טעם הוא תהליך חושי חשוב המאפשר משיכה לחומרים מועילים והימנעות מחומרים רעילים. פרוטוקול זה מתאר מבחן בליעה פשוט לקביעת העדפת טעם של דרוזופילה לתרכובת כימית נתונה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
תפיסת הריח והטעם של הסביבה חיונית להישרדות בעלי חיים. היישום הברור ביותר של כימותרפיה זו הוא היכולת להבחין בין מקורות מזון טובים למקורות מזון שעלולים להיות מסוכנים. גוסטיישן דורש מגע פיזי עם תרכובת כימית המסוגלת לאותת באמצעות קולטני טעם המתבטאים על פני השטח של נוירונים. אצל חרקים, תאי העצב הטעמיים האלה יכולים להיות ממוקמים על פני גוף החיה, מה שמאפשר לטעם למלא תפקיד חשוב בהתנהגויות רבות ושונות. חרקים מעדיפים בדרך כלל תרכובות המכילות סוכרים, בעוד שתרכובות הנחשבות בעלות טעם מר נמנעות. בהתחשב בחשיבותו הביולוגית הבסיסית של הטעם, יש עניין רב בהבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס אופן חושי זה. אנו מתארים בדיקת טעם של דרוזופילה בוגרת המשקפת את העדפת בעלי החיים לתרכובת טסטנט נתונה. ניתן ליישם בדיקה זו על בעלי חיים מכל רקע גנטי כדי לבחון את העדפת הטעם לתרכובת מסיסה רצויה.
מבוא
בעלי חיים להשתמש chemosensation להבחין תנאי יתרון מלבד תנאים נחותים. תפיסה זו יכולה להיות קריטית עבור דברים כגון קביעת מקור המזון הטוב ביותר, הימנעות חומרים רעילים או קביעת שותף הזדווגות מיטב 1. Chemosensation מחולקת לעתים קרובות לשני מרכיבים חושיים: חושי חוש ריח וחושים התעוררו אצלם. מאפיין מבדיל עיקרי של חושים אלה הוא כי חוש ריח (ריח) משמש כדי לדגום את הסביבה הכימית גזים שמסביב בעוד gustation (טעם) דורש מגע פיזי עם מצע בלתי נדיף. שני אופנים חושיים לעורר תגובות נוירולוגיות שעוברים עיבוד מפוענח במוח כדי לגרום לפעולת 2 דוחה או המושך המתאים. חושים אלה הם אפוא קריטיים להישרדות חיה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. רעב
- הכן לטוס בקבוקונים רעבים על ידי להרוות כדור צמר גפן עם 18.2 MΩ מים בתחתית בקבוקון זבוב סטנדרטי. לחלופין, בדומה להרוות רצועה קטנה של נייר סינון עם 18.2 MΩ מים ומקום בזווית בתוך הבקבוקון.
- אסוף זבובים לתוך סטים של ~ 100 בעלי חיים על כרית CO 2 ולאחר מכן להוסיף את הזבובים כדי בקבוקון מוכן.
הערה: התוצאות הטובות ביותר מושגות עם חיות כי הם פחות מ 5 ימים. עם זאת, את הגיל המדויק של החיות ניתן לשלוט כמשתנה ניסיוני לקבוע לשינויים בהעדפות הטעם לאורך זמן.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כמה תוצאות אופייניות מבחני העדפה לטעם מוצגות להלן. ברוב הניסויים שונים כלשהי עוצמת צביעת בטן יהיה לראות (איור 1). כל צביעה בבטן אם אינטנסיבי או חלש נחשבת בליעה חיובית. לכן מומלץ לחוקרים להבקיע בעלי חיים תוך עיוור תנאי הניסוי כדי להגביל כל הטיות פוטנציאליות.
כמו כן, חשוב לבחור ריכוזי צבע מאכל אשר אינו משפיע על התוצאה של assay ההעדפה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
תארנו פרוטוקול פשוט אך יעיל לקביעת העדפה לטעם תסיסנית. גרסאות של assay זה משמשים באופן שגרתי ניסויים כדי לקבוע את תרומתם של קולטנים התעורר אצלם (GRS) כדי לתפוס את איכויות שונות (מר, מתוק, חמוץ, מלוח, umami) של תרכובות טעם. הגנום תסיסנית מכיל כ 60 גנים המקודדים 68 קולטנים gustatory מזוהה על ידי שחבור חלופי 8,9. עם זאת, חלבונים אחרים כגון קולטני גלוטמט ionotropic וערוצי TRP גם הוכחו לשחק תפקיד בטעם 10-13. לכן, יש מגוון נרחב בכח המפלה של טעם חר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
תודות
ברצוננו להודות לחברי מעבדת טסייה על הקריאה הביקורתית של כתב היד הזה ועל הצעות מועילות במהלך הכנת פרוטוקול זה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צבע מאכל כחול (מים, פרופילן גליקול, FD& C כחול 1 ואדום 40, פרופילפרבן) | מקורמיק | N/A | |
| קופסאות קריו/מקפיא ללא חוצצים | פישר | 03-395-455 | |
| Dumont #5 מלקחיים | כלים מדעיים עדינים | 11251-20 | |
| חומצה אצטית קרחונית | פישר | BP2401-500 | |
| Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X מיקרוסקופ | W. Nuhsbaum, Inc. | צלחת | |
| פטרי 10446294 (100 מ"מ x 15 מ"מ) | BD Falcon | 351029 | לשימוש חוזר אם נשטף ומיובש היטב |
| Quick-Snap Microtubes | Alkali Scientific Inc. | C3017 | |
| צבע מאכל אדום (מים, פרופילן גליקול, FD& C Reds 40 and 3, Propylparaben) | McCormick | N/A | |
| Sucrose | IBI Scientific | IB37160 |
מקורות
- Herrero, P. Fruit fly behavior in response to chemosensory signals. Peptides. 38 (2), 228-237 (2012).
- Vosshall, L. B., Stocker, R. F. Molecular architecture of smell and taste in Drosophila. Annu Rev Neurosci. 30, 505-533 (2007).
- Harris, D. T., Kallman, B. R., Mullane....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
