تطوير الخلايا العصبية والبلاعم في المختبر

ابدأ بالخلايا العصبية العقدية الجذرية الظهرية للفئران المعزولة في وسط النمو.

ضعها في صفيحة متعددة الآبار مطلية بالبوليمر لتعزيز الارتباط العصبي.

بعد ذلك ، خذ فأرا مقطعا للقتل الرحيم وحقن PBS المثلج في تجويفه البريتوني.

قم بتدليك الصفاق برفق لإخراج البلاعم من جدار الصفاق.

اضغط على الفأر لجمع السائل البريتوني ومعالجته بمحلول تحلل لتحلل خلايا الدم الحمراء بشكل انتقائي ، والتي تظهر على أنها ملوثات. جهاز الطرد المركزي وإعادة تعليق الخلايا في وسط ثقافة.

انقل البلاعم إلى ملحق مسامي موجود داخل البئر الذي يحتوي على الخلايا العصبية المستنبتة.

تسمح هذه الثقافة المشتركة للخلايا العصبية والضامة بأن تكون على مقربة.

عالج الزراعة المشتركة باستخدام db-cAMP واحتضانها لتسهيل دخولها إلى الخلايا. هذا ينشط الخلايا العصبية لإفراز جزيئات الإشارات.

تحث جزيئات الإشارات هذه ، جنبا إلى جنب مع db-cAMP ، البلاعم على تبني نمط ظاهري مؤيد للتجدد وإفراز العوامل الأساسية لنمو الخلايا العصبية.

قبل إعداد الثقافة ، قم بتغطية صفيحة مكونة من 6 آبار مسبقا ب poly-D-lysine واللامينين. بعد ذلك ، قم باحتضان الصفيحة المكونة من 6 آبار مع 0.01 بولي دي ليسين عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين أو عند 4 درجات مئوية طوال الليل. بعد ذلك ، اغسل الطبق مرتين بالماء المقطر.

ثم احتضان اللوحة بمحلول اللامينين بتركيز 3 ميكروغرام لكل مليلتر لمدة