Summary
Hier präsentieren wir ein Protokoll, um depressive Mausmodell zu etablieren, beobachten die Verhalten Veränderungen im Zusammenhang mit unvorhersehbaren milde Dauerstress (spritzt) und den Anti-Depressionen-Effekt von Xiaoyaosan zu bewerten.
Abstract
Neben dem standardisierten Einsatz von Antidepressiva und Psychotherapie hat die Nutzung der traditionellen chinesischen Medizin führen insgesamt zu einer Verbesserung von Patienten mit major Depression (MDD). Daher war der Zweck dieser Studie depressive Mausmodell zu etablieren, beobachten die Verhalten Veränderungen im Zusammenhang mit unvorhersehbaren milde Dauerstress (spritzt) und dann auswerten des Anti-Depressionen-Effekts des Xiaoyaosan. Mäuse wurden nach dem Zufallsprinzip in vier Gruppen eingeteilt: eine Kontrollgruppe, eine Modellgruppe Behandlungsgruppe mit Xiaoyaosan und Behandlungsgruppe mit Fluoxetin. Alle Mäuse wurden einzeln in Käfigen gehalten, und Depression wurde bei den Mäusen induziert durch Belichten sie mehrere gestaltete Manipulationen der CUMS für 21 Tage, wie im Protokoll beschrieben. Mäuse in der Kontrollgruppe und Model-Gruppe erhielt 0,5 mL destilliertem Wasser, während Mäuse in den Behandlungsgruppen entweder Xiaoyaosan erhielten (0,25 g/kg/Tag) oder Fluoxetin (2,6 mg/kg/Tag). In der Studie verwendeten Medikamente erhielten täglich während der gesamten drei Wochen intragastrically. Um die Depressive-ähnliche Verhaltensweisen einschätzen zu können, öffnen Sie eine Reihe von Parametern, einschließlich der Mantel stand, Körpergewicht, Feld-Test-Ergebnis und Saccharose Präferenz Testergebnis aufgenommen wurden. Analyse der Daten zeigte, dass Verhaltensweisen des Modells, die Mäuse wesentlich verändert wurden Verhalten der Mäuse in der Kontrollgruppe verglichen, die bei der Behandlung von Xiaoyaosan und Fluoxetin verbessert wurden. Die aktuellen Erkenntnisse Xiaoyaosan Anti-Depressionen Auswirkungen auf das Verhalten von Mäusen CUMS-induzierte demonstriert und gezeigt, dass Verbindungen aus dem Xiaoyaosan Rezept zur Behandlung von Depressionen, wenn man bedenkt ihre wohltuende Wirkung auf lohnen kann Depressive-ähnliche Verhaltensweisen.
Introduction
MDD ist eine chronische, hoch wiederkehrende psychische Krankheit, Geschenke mit anhaltende Niedergeschlagenheit, Depressionen, geringes Selbstwertgefühl, geistige Retardierung, Verlust des Interesses,, zutiefst pessimistisch oder suizidale Tendenzen Schlafstörungen; Es hat großen Schaden für die Gesundheit und sozialen Stabilisierung1verursacht. Es hat gewordenes der Welt Hauptursache für Behinderung und möglicherweise einer der wichtigsten Hauptursachen der Krankheitslast bis zum Jahr 2030 laut der Weltgesundheitsorganisation (WHO)2,3. Derzeit sind Antidepressiva und Psychotherapie als die erste Wahl zur Behandlung von MDD sein. Dennoch eine enorme Anzahl von Patienten mit MDD reagieren nicht auf kontinuierliche Medikation oder Behandlung, und sie sind mit behandlungsresistenter Depression4aufgelistet.
Xiaoyaosan ist eine klassische chinesische Verbindung5 , die am meisten, zur Behandlung von psychischer Krankheiten seit Tausenden von Jahren seit der Song-Dynastie in China6 benutzt gewesen. Es besteht aus 8 chinesische Kräuter: Radix Bupleuri Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Poria, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens , und Herba Menthae. Xiaoyaosan enthält mehrere Komponenten, hat mehrere Ziele und nutzt mehrere Wege7. Xiaoyaosan ist häufig gezeigt, um eine sichere und wirksame Formel für die Behandlung von verschiedenen Krankheiten im Zusammenhang mit psychischen Erkrankungen sein, und moderne Studien konzentrierten sich auch auf die Anti-Depression-Mechanismus dieses zusammengesetzte8,9, 10. Die Pathogenese der MDD ist noch unklar, obwohl es vielfältige Hypothesen gibt, einschließlich die Monoamin-Hypothese, die Neurotransmitter-Rezeptor-Hypothese, die neuroendokrine Funktion Änderung Hypothese, Immunsystem Anomalie Hypothese, Etc. Mehrere Studien haben gezeigt, dass die antidepressive Wirkung von Xiaoyaosan eine Verbindung mit der materiellen Grundlagen der oben genannten Hypothesen11,12, und seine therapeutische Wirkung manifestiert sich als eine Verbesserung zu depressiv-like Verhaltensweisen13.
Darüber hinaus hat mit der Prävalenz von Depression, Rückgang der Arbeitskräfte, Frühpensionierungen und teure Behandlungen14modernen Gesellschaft litt. Teure Behandlung braucht strenge ärztliche Hilfe, die eine Reihe von erhöhten Behandlungskosten und genaue Vorwegnahme der präzise unerwünschte Ergebnisse sowie Nebenwirkungen15bedeutet. Das chinesische Kraut Xiaoyaosan hat zugänglichen Komponenten, einzigartige Effekte und leichte Nebenwirkungen. Seine Anwendung kann eine Rolle bei der Verringerung der Belastung der modernen medizinischen Behandlung. Daher, um eine mehr theoretische Grundlage für die Anwendung von Xiaoyaosan zu bieten, eine alternative klinische Therapie sollte zur Behandlung von Depressionen, die Inzidenz steigt von Jahr zu Jahr angeboten werden und sollte bei gleichzeitiger Verbesserung der menschlichen Gesundheit. Dieses Whitepaper beschreibt ein Protokoll unter Verwendung von Xiaoyaosan, depressiv-ähnliche Verhaltensweisen zu verhindern, indem Sie die depressive Modell der Maus zu etablieren. Die Freiland-Test und Saccharose Präferenz Test wurden verwendet, um die antidepressive Wirkung von Xiaoyaosan überprüfen.
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Protocol
Dieses Protokoll wurde von der tierischen Ethikkommission der Peking-Universität der chinesischen Medizin und wurde in Übereinstimmung mit allen Richtlinien für die Pflege und Nutzung des Labor Tiere von China. Es gab keine Unfalltod Situation während der Versuchsdurchführung und keine Tiere in dieser Studie eingeschläfert werden musste.
1. Vorbereitung Drogen für das Experiment
Hinweis: Die chinesische Kräuter wurden gekauft und dann von Dr. B. Liu von der Beijing University of Chinese Medicine authentifiziert. Xiaoyaosan enthält die folgenden acht traditionellen chinesischen Drogen in einem Verhältnis von 6:6:6:6:3:6:2:2: Radix Angelicae Sinensis Radix Paeoniae Alba, Poria, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae und Rhizoma Zingiberis Recens.
- Bereiten Sie Xiaoyaosan als zuvor beschriebenen16.
Hinweis: Wir extrahiert diese Verbindungen in der chinesischen Medizin Vorbereitungsraum des China-Japan Freundschaft Krankenhauses und die Extraktion-Rendite betrug 18,8 %. - Überprüfen Sie die Qualität des Xiaoyaosan durch leistungsstarke flüssige Chromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS/MS) Analyse17.
2. Vorbereitung Mäuse für die Versuchsdurchführung
Hinweis: Für die Versuchsdurchführung wurden 60 gesunden männlichen C57BL/6J Mäuse im Alter von 12 Wochen, mit jeder Maus mit einem Gewicht zwischen 18 und 22 g ausgewählt.
- Halten Sie Mäuse einzeln in Käfigen in eine typische spezifische Erreger frei (SPF) Labor Tierraum (22 ± 1 ° C, 12 h/12 h hell/dunkel-Zyklus, Relative Luftfeuchtigkeit: 30 – 40 %) für eine Woche vor dem Eingriff spritzt.
- Nach dem Zufallsprinzip teilen Sie alle Mäuse in einer Kontrollgruppe, eine Modellgruppe, Xiaoyaosan Behandlungsgruppe oder Fluoxetin Behandlungsgruppe entsprechend ihres Körpergewichts. Jede Gruppe hat 15 Mäuse.
- Vor Beginn des Experiments Nummer der Mäuse in den einzelnen Gruppen auf ihre Fersen mit einem Markierstift.
- Alle Mäuse mit einem fünftägigen Saccharose-Präferenz-Test testen (siehe Schritt 5) und ein offenes Feld-Test (siehe Schritt 6).
(3) Induktion von Depression bei Mäusen
Hinweis: Um die Depression zu induzieren, erfuhr die Mäuse in der Model-Gruppe und zwei Behandlungsgruppen CUMS für 21 Tage18. Der Plan kann entsprechend der konkreten Situation geändert werden, aber das Prinzip der gleichen Stressor ständig verwendet werden sollten befolgt werden.
-
Mäuse, täglich um zwei beliebige der folgenden sieben Stressoren für 21 aufeinanderfolgenden Tagen19aussetzen. Unser Plan Modellierung ist folgendermaßen aufgebaut:
- Am Montag setzen Sie Mäuse zu Nahrungsmangel (leer den Feed jedes Käfigs für 24 h, 08:00 bis 08:00) und Wasserentzug (Entfernen der Trinkflasche jedes Käfigs für 24 h, 08:00 bis 08:00 aus).
- Am Dienstag setzen Sie Mäuse zu Zurückhaltung Stress (Restrain Mäuse in eine kleine Plastikwanne für 3 h, 08:00 bis 11:00) und leeren Käfige (entfernen Sie das Polster in jedem Käfig für 11 Uhr, 08:00 bis 19:00 Uhr aus).
- Am Mittwoch, Mäuse, nasse und verschmutzte Käfige (Gießen Sie Wasser in jedem Käfig und halten Sie feucht für 24 h, 08:00 bis 08:00) aussetzen und überfüllten Käfigen (legen fünf Mäuse in einem Käfig für 24 h, 08:00 bis 08:00 Uhr).
- Am Donnerstag setzen Sie Mäuse zu Zurückhaltung Stress und eiskalte schwimmen20,21 (Kraft jeder Maus in ein klares Glas Aquarium mit eiskaltem Wasser für 5 min Schwimmen aus).
- Am Freitag setzen Sie Mäuse, nasse und verschmutzte Käfige und Nahrungsmangel aus.
- Am Samstag setzen Sie Mäuse zu Zurückhaltung Stress und überfüllten Käfigen aus.
- Am Sonntag setzen Sie Mäuse zu leeren Käfige und eiskalte Schwimmen aus.
- Notieren Sie den Mantel Zustand und Körpergewicht wöchentlich bis zum Ende der Modellierung (Tag 21). Berechnen Sie die Gesamtpunktzahl des Bundestaates Mantel als der Summe der Punkte aus sieben verschiedenen Körperteile: Kopf, Hals, dorsale Fell, ventrale Fell, Vorderpfoten, Schweif und Hinterpfoten. Eine Punktzahl von eins kennzeichnet ein gepflegtes Fell und einen Wert von Null einen ungepflegten Mantel22.
- Einen fünftägiges Saccharose Präferenz Test durchführen (siehe Schritt 5) und ein offenes Feld-Test (siehe Schritt 6) am Ende des Experiments.
4. Verwaltung des Xiaoyaosan
Hinweis: Die Dosis von Xiaoyaosan (0,25 g/kg/Tag) wurde auf der Grundlage seiner zufrieden stellende Wirksamkeit als zuvor beschriebenen9ausgewählt.
- Während des Experiments verwenden Sie destilliertes Wasser bereiten die Xiaoyaosan und Fluoxetin Suspensionen, und stellen Sie sicher, sofort zu verwenden.
- Geben Sie 0,5 mL destilliertem Wasser für die Mäuse in der Kontrollgruppe und Model-Gruppe von eines-Verwaltung jeden Tag vor der Modellierung. Unterdessen geben Xiaoyaosan (0,25 g/kg/Tag) oder Fluoxetin (2,6 mg/kg/Tag) für die Mäuse in den beiden Behandlungsgruppen.
(5) Saccharose Präferenz Test
Hinweis: Kein Wasser oder Nahrung Deprivation wurde vor dem Test angewendet. Das Protokoll wurde bereits berichtet23aufgeführt.
- Beherbergen Sie an den ersten beiden Tagen die Mäuse einzeln mit zwei Flaschen mit Leitungswasser gefüllt.
- Geben Sie an den nächsten beiden Tagen die Mäuse zwei Flaschen mit 1 % Saccharoselösung gefüllt.
- Am letzten Tag geben Sie die Mäuse zwei Flaschen für 24 h mit Leitungswasser und 1 % Saccharoselösung. Um eine Seite Präferenz der Mäuse im Trinkwasser Verhalten zu vermeiden, wechseln Sie die Position der zwei Flaschen nach 12 h.
- Notieren Sie das Volumen (mL) der verbrauchten Saccharoselösung und Leitungswasser. Die Saccharose-Einstellung wie folgt zu berechnen: Saccharose Präferenz (%) = Saccharose Verbrauch/Total flüssigen Verbrauch × 100 %.
6. offene Feldtest
- Führen Sie den Freiland-Test in einem schwach beleuchteten und ruhigen Raum mit einer vierseitigen Schwarz Matt Holzkiste. Teilen Sie dem Boden in 25 gleiche Quadrate durch blaue Linien.
- Reinigen Sie Open-Feld mit 5 % Alkohol vor dem Zugriff von jeder Maus. Dann platzieren Sie den Mauszeiger in der Mitte des offenen Feldes sanft.
- Anhalten einer hochauflösenden Digitalkamera ca. 200 cm direkt über das Feld und erfassen das Verhalten jeder Maus für 5 min.
- Bewerten Sie die Mäuse Verhaltensstörungen Video von der Video-Tracking Systemsoftware zu und notieren Sie die Daten der gesamten Entfernung und Anzahl der Einträge in die Mitte-Zone laufen.
- Analysieren Sie die Daten von der Gesamtstrecke verschoben und die Anzahl der Einträge in die Mitte-Zone von Statistik-Software.
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Representative Results
Beachten Sie, dass die Ergebnisse von Dr. Xiu-Fang Ding, Et Al. zuvor veröffentlicht wurden 18
Daten wurden als der Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwertes (SEM) ausgedrückt. Eine einfache ANOVA oder eines nicht-parametrische Tests wurde für allgemeine Daten basierend auf der Normalität-Test und der Test auf Homogenität der Varianz verwendet. Die LSD-Test wurde für die Vergleiche zwischen Gruppen verwendet. Darüber hinaus wurde der wiederholten Messung Prozess der das allgemeine lineare Modell (GLM) verwendet, um One-Way ANOVA für wiederholte Messdaten analysieren (Partitur zu beschichten und Körpergewicht), und ein Prozess der multivariaten Analyse der Varianz wurde angenommen, um Vergleiche anzustellen zwischen den Gruppen zu jedem Zeitpunkt darauf (LSD-Methode).
Der physikalische Zustand der CUMS-induzierte Mäuse
Nach der Freilegung Mäuse drei Wochen CUMS für die Induktion von Depression, wurde eine schrittweise Dystrophie der Mantel Zustand in der Modellgruppe induziert; der Morbus Sudeck habe nicht vor, nach zwei Wochen von Stress, aber es verschlechterte sich am Ende des Verfahrens CUMS (drei Wochen) und der Mantel-Score signifikant verringert im Vergleich zu jener der Kontrollgruppe (F (3, 56) = 25,08, p = 0.000). Der Mantel Zustand von Mäusen wurde vor allem nach einer kontinuierlichen Behandlung mit Xiaoyaosan oder Fluoxetin verglichen mit der Modellgruppe verbessert (F (3, 56) = 25,08, beide p = 0.001, Abb. 1a). Nach den wöchentlichen Körper Gewichtsdaten der einzelnen Gruppen, manifestierte sich eine signifikante Reduktion des Körpergewichts der dritten Woche (F (3, 56) = 16.149, p = 0,000, Abbildung 1 b), während Xiaoyaosan oder Fluoxetin Behandlung des Körpers erheblich erhöht Gewicht im Vergleich mit der Modellgruppe (F (3, 56) = 16.149, beide p = 0.001).
Die Saccharose-Präferenz-test
Vor Stress ausgesetzt hatte Mäuse in allen Gruppen ähnlich wie Saccharose (Ausgangszustand, Abb. 2a). Ein signifikanter Rückgang der Saccharose Präferenz wurde allerdings nach drei Wochen Stress Verfahren in Model-Gruppe beobachtet (F (3, 56) = 41.379, p = 0,000, Abb. 2 b). Xiaoyaosan und Fluoxetin Behandlung effektiv diese Änderungen rückgängig gemacht und erhöht deutlich die Saccharose Präferenz gegenüber Modellgruppe (F (3, 56) = 41.379, beide p = 0.000).
Die Freiland-test
Vor Stress ausgesetzt stellte alle Mäuse einen ähnlichen Verhalten Zustand (Baseline-Bedingungen. Abbildung 2 c und 2d). Jedoch nachdem Stress Belichtung für drei Wochen, die Gesamtstrecke in fünf Minuten deutlich verschoben unterschieden sich zwischen den Gruppen. Die Gesamtstrecke von Mäusen in der Modellgruppe bewegt war signifikant niedriger (F (3, 56) = 4.216, p = 0,003, Abbildung 2f) als bei der Kontrollgruppe. Darüber hinaus wurde auch die Anzahl der Einträge in der zentralen Zone signifikant zwischen den Gruppen. Die Anzahl der Einträge in der zentralen Zone der Model-Gruppe erheblich gesunken (F (3, 56) = 2.809, p = 0.013, Abbildung 2e) verglichen mit der Kontrollgruppe. Fluoxetin-Behandlung verhindert diese Veränderungen in der Fortbewegung Trend und verbessert die Gesamtstrecke und die Anzahl der Einträge in der zentralen Zone (F (3, 56) = 4.216, p = 0.029; F (3, 56) = 2.809, p = 0,004). Ein ähnliches Phänomen wurde auch in der Behandlung Xiaoyaosan beobachtet (F (3, 56) = 4.216, p = 0,014; F (3, 56) = 2.809, p = 0.029).
Abbildung 1 : Auswirkungen von Xiaoyaosan auf CUMS-induzierten Veränderungen in Mäusen Aggregatzustand. Die Mäuse Fell Zustand (a) und Körpergewicht (b) wurden während der Stressphase wöchentlich gemessen. Daten wurden ausgedrückt als Mittelwert ± SEM, n = 15 pro Gruppe. ** p < 0,001 versus Kontrolle; ΔΔ p < 0,001 gegenüber dem Modell. Diese Zahl wurde von Ding, Et Al. modifiziert 18 Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 : Auswirkungen von Xiaoyaosan auf CUMS-induzierte depressiv anmutenden Verhaltensweisen. Eine Reihe von Verhaltensstörungen Tests wurde durchgeführt und folgende Parameter gemessen: Saccharose Präferenz (a, b), Anzahl der Einträge in der Mitte-Zone (c, e) und die Gesamtstrecke verschoben (lokomotorischen Tätigkeit) (d, f). Daten wurden ausgedrückt als Mittelwert ± SEM, n = 15 pro Gruppe. * p < 0,05, *p < 0,01 und *p < 0,001 versus Kontrolle; Δ p < 0,05, ΔΔp < 0,01 und ΔΔΔp < 0,001 gegenüber Modell. Diese Zahl wurde von Ding, Et Al. modifiziert 18 Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
In dieser Studie verwendete CUMS-Modell ist eine gängige Methode, Stress-Diathese-Modell Depression24zu etablieren. Die meisten Manifestationen der CUMS können durch Antidepressiva, die zeigten, dass diese Modell-Methode eine starke prädiktive Gültigkeit25 hatwiederhergestellt werden. Durch diese Methode Tiere erhalten chronische unberechenbar stressig Reize und Kernsymptome der major Depression, verminderte Ort Präferenz Klima-, Anhedonie, und beeinträchtigt Emotion-ähnliche Verhaltensweisen26zu entwickeln. Hier kann die kontinuierliche Nutzung von Xiaoyaosan oder Fluoxetin in diesem Protokoll die Depressive-ähnliche Verhaltensweisen des CUMS-induzierte Mäusen nach den Ergebnissen des Experiments verbessern; Die Fluoxetin ist als Positivkontrolle Medikament die Wirkung der Intervention von Xiaoyaosan beweisen.
Die Auswertung der Mantel der Gäste, im Gegensatz zu offenen Feld Test, Schwimmtest, gezwungen oder Neuheit unterdrückt Fütterung Test, ist ein Maß, das ist nicht verbunden mit Depressionen beim Menschen aber ist die vorherrschende, zuverlässig und gut validierte Methode für die depressive Modell der Maus27. In der vorliegenden Studie eine allmähliche Dystrophie des Staates in der Modellgruppe Mantel wurde induziert und habe nicht vor, nach zwei Wochen Stress aber verschlechterte sich am Ende des Verfahrens CUMS (drei Wochen), während das Körpergewicht nicht signifikant zwischen den Gruppen nach eine Woche Stress ausgesetzt. Allerdings begann der Unterschied des Körpergewichts in den einzelnen Gruppen nach der Modellierung für zwei Wochen, was zu einer weiteren Abnahme bis zum Jahresende drei Wochen entstehen. Die Ergebnisse zeigen, dass diese Änderungen im physischen Zustand der CUMS-induzierte Mäuse durch Xiaoyaosan und Fluoxetin behandelt werden, darauf hindeutet, dass Xiaoyaosan physikalische Zustände des depressiv Mäuse verbessern könnte umgekehrt werden konnte.
Um weiter bestätigen das Modell CUMS und belegen die Wirkung der Substanz, die in diesem Protokoll verwendeten, waren eine Saccharose Präferenz und ein offenes Feldtest verwendet, um möglichen depressiven Verhaltensweisen in CUMS-induzierte Mäuse zu bewerten. Die Reduzierung der Anhedonie Saccharose bevorzugt auszuwertende depressiv-artigen Zustand bei Nagetieren, während der Freiland-Test als tierische psychologischen Test verwendet wurde, wird häufig verwendet, zur Bewertung der motorischen Funktion und Emotionalität der Nager28. Das Ergebnis zeigte, dass 3 Wochen Stress ausgesetzt einen offensichtlichen Einfluss auf die Saccharose-Präferenz der Mäuse hatte und die Anhedonie wurde durch die Xiaoyaosan und Fluoxetin Behandlungen umgekehrt. Freiland-Test dient häufig zur motorischen Funktion und Emotionalität im Labor Tiere29Bewertung. In dieser Studie wurde es zur depressive Verhaltensweisen zu analysieren. Die Freiland-Test ergab, dass die Gesamtstrecke zog durch die Mäuse in der Model-Gruppe deutlich niedriger als die der Kontrollgruppe war. Darüber hinaus wurde die Anzahl der Einträge in der zentralen Zone von der Model-Gruppe von Mäusen deutlich niedriger als bei der behandelten Gruppe von Mäusen, die vorschlugen, dass CUMS-induzierte Mäuse depressiv-ähnliche Verhaltensweisen angezeigt. Die Studie zeigte auch, dass Xiaoyaosan und Fluoxetin in der Freiland-Test vorgestellten Änderungen verbessern könnte.
Im Einvernehmen mit der ähnlichen Ergebnissen in früheren Studien diskutiert zeigte dieses Papier, dass CUMS eine Abnahme der Saccharose Verbrauch und Bewegungsorgane Aktivität verursacht. Die kontinuierliche Nutzung von Xiaoyaosan war wirksam zur Vorbeugung und Behandlung von CUMS-induzierte Depressionen bei Mäusen. Viele Studien haben Depressionen untersucht, eine erweiterte Verständnis von einem Tiermodell könnte der Schlüssel zur Klärung des Mechanismus der Depression30. In diesem Protokoll beschriebene CUMS-Methode kann effektiv die Depression von Mäusen Anzeigestatus. Im Gegensatz zu den milden Dauerstress (CMS) oder chronische Immobilisierung Stress (CIS) Methode31,32liegt der wesentliche Punkt CUMS in der Auswahl von unvorhersehbaren Stressoren und die rationelle Anwendung der Modellevaluierung. Um weiter die Methode und das Resultat gezeigt in diesem Protokoll zu bestätigen, sollte künftige Arbeit der Auswahl weitere Stressoren und Bewertungsmethoden für CUMS Methode und die Erkennung der längerfristigen Auswirkungen des Xiaoyaosan für 28-48 Tage CUMS enthalten.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Diese Forschung wurde unterstützt durch Zuschüsse aus dem National Natural Science Foundation of China (Nr. 81630104, Nr. 81473597) und die grundlegenden Forschungsmittel für die Central-Hochschulen (Nr. 2018-JYBZZ-XS005). Das Protokoll und die Ergebnisse zeigten in diesem Papier stammt aus dem Artikel Beteiligung der normalisiert Glial Fibrillary sauren Protein-Expression in die Hippocampi in Antidepressant-Like Effekte von Xiaoyaosan an chronisch betonte Mäusen von Dr.. Xiu-Fang Ding, Et al.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chinese Herbs | Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company | - | The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d. |
| Fluoxetine | PATHEON FRANCE | 5545A | The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d. |
| C57BL/6j mice | Beijing Vital River of the Charles River Company | SCXK 2011-0004 | 60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company. |
| Mouse cage | Styling Biotechnology | 34853016 | 318×202×135 mm |
| Distilled Water | - | - | The water was used througout the experiment. |
| Sucrose | Sigma | - | The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution. |
| ACS-2EAS Electronic Balance | Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd. | - | It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages. |
| Wooden Black Lusterless Box | - | - | (40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines. |
| WV-CP470 Camera | Panasonic, Japan | - | A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test. |
| Etho Vision 3.0 Software | Noldus, Wageningen, Holland | - | A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice. |
| SPSS Statistics 21.0 Software | IBM | - | SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups. |
| Graphpad Prism 6.0 Software | Graphpad Software,Inc.USA | - | Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs. |
References
- Chrousos, G. P., Gold, P. W. The concepts of stress and stress system disorders. Overview of physical and behavioral homeostasis. JAMA. 267 (9), 1244-1252 (1992).
- Yao, Y., Huang, H. Y., Yang, Y. X., Guo, J. Y. Cinnamic aldehyde treatment alleviates chronic unexpected stress-induced depressive-like behaviors via targeting cyclooxygenase-2 in mid-aged rats. Journal of Ethnopharmacology. 162, 97-103 (2015).
- Murray, C. J., Lopez, A. D. Global health statistics: a compendium of incidence prevalence and mortality estimates for over 200 conditions. World Health Organization Harvard School of Public Health World Bank. , ii (1996).
- Sackeim, H. A. The definition and meaning of treatment-resistant depression. Journal of Clinical Psychiatry. 62 (16), 10-17 (2001).
- Li, W., et al. The effect of compounds of soothing liver, invigorating spleen, tonifying kidney on the praxiology and immunological function of chronic immobilization stressed rats. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 11, 33-37 (2003).
- Meng, Z. Z., Chen, J. X., Jiang, Y. M., Zhang, H. T. Effect of Xiaoyaosan Decoction on Learning and Memory Deficit in Rats Induced by Chronic Immobilization Stress. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2013 (17), 297154 (2013).
- Zhao, H., Wan, X., Chen, J. X. A mini review of traditional Chinese medicine for the treatment of depression in China. American Journal of Chinese Medicine. 37 (02), 207-213 (2009).
- Gao, X., et al. Metabonomic study on chronic unpredictable mild stress and intervention effects of Xiaoyaosan in rats using gas chromatography coupled with mass spectrometry. Journal of Ethnopharmacology. 137 (1), 690-699 (2011).
- Li, P., et al. CNP signal pathway up-regulated in rectum of depressed rats and the interventional effect of Xiaoyaosan. World Journal of Gastroenterology. 21 (5), 1518 (2015).
- Li, X. J., et al. Xiaoyaosan exerts anxiolytic-like effects by down-regulating the TNF-α/JAK2-STAT3 pathway in the rat hippocampus. Scientific Reports. 7 (1), 353 (2017).
- Jun-Sheng, T., et al. Dynamic analysis of the endogenous metabolites in depressed patients treated with TCM formula Xiaoyaosan using urinary (1)H NMR-based metabolomics. Journal of Ethnopharmacology. 158, 1-10 (2014).
- Dai, Y., et al. Metabolomics study on the anti-depression effect of xiaoyaosan on rat model of chronic unpredictable mild stress. Journal of Ethnopharmacology. 128 (2), 482-489 (2010).
- Zhou, Y., et al. Antidepressant-like effects of the fractions of Xiaoyaosan on rat model of chronic unpredictable mild stress. Journal of Ethnopharmacology. 137 (1), 236-244 (2011).
- Wang, P. S., et al. The Costs and Benefits of Enhanced Depression Care to Employers. Archives of General Psychiatry. 63 (12), 1345-1353 (2006).
- Pirraglia, P. A., Rosen, A. B., Hermann, R. C., Olchanski, N. V., Neumann, P. Cost-utility analysis studies of depression management: a systematic review. American Journal of Psychiatry. 161 (12), 2155-2162 (2004).
- Wang, S. X., et al. Xiaoyaosan Decoction Regulates Changes in Neuropeptide Y and Leptin Receptor in the Rat Arcuate Nucleus after Chronic Immobilization Stress. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine. 2012 (4), 381278 (2012).
- Zhu, X., et al. Xiao Yao San Improves Depressive-Like Behavior in Rats through Modulation of β-Arrestin 2-Mediated Pathways in Hippocampus. Evidence-based Complementary and Alternative. 2014, (2014).
- Ding, X. F., et al. Involvement of Normalized Glial Fibrillary Acidic Protein Expression in the Hippocampi in Antidepressant-Like Effects of Xiaoyaosan on Chronically Stressed Mice. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2017, 1960584 (2017).
- Ding, X. F., et al. Involvement of the glutamate/glutamine cycle and glutamate transporter GLT-1 in antidepressant-like effects of Xiao Yao san on chronically stressed mice. BMC Complementary & Alternative Medicine. 17 (1), 326 (2017).
- Murua, V. S., Gomez, R. A., Andrea, M. E., Molina, V. A. Shuttle-box deficits induced by chronic variable stress: reversal by imipramine administration. Pharmacol Biochem Behav. 38 (1), 125 (1991).
- Duan, J. J., et al. Pharmacokinetics of 5-fluorouracil and cyclophosphamide in depression rats. European Review for Medical & Pharmacological Sciences. 16 (4), 427-436 (2012).
- Cao, X., et al. Astrocyte-derived ATP modulates depressive-like behaviors. Science Foundation in China. 19 (1), 56 (2013).
- Kirshenbaum, G. S., et al. Decreased neuronal Na+, K+ -ATPase activity in Atp1a3 heterozygous mice increases susceptibility to depression-like endophenotypes by chronic variable stress. Genes Brain & Behavior. 10 (5), 542-550 (2011).
- Liu, X. J., et al. Urinary metabonomic study using a CUMS rat model of depression. Magnetic Resonance in Chemistry. 50 (3), 187-192 (2012).
- Zhu, S., et al. Unpredictable chronic mild stress induces anxiety and depression-like behaviors and inactivates AMP-activated protein kinase in mice. Brain Research. 1576, (2014).
- Yang, C., Wang, G., Wang, H., Liu, Z., Wang, X. Cytoskeletal alterations in rat hippocampus following chronic unpredictable mild stress and re-exposure to acute and chronic unpredictable mild stress. Behavioural Brain Research. 205 (2), 518-524 (2009).
- Ding, X. F., et al. Xiao Yao San Improves Depressive-Like Behaviors in Rats with Chronic Immobilization Stress through Modulation of Locus Coeruleus-Norepinephrine System. Evidence-Based Complementary and Alternative. , 605914 (2014).
- Wu, L. L., et al. Antidepressant-Like Effects of Fractions Prepared from Danzhi-Xiaoyao-San Decoction in Rats with Chronic Unpredictable Mild Stress: Effects on Hypothalamic-Pituitary-Adrenal Axis, Arginine Vasopressin, and Neurotransmitters. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016 (3), 1-11 (2016).
- Stanford, S. C. The Open Field Test: reinventing the wheel. Journal of Psychopharmacology. 21 (2), 134 (2007).
- Zeldetz, V., et al. A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats. Journal of Visualized Experiments. (132), e57137 (2018).
- Willner, P. Chronic mild stress (CMS) revisited: consistency and behavioural-neurobiological concordance in the effects of CMS. Neuropsychobiology. 52 (2), 90-110 (2005).
- Wood, G. E., Norris, E. H., Waters, E., Stoldt, J. T., Mcewen, B. S. Chronic immobilization stress alters aspects of emotionality and associative learning in the rat. Behavioral Neuroscience. 122 (2), 282-292 (2008).
