embolie bij grafts na reperfusie. Gebruik een spuit van 1 mL om de donor met 0-4 °C te laten versperren en verhoog de snelheid tot 50 μL per seconde om een passende druk te behouden. Tijdens anastomose, niet band de omtrek 8-0 hechtingen (gebruikt om het everted vasculaire endotheel aan de manchetten vast te stellen) in het lumen van de graftslagaders.

Hoewel er beperkingen zijn aan het samenwerkingsmodel, waaronder de noodzaak van microchirurgische technieken, de beschikbaarheid van twee gelijktijdige microscopen en het dubbele van het aantal geschoolde chirurgen, heeft het toch aangetoond dat het een succesvolle benadering is voor het uitvoeren van gevasculariseerde orgaantransplantatie. De bredere toepassing ervan kan verder bijdragen tot de ontwikkeling van nieuwe immunosuppressieve protocollen en het bestuderen van de mechanismen van acute en chronische afstoting in het transplantatiegebied.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgments

Dit werk werd ondersteund door het Fujian Provincial Health Education Joint Research Project (WKJ2016-2-20), de National Natural Science Foundation of China (81771271 en 81800664), het National Key R&D Program of China (2018YFA0108304) en het Project Onderwijs en Wetenschappelijk Onderzoek voor jonge en middelbare docenten in de provincie Fujian (JAT170714), Natural Science Foundation van de provincie Hunan (2019JJ50842) en Huxiang Young Talents van de provincie Hunan (2019RS2013).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Artery cuff Self-made Polyamide tube. diameter: 0.55 mm,length: 1.0 mm
Artery inner tube Self-made Polyamide tube. Diameter: 0.28mm
Micro curved forceps Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA3050 1/8 arc, 0.3-mm tip without a hook
Micro needle holders Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA2050 0.2-mm tip
Micro scissors Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA1050 Straight, blade length: 10 mm
Micro straight forceps Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory WA3060 0.15-mm tip without a hook
Scanlan Vascu-Statt Bulldog Clamps Scanlan International Inc 1001-531 Clamping pressure 20–25 grams
Vein cuff Self-made Polyamide tube. diameter: 0.9 mm,length: 1.2 mm
Vein inner tube Self-made Polyamide tube. Diameter: 0.6 mm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Heart transplantation in congenic strains of mice. Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).
  2. Que, W. et al. Prolonged cold ischemia time in mouse heart transplantation using supercooling preservation. Transplantation. (2019).
  3. Wang, C. Y. et al. Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions. Circulation. 105 (13), 1609-1614 (2002).
  4. Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).
  5. Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).
  6. Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).
  7. Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice. Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).
  8. Li, W. et al. Surgical technique for lung retransplantation in the mouse. Journal of Thoracic Disease. 5 (3), 321-325 (2013).
  9. Kamada, N., Calne, R. Y. A surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat. Surgery. 93 (1 Pt 1), 64-69 (1983).
  10. Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis. PLoS One. 8 (10), e77278 (2013).
  11. Miller, M. L. et al. Spontaneous restoration of transplantation tolerance after acute rejection. Nature Communications. 6, 7566 (2015).
  12. Lin, Y. et al. Overexpression of Jagged-1 combined with blockade of CD40 pathway prolongs allograft survival. Immunology and Cell Biology. 93 (2), 213-217 (2015).
  13. Xie, B. et al. Combined costimulation blockade inhibits accelerated rejection mediated by alloantigen-primed memory T cells in mice. Immunological Investigations. 38 (7), 639-651 (2009).
  14. Shao, W. et al. Combination of monoclonal antibodies with DST inhibits accelerated rejection mediated by memory T cells to induce long-lived heart allograft acceptance in mice. Immunology Letters. 138 (2), 122-128 (2011).
  15. Dai, H. et al. Blockade of CD27/CD70 pathway to reduce the generation of memory T cells and markedly prolong the survival of heart allografts in presensitized mice. Transplant Immunology. 24 (4), 195-202 (2011).
  16. Yan, G. et al. Inhibition of accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonged allograft survival by arsenic trioxide. Immunological Investigations. 42 (5), 438-454 (2013).
  17. Yan, G. et al. Inhibiting accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonging allograft survival by 1alpha,25-dihydroxyvitamin D(3) in nude mice. Immunology Letters. 149 (1-2), 54-61 (2013).
  18. Lin, Y. et al. Arsenic trioxide is a novel agent for combination therapy to prolong heart allograft survival in allo-primed T cells transferred mice. Transplant Immunology. 25 (4), 194-201 (2011).
  19. Shao, W. et al. CD44/CD70 blockade and anti-CD154/LFA-1 treatment synergistically suppress accelerated rejection and prolong cardiac allograft survival in mice. Scandinavian Journal of Immunology. 74 (5), 430-437 (2011).
  20. Li, Y. et al. A highly reproducible cervical cuff technique for rat-to-mouse heterotopic heart xenotransplantation. Xenotransplantation. (2017).
  21. Oberhuber, R. et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
  22. Blanchard, J. M., Pollak, R. Techniques for perfusion and storage of heterotopic heart transplants in mice. Microsurgery. 6 (3), 169-174 (1985).
  23. Felix, N. J. et al. H2-DMalpha(-/-) mice show the importance of major histocompatibility complex-bound peptide in cardiac allograft rejection. Journal of Experimental Medicine. 192 (1), 31-40 (2000).
  24. Tomita, Y. et al. Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice. Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).
  25. Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon. Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).
  26. Wang, K., Zhang, N., Li, H. Improved technique of mouse heterotopic heart graft retransplantation. Microsurgery. 26 (3), 200-202 (2006).
  27. Plenter, R. J., Grazia, T. J. Murine heterotopic heart transplant technique. Journal of Visualized Experiments. (89) (2014).
  28. Ratschiller, T. et al. Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice. Journal of Visualized Experiments. (102), e52907 (2015).
  29. Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Experimental and Clinical Transplantation. 8 (3), 245-249 (2010).
  30. Fukunaga, N., Bissoondath, V., Rao, V. Submandibular Gland-preserving Technique for Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice. Transplantation. 102 (11), e464-e465 (2018).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.

    Usage Statistics