Introduction
पशु chemosensation का उपयोग हानिकर की स्थिति से अलग लाभप्रद शर्तों भेद करने के लिए। यह धारणा है, सबसे अच्छा भोजन स्रोत का पता लगाने जहरीले पदार्थ से बचने या सबसे अच्छा संभोग साथी 1 निर्धारण के रूप में ऐसी बातों के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है। घ्राण होश और स्वाद इंद्रियों: Chemosensation अक्सर दो संवेदी घटकों में विभाजित है। इन इंद्रियों की एक मुख्य विशिष्ठ विशेषता है कि महक (गंध) के आसपास के गैसीय रासायनिक वातावरण का नमूना है, जबकि स्वाद (स्वाद) एक nonvolatile सब्सट्रेट के साथ शारीरिक संपर्क की आवश्यकता है प्रयोग किया जाता है। दोनों संवेदी तौर तरीकों न्यूरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं जो संसाधित और मस्तिष्क उचित आकर्षक या प्रतिकारक व्यवहार 2 का उत्पादन करने में डीकोड कर रहे हैं प्रोत्साहित। इन इंद्रियों इसलिए पशु अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण हैं।
फल मक्खी ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर एक मॉडल जीव जो समझ में उपयोग के लिए लोकप्रियता में वृद्धि जारी हैआईएनजी कैसे कीड़े गंध और स्वाद मानता है। फल मक्खियों आनुवंशिक आणविक, सेलुलर, और व्यवहार रास्ते के विच्छेदन के लिए उपलब्ध उपकरणों के धन के कारण अन्य मॉडल प्रणाली पर जबरदस्त लाभ प्रदान करते हैं। पिछले 15 वर्षों से काम विशिष्ट सेलुलर पहचान, न्यूरोनल रिसेप्टर्स निस्र्पक, और दोनों गंध और स्वाद में शामिल तंत्र संकेत में विशेष रूप से महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है। अब, ड्रोसोफिला आनुवंशिकी की शक्ति आगे स्पष्ट करने के लिए कैसे इन प्रक्रियाओं एक न्यूरॉन और सिंगल सर्किट स्तर 3-6 से कोडित रहे हैं इस्तेमाल किया जा रहा है। इसलिए, assays जो प्रदान आसानी से रन बनाए संवेदी रास्ते के लिए परिवर्तन की readouts इन क्षेत्रों के सतत अग्रिम के लिए महत्वपूर्ण हैं।
एक बड़ा सौदा कैसे घ्राण संकेतों कोडित और मस्तिष्क में कार्रवाई कर रहे हैं के बारे में जाना जाता है, बहुत कम स्वाद मार्ग में इसी प्रकार के तंत्र के बारे में समझा जाता है। हम यहाँ एक प्रोटोकॉल जो स्वाद preferen पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का वर्णनड्रोसोफिला। ड्रोसोफिला में सीई, स्तनधारियों की तरह, आम तौर पर मीठा स्वाद यौगिकों के रूप में पसंद करते हैं कड़वा स्वाद यौगिकों करने का विरोध किया। इन खाद्य स्रोतों का कोई भी संयोजन निर्धारित करने के लिए कैसे जाना जाता आनुवंशिक परिवर्तन स्वाद पसंद को प्रभावित इस प्रयोगात्मक डिजाइन में उपयोग किया जा सकता है। इसके अलावा, औषधीय हस्तक्षेप रणनीतियों इसी तरह 'जानवरों के स्वाद पसंद पर उनके प्रभाव के लिए मूल्यांकन किया जा सकता है। आसानी और इस परख का लचीलापन यह ड्रोसोफिला में स्वाद धारणा की प्रकृति को समझने के लिए एक उपयोगी प्रतिमान बना देता है।
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Protocol
1. भुखमरी
- एक मानक मक्खी शीशी के नीचे 18.2 MΩ पानी के साथ एक कपास की गेंद को संतृप्त द्वारा भुखमरी शीशियों के लिए उड़ान भरने को तैयार है। वैकल्पिक रूप से, इसी तरह शीशी के भीतर एक कोण पर 18.2 MΩ पानी और जगह के साथ फिल्टर पेपर की एक छोटी सी पट्टी तर।
- सीओ 2 पैड पर के सेट में मक्खियों 100 पशुओं को इकट्ठा ~ और फिर एक तैयार शीशी मक्खियों जोड़ें।
नोट: सबसे अच्छा परिणाम जानवरों है कि कम से कम 5 दिन पुराने हैं के साथ प्राप्त कर रहे हैं। हालांकि, जानवरों की सही उम्र समय के साथ स्वाद वरीयता में परिवर्तन का निर्धारण करने के लिए एक प्रयोगात्मक चर के रूप में नियंत्रित किया जा सकता है। - सुरक्षित करने के लिए बंद कर दिया शीशियों एक कपास की गेंद या फोम डाट का प्रयोग करें। उनके पक्ष में शीशियों एक पर्यावरण नियंत्रित इनक्यूबेटर में रखें। 25 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, और 70% से अधिक नमी बनाए रखें। 24 घंटे के लिए अछूता शीशियों छोड़ दें।
2. स्वाद पसंद परख
- उसी दिन एक पर परख के लिए सभी tastants तैयारएस परीक्षण।
नोट: सटीक tastants प्रयोगात्मक प्रश्न के आधार पर अलग अलग होंगे इस्तेमाल किया जा करने के लिए कहा जा रहा है। निम्न उदाहरण इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल tastants हैं। अनुकूलन के लिए धारा 4 देखें।- 100 मिमी सूक्रोज समाधान के 10 μl, लाल रंग भोजन के 13 μl, और 18.2 MΩ पानी के 977 μl के संयोजन से नियंत्रण tastant (1 मिमी सूक्रोज) तैयार करें।
- 100 मिमी सूक्रोज समाधान के 50 μl, नीले रंग भोजन के 10 μl, और 18.2 MΩ पानी के 940 μl के संयोजन से प्रयोगात्मक tastant (5 मिमी सूक्रोज) तैयार करें।
- निम्नलिखित तरीके से तैयार एक मानक 100 मिमी x 15 मिमी प्लास्टिक पेट्री डिश का उपयोग परख कक्षों करें:
- तीन 10 μl और 12 बजे प्लेट के किनारे निकटतम नियंत्रण tastant की बूंदों 6 बजे एक और 3 बूँदें रखें। सुनिश्चित करें कि बूंदों के बीच अंतर रखने के समान है।
- 3 बजे और एक पर थाली के किनारे निकटतम प्रयोगात्मक tastant के तीन 10 μl बूंदों की जगहअन्य 3 9 बजे चला जाता है। सुनिश्चित करें कि बूंदों के बीच अंतर रखने के समान है।
- दोहराएँ के रूप में कई प्रतिकृति के लिए 2.2.1 और 2.2.2 कदम के रूप में वांछित।
- सीओ 2 पैड अभी लंबे समय तक सभी जानवरों (लगभग 10 सेकंड) anesthetize करने के लिए पर्याप्त पर ~ 100 भूखे मक्खियों की खाली शीशी 1। एक तैयार परख चैम्बर के बीच में पशुओं ब्रश और पकवान ढक्कन के साथ कवर किया।
नोट: लंबे समय तक सीओ 2 जोखिम की अवधि वसूली समय और खिला व्यवहार के साथ सीमा हस्तक्षेप सुधार करने के लिए बचा जाना चाहिए। बर्फ के संपर्क में (~ 5 मिनट) सीओ 2 व्यवहार प्रभाव है कि भले सीमित जोखिम से उत्पन्न हो सकती से बचने के लिए anesthetizing के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। - एक अपारदर्शी कार्डबोर्ड बॉक्स में परख चैम्बर रखें। हालत और जीनोटाइप परीक्षण किया जा रहा के साथ बॉक्स के बाहर लेबल करने के लिए सुनिश्चित करें।
- 2 घंटे के लिए कम से कम 70% नमी के साथ एक 25 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में पूरे सेटअप (परख चैम्बर 2.4 कदम से गत्ता बॉक्स के भीतर निहित) रखें। दोहराएँ सभी प्रतिकृति के लिए 2.5 के माध्यम से 2.3 कदम।
- 2 घंटे के बाद, सीधे एक -20 डिग्री सेल्सियस quantitation के लिए तैयार है जब तक फ्रीजर में, परख कक्षों, अभी भी गत्ता बक्से के भीतर निहित जगह है।
3. स्वाद पसंद परख मात्रा
- एक भी परख चैम्बर कमरे के तापमान (लगभग 5 मिनट) तक गर्म करने के लिए अनुमति दें।
- लाल, नीले, बैंगनी या स्पष्ट (चित्रा 1): एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, एक ब्रश या संदंश की जोड़ी का उपयोग कर, उनके पेट के रंग के आधार पर समूह जानवरों।
- प्रत्येक समूह में जानवरों की संख्या रिकॉर्ड। स्पष्ट जानवरों के लिए परख में भाग नहीं लिया है पर विचार और इसलिए उन्हें किसी भी गणना में शामिल नहीं हैं।
- निम्नलिखित समीकरण से एक के अनुसार वरीयता सूचकांक की गणना:
- (एन लाल + 0.5N बैंगनी) ब्याज की प्रयोगात्मक tastant लाल रंग से जोड़ा जाता है, तो उपयोग / (एन लाल + N नीले + N purplई)।
- प्रयोगात्मक tastant नीले रंग की डाई करने के लिए जोड़ा जाता है, तो (एन नीले + 0.5N बैंगनी) / (एन नीले + N लाल + एन बैंगनी) के समीकरण को समायोजित।
- सभी प्रयोगात्मक शर्तों और प्रतिकृति के लिए गणना दोहराएँ।
4. स्वाद पसंद परख के अनुकूलन
- अनुभव से खाद्य रंग संकेतकों की एकाग्रता का निर्धारण, ताकि खाद्य रंग स्वाद परख के परिणाम को प्रभावित नहीं करता इस्तेमाल किया जा करने के लिए इस प्रकार है:
- उसी आधार यौगिक (जैसे 5 मिमी सूक्रोज) के रूप में 2.1 चरण में संकेत का उपयोग कर 4 tastants तैयार है, लेकिन खाद्य रंग न आना।
- tastants से एक के लिए 1.3% लाल रंग भोजन जोड़ें। प्रत्येक ट्यूब में अलग सांद्रता के नीले रंग भोजन (जैसे 0.6%, 1%, और 1.3%) के साथ शेष 3 tastants बनाओ।
- पूरा प्रोटोकॉल 2.2 हर tastant जोड़ी के लिए 3.4 के माध्यम से कदम: 1.3% लाल बनाम 0.6% नीले; 1.3% लाल बनाम 1% नीले और1.3% लाल बनाम 1.3% नीला।
- दोहराएँ कदम 4.1.1-4.1.3 वरीयता सूचकांक का औसत तक नीले रंग भोजन के विभिन्न प्रतिशत 0 (चित्रा 2) के एक मूल्य के साथ।
नोट: एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में, 1.3% लाल रंग भोजन 1% नीले रंग भोजन के साथ मिलकर आम तौर पर अच्छे परिणाम अर्जित करता है। नीले रंग भोजन का कोई संतोषजनक एकाग्रता 1.3% डाई करने के लिए मिलान किया जा सकता है, तो कदम 4.1.3 के माध्यम से 4.1.1 लाल रंग और नीले रंग भोजन के एक निरंतर एकाग्रता की सांद्रता के साथ अलग दोहराया जा सकता है। - सभी शर्तों ही अनुकूलित खाद्य रंग सांद्रता के साथ परीक्षण किया जा करने का विश्लेषण।
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Representative Results
स्वाद पसंद assays से कुछ विशिष्ट परिणाम नीचे दिखाई जाती हैं। सबसे प्रयोगों में पेट रंग की तीव्रता में कुछ बदलाव (चित्रा 1) में देखा जाएगा। चाहे वह तीव्र या कमजोर पेट में किसी भी रंग एक सकारात्मक घूस माना जाता है। इसलिए यह उचित शोधकर्ताओं ने जानवरों जबकि प्रयोगात्मक हालत को अंधा स्कोर करने के लिए इतनी के रूप में किसी भी संभावित पूर्वाग्रहों की सीमा है।
यह भी खाद्य रंजक जो वरीयता परख के परिणाम को प्रभावित नहीं करते की सांद्रता का चयन करने के लिए महत्वपूर्ण है। विभिन्न खाद्य रंग सांद्रता का उपयोग करने के परिणामों का एक उदाहरण चित्रा 2 में दिखाया गया है इस उदाहरण में, लाल खाद्य रंग की मात्रा 1.3% पर बनाए रखा गया था, जबकि नीले रंग की डाई भोजन की राशि अलग-अलग किया गया था:। 0.6%, 1%, और 1.3 %। हर रंग 5 मिमी सुक्रोज को जोड़ा गया है परख में भाग लेने वालों की एक उच्च प्रतिशत सुनिश्चित करने के लिए। स्वाद preference परख तो हर हालत और वरीयता सूचकांक 3.4.1 में समीकरण के अनुसार गणना से 3 प्रतिकृति पर प्रदर्शन किया गया था। एक प्रतिशत नीले 1.3% लाल रंग के साथ मिलकर डाई के रूप में पशुओं की विफलता अन्य (वरीयता सूचकांक 0.5 के करीब मूल्य) पर एक रंग में सुक्रोज वर्तमान चयन करने के द्वारा प्रदर्शन किया इन प्रयोगों के लिए इष्टतम होना पाया गया। जब केवल 0.6% नीले रंग की डाई 1.3% लाल रंग के साथ रखा गया था, जानवरों स्पष्ट रूप से लाल रंग सुक्रोज के नमूने (1 करने के लिए पास वरीयता सूचकांक मूल्य) को चुना है, भले ही सुक्रोज एकाग्रता दोनों रंग के लिए समान था। खाद्य रंग के बराबर मात्रा का उपयोग करते हुए एक मामूली में हुई है, हालांकि सांख्यिकीय महत्वपूर्ण, सूक्रोज नीले रंग की डाई (वरीयता सूचकांक मूल्य <0.5) युक्त नमूने के लिए वरीयता। यहां पहचान इष्टतम मूल्यों सुक्रोज 1 मिमी से 10 मिमी से लेकर सांद्रता की एक 10 गुना सीमा से अधिक अनुरूप परिणाम देने के लिए पाए गए। फिर भी, यहां मात्रा पहचान मूल्यों और वास्तविक concentrati शुरू करने पर विचार किया जाना चाहिएons के अनुभव से गणना की जानी चाहिए सभी स्थितियों के लिए प्रयोगात्मक नमूने चल करने से पहले परीक्षण किया जाना है।
जो समीकरण वरीयता सूचकांक की गणना के लिए उपयोग करने के विकल्प के प्रयोग की स्थापना और प्रयोग के लक्ष्यों घृणा बनाम आकर्षण पर आधारित है। के रूप में चित्रा 3 में उदाहरण में दिखाया गया है, मक्खियों सुक्रोज कम सांद्रता बनाम की उच्च सांद्रता के लिए एक प्राथमिकता का प्रदर्शन किया और इस वरीयता एसिड के अलावा के साथ उलट हो सकता है। समीकरण (एन नीले + 0.5N बैंगनी) / 3.4.2 से (एन नीले + N लाल + एन बैंगनी) प्रत्येक प्रयोगात्मक हालत के 3 प्रतिकृति के लिए वरीयता सूचकांक की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया गया था के बाद से ब्याज की यौगिक नीले रंग की डाई में रखा गया था । 1 के पास एक वरीयता सूचकांक इंगित करता है कि जब 1 मिमी सुक्रोज (लाल रंग में) और 5 मिमी सुक्रोज के बीच चुनाव (नीले रंग में) की पेशकश की, मक्खियों लगभग हमेशा उच्च concentr चुना समझना। इसके विपरीत, मक्खियों का एक दूसरा समूह है कि 10% एसिटिक एसिड को छोड़कर एक ही विकल्प 5 मिमी सुक्रोज विकल्प (नीले रंग में) के साथ जोड़ दिया गया था दिया गया था। के रूप में 0 के पास वरीयता सूचकांक, एसिड 7 की उच्च सांद्रता के लिए जाना जाता है प्रतिक्रियाओं के साथ संगत के साथ देखा लगभग पूरी तरह से इस स्थिति से बचा मक्खियों।
चित्रा 1: स्वाद पसंद परख का परिणाम है। पेट रंग की भिन्नता में कुछ उदाहरण दिखाए जाते हैं। गहरे लाल रंग किया जाता है (ए)। प्रकाश लाल जाता (बी)। गहरे नीले (सी) किया जाता है। हल्का नीला जाता (डी)। जब पूरे रंगाई प्रकट होता है बैंगनी (ई) बैंगनी पेट माना जाता है, या जब लाल (नोक) के पेट शो भागों और नीले (तीर) के अलग-अलग भागों (एफ) के विशिष्ट क्षेत्रों के।//www.jove.com/files/ftp_upload/54403/54403fig1large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: खाद्य रंगाई प्रभाव के लिए नियंत्रण। tastants करने के लिए खाद्य रंग के अलावा पशुओं के स्वाद पसंद पर कोई असर नहीं होना चाहिए। नीले रंग की डाई की एकाग्रता परिवर्तनीय जबकि लाल रंग की एक निरंतर एकाग्रता को बनाए रखने के 1.3% 1.0% नीले रंग के लिए लाल रंग का एक इष्टतम संयोजन का पता चला। यह 0.5 के पास एक वरीयता मूल्य सूचकांक ने संकेत दिया है। मान मानक विचलन ± मतलब हैं। * पी <0.05, *** पी <0.001 से दो तरफा छात्र की टी परीक्षण। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3:। स्वाद पसंद आकर्षण और घृणा ड्रोसोफिला के लिए इस्तेमाल किया परख स्वाभाविक रूप से उच्च सांद्रता सुक्रोज के रूप में 1 के पास एक वरीयता सूचकांक मूल्य द्वारा देखा करने के लिए आकर्षित कर रहे हैं जब 5 मिमी सुक्रोज (नीले रंग में) और 1 मिमी सुक्रोज के बीच चुनाव को देखते हुए (लाल रंग में) । इस तरह 5 मिमी सुक्रोज विकल्प को एसिड के रूप में एक प्रतिकूल यौगिक जोड़ना उच्च सुक्रोज के लिए इस विकल्प के रूप में वरीयता सूचकांक 0. मूल्यों के पास मानक विचलन ± मतलब हैं बूँदें उलट जाती है। *** पी <0.0001 दो तरफा छात्र की टी परीक्षण से। कृपया यहाँ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।
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Discussion
हम ड्रोसोफिला में स्वाद वरीयता निर्धारित करने के लिए एक सरल लेकिन प्रभावी प्रोटोकॉल का वर्णन किया है। इस परख के संस्करण नियमित तौर पर अलग अलग गुणों (कड़वा, मीठा, खट्टा, नमकीन, और umami) स्वाद यौगिकों की मानता करने के लिए स्वाद रिसेप्टर्स (GRS) के योगदान को निर्धारित करने के लिए प्रयोगों में इस्तेमाल किया जाता है। ड्रोसोफिला जीनोम लगभग 60 जीन जो वैकल्पिक splicing 8,9 से 68 की पहचान स्वाद रिसेप्टर्स सांकेतिक शब्दों में बदलना होता है। हालांकि, इस तरह ionotropic ग्लूटामेट रिसेप्टर्स और टीआरपी चैनल के रूप में अन्य प्रोटीन भी स्वाद 10-13 में एक भूमिका निभाने के लिए प्रदर्शन किया गया है। इसलिए, वहाँ कीड़ों में स्वाद के भेदभावपूर्ण सत्ता में व्यापक विविधता है। इसके अलावा, गंध के लिए रिसेप्टर्स के विपरीत, स्वाद रिसेप्टर्स सभी फ्लाई ओवर स्थित कोशिकाओं में व्यक्त कर रहे हैं। Sensilla अलग स्वाद रिसेप्टर्स व्यक्त न्यूरॉन्स के संयोजन से युक्त labellum, पैर, पंखों पर और 14 ovipositer पाया जा सकता है। जैसे की,ड्रोसोफिला प्रेमालाप और अंडे बिछाने सहित पोषण अधिग्रहण से परे व्यवहार की मेजबानी के लिए स्वाद भेदभाव पर भरोसा करते हैं।
यह स्वाद विश्लेषण तकनीक कई अलग अलग प्रयोगात्मक सवालों को संबोधित करने के लिए लागू किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, के बाद से स्वाद, प्रेम प्रसंग, और अंडे बिछाने व्यवहार में कई जानवरों के लिए महत्वपूर्ण विचार कर रहे हैं, इस प्रोटोकॉल ऐसे ticks और मच्छरों के रूप में अन्य महत्वपूर्ण कीड़ों के लिए स्केलेबल हो सकता है। इस तरह की उन्नति रोग वेक्टर प्रबंधन और कीटनाशक विकास के लिए उपयोगी साबित हो सकता है। इसके अलावा, इस परख आगे आनुवंशिक स्क्रीन जो ड्रोसोफिला दशकों के लिए इस तरह के एक शक्तिशाली खोजी उपकरण बना दिया है में उपयोग के लिए बढ़ाया जा सकता है। स्वाद रास्ते की पूरी आणविक समझ नहीं जाना जाता है। उपन्यास जीन में अवरोधों जो इस परख में स्वाद वरीयताओं मध्यस्थता की पहचान स्वाद सर्किट ज्ञान में महत्वपूर्ण अंतराल में भरने में सहायता कर सकता है। इसके अलावा, बीमारी चोर की preclinical मॉडल के महत्व के रूप मेंबढ़ाने के लिए tinues, औषधीय स्वाद संकेतन तंत्र को प्रभावित करने स्क्रीन आसानी से इस प्रोटोकॉल में tastants को चिकित्सीय यौगिकों जोड़कर किया जा सकता है। इसलिए, मजबूत परख यहाँ वर्णित अनुसंधान के कई अलग अलग लाइनों के लिए एक संभावित महत्वपूर्ण उपकरण है।
वहाँ स्वाद पसंद के विश्लेषण के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग करने के कई फायदे हैं। इस खिला प्रतिमान ही किया जाता tastants और लोकप्रिय वर्तमान अनुप्रयोगों का पता लगाने के लिए एक ही रंग में उपयोग के प्रारंभिक संस्करणों tastant वितरण 15-18 के लिए microtitre प्लेटों का इस्तेमाल करते हैं। पेट्री डिश परख इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल चैम्बर एक कुछ आम उत्पाद प्रयोगशालाओं वर्तमान में स्वाद assays प्रदर्शन करने के लिए तैयार नहीं में पाया जाता है। पहले से ही हाथ पर एक परख चैम्बर होने की संभावना है, इसलिए, समय या नए उपकरणों में पैसा निवेश के बिना नई परिकल्पना के परीक्षण की सुविधा में मदद करता है। इसके अलावा, नीले और लाल रंगों का उपयोग कर के संयोजन है कि सब सुनिश्चित करने के लिए मूल्यवान हैजानवरों के प्रयोग में गिना वास्तव में प्रयोग में भाग लिया। यहाँ तक कि भुखमरी के 24 घंटे के बाद, भोजन अवधि के बाद स्पष्ट पेट के साथ कुछ स्वस्थ पशुओं से देखा जा सकता है। वरीयता सूचकांक गणना से इन जानवरों को नष्ट करने की आबादी का एक सटीक माप सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक है। इसके अलावा, भुखमरी के बाद कुछ जानवरों निरपवाद रूप से पहले वे परख में भाग लेने के लिए सक्षम हैं मर जाएगा। कुछ मरे हुए जानवरों सूखना सकता है और आसानी से गिनती से पहले हटाया जा सकता है, जबकि अन्य मरे हुए जानवरों की पहचान के लिए और अधिक कठिन हो सकता है। दोनों खाना पसंद में डाई का समावेश इसलिए, सुनिश्चित करता है कि केवल स्वस्थ पशुओं जो एक खाद्य स्रोत भस्म प्रयोग के लिए माना जाता है। यह बहुत परिणाम है जो इस परख के एकल रंग संस्करणों में देखा जा सकता है की परिवर्तनशीलता कम कर देता है। इसके अलावा, दो रंगों का प्रयोग भी जानवरों जो दोनों substrates पर खिलाने के उनके पेट में मिश्रित बैंगनी रंग से पहचाना जा सकता है। इन जानवरों को एकमहत्वपूर्ण पुन क्योंकि वे कुछ व्यक्तियों के पूरे समूह की तुलना में कमजोर वरीयताओं हो सकता है कि प्रदर्शित करता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि हम भी इस वयस्क स्वाद परख जहां दोनों substrates पर खिला जानवरों हरी पेट प्रदर्शन के लिए नीले और पीले रंगों का उपयोग कर भोजन सफलता मिली है। इस संदर्भ में, हमने पाया है कि पीले पेट कुछ हद तक कम लाल पेट से स्कोर करने के लिए स्पष्ट कर रहे हैं, लेकिन फिर भी कुछ शोधकर्ताओं इस विकल्प को पसंद कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल रंगों के साथ के रूप में, खाद्य रंग की एक उचित संतुलन अनुभव से रंगों सुनिश्चित करने के लिए 'जानवरों वरीयता पर एक प्रभाव नहीं है निर्धारित किया जाना चाहिए।
हालांकि यह स्वाद पसंद परख का निर्धारण कैसे मक्खियों की आबादी के अलग अलग tastants के लिए जवाब है पर अच्छा है, यह भी पशु प्रतिक्रियाओं या वास्तविक भोजन का सेवन के बारे में कोई जानकारी उपलब्ध नहीं कराता है। अन्य assays कि आमतौर पर ड्रोसोफिला प्रणालियों में स्वाद के अध्ययन के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं इन मापदंडों 19 का बेहतर समाधान की पेशकश </ Sup>। विशेष रूप से, सूंड विस्तार परख तरल भोजन की बूंदों के लिए एकल मक्खियों की वास्तविक व्यवहार प्रतिक्रिया की निगरानी के लिए बहुत उपयोगी है। इसी तरह एक केशिका खिला प्रतिमान (कैफे) जोड़ा लाभ यह है कि परख आसानी से समय की लंबी अवधि में नजर रखी जा करने में सक्षम है के साथ, एकल मक्खियों में किया जाता यौगिकों की मात्रा का आकलन करने के लिए एक मजबूत साधन प्रदान करता है। जनसंख्या के आधार स्वाद परख की एक और सीमा यहाँ स्कोरिंग की कुछ हद तक व्यक्तिपरक प्रकृति में झूठ है। जैसा कि चित्र 1 में सचित्र वहाँ हमेशा भस्म और / या प्रत्येक जानवर द्वारा उत्सर्जित भोजन की मात्रा में भिन्नता के कुछ डिग्री है। इसलिए पेट रंग की तीव्रता भिन्न होता है। यह शोधकर्ताओं जानवरों जबकि प्लेट की शर्तों को अंधा स्कोर करने के लिए अच्छा अभ्यास है। इसे पूरा करने के लिए यह प्लेटों पर tastant पहचान लेखन, लेकिन इसके बजाय बक्से लेबल से बचने के लिए प्लेटों में रखा जाता है की सिफारिश की है, इसलिए है कि प्लेटों के रूप में निष्पक्ष एक माँ में गिना जा सकता हैnner के रूप में संभव। यह भी अलग प्रयोगों में वैकल्पिक रंग के लिए ब्याज की tastant घूर्णन द्वारा परिणामों की पुष्टि करने के लिए समझदारी है। इस अतिरिक्त विश्लेषण के परिणाम के मजबूत सटीकता सुनिश्चित करना चाहिए।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Blue Food Coloring (Water, Propylene Glycol, FD&C Blue 1 and Red 40, Propylparaben) | McCormick | N/A | |
| Cryo/Freezer Boxes w/o Dividers | Fisher | 03-395-455 | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Glacial Acetic Acid | Fisher | BP2401-500 | |
| Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X microscope | W. Nuhsbaum, Inc. | 10446294 | |
| Petri dish (100 mm x 15 mm) | BD Falcon | 351029 | Reuseable if thoroughly washed and dried |
| Quick-Snap Microtubes | Alkali Scientific Inc. | C3017 | |
| Red Food Coloring (Water, Propylene Glycol, FD&C Reds 40 and 3, Propylparaben) | McCormick | N/A | |
| Sucrose | IBI Scientific | IB37160 |
References
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