Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

مضان تنشيط الفرز الخليوي لتنقية الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل من الفأر نخاع العظم

Published: November 4, 2016 doi: 10.3791/54641
Automatic Translation
1, 2, 1
1Department of Biomedical Sciences and Pathobiology, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine, Virginia Polytechnic Institute and State University, 2Flow Cytometry Laboratory, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine, Virginia Polytechnic Institute and State University

Summary

نفيدكم بروتوكول باستخدام مضان تنشيط الخلايا الفرز لعزل الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل (PDC) مع نقاء عالية من نخاع العظام من الفئران المعرضة للمرض الذئبة للدراسات وظيفية من الحزب الديمقراطي المسيحي.

Protocol

ملاحظة: MRL / MP-فاس لبر (MRL / لبر) كانت ولدت الفئران المعرضة للمرض الذئبة وصيانتها في منشأة معينة خالية من مسببات الأمراض التالية متطلبات رعاية الحيوان المؤسسية واللجنة الاستخدام (IACUC) في عدد فرجينيا للتكنولوجيا (الحيوان ضمان الرفاه: A3208-01). وقد أجريت هذه الدراسة بما يتفق بدقة مع التوصيات الواردة في دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية من المعاهد الوطنية للصحة. وأجريت التجارب على الحيوانات فقط تحت IACUC بروتوكول # 12-062.

1. خلية ثقافة متوسطة والفرز العازلة

  1. إعداد كامل مستنبت الخلية (C10) باستخدام RPMI 1640 تستكمل مع 10٪ مصل الجنين البقري، 1 ملم البيروفات الصوديوم، 1٪ 100 MEM الأحماض الأمينية غير الأساسية، و 10 ملي HEPES، 55 ميكرومتر 2-المركابتويثانول، 2 مم L-الجلوتامين و 100 U / مل البنسلين ستربتومايسين.
  2. إعداد عازلة الفرز (HBSS الكامل) باستخدام محلول ملح 1X هانك المتوازن (HBSS) تستكمل مع 10 ملي HEPES 2.5 ملغ / مل ألبومين المصل البقري،0.05 ملي MgCl 2 و 0.2 U / مل الدناز أولا

2. ماوس تشريح

  1. إعداد طبقين قطرها 6 سم، تحتوي على 4 مل C10. وضع الأطباق على الجليد.
  2. الموت ببطء الماوس عن طريق CO 2 الاستنشاق.
  3. حصاد الطحال والحفاظ عليه في طبق مع C10 على الجليد.
    1. دبوس الماوس لأسفل مع بطن مواجهة على لوحة التشريح. تعقيم الجسم عن طريق رش 70٪ من الإيثانول.
    2. قطع الجلد وفصل الجلد عن جدار عضلة تحت على طول خط الوسط بطني من الارتفاق العانة في الرقبة.
    3. قطع الجلد على طول أطرافه الخلفية من شق الأول إلى الكاحل.
    4. دبوس الجلد مرة أخرى على الجانبين وقطع الجدار العضلي على طول الجانبين من مكان الشق الأول إلى الحجاب الحاجز.
    5. دبوس الجدار العضلي مرة أخرى على الجانب الأيمن من الرأس.
    6. حدد موقع الطحال على الجانب الأيمن من الماوس تحت الأمعاء الدقيقة وبجانب المعدة. التقاط واحدة من نهاية الالبريد الطحال وفصلها من المعدة.
  4. قطع كل من أطرافه الخلفية بها، بما في ذلك عظم الفخذ والساق، وإزالة جميع العضلات قدر الإمكان.
    1. قطع العضلات على طول أطرافه الخلفية من الحوض مفصل الورك إلى الكاحل مع مقص حاد /، في محاولة لتجنب الأوعية الدموية.
    2. فصل أطرافهم هند بها قطع في الحوض / مفصل الورك ومفصل الكاحل / القدم دون التعرض لمحتويات نخاع العظام.
    3. العضلات المتبقية نظيفة على العظام بواسطة خدش بشفرة حلاقة مرارا وقطع العضلات في نقاط مشتركة.
  5. إبقاء العظام في طبق 6 سم تحتوي على 4 مل C10 على الجليد. الشروع في تشريح الماوس المقبل.

3. خلية طحالية عزل

  1. التجانس الطحال بلطف مع المكبس حقنة ضد مصفاة الخلية 70 ميكرومتر على رأس الطبق يحتوي على 4 مل C10 حتى لا قطعة حمراء واضحة.
  2. إضافة إضافي C10 6 مل في طبق من خلال مصفاة لالثانية ثم نقل الكلي تعليق خلية 10 مل إلى 15 مل أنبوب مخروطي الشكل.
  3. أجهزة الطرد المركزي أنبوب مخروطي الشكل في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية.
  4. بعد الطرد المركزي، ونضح طاف و resuspend بيليه خلية في 2 مل 1 × خلية الدم الحمراء (RBC) العازلة تحلل. في احتضان RT لمدة 5 دقائق.
  5. بعد الحضانة، وأجهزة الطرد المركزي أنبوب مخروطي الشكل في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية.
  6. بعد الطرد المركزي، ونضح طاف و resuspend بيليه خلية في 1 مل C10. تجاهل أي كتل كبيرة (الخلايا الميتة) والحفاظ على أنبوب على الجليد في وقت لاحق.
    ملاحظة: إذا كان هناك العديد من كتل صغيرة، استخدم مصفاة الخلية 70 ميكرومتر لتصفية تعليق الخلية مرة واحدة.
  7. حساب عدد الخلايا مع الأزرق التريبان باستخدام عداد الخلية الآلي.

4. نخاع العظم عزل الخلايا

  1. نقل العظام مع 4 مل C10 إلى بمدافع الهاون وإضافة 6 مل C10 إلى جعل حجم 10 مل C10 في المجموع.
  2. كسر العظام برفق في هاون باستخدام ا ف بestle.
  3. يحرك بلطف مع مدقة للافراج عن نخاع العظم إلى C10.
  4. نقل مل C10 10 تحتوي على نخاع العظم في أنبوب مخروطي 50 مل على الجليد من خلال مصفاة الخلية 70 ميكرومتر. إضافة C10 10 مل جديدة في هاون تزال تحتوي على العظام.
    ملاحظة: ماصة في محلول يحتوي على نخاع العظام صعودا وهبوطا عدة مرات قبل أن تمر عبر مصفاة إذا كتل حمراء واضحة.
  5. كرر الخطوات من 4،2-4،4 مرتين. بعد غسل الماضي، يجب أن تظهر عظام بيضاء.
  6. أجهزة الطرد المركزي ال 50 مل أنبوب مخروطي الشكل في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية. وفي الوقت نفسه، وإعداد 5 مل جاهزة للاستخدام متوسطة الكثافة التدرج في 15 مل أنبوب الطرد المركزي المخروطية في RT.
  7. بعد الطرد المركزي، ونضح وطاف resuspend الكرية خلية في 10 مل C10.
  8. طبقة ببطء تعليق 10 مل خلية على رأس 5 مل التدرج الكثافة المتوسطة، والحفاظ على واجهة واضحة بين المرحلتين. ثم الطرد المركزي ال 15 مل أنبوب مخروطي الشكل في 1363 ز لمدة 30 دقيقة فيRT (20 ° C) مع مجموعة تسارع إلى 9 والتباطؤ النحو 0 (أو OFF الفرامل).
  9. بعد الطرد المركزي، وإزالة كبار 8 مل من محلول بعناية وجمع معطف 2 مل الشهباء في واجهة (طبقة من الخلايا وحيدة النواة) إلى 15 مل أنبوب مخروطي الشكل الجديد.
  10. إضافة C10 12 مل الجليد الباردة إلى 15 مل أنبوب مخروطي يحتوي على خلايا وحيدة النواة نخاع العظام، وكأب وعكس عدة مرات لتخلط جيدا، ثم الطرد المركزي الأنبوب في 800 x ج لمدة 10 دقيقة، 4 درجات مئوية.

5. خلية تلطيخ السطح لنظام مراقبة الأصول الميدانية

  1. تلطيخ عينة
    1. إعداد لمكافحة فأر CD16 / 32 الضد الحل (1-100 التخفيف في HBSS الكامل، 5 ميكروغرام / مل تركيز النهائي).
    2. بعد الطرد المركزي في خطوة 4.10، نضح في وطاف resuspend الكرية الخلية في 100 ميكرولتر مكافحة فأر CD16 / 32 حل الأجسام المضادة لمنع التيسير على مستقبلات الخلايا وحيدة النواة. احتضان على الجليد لمدة 10 دقيقة.
    3. إعداد ومضان مترافق الأجسام المضادة خليط (النملط-ماوس CD11c و-PE 1:40 التخفيف، ومكافحة فأر CD11b-APC-CY7 1:80 التخفيف، ومكافحة فأر PDCA-1-FITC 1:40 تخفيف ومكافحة فأر B220-V500 01:40 التخفيف في HBSS- كامل على النحو الموصى به من قبل الشركة المصنعة في 100 الحجم النهائي ميكرولتر لكل عينة).
      ملاحظة: من المهم أن يعاير الأجسام المضادة قبل الاستخدام.
    4. بعد مرور فترة الحضانة 10 دقيقة في الخطوة 5.1.2، إضافة 4 مل الجليد الباردة HBSS-كاملة وأجهزة الطرد المركزي في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية لإزالة غير منضم لمكافحة فأر CD16 / 32.
    5. بعد الطرد المركزي، ونضح طاف و resuspend بيليه الخلية في 100 ميكرولتر مضان مترافق الأجسام المضادة الخليط. احتضان على الجليد لمدة 15 دقيقة في الظلام.
    6. بعد 15 دقيقة الحضانة، إضافة 4 مل الجليد الباردة HBSS-كاملة وأجهزة الطرد المركزي في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية لإزالة الأجسام المضادة مضان مترافق غير منضم.
    7. يعد حل تحميل FACS (500 نانوغرام / مل دابي في HBSS-كاملة).
    8. بعد الطرد المركزي في خطوة 5.1.6، نضح في وطاف resuspend الكرية الخلية في 500 μ؛ ل FACS حل التحميل. نقل تعليق خلية إلى 12 × 75 ملم جولة أنبوب أسفل (FACS أنبوب) والحفاظ على أنبوب على الجليد في الظلام حتى الفرز داخل 1 ساعة.
  2. تلطيخ للتعويض
    1. تسمية 6 FACS الأنابيب كما PE، APC-CY7، FITC، V500، دابي أو غير ملوثين. splenocytes قسامة في 1 × 10 6 خلية / أنبوب في أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية، وأغسلها مع 4 مل HBSS-كاملة في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية.
      ملاحظة: استخدام الحمض النووي ملزم صبغ مضان، دابي، لتمييز الخلايا الحية من الخلايا الميتة. دابي يمكن أن تمر عبر غشاء البلازما من الخلايا الميتة (ولكن ليس من الخلايا الحية) وربط الحمض النووي الصبغي.
    2. نضح طاف و resuspend بيليه الخلية في 100 ميكرولتر HBSS الكامل.
    3. في كل أنبوب FACS المقابلة، إضافة واحد من الأجسام المضادة التالية: مكافحة فأر CD19-PE 1:40 التخفيف، ومكافحة فأر CD11b-APC-CY7 1:80 التخفيف، ومكافحة فأر PDCA-1-FITC 1:40 تخفيف أو مكافحة فأر B220-V500 01:40 التخفيف على النحو الموصى به من قبل manufacturer. ترك الموافق 5 (دابي) و 6 عشر (غير ملوثين) FACS الأنابيب كما هي. تخلط جيدا عن طريق هز واحتضان جميع أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية على الجليد في الظلام لمدة 15 دقيقة.
    4. بعد الحضانة، إضافة 4 مل الجليد الباردة HBSS الكامل في كل أنبوب وأنابيب الطرد المركزي نظام مراقبة الأصول الميدانية في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية.
    5. بعد الطرد المركزي، ونضح طاف و resuspend بيليه الخلية في 500 ميكرولتر الجليد الباردة HBSS الكامل باستثناء بيليه في الأنبوب المسمى دابي، الذي هو معلق في 500 ميكرولتر FACS حل التحميل. حفظ جميع أنابيب 6 على الجليد في الظلام حتى الفرز.

6. الفرز على فارز الخلية

وموحدة عملية الفرز الإجراء على الكريات والبرامج مع تعليمات مفصلة التي تقدمها الشركة: ملاحظة. لفترة وجيزة، ونحن نستخدم 100 فوهة ميكرون في 20 رطل، تعيين تركيز الخلية المستهدفة بين 5-10٬000٬000 لكل مل، وضبط كفاءة إلى 70٪ أو أعلى (أي أبقى الصراعات تحت 30٪).

  1. إعداد مجموعة أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية مع 500 ميكرولتر FBS / أنبوب يحتوي على 100 وحدة / مل البنسلين ستربتومايسين.
  2. ضبط المعلمات تعويض فارز الخلية باستخدام أنابيب تعويضات وصمة عار واحدة من الخطوة 5.2.
    1. تسجيل 10000 خلايا في أنبوب غير ملوثين لوضع بوابة السلبية لكل كثافة الفلورسنت.
    2. تسجيل 10000 الخلايا في أنابيب تعويضات للبقع واحدة أخرى لوضع بوابة إيجابية لكل كثافة الفلورسنت.
      ملاحظة: البرنامج بحساب المعلمات تعويض تلقائيا.
  3. استخدام عينة واحدة من الخطوة 5.1 لتعيين أبواب السكان الخلية فرزها عن طريق تسجيل 3000 الخلايا. باستخدام كثافة الفلورسنت كمعلمات X و Y الرسم البياني المحور، سكان الخلية البوابة الهدف يدويا كمجموعة من النقاط تفصل ما يبدو من النقاط الأخرى.
    ملاحظة: هذه مجموعة النابضة مرنة وتعسفي بناء على متطلبات الباحثين. إذا توقع الباحثون العالي النقاء بناء على علامات واحدة أو أكثر، نقل البوابةأعلى على أساس كثافة الفلورسنت المقابلة.
  4. تحميل أنبوب جمع والبدء في فرز السكان الخلية المستهدفة.
  5. الحفاظ على أنبوب جمع على الجليد بعد الفرز حتى تتم جميع أنابيب العينات.
  6. إضافة الجليد C10 البرد إلى أنبوب جمع ما يصل إلى 4 مل، وكأب وعكس إلى المزيج.
  7. أجهزة الطرد المركزي أنبوب جمع في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية، ثم نضح طاف، وترك حوالي 200 ميكرولتر مع بيليه الخلية يمسها.
  8. إضافة 1 مل C10 الجليد الباردة إلى resuspend الكرية خلية ونقل عن تعليق الخلية في أنبوب 1.5 مل الطرد المركزي.
  9. أجهزة الطرد المركزي في أنبوب 1.5 مل في 800 x ج لمدة 5 دقائق، 4 درجات مئوية، ونضح طاف، وترك 100 ميكرولتر مع بيليه الخلية يمسها.
  10. تخزين السكان الخلية مرتبة على الجليد حتى الاستخدام.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

نحن تهدف إلى إثراء نخاع العظام PDC مع نقاء عالية، ودون تأثير من أنواع الخلايا الأخرى، من MRL / لبر الفئران المعرضة للمرض الذئبة كل من عمر الصغار والكبار لدراسة التغييرات الوظيفية من الحزب الديمقراطي المسيحي بشأن قدرتها على إنتاج IFNα. كانت استراتيجية تنقية الأولى التي استخدمت MCS، الذي قاد، كما يظهر الشكل 1 إلى فقط 7.75٪ النقاء بعد التخصيب. مقارنة MCS، مما أثرى FACS PDC مع نقاء عالية مثل 96.4٪. لضمان نقاء عالية، تم تنفيذ استراتيجية النابضة خطوة بخطوة. كما هو مبين في الشكل 2، وبوابات الخلايا وحيدات النوى وفصل من الحطام مبعثر إلى الأمام (FSC) والمعلمات مبعثر الجانب (SSC). باستخدام FSC العرض (FSC-W) مقابل FSC الارتفاع (FSC-H) وSSC-W مقابل SSC-H، وبوابات الخلايا وحيدة لتجنب الإشارات الإيجابية الكاذبة التي تنتجها الركام. ثم تم بوابات الخلايا واحدة حية مثل دابي - السكان (خلايا دابي + لقوا حتفهم أو أفكارك).من الخلايا وحيدة حية، CD11c و+ CD11b - السكان وبوابات، من الذي B220 + PDCA-1 + السكان وبوابات أخرى مثل الحزب الديمقراطي المسيحي. وكان الحزب الديمقراطي المسيحي فرز ليس فقط من نقاء عالية ولكن أيضا وضعها الطبيعي وظيفيا. كان لديهم القدرة على إنتاج IFNα في المختبر على التحفيز الدليل السياسي الشامل كما هو مبين في الشكل (3) (إعادة طباعة بإذن من نشر رسائلنا السابقة (17).

شكل 1
الشكل 1. الطهارة من PDC التصنيف إما عن طريق الإشراف والطريقة FACS تدفق الممثل الخلوي الأرقام التي تبين النسبة المئوية من الحزب الديمقراطي المسيحي (CD11c و+ CD11b - B220 + PDCA-1 +). في الخلايا التي تم فرزها من قبل MCS (أعلى) ونظام مراقبة الأصول الميدانية (القاع)، على التوالي. تم بوابات السكان من مجموع الخلايا الحية (يسار)، ثم PDC كما B220 + PDCA-1 - في CD11c و+ CD11b تم بوابات خلايا + داخل CD11c و+ CD11b - السكان (يمين) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2. استراتيجية المحاصرة لPDC التخصيب بواسطة نظام مراقبة الأصول الميدانية استراتيجية النابضة خطوة بخطوة في الترتيب التالي: خلايا وحيدة النواة إلى الخلايا وحيدة FSC، إلى الخلايا وحيدة SSC، إلى دابي - الخلايا الحية، لCD11c و+ CD11b -، وإلى B220 + PDCA-1 + كما PDC الحية. PDC في مجموع الخلايا واحدة هي 2.95 ± 1.42٪. فرز عدد PDC هو 0.88 ± 0.28 × 10 5 في الفأر مع معدل استرداد نحو 50٪. (ن = 12 MRL / لبر الفئران، وأظهرت البيانات كما يعني ± SD في 95٪ CI من الوسط). 641fig2large.jpg "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
وعولج الشكل 3. IFNα الإنتاج من قبل الحزب الديمقراطي المسيحي فرز FACS العظام الترتيب نخاع PDC مع فئة A الدليل السياسي الشامل. (ODN1585 و 5 ميكرومتر) لمدة 6 ساعة في المختبر. في الشكل، "ص" لتقف على الأصغر سنا، فئران عمرها 6 أسابيع. "س" لتقف على والفئران الأكبر سنا من العمر 16 أسابيع. MRL لتقف على الفئران MRL السيطرة على الفئران كما صحية؛ لبر لتقف على الفئران MRL / لبر كما الفئران المعرضة للمرض الذئبة. وقد تم قياس تركيز IFNα في ثقافة طاف مع إليسا. * P <0.05، ** P <0.01، *** P <0.001، في اتجاه واحد أنوفا. وأظهرت البيانات يعني كما ± الخطأ المعياري للمتوسط ​​(ن = 3 الفئران في كل مجموعة). ويرد هذا الرقم من نشر لدينا في مجلة علم المناعة بإذن 17pload / 54641 / 54641fig3large.jpg "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RPMI 1640 gibco by life technologies 11875-093
Fetal bovine serum HyClone SH30396.03
Sodium pyruvate gibco by life technologies 11360-070
MEM non-essential amino acids gibco by life technologies 11140-050
HEPES gibco by life technologies 15630-080
2-mercaptoethanol gibco by life technologies 21985-023
L-glutamine  gibco by life technologies 25030-164
Penicillin-Streptomycin gibco by life technologies 15140-122
1x Hank’s Balanced Salt Solution  gibco by life technologies 14175-079
MACS BSA Stock Solution Miltenyi Biotec 130-091-376
MgCl2 SIGMA M8266
DNase I SIGMA D4527
Red blood cell (RBC) lysis buffer  eBioscience 00-4300-54
Density gradient medium GE Healthcare 17-1440-02 Ficoll-Paque Plus 
anti-mouse CD19-PE BD Pharmingen 553786
anti-mouse CD11c-PE eBioscience 12-0114-82
anti-mouse CD11b-APC-CY7 BD Pharmingen 557657
anti-mouse PDCA-1-FITC eBioscience 11-3172-81
anti-mouse B220-V500  BD Pharmingen 561226
DAPI invitrogen D3571
Plasmacytoid Dendritic Cell Isolation Kit II, mouse Miltenyi Biotec 130-092-786
BD FACSAria I flow cytometer  BD Biosciences 643178
BD FACS Diva version 6 BD Biosciences

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bonner, W. A., Hulett, H. R., Sweet, R. G., Herzenberg, L. A. Fluorescence activated cell sorting. Rev Sci Instrum. 43 (3), 404-409 (1972).
  2. Herzenberg, L. A., et al. The history and future of the fluorescence activated cell sorter and flow cytometry: a view from Stanford. Clin Chem. 48 (10), 1819-1827 (2002).
  3. Brown, M., Wittwer, C. Flow cytometry: principles and clinical applications in hematology. Clin Chem. 46 (8 Pt 2), 1221-1229 (2000).
  4. Laerum, O. D., Farsund, T. Clinical application of flow cytometry: a review. Cytometry. 2 (1), 1-13 (1981).
  5. Alvarez-Barrientos, A., Arroyo, J., Canton, R., Nombela, C., Sanchez-Perez, M. Applications of flow cytometry to clinical microbiology. Clin Microbiol Rev. 13 (2), 167-195 (2000).
  6. Mattanovich, D., Borth, N. Applications of cell sorting in biotechnology. Microb Cell Fact. 5 (12), (2006).
  7. Aldahlawi, A. M., Elshal, M. F., Damiaiti, L. A., Damanhori, L. H., Bahlas, S. M. Analysis of CD95 and CCR7 expression on circulating CD4(+) lymphocytes revealed disparate immunoregulatory potentials in systemic lupus erythematosus. Saudi J Biol Sci. 23 (1), 101-107 (2016).
  8. Cullender, T. C., et al. Innate and adaptive immunity interact to quench microbiome flagellar motility in the gut. Cell Host Microbe. 14 (5), 571-581 (2013).
  9. Fernandez, A. G., et al. High-throughput fluorescence-based isolation of live C. elegans larvae. Nat Protoc. 7 (8), 1502-1510 (2012).
  10. Cai, M., et al. DC-SIGN expression on podocytes and its role in inflammatory immune response of lupus nephritis. Clin Exp Immunol. 183 (3), 317-325 (2016).
  11. Blasius, A., et al. A cell-surface molecule selectively expressed on murine natural interferon-producing cells that blocks secretion of interferon-alpha. Blood. 103 (11), 4201-4206 (2004).
  12. Welzel, G., Seitz, D., Schuster, S. Magnetic-activated cell sorting (MCS) can be used as a large-scale method for establishing zebrafish neuronal cell cultures. Sci Rep. 5, 7959 (2015).
  13. Valli, H., et al. Fluorescence- and magnetic-activated cell sorting strategies to isolate and enrich human spermatogonial stem cells. Fertil Steril. 102 (2), 566-580 (2014).
  14. Yamashiro, S., et al. Phenotypic and functional change of cytokine-activated neutrophils: inflammatory neutrophils are heterogeneous and enhance adaptive immune responses. J Leukoc Biol. 69 (5), 698-704 (2001).
  15. Apostolidis, S. A., Lieberman, L. A., Kis-Toth, K., Crispin, J. C., Tsokos, G. C. The dysregulation of cytokine networks in systemic lupus erythematosus. J Interferon Cytokine Res. 31 (10), 769-779 (2011).
  16. Asselin-Paturel, C., Brizard, G., Pin, J. J., Briere, F., Trinchieri, G. Mouse strain differences in plasmacytoid dendritic cell frequency and function revealed by a novel monoclonal antibody. J Immunol. 171 (12), 6466-6477 (2003).
  17. Liao, R., et al. Tacrolimus Protects Podocytes from Injury in Lupus Nephritis Partly by Stabilizing the Cytoskeleton and Inhibiting Podocyte Apoptosis. PLoS One. 10 (7), e0132724 (2015).

Tags

علم المناعة، العدد 117، نظام مراقبة الأصول الميدانية، والماوس، ونخاع العظام والخلايا الجذعية بلازماوية الشكل (PDC)، IFNα، الذئبة
مضان تنشيط الفرز الخليوي لتنقية الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل من الفأر نخاع العظم
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Liao, X., Makris, M., Luo, X. M.… More

Liao, X., Makris, M., Luo, X. M. Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow. J. Vis. Exp. (117), e54641, doi:10.3791/54641 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter