在果蝇幼虫中枢神经系统的剖析

Biology

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Summary

在这篇文章中,我们将演示如何剖析第三龄果蝇幼虫中枢神经系统。

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Hafer, N., Schedl, P. Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster. J. Vis. Exp. (1), e85, doi:10.3791/85 (2006).

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Abstract

中枢神经系统(CNS)的果蝇幼虫是复杂的和知之甚少。调查的中枢神经系统的一种方法是使用免疫组织化学研究各种新颖,标志蛋白的表达。整个幼虫染色是不切实际的,因为艰难的角质层,防止穿透体腔内部的抗体。为了污渍这些组织是必要的解剖动物之前,固定和染色。在这篇文章中,我们将演示如何剖析而不损害中枢神经系统的果蝇幼虫。开始幼虫,用一双细镊子撕成两半,然后打开角质层的“内向外”揭露的中枢神经系统。如果进行仔细清扫的中枢神经系统将继续连接到角质层。我们通常保持整个固定和染色步骤角质层的中枢神经系统,只有完全去除角质层的中枢神经系统,安装前在载玻片上的样品。我们也表现出一些有代表性的前夕,在在中枢神经系统的神经元的一个子集中表达的一种转录因子染色的一个幼虫中枢神经系统的图像。文章最后讨论了这项技术的实际用途和可能出现的潜在困难一些。

Protocol

  1. 剖析3 龄幼虫,使角质层的中枢神经系统。放置在一个1.5毫升管。
  2. 在PBS(1X),修复含有2%的甲醛与摇晃40分钟。每隔5-10解剖中枢神​​经系统使用250ul。
  3. 清除甲醛,并简要洗3次,PBS + 0.1%Triton X一100(PBST)。使用细拉的巴斯德吸管,以避免组织损失。
  4. 座非特异性蛋白结合位点和通透细胞膜,通过孵化PBST组织1-8小时+ 5%BSA,在4摇摆° C。
  5. 在PBST + 5%BSA的摇摆稀释抗体在4 ° C过夜孵育。最佳的抗体稀释,会因不同的抗体。
  6. 在PBST冲洗3倍,由两个30分钟的洗涤在4 ° C
  7. 在PBST稀释的二级抗体孵育+ 5%BSA摇摆1-3小时4 ° C。在PBST冲洗3倍,由两个30分钟的洗涤在4 ° C如果中学是一种光敏化合物的共轭,包装铝箔管。
  8. 进一步解剖组织(如需要)和安装在幻灯片上。

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Discussion

该视频演示了如何从果蝇幼虫三龄中枢神经系统解剖。解剖后,中枢神经系统,可染色,使用一个标准的免疫组织化学协议。目前,很多仍然是未知的成年神经系统是如何产生以及如何存储和传输信息。发展中国家的果蝇幼虫中枢神经系统的研究应该加强我们的神经系统的布线和功能知识。

果蝇幼虫stereotpyed的行为,如环境因素的反应,表现出。如何教训和神经系统中存储​​的这些行为呢?幼虫发育期间的神经系统的研究将有助于回答这个问题。

此时在果蝇发育阶段,机体准备接受广大化蛹期间发生的形态学变化。在这段时间内发生大规模的重塑,神经肌肉系统从爬行蛆到成年飞organsim转换。这将是有趣,以确定神经元的变化如何在这个发展阶段,如果同一类型的行为,可以在高等动物的神经元观察。

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Forceps fine tipped
9-well Watch glass
Plastic Petri dish

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References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. The justification/ultimate goals are poorly explained. How dŒs the presence of a protein show function?

    Reply
    Posted by: jacqui s.
    December 12, 2009 - 6:36 AM

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