Waiting
登录处理中...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

Antikanker werkzaamheid van Photo Dynamische Therapie met longkanker-Gerichte Nanodeeltjes

Published: December 1, 2016 doi: 10.3791/54865
Automatic Translation
1, 2, 1,3
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University Bundang Hospital, 2College of Pharmacy, Kangwon National University, 3Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Seoul National University College of Medicine

Protocol

LET OP: Alle dierlijke studie protocollen werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van Seoul National University Bundang Ziekenhuis (BA1308-134 / 072-01).

1. Synthese van hyaluronzuur-Ceramide (HACE)

  1. Oplosbaar 12.21 mmol van hyaluronzuur (HA) oligomeer en 9,77 mmol van tetra-n-hydroxide (TBA) in 60 ml dubbel gedestilleerd water (DDW). Roer gedurende 30 minuten.
  2. De DS-Y30 linker synthetiseren lossen 8,59 mmol DS-Y30 ceramide en 9,45 mmol triethylamine in 25 ml tetrahydrofuran (THF). Meng met 8,59 mmol van 4-chloromethylbenzoyl chloride in THF. Roer gedurende 6 uur bij 60 ° C.
  3. Los het gesynthetiseerde 8,10 mmol HA-TBA en 0,41 mmol van DS-Y30 linker in een mengsel van THF en acetonitril (4: 1, v / v). Roer gedurende 5 uur bij 40 ° C.
  4. Verwijderen onzuiverheden door het filteren met een filter middel en elimineren het organische oplosmiddel door vacuümverdamping. Zuiver het product met behulp van een dialysemembraan (moleculair gewicht cut-off: 3,5 kDa) en Lyophilize.

2. Bereiding van de nanodeeltjes

  1. Los 1 mg HB en 1 mg paclitaxel in 0,5 ml dimethylsulfoxide (DMSO) en mengen met 0,5 ml DDW door vortex-mengen gedurende 5 minuten. Vervolgens HACE oplosbaar in het mengsel van vortex-mengen gedurende nog eens 5 min.
  2. Het oplosmiddel, verwarmen bij 70 ° C gedurende 4 uur elimineren onder een voorzichtige stroom stikstofgas.
  3. Resuspendeer de film uit HACE, HB en paclitaxel met 1 ml DDW. Filter met een injectiespuit filter (0,45 pm poriegrootte) om niet-ingekapseld drugs te verwijderen.

3. In vitro fototoxiciteit

  1. Opname van nanodeeltjes in longkankercellijnen
    1. Bereid RPMI-1640-medium bevattende 10% (v / v) foetaal runderserum en 1% (w / v) penicilline-streptomycine.
    2. Zaad A549-cellen in 24-well celcultuur platen bij een dichtheid van 1 x 10 5 cellen / putje (drievouden pergroep). Incubeer gedurende 24 uur bij 37 ° C in een bevochtigde 5% CO2 en 95% lucht atmosfeer.
    3. Na celhechting Verwijder het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS).
    4. Los de nanodeeltjes in PBS tot een eindconcentratie van 2 uM / ml HB. Vervolgens incuberen van de cellen met 1 ml PBS, lege NP, HB-NP of HB-P-NP in elk putje gedurende 4 uur in het donker.
    5. Verwijderen van de oplossing en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens. Voeg vers kweekmedium.
  2. Cellevensvatbaarheid assay
    1. Plaats de celcultuur plaat onder de PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT fiber to the well). Draag laser veiligheidsbril en verlichten de cellen met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) in het donker gedurende verschillende tijdsperioden: 0, 5, 10, 20, 30, en 40 sec (0, 2, 4 , 8, 12 en 16 J / cm 2). Vervolgens incuberen van de cellen gedurende 24 uur in het donker.
    2. Zuig het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens.
    3. Voeg 10 ul van cytotoxiciteit meetoplossing aan elk putje. Incubeer in het donker gedurende 2 uur.
    4. Meet de absorptie bij 450 nm met een microplaat reader.
  3. microscopische analyse
    1. Plaats de celcultuur plaat onder de PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT fiber to the well). Draag laser veiligheidsbril en verlichten de cellen met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) in het donker gedurende 0, 20 of 40 sec (0, 8 of 16 J / cm 2). Vervolgens incuberen van de cellen gedurende 24 uur in het donker.
    2. Zuig het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens.
    3. Voeg 50 ul van annexine V-FITC en 50 gl 4 ', 6-diamidino-2-fenylindol (DAPI, 1,5 ug / ml). Schud de plaat en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur in het donker.
      OPMERKING: Gebruik annexine V-FITC van de fluorescentiemicroscoop kit.
    4. Was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens. Houd de cellen in vers PBS. Identificeer de apoptotische cellen met behulp van licht microscopie bij 100X vergroting.
  4. Fluorescentie geactiveerde celsortering (FACS) analyse
    1. Plaats de celcultuur plaat onder de PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT fiber to the well). Draag laser veiligheidsbril en verlichten de cellen met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm2) gedurende 0, 20, of 40 sec (0, 8 of 16 J / cm 2). Vervolgens incuberen van de cellen gedurende 24 uur in het donker.
    2. Zuig het medium en was de cellen door toevoeging van 1 ml koude PBS. Herhaal de wasstap nog eens.
    3. Resuspendeer de cellen in 1 ml van 1 x bindingsbuffer (verdund 1 deel van de 10x bindingsbuffer; 0,1 M Hepes / NaOH (pH 7,4), 1,4 M NaCl, en 25 mM CaCl 2 tot 9 delen gedestilleerd water) en overdracht 100 ul van de monsteroplossing een 5-mlcultuur buis.
    4. Voeg 5 ul van annexine V-FITC en 5 ui propidium jodide (PI). Voorzichtig vortex de buis en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur (RT) in het donker. Voeg 400 ul van 1 x bindingsbuffer.
      OPMERKING: Gebruik annexine V-FITC en PI van de fluorescentie microscoop kit.
    5. Identificeer de apoptotische cellen door FACS 14. De excitatie laserlijnen PI en annexine V-FITC zijn 488 nm en 635 nm, respectievelijk. Meet de fluorescentie-emissie van PI en annexine V-FITC bij 610 ± 20 nm en 660 ± 20 nm. Verzamel de verworven cellen op de flowcytometer per 10.000 gebeurtenissen.

4. In vivo antikanker werkzaamheid bij tumordragende muizen

  1. Lung-kanker-geïnduceerde muismodel
    1. Bereid 1 x 10 6 A549-cellen in 0,1 ml RPMI-1640 medium; hou het in ijs.
    2. Verdoven de muizen een ip injectie van xylazine en een mengsel van tiletamine en zolazepam (1: 2, 1 ml /kg). Bevestig de juiste verdoving door zachtjes te knijpen een kleine plooi van de huid van muizen. Gebruik dierenarts zalf op de ogen te voorkomen droogheid terwijl onder verdoving.
      OPMERKING: Indien er geen beweging wordt waargenomen, het dier voldoende verdoofd om de experimenten te starten.
    3. Injecteer de cellen subcutaan in de linker flank van BALB / C mannelijk naakt muizen (6-7 weken, 20-22 g).
    4. Houd het observeren van de muizen tot ze beginnen te bewegen rond de kooi.
      LET OP: Wees niet een dier onbeheerd achter, totdat het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Heeft een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren totdat deze volledig is hersteld niet meer terug. Houd de muizen onder specifieke pathogeenvrije (SPF) omstandigheden.
    5. Meet de tumorgrootte met remklauwen elke dag. Bereken het tumorvolume (mm3) als (lengte x breedte 2) / 2. Wanneer de tumorgrootte er ongeveer 200 mm3 in volume, start het experiment.
    6. Antikanker effectiviteitsstudie
      1. Willekeurig verdelen de muizen in 4 groepen (n = 10 voor elke groep).
      2. Verdoven de muizen een ip injectie van xylazine en een mengsel van tiletamine en zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bevestig de juiste verdoving door zachtjes te knijpen een kleine plooi van de huid van muizen. Gebruik dierenarts zalf op de ogen te voorkomen droogheid terwijl onder verdoving.
        OPMERKING: Indien er geen beweging wordt waargenomen, het dier voldoende verdoofd om de experimenten te starten.
      3. Los de nanodeeltjes in PBS tot een eindconcentratie van 2 mg / ml HB. Injecteer PBS, vrij HB HB-NP of HB-P-NPs via de staartader (2 mg / kg HB) tweemaal op dagen 0 en 7.
      4. Houd het observeren van de muizen tot ze beginnen te bewegen rond de kooi.
        LET OP: Wees niet een dier onbeheerd achter, totdat het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Heeft een dier dat een operatie heeft ondergaan om het gezelschap van andere dieren tot het volledig niet terugkerenhersteld. Houd de kooien donker en onder specifieke voorwaarden SPF.
      5. 24 uur na elke injectie, verdoven de muizen een ip injectie van xylazine en een mengsel van tiletamine en zolazepam (1: 2, 1 ml / kg). Bevestig de juiste verdoving door zachtjes te knijpen een kleine plooi van de huid van muizen. Gebruik dierenarts zalf op de ogen te voorkomen droogheid terwijl onder verdoving.
        OPMERKING: Indien er geen beweging wordt waargenomen, het dier voldoende verdoofd om de experimenten te starten.
      6. Plaats de tumorplaats onder PDT vezel (met 1 cm afstand van de PDT vezel naar de tumor). Draag een veiligheidsbril laser bril, zet de schakelaar, en verlichten de tumor met een PDT laser (630 nm, 400 mW / cm 2) voor 500 sec (200 J / cm2) tweemaal op dag 1 en 8.
      7. Houd het observeren van de muizen tot ze beginnen te bewegen rond de kooi. Heeft een dier niet onbeheerd achter te laten tot het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Heeft een dier dat undergon heeft niet terugkerene operatie om het gezelschap van andere dieren tot volledig hersteld.
      8. Houd de kooien onder SPF-omstandigheden. Handhaaf de kooien in het donker gedurende 24 uur na laserbehandeling.
      9. Visueel controleren het tumorvolume en de veranderingen op de tumorplaats dagelijks. Meet de tumorgrootte met remklauwen, en bereken het volume (lengte x breedte 2) / 2 (mm 3). Neem foto's van de tumor plaatsen elke dag om te controleren of de tumor oppervlakte wijzigingen na PDT.
      10. Op dag 16, offeren vijf muizen per groep door terminale anesthesie met behulp van isofluraan.
      11. Met een pincet en een schaar, knip de buitenste schil en bloot de tumoren 15. Zorgvuldig oogsten hen. Bevestig ze in 10% formaline, insluiten in paraffine, en vlekken ze met hematoxyline en eosine (H & E) voor histologische analyse 16.
      12. Na 45 dagen van de monitoring, offeren de resterende muizen door terminal anesthesie met behulp van isofluraan.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

We bereidden twee HB-NPs en HB-P-NPs met de bovengenoemde technieken. De gemiddelde diameters van HB-NPs en HB-P-NPs waren 220,9 ± 3,2 nm en 211,9 ± 1,6 nm.

De cel levensvatbaarheid van A549 cellen na 4 uur incuberen met PBS, lege NP, HB-NPs en HB-P-NPs gevolgd door bestraling met licht (0-16 J / cm 2) wordt getoond in figuur 1. Zonder licht, de HB-NP behandelde groep vertoonde geen cytotoxiciteit terwijlprototypemodellen HB-P-NP-behandelde cellen vertoonden 81,28 ± 0,14% cellevensvatbaarheid. Dit kan te wijten zijn aan de antikanker effect van paclitaxel, die werd afgegeven uit de nanodeeltjes. Onder PDT werd de cellevensvatbaarheid verminderd in overeenstemming met het licht belichtingstijd zowel HB-NP en HB-P-NP-behandelde cellen. HB-P-NP-behandelde cellen vertoonden verhoogde fototoxiciteit dan HB-NPs groep onder dezelfde instraling. Wanneer 16 J / cm 2 bestraling werd slechts 7,52 ± 0,38% van de cellen overleefden in het HB-P-NP behandelingsgroep.

De resultaten werden zichtbaar gemaakt met annexine V-FITC-kleuring (figuur 2). De PDT-geïnduceerde apoptotische cellen werden gekleurd met annexine V-FITC, uitdrukken groene fluorescentie. De sterkste groene fluorescentie signaal werd gedetecteerd in de HB-P-NP-behandelde cellen onder dezelfde instraling.

De fasen van de PDT geïnduceerde apoptotische cellen werden ondergebracht in flowcytometrie. Door dubbel-kleuring met annexine V-FITC en PI, vroeg apoptotische cellen (alleen annexine V-FITC positief), laat apoptotische cellen (zowel annexine-V en PI positief) en necrotische cellen (alleen PI positief) werden onderscheiden. Onder dezelfde PDT omstandigheden werd het gedeelte van late apoptotische cellen nam in het HB-P-NP-behandelde groep (figuur 3).

"Fo: keep-together.within-page =" 1 "> In vivo tumorgroei in long-tumor dragende muizen na dubbele intraveneuze injectie van PBS, gratis HB, HB-NP en HB-P-NP's, gevolgd door het licht bestraling figuur 4. de oppervlakken van de tumorplaatsen werden onderzocht (Figuur 5). het HB-P-NP-behandelde muizen toonde de snelste reacties, waaronder bloedingen en necrose, en de langzaamste tumorgroei. Verder histologische analyse bevestigde de zwaarst beschadigde tumorcellen in het HB-P-NP behandelde groep (Figuur 6).

Figuur 1
Figuur 1:. In vitro fototoxiciteit van A549 cellen A549 cellen werden behandeld met PBS, lege NP, HB-NP of HB-P-NP en lichte bestraling gegeven voor 0, 5, 10, 20, 30 of 40 sec (0, 2, 4, 8, 12 of 16 J / cm 2). onder thij hetzelfde bestraling tijd, de HB-P-NP behandelde groep vertoonden hogere fototoxiciteit dan de HB-NP behandelde groep. De waarden worden uitgedrukt als gemiddelden ± standaarddeviaties (SD, n = 3). *** P <0,001, in vergelijking met de PBS-behandelde groep. ## P <0,01, ### p <0,001 ten opzichte van de HB-NP behandelingsgroep. Aangepast van Chang et al. 10 Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2:. Microscopische analyse van apoptotische cellen A549 A549-cellen werden behandeld met PBS, HB-NPs of HB-P-NP en lichte bestraling gegeven voor 0, 2 of 4 J / cm2. De dubbel-smet van DAPI (blauw, eerste kolom) en annexine V-FITC (groen, tweede kolom) geven kernenen apoptotische cellen. HB-P-NP-behandelde cellen vertoonden een sterkere groene fluorescentie signalen dan de HB-NP-behandelde cellen onder dezelfde omstandigheden bestraling, hetgeen een veel hoger fototoxiciteit. Schaal bar = 200 micrometer, vergroting = 100X. Aangepast van Chang et al. 10 Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 3
Figuur 3:. FACS analyse van apoptotische cellen A549 A549-cellen werden behandeld met PBS, HB-NP of HB-P-NP en lichte bestraling gegeven voor 0, 2 of 4 J / cm2. De cellen werden ingedeeld in vier groepen. I) zowel annexine V-FITC en PI-negatieve cellen worden geacht onbeschadigd, ii) annexine V-FITC-positieve en PI-negatieve cellenzijn vroege apoptotische, iii) zowel annexine V-FITC en PI-positieve cellen te laat apoptotische, en iv) annexine V-FITC-negatieve en PI-positieve cellen zijn ofwel te laat apoptotische of necrotische. Overeenkomstig de microscopische analyse onder dezelfde bestralingsomstandigheden, de HB-P-NP-behandelde cellen vertoonden hogere fototoxiciteit dan HB-NP-behandelde cellen en late apoptotische cellen niveaus verhoogd. Aangepast van Chang et al. 10 Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 4
Figuur 4:. Tumor Volume Bewaking van de A549 tumor-dragende muizen op dag 0 en 7, de dubbele injecties van PBS, gratis HB, HB-NP en HB-P-NP's werden uitgevoerd. De PDT (200 J / cm 2) was performed 1 dag na elke injectie op dagen 1 en 8. De behandelingen vertoonden verschillende therapeutische effect, met HB <HB-NPs <HB-P-NP. Op dag 45, de HB-P-NP behandelde groep vertoonde een significant verminderd tumorvolume vergeleken met de andere groepen. Waarden worden weergegeven als het gemiddelde ± standaardafwijkingen (SD, n = 4). De tumor volume (mm3) werd gedefinieerd als (lengte x breedte 2) / 2. Bewerking van Chang et al. 10 Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 5
Figuur 5:. De Surface Wijzigingen op de plaats van de tumor van de A549-Tumor-dragende muizen De tumor sites werden gecontroleerd na dubbele intraveneuze injecties (op dag 0 en 7) van PBS, gratis HB, HB-NP en HB-P-NP met 200 J / cm2 bestraling met licht 1 dag na elke injectie (op dagen 1 en 8). Zowel de HB-NPs en HB-P-NP behandelingsgroepen begon reacties blijkt de eerste dag na de PDT. De HB-P-NP behandelde groep vertoonde ernstige bloedingen en de snelste ontwikkeling van necrose. Aangepast van Chang et al. 10 Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 6
Figuur 6:. Histologische analyse van tumorweefsels in A549-tumor dragende muizen op dag 16, de histologische bevestiging werd uitgevoerd door een H & E kleuring van uitgesneden tumorweefsels. De HB-P-NP behandelde groep aangetoond dat de meest complete tumorcel dood. Schaal bar = 500 micrometer, vergroting = 40X. Aangepast van Chang et al. 10 Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De meest kritische stap in deze studie is het selecteren van de juiste laser voorwaarden: golflengte, energie en bestralingstijd. De juiste golflengte van licht die geschikt zijn voor de specifieke fotosensibilisator is noodzakelijk voor de PDT. We gebruikten een 630-nm laser die geschikt is voor hypocrelline B. Het uitgangsvermogen is een andere belangrijke factor, die werd ingesteld op 400 mW / cm 2 op basis van vele modelstudies was. Uitgangsvermogen van meer dan 400 mW / cm 2 beschadigde cellen of het huidoppervlak van de dieren door de bestraling zelf, terwijl uitgangsvermogen dan 400 mW / cm 2 was te zwak om elk therapeutisch effect. De juiste bestralingstijden voor de in vitro en in vivo studies waren 40 sec (16 J / cm 2) en 500 seconde (200 J / cm2), respectievelijk. De afstand tussen de PDT vezel aan de cellen of de tumor weefsel van de diermodellen was ook een belangrijke factor in deze studie. Om de hele cel of tumor oppervlak met het bedekkenlicht, 1 cm bleek de optimale afstand zijn.

Als een andere fotosensibilisator wordt toegepast, kunnen gebruik maken van de juiste golflengte van het licht de PDT effectiviteit te maximaliseren. Het uitgangsvermogen en bestraling tijd zou moeten worden vastgesteld door middel van trial and error. Wanneer het huidoppervlak gaat verbranden tijdens de bestraling met licht, moet het uitgangsvermogen lager worden ingesteld. Wanneer de tumor oppervlak vertoont geen verandering op de dag na PDT, kan dit de noodzaak om de productie te verhogen geven.

Deze methode heeft een aantal beperkingen. Maar eerst de afstand van de PDT vezel naar het doel is een belangrijke factor in dit onderzoek, is het moeilijk om uniformiteit. De afstand kan iets afwijken, omdat het wordt gecontroleerd door de mens. Ten tweede voor het diermodel met tumoren in organen zoals de longen, dit protocol moeilijk toepasbaar omdat endoscopie noodzakelijk is en ademhalingsbeweging onvermijdelijk.

Hoewel chirurgische resectie is het eersteoptie voor de behandeling van longkanker, PDT heeft verschillende voordelen als een niet-invasieve en niet-chirurgische alternatieve behandeling. Als de operatie niet geschikt is, zoals in meerdere laesie gevallen kan PDT een geldige optie. Ook kan preoperatieve PDT de tumorgrootte te verminderen en de mate van operatie 17. PDT heeft minder bijwerkingen in vergelijking met chirurgie, radiotherapie of endobronchiale brachytherapie. Daarnaast PDT is irrelevant mutaties die weerstand tegen radiotherapie of chemotherapie 18.

In deze studie hebben we voorgesteld zowel photosensitizer- en antikanker geneesmiddel ingekapseld longkanker gerichte nanodeeltjes als nieuw afgiftesysteem fotosensibilisator voor PDT. Dit concept kan worden toegepast op andere fotosensitizers en antikanker geneesmiddelen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Deze studie werd ondersteund door subsidie ​​niet. 14-2014-017 van de SNUBH Research Fund.

De auteurs zijn verschuldigd aan J. Patrick Barron, emeritus hoogleraar, Tokyo Medical University en Adjunct Professor, Seoul National University Bundang ziekenhuis voor zijn pro bono redactie van dit manuscript.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
oligo hyaluronic acid Bioland Co., Ltd. _
DS-Y30 (ceramide 3B; mainly N-oleoyl-phytosphingosine) Doosan Biotech Co., Ltd. _
adipic acid dihydrazide Sigma Aldrich A0638
N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide Sigma Aldrich 39391
4-(chloromethyl)benzoyl chloride Sigma Aldrich 270784
Tween 80 Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. T0546
syringe filter Sartorius Stedim Biotech GmbH 17762 15 mm, RC, PP, 0.45 µm
triethylamine Sigma Aldrich T0886
Mini-GeBAflex tubes Gene Bio-Application Ltd. D070-12-100
Paclitaxel Taihua Corporations _
RPMI-1640 Gibco Life Technologies, Inc. 11875
Penicillin–streptomycin Gibco Life Technologies, Inc. 15070
Fetal bovine serum Gibco Life Technologies, Inc. 16140071
Celite (Filter agent) Sigma Aldrich 6858 See step 1.4

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shang, L., Zhou, N., Gu, Y., Liu, F., Zeng, J. Comparative study on killing effect of esophageal cancer cell line between hypocrellin B-photodynamic therapy and hematoporphyrin derivative-photodynamic therapy. Chin J Cancer Prev Treat. 12, 1139-1142 (2005).
  2. Huisman, C., et al. Paclitaxel triggers cell death primarily via caspase-independent routes in the non-small cell lung cancer cell line NCI-H460. Clin Cancer Res. 8 (2), 596-606 (2002).
  3. Dolmans, D. E., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  4. Pass, H. I. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  5. Sutedja, T. G., Postmus, P. E. Photodynamic therapy in lung cancer. A review . J. Photochem. Photobiol. 36 (2), 199-204 (1996).
  6. Peng, C. L., Shieh, M. J., Tsai, M. H., Chang, C. C., Lai, P. S. Self-assembled star-shaped chlorin-core poly(epsilon-caprolactone)-poly(ethylene glycol) diblock copolymer micelles for dual chemo-photodynamic therapies. Biomaterials. 29 (26), 3599-3608 (2008).
  7. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2 (3), 477-487 (2005).
  8. Lee, S. J., et al. Comparative study of photosensitizer loaded and conjugated glycol chitosan nanoparticles for cancer therapy. J Control Release. 152 (1), 21-29 (2011).
  9. Chang, J. E., et al. Anticancer efficacy of photodynamic therapy with hematoporphyrin-modified, doxorubicin-loaded nanoparticles in liver cancer. J. Photochem. Photobiol. 140, 49-56 (2014).
  10. Chang, J. E., Cho, H. J., Yi, E., Kim, D. D., Jheon, S. Hypocrellin B and paclitaxel-encapsulated hyaluronic acid-ceramide nanoparticles for targeted photodynamic therapy in lung cancer. J. Photochem. Photobiol. 158, 113-121 (2016).
  11. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle delivery of cancer drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  12. Matsumura, Y., Maeda, H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 46 (12 Pt 1), 6387-6392 (1986).
  13. Penno, M. B., et al. Expression of CD44 in human lung tumors. Cancer Res. 54 (5), 1381-1387 (1994).
  14. Wilkins, R., Kutzner, B., Truong, M., Sanchez-Dardon, J., McLean, J. Analysis of radiation-induced apoptosis in human lymphocytes: Flow cytometry using Annexin V and propidium iodide versus the neutral comet assay. Cytometry. 48 (1), 14-19 (2002).
  15. Bannas, P., et al. Validation of nanobody and antibody based in vivo tumor xenograft NIRF-imaging experiments in mice using ex vivo flow cytometry and microscopy. J Vis Exp. (98), e52462 (2015).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. (5), (2008).
  17. Lam, S. Photodynamic therapy of lung cancer. Semin Oncol. 21 (6 Suppl 15), 15-19 (1994).
  18. Simone, C. B. 2nd, et al. Photodynamic therapy for the treatment of non-small cell lung cancer. J Thorac Dis. 4 (1), 63-75 (2012).

Tags

Cancer Research fotodynamische therapie nanodeeltjes Longkanker Fototoxiciteit A549 BALB / C Naakt Mouse
Antikanker werkzaamheid van Photo Dynamische Therapie met longkanker-Gerichte Nanodeeltjes
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S.… More

Chang, J. E., Cho, H. J., Jheon, S. Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles. J. Vis. Exp. (118), e54865, doi:10.3791/54865 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter