موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:32 دقيقة • April 30th, 2023
- ابدأ بقطرة من محلول المخزن المؤقت على شريحة المجهر وانقل الديدان السليمة إلى القطرة. بمجرد أن تصبح الديدان في مكانها ، استخدم منديلا خاليا من النسالة لامتصاص المخزن المؤقت وإزالته. قم بإصلاح العينة عن طريق استحمام العينات بنسبة 90٪ من الإيثانول عدة مرات ، مما يسمح لها بالتبخر بعد كل تطبيق.
بمجرد أن يتبخر الإيثانول بعد الشطف النهائي ، أضف محلولا يحتوي على صبغة الحمض النووي ، DAPI ، إلى العينة. يرتبط DAPI بشكل تفضيلي بقواعد الأدينين والثايمين في الأخدود الصغير للحمض النووي. عند الارتباط ، يمتص مركب DAPI-DNA ضوء الأشعة فوق البنفسجية وينبعث منه ضوء أزرق مرئي.
بعد ذلك ، أضف مادة حافظة مضادة للبهتان لإطالة العمر الافتراضي للعينة. ضع زلة غطاء وأغلقها على الشريحة. ثم استخدم مجهر فلوري مع مرشح أزرق لتصور أجسام DAPI ، والتي ، اعتمادا على الخلية وحالة دورتها ، يمكن أن تمثل كروموسومات مفردة أو أزواج كروماتيدات شقيقة أو نوى كاملة. في هذه التجربة ، سنحسب أزواج الكروماتيدات الشقيقة الملطخة ب DAPI في البويضات ، لتحديد سلالات رابعية الصبغيات من Caenorhabditis elegans.
- تحتوي السلالات رباعية الصبغيات على 12 زوجا من الكروموسومات ، والتي يمكن التحقق من صحتها عن طريق حساب الأجسام الملطخة ب DAPI في البويضات غير المخصبة. للقيام بذلك ، قم بإسقاط خمسة إلى عشرة ميكرولترات من المخزن المؤقت M9 على شريحة وا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية