Waiting
登录处理中...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

Anticancer Effekten af ​​Fotodynamisk terapi med lungekræft-Målrettet Nanopartikler

Published: December 1, 2016 doi: 10.3791/54865
Automatic Translation
1, 2, 1,3
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University Bundang Hospital, 2College of Pharmacy, Kangwon National University, 3Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University College of Medicine

Protocol

BEMÆRK: Alle forsøgsprotokoller dyr blev godkendt af Institutional Animal Care og brug Udvalg for Seoul National University Bundang Hospital (BA1308-134 / 072-01).

1. Syntese af hyaluronsyre-ceramid (HACE)

  1. Solubilisere 12,21 mmol af hyaluronsyre (HA) oligomer og 9,77 mmol af tetra-n-hydroxid (TBA) i 60 ml dobbelt-destilleret vand (DDW). Omrør i 30 min.
  2. At syntetisere DS-Y30 linker, opløses 8,59 mmol af DS-Y30 ceramid og 9,45 mmol triethylamin i 25 ml tetrahydrofuran (THF). Bland med 8,59 mmol 4-chlormethylbenzoylchlorid i THF. Der omrøres i 6 timer ved 60 ° C.
  3. Opløs det syntetiserede 8,10 mmol af HA-TBA og 0,41 mmol af DS-Y30 linker i en blanding af THF og acetonitril (4: 1, vol / vol). Der omrøres i 5 timer ved 40 ° C.
  4. Fjerne urenheder ved filtrering med et filter middel og fjerne det organiske opløsningsmiddel ved vakuumfordampning. Oprens produktet med en dialysemembran (molekylevægt cut-off: 3,5 kDa) og lyofiliseres.

2. Fremstilling af nanopartikler

  1. Opløs 1 mg HB og 1 mg paclitaxel i 0,5 ml dimethylsulfoxid (DMSO) og blande med 0,5 ml DDW ved vortex-blanding i 5 min. Derefter solubilisere HACE i den blanding af vortex-blanding i yderligere 5 min.
  2. For at eliminere opløsningsmidlet varme ved 70 ° C i 4 timer under en svag strøm af nitrogengas.
  3. Resuspender film sammensat af HACE, HB, og paclitaxel med 1 ml DDW. Filter med en sprøjte filter (0,45 um porestørrelse) til fjernelse uindkapslede lægemidler.

3. In vitro Fototoksicitet

  1. Optagelse af nanopartikler i lungekræft cellelinier
    1. Forbered RPMI-1640 medium indeholdende 10% (vol / vol) føtalt bovint serum og 1% (vægt / volumen) penicillin-streptomycin.
    2. Seed A549-celler i 24-brønds celledyrkningsplader plader ved en densitet på 1 x 10 5 celler / brønd (triplikater for hvergruppe). Inkuber i 24 timer ved 37 ° C i en befugtet 5% CO2 og 95% luft atmosfære.
    3. Efter cellebinding, fjern medium og vask af cellerne ved tilsætning af 1 ml phosphatpufret saltvand (PBS).
    4. Opløs nanopartiklerne i PBS til en slutkoncentration på 2 pM / ml HB. Derefter inkuberes cellerne med 1 ml PBS, tomme NP'er, HB-NP, eller HB-P-NP'er i hver brønd i 4 timer i mørke.
    5. Fjern alle af opløsningen og vask af cellerne ved tilsætning af 1 ml kold PBS. Gentag vasketrinet gang mere. Tilføj frisk dyrkningsmedium.
  2. Cellelevedygtighed assay
    1. Placer celledyrkningspladen under PDT fiber (med 1 cm afstand fra PDT fiber til brøndens). Bær laser sikkerhedsbriller og belyse cellerne med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) i mørke i forskellige tidsperioder: 0, 5, 10, 20, 30, og 40 sek (0, 2, 4 , 8, 12 og 16 J / cm2). Derefter inkuberes cellerne i 24 timer i mørke.
    2. Aspirer medium og vask af cellerne ved tilsætning af 1 ml kold PBS. Gentag vasketrinet gang mere.
    3. Tilsæt 10 pi cytotoksicitet måling opløsning til hver brønd. Der inkuberes i mørke i 2 timer.
    4. Absorbansen ved 450 nm under anvendelse af en mikropladelæser.
  3. Mikroskopisk analyse
    1. Placer celledyrkningspladen under PDT fiber (med 1 cm afstand fra PDT fiber til brøndens). Bær laser sikkerhedsbriller og belyse cellerne med et PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) i mørke i 0, 20 eller 40 sekunder (0, 8, eller 16 J / cm2). Derefter inkuberes cellerne i 24 timer i mørke.
    2. Aspirer medium og vask af cellerne ved tilsætning af 1 ml kold PBS. Gentag vasketrinet gang mere.
    3. Der tilsættes 50 pi annexin V-FITC og 50 pi 4 ', 6-diamidino-2-phenylindol (DAPI, 1,5 ug / ml). Ryst forsigtigt pladen og inkuber det i 15 minutter ved stuetemperatur i mørke.
      BEMÆRK: Brug annexin V-FITC fra fluorescens mikroskop kit.
    4. Vask cellerne ved tilsætning af 1 ml kold PBS. Gentag vasketrinet gang mere. Holde cellerne i frisk PBS. Identificere de apoptotiske celler under anvendelse af lysmikroskopi ved 100X forstørrelse.
  4. Fluorescensaktiveret cellesortering (FACS) analyse
    1. Placer celledyrkningspladen under PDT fiber (med 1 cm afstand fra PDT fiber til brøndens). Bær laser sikkerhedsbriller og belyse cellerne med et PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) for 0, 20 eller 40 sekunder (0, 8, eller 16 J / cm2). Derefter inkuberes cellerne i 24 timer i mørke.
    2. Aspirer medium og vask af cellerne ved tilsætning af 1 ml kold PBS. Gentag vasketrinet gang mere.
    3. Resuspender cellerne i 1 ml 1 × bindingsbuffer (fortynd 1 del af 10x bindingsbuffer 0,1 M Hepes / NaOH (pH 7,4), 1,4 M NaCl, og 25 mM CaCl2 til 9 dele destilleret vand) og overførsel 100 pi af prøveopløsningen til en 5-mlkultur rør.
    4. Tilsæt 5 pi annexin V-FITC og 5 pi propidiumiodid (PI). Forsigtigt vortexes rør og inkuberes i 15 minutter ved stuetemperatur (RT) i mørke. Tilføj 400 pi 1 × bindende buffer.
      BEMÆRK: Brug annexin V-FITC og PI fra fluorescens mikroskop kit.
    5. Identificere de apoptotiske celler ved anvendelse af FACS 14. De excitation laser linjer af PI og annexin V-FITC er 488 nm og 635 nm. Måle fluorescens emission af PI og annexin V-FITC ved 610 ± 20 nm og 660 ± 20 nm. Saml de erhvervede celler på flowcytometeret pr 10.000 begivenheder.

4. In vivo anticancer virkning hos tumor-bærende mus

  1. Lungecancer-induceret musemodel
    1. Forbered 1 × 10 6 A549 celler i 0,1 ml RPMI-1640 medium; holde det i is.
    2. Bedøver de mus med en ip injektion af en xylazin og en blanding af tiletamin og zolazepam (1: 2, 1 ml /kg). Bekræft korrekt bedøvelse ved forsigtigt at klemme en lille fold af musehud. Brug dyrlæge salve på øjnene for at forhindre tørhed, mens under anæstesi.
      BEMÆRK: Hvis der ikke observeres bevægelse, dyret er tilstrækkeligt bedøvet at starte eksperimenterne.
    3. Injicere cellerne subkutant ind i venstre flanker på BALB / C mandlige nøgne mus (6 - 7 uger gamle blev 20 - 22 g).
    4. Hold observere musene, indtil de begynder at bevæge sig rundt i buret.
      BEMÆRK: Lad ikke et dyr uden opsyn, indtil det har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystleje. Må ikke returnere et dyr, der har gennemgået kirurgi til selskab med andre dyr, indtil den er fuldt tilbagebetalt. Hold musene under specifikke patogenfrie (SPF) betingelser.
    5. Mål tumorstørrelsen med passere hver dag. Beregn tumor volumen (mm 3) som (længde × bredde 2) / 2. Når tumorstørrelsen når ca. 200 mm 3 i volumen, starte eksperimentet.
    6. Anticancer effektstudie
      1. Tilfældigt opdele musene i 4 grupper (n = 10 for hver gruppe).
      2. Anesthetize mus med en ip injektion af en xylazin og en blanding af tiletamin og zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bekræft korrekt bedøvelse ved forsigtigt at klemme en lille fold af musehud. Brug dyrlæge salve på øjnene for at forhindre tørhed, mens under anæstesi.
        BEMÆRK: Hvis der ikke observeres bevægelse, dyret er tilstrækkeligt bedøvet at starte eksperimenterne.
      3. Opløs nanopartiklerne i PBS til en slutkoncentration på 2 mg / ml HB. Injicer PBS, fri HB HB-NP, eller HB-P-NPs via halevenen (2 mg / kg som HB) to gange på dag 0 og 7.
      4. Hold observere musene, indtil de begynder at bevæge sig rundt i buret.
        BEMÆRK: Lad ikke et dyr uden opsyn, indtil det har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystleje. Må ikke returnere et dyr, der har gennemgået kirurgi til selskab med andre dyr, indtil fuldtinddrives. Hold burene mørke og under specifikke SPF betingelser.
      5. 24 timer efter hver injektion, bedøver de mus med en ip injektion af en xylazin og en blanding af tiletamin og zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bekræft korrekt bedøvelse ved forsigtigt at klemme en lille fold af musehud. Brug dyrlæge salve på øjnene for at forhindre tørhed, mens under anæstesi.
        BEMÆRK: Hvis der ikke observeres bevægelse, dyret er tilstrækkeligt bedøvet at starte eksperimenterne.
      6. Placer tumorstedet under PDT fiber (med 1 cm afstand fra PDT fiber til tumoren). Bær laser sikkerhedsbriller, slukke på kontakten, og belyse tumoren med en PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) for 500 sek (200 J / cm2) to gange på dag 1 og 8.
      7. Hold observere musene, indtil de begynder at bevæge sig rundt i buret. Lad ikke et dyr uden opsyn, indtil det har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystleje. Må ikke returnere et dyr, der har undergone kirurgi til selskab med andre dyr, indtil fuldt tilbagebetalt.
      8. Hold burene under SPF betingelser. Oprethold burene i mørke i 24 timer efter laserbehandling.
      9. overvåge visuelt tumorvolumen og ændringerne på tumorstedet hver dag. Mål tumorstørrelsen med passere, og beregne volumen som (længde x bredde 2) / 2 (mm3). Tage billeder af tumor sites hver dag for at kontrollere for tumor overflade ændringer efter PDT.
      10. På dag 16, ofrer fem mus pr gruppe ved terminal anæstesi ved hjælp isofluran.
      11. Med pincet og saks, klippe den ydre hud og udsætte tumorer 15. høste dem forsigtigt. Fix dem i 10% formalin, integrere dem i paraffin, og plette dem med hæmatoxylin og eosin (H & E) for den histologiske analyse 16.
      12. Efter 45 dage overvågning, ofrer de resterende mus ved terminal anæstesi ved hjælp isofluran.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi forberedt både HB-NPs og HB-P-nationale parlamenter med ovennævnte teknikker. De gennemsnitlige diametre på HB-NPs og HB-P-NP var 220,9 ± 3,2 nm og 211,9 ± 1,6 nm.

Cellelevedygtigheden af A549-celler efter 4 timer af inkubation med PBS, tomme NP'er, HB-NP, og HB-P-NP'er efterfulgt af lysbestråling (0 og 16 J / cm2) er vist i figur 1. Uden lys, HB-NP behandlingsgruppen viste ingen cytotoksicitet overhovedet, mens HB-P-NP-behandlede celler udviste 81,28 ± 0,14% cellelevedygtighed. Dette kan skyldes den anticancervirkning af paclitaxel, som blev frigivet fra nanopartiklerne. Under PDT, blev cellelevedygtigheden faldt ifølge lyset eksponeringstid i både HB-NP- og HB-P-NP-behandlede celler. De HB-P-NP-behandlede celler viste øget fototoksicitet end HB-nationale parlamenters gruppe under samme bestrålingsforhold. Når 16 J / cm2 af bestråling blev givet, kun 7,52 ± 0,38% af cellerne overlevede i HB-P-NP behandlingsgruppe.

De konsistente resultater blev visualiseret med annexin V-FITC-farvning (figur 2). PDT-inducerede apoptotiske celler blev farvet med annexin V-FITC, der udtrykker grøn fluorescens. Det stærkeste grønne fluorescenssignal blev påvist i HB-P-NP-behandlede celler under de samme bestrålingsforhold.

De stadier af PDT-inducerede apoptotiske celler blev klassificeret ved flowcytometri. Ved at dobbeltklikke farvning med annexin V-FITC og PI, tidlige apoptotiske celler (kun annexin V-FITC positive), sent apoptotiske celler (både annexin-V og PI positiv) og nekrotiske celler (kun PI positive) var fornem. Under de samme PDT betingelser blev den del af sene apoptotiske celler steg i HB-P-NP-behandlede gruppe (figur 3).

"FO: keep-together.within-side =" 1 "> In vivo tumorvækst i lunge tumorbærende mus efter dobbelt intravenøs injektion af PBS, fri HB HB-NP, og HB-P-NP'er efterfulgt af lysbestråling er vist i figur 4. overfladerne på tumorstederne blev også undersøgt (figur 5). Hb-P-NP-behandlede mus udviste de hurtigste reaktioner, herunder blødning og nekrose, og den langsomste tumorvækst. desuden histologisk analyse bekræftede de fleste alvorligt beskadiget tumorceller var i HB-P-NP behandlingsgruppe (figur 6).

figur 1
Figur 1:. In vitro Fototoksicitet af A549-celler A549-celler blev behandlet med PBS, tomme NP'er, HB-NP, eller HB-P-NP, og lysbestråling blev givet i 0, 5, 10, 20, 30 eller 40 sek (0, 2, 4, 8, 12, eller 16 J / cm2). Under than samme bestrålingstid viste HB-P-NP behandlingsgruppen højere fototoksicitet end HB-NP behandlingsgruppe. Værdier er udtrykt som middelværdier ± standardafvigelser (SD, n = 3). *** P <0,001, sammenlignet med den PBS-behandlede gruppe. ## P <0,01, ### p <0,001 sammenlignet med HB-NP behandlingsgruppe. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2:. Mikroskopisk analyse af apoptotiske A549-celler A549-celler blev behandlet med PBS, HB-NP'er eller HB-P-NP, og lysbestråling blev givet i 0, 2, eller 4 J / cm2. Den dobbelt-plet af DAPI (blå, første kolonne) og annexin V-FITC (grøn, anden kolonne) angiver kernerog apoptotiske celler. Hb-P-NP-behandlede celler udviste stærkere grøn fluorescens signaler end de HB-NP-behandlede celler under de samme bestrålingsforhold, hvilket indikerer en meget højere fototoksicitet. Scale bar = 200 um, forstørrelse = 100X. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Figur 3:. FACS-analyse af apoptotiske A549-celler A549-celler blev behandlet med PBS, HB-NP, eller HB-P-NP, og lysbestråling blev givet i 0, 2, eller 4 J / cm2. Cellerne blev kategoriseret i fire grupper. I) begge annexin V-FITC- og PI-negative celler anses ubeskadigede, ii) annexin V-FITC-positive og PI-negative cellerer tidligt apoptotisk, iii) både annexin V-FITC- og PI-positive celler er sent apoptotiske, og iv) annexin V-FITC-negative og PI-positive celler er enten sent apoptotiske eller nekrotiske. I overensstemmelse med den mikroskopiske analyse, under de samme bestrålingsforhold viste HB-P-NP-behandlede celler højere fototoksicitet end HB-NP-behandlede celler, og sene apoptotiske celle-niveauer blev forøget. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4
Figur 4:. Tumorvolumen Overvågning af A549 tumorbærende mus på dag 0 og 7, de dobbelte injektioner af PBS, fri HB HB-NPS, og HB-P-NPS blev udført. PDT (200 J / cm2) var perforwith 1 dag efter hver injektion, på dag 1 og 8. Behandlingerne viste forskellige niveauer af terapeutisk virkning, med HB <HB-NP'er <HB-P-NP'er. På dag 45, viste HB-P-NP'er behandlingsgruppen en signifikant nedsat tumorvolumen i forhold til de andre grupper. Værdier er præsenteret som middelværdi ± standardafvigelser (SD, n = 4). Tumoren volumen (mm3) blev defineret som (længde × bredde 2) / 2. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 5
Figur 5:. Overfladen Ændringer på tumorstedet af A549 tumorbærende mus tumoren steder blev monitoreret efter dobbelt intravenøse injektioner (på dag 0 og 7), i PBS, fri HB, HB-NP, og HB-P-NP'er med 200 J / cm2 lysbestråling 1 dag efter hver injektion (på dag 1 og 8). Både HB-NPs og HB-P-NPS behandlingsgrupper begyndte at vise reaktioner dagen efter den første PDT. HB-P-NP'er behandlingsgruppen udviste alvorlig blødning og den hurtigste udvikling af nekrose. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 6
Figur 6:. Histologisk analyse af tumorvæv i A549 tumorbærende mus På dag 16 blev histologisk bekræftelse udføres af en H & E farvning af udskårne tumorvæv. HB-P-NP'er behandlingsgruppen demonstrerede den mest komplette tumor celledød. Scale bar = 500 um, forstørrelse = 40X. Tilpasset fra Chang et al. 10 Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Det mest kritiske skridt i denne undersøgelse er at vælge de rigtige laser betingelser: bølgelængde, kraft og bestråling tid. Den korrekte bølgelængde af lys er egnet til den specifikke fotosensibilisator er nødvendig for PDT. Vi brugte en 630-nm laser, der var passende for hypocrellin B. udgangseffekt var en anden vigtig faktor, der blev fastsat til 400 mW / cm2 baseret på mange pilotundersøgelser. Udgangseffekter på over 400 mW / cm2 beskadiget cellerne eller hudoverfladen af dyrene på grund af selve bestrålingen, mens udgangseffekter under 400 mW / cm2 var for svag til at vise nogen terapeutisk virkning. De passende bestrålingstider til in vitro- og in vivo-undersøgelser var 40 sek (16 J / cm2) og 500 sekunder (200 J / cm2), henholdsvis. Afstanden fra PDT fiber til cellerne eller til tumoren væv i dyremodeller var også en kritisk faktor i denne undersøgelse. At dække hele celle eller tumor overflade medlys, blev 1 cm sig at være den optimale afstand.

Hvis en anden fotosensibilisator anvendes, kan brug af den korrekte bølgelængde af lys maksimere PDT virkningsfuldhed. Udgangseffekten og bestråling tid bør fastsættes gennem trial and error. Når hudoverfladen begynder at brænde under lysbestråling, bør udgangseffekten sættes lavere. Når tumor overflade viser ingen ændring overhovedet dagen efter PDT, kan det indikere nødvendigheden af ​​at øge udgangseffekt.

Denne metode har visse begrænsninger. Men først afstanden fra PDT fiber til målet er en vigtig faktor i denne undersøgelse, er det svært at sikre ensartethed. Afstanden kan variere lidt, fordi den styres af mennesker. For det andet, for dyret model med tumorer i organer såsom lunger, denne protokol er vanskeligt at anvende, da endoskopi er nødvendig og respiratorisk bevægelse uundgåelig.

Selvom kirurgisk resektion er den førstemulighed for at behandle lungecancer, PDT har flere fordele som en ikke-invasiv og ikke-kirurgisk alternativ behandling. Når operationen er ikke hensigtsmæssigt, såsom i flere læsioner tilfælde kan PDT være en gyldig løsning. Ligeledes kan præoperativ PDT reducere tumorstørrelse og mindske graden af kirurgi 17. PDT har færre bivirkninger sammenlignet med kirurgi, strålebehandling eller endobronkial brachyterapi. Desuden PDT er irrelevant for mutationer, der giver resistens over for strålebehandling eller kemoterapi 18.

I denne undersøgelse, foreslog vi både photosensitizer- og anticancer lægemiddel-indkapslet lungecancerrelaterede målrettede nanopartikler som et nyt fotosensibilisator levering system til PDT. Dette koncept kan anvendes på andre fotosensibilisatorer og anticancer narkotika.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Denne undersøgelse blev støttet af bevilling nr. 14-2014-017 fra forskningsfonden SNUBH.

Forfatterne er i gæld til J. Patrick Barron, professor emeritus, Tokyo Medical University og adjungeret professor, Seoul National University Bundang Hospital for hans pro bono redigering af dette manuskript.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
oligo hyaluronic acid Bioland Co., Ltd. _
DS-Y30 (ceramide 3B; mainly N-oleoyl-phytosphingosine) Doosan Biotech Co., Ltd. _
adipic acid dihydrazide Sigma Aldrich A0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide Sigma Aldrich 39391
4-(chloromethyl)benzoyl chloride Sigma Aldrich 270784
Tween 80 Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. T0546
syringe filter Sartorius Stedim Biotech GmbH 17762 15 mm, RC, PP, 0.45 µm
triethylamine Sigma Aldrich T0886
Mini-GeBAflex tubes Gene Bio-Application Ltd. D070-12-100
Paclitaxel Taihua Corporations _
RPMI-1640 Gibco Life Technologies, Inc. 11875
Penicillin–streptomycin Gibco Life Technologies, Inc. 15070
Fetal bovine serum Gibco Life Technologies, Inc. 16140071
Celite (Filter agent) Sigma Aldrich 6858 See step 1.4

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shang, L., Zhou, N., Gu, Y., Liu, F., Zeng, J. Comparative study on killing effect of esophageal cancer cell line between hypocrellin B-photodynamic therapy and hematoporphyrin derivative-photodynamic therapy. Chin J Cancer Prev Treat. 12, 1139-1142 (2005).
  2. Huisman, C., et al. Paclitaxel triggers cell death primarily via caspase-independent routes in the non-small cell lung cancer cell line NCI-H460. Clin Cancer Res. 8 (2), 596-606 (2002).
  3. Dolmans, D. E., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  4. Pass, H. I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  5. Sutedja, T. G., Postmus, P. E. Photodynamic therapy in lung cancer. A review . J. Photochem. Photobiol. 36 (2), 199-204 (1996).
  6. Peng, C. L., Shieh, M. J., Tsai, M. H., Chang, C. C., Lai, P. S. Self-assembled star-shaped chlorin-core poly(epsilon-caprolactone)-poly(ethylene glycol) diblock copolymer micelles for dual chemo-photodynamic therapies. Biomaterials. 29 (26), 3599-3608 (2008).
  7. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2 (3), 477-487 (2005).
  8. Lee, S. J., et al. Comparative study of photosensitizer loaded and conjugated glycol chitosan nanoparticles for cancer therapy. J Control Release. 152 (1), 21-29 (2011).
  9. Chang, J. E., et al. Anticancer efficacy of photodynamic therapy with hematoporphyrin-modified, doxorubicin-loaded nanoparticles in liver cancer. J. Photochem. Photobiol. 140, 49-56 (2014).
  10. Chang, J. E., Cho, H. J., Yi, E., Kim, D. D., Jheon, S. Hypocrellin B and paclitaxel-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles for targeted photodynamic therapy in lung cancer. J. Photochem. Photobiol. 158, 113-121 (2016).
  11. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle delivery of cancer drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  12. Matsumura, Y., Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46 (12 Pt 1), 6387-6392 (1986).
  13. Penno, M. B., et al. Expression of CD44 in human lung tumors. Cancer Res. 54 (5), 1381-1387 (1994).
  14. Wilkins, R., Kutzner, B., Truong, M., Sanchez-Dardon, J., McLean, J. Analysis of radiation-induced apoptosis in human lymphocytes: Flow cytometry using Annexin V and propidium iodide versus the neutral comet assay. Cytometry. 48 (1), 14-19 (2002).
  15. Bannas, P., et al. Validation of nanobody and antibody based in vivo tumor xenograft NIRF-imaging experiments in mice using ex vivo flow cytometry and microscopy. J Vis Exp. (98), e52462 (2015).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. (5), (2008).
  17. Lam, S. Photodynamic therapy of lung cancer. Semin Oncol. 21 (6 Suppl 15), 15-19 (1994).
  18. Simone, C. B. 2nd, et al. Photodynamic therapy for the treatment of non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 4 (1), 63-75 (2012).

Tags

Cancer Research Fotodynamisk terapi Nanopartikel lungekræft Fototoksicitet A549 BALB / C Nude Mouse
Anticancer Effekten af ​​Fotodynamisk terapi med lungekræft-Målrettet Nanopartikler
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S.… More

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S. Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles. J. Vis. Exp. (118), e54865, doi:10.3791/54865 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter