Summary
Denne protokol beskriver en musemodel af salmonella drevet tarm fibrose, der ligner de vigtigste patologiske kendetegn af Crohns sygdom, herunder transmural inflammation og fibrose. Denne metode kan bruges til at evaluere værts faktorer, der ændrer fibrotiske udfald ved hjælp af muterede mus, som vedligeholdes på en C57Bl/6 genetisk baggrund.
Abstract
Vævs fibrose karakteriseret ved den patologiske ophobning af ekstracellulære matrix såsom kollagen er resultatet af vedvarende inflammation og dysreguleret reparation. I inflammatorisk tarmsygdom (IBD), fibrose fører til recidiverende striktur formationer, som der ikke er nogen effektiv behandling andre end kirurgisk resektion. På grund af sin sene debut, de processer, der drev fibrose er mindre undersøgt og stort set ukendt. Derfor udgør fibrotiske komplikationer en stor udfordring i IBD. I denne protokol beskrives en robust in vivo-model af intestinal fibrose, hvor streptomycin forbehandling af C57Bl/6-mus efterfulgt af oral sonde med vaccine kvalitet salmonella typhimurium ΔAroA mutant fører til vedvarende patogen kolonisering og fibrose af cecum. Metoder til udarbejdelse af S. Typhimurium ΔAroA for inokulation, kvantificere patogenet belastninger i cecum og milt, og evaluere kollagen deposition i tarm væv forklares. Denne eksperimentelle sygdomsmodel er nyttig til at undersøge værts faktorer, der enten forbedrer eller forværrer CD-lignende tarm fibrose.
Introduction
Ulcerativ colitis (UC) og Crohns sygdom (CD) er de to vigtigste former for IBD og er karakteriseret som kroniske og recidiverende inflammatoriske lidelser i mave-tarmkanalen 1,2. Disse lidelser har stor indflydelse på patienternes livskvalitet. Symptomerne på IBD omfatter abdominalsmerter, diarré, kvalme, vægttab, feber, og træthed3. Nylige undersøgelser har identificeret genetiske og miljømæssige faktorer, der bidrager til sygdoms patogenese; Det menes, at sådanne risikofaktorer bidrager til forstyrrelsen af epitelial barrieren, hvilket resulterer i translokation eller oversampling af luminale antigener4. Som en konsekvens, dette indleder en afvigende inflammatorisk reaktion på den kommensal flora medieret af tarm immunceller4. Funktioner af IBD-associerede komplikationer kan strække sig til steder ud over mave-tarmkanalen påvirker forskellige organer, herunder leddene, hud, og leveren1,2. Kendetegn for UC omfatter svær og diffus inflammation typisk lokaliseret i tyktarmen1. Sygdoms patologi påvirker slimhinden og submucosa i tarmen, hvilket resulterer i overfladiske slimhinde ulcerationer1. I modsætning, CD kan påvirke nogen del af mave-tarmkanalen selvom tegn på sygdom er almindeligt forekommende i tyktarmen og distale ileum2. Desuden er betændelse i CD transmural, påvirker alle lag af tarmvæggen2.
Adskillige IBD-følsomheds gener, der er blevet identificeret, indikerer, at dysregulering af epitelial barrieren eller immuniteten er kritiske bidragydere til sygdomsprogression5. Mutationer i nucleotidoligomerisering domæne 2 (NOD2) udtrykt ved monocytter blev fundet at være forbundet med øget følsomhed over for CD; Dette fremhæver en sammenhæng mellem ændret medfødte immun påvisning af bakterie komponenter og sygdommen6. Nyere Genome-dækkende Associations studier (GWAS) har afsløret yderligere veje, som potentielt er involveret i IBD'S patogenese, herunder genetiske variationer i: STAT1, NKX2-3, IL2RA, IL23R afhængige veje knyttet til adaptive immunitet, MUC1, MUC19, og PTGER4 i intestinal barriere vedligeholdelse, og ATG16L-medieret autophagy7,8,9. Mens disse populations-baserede genetik undersøgelser har forbedret vores forståelse af IBD, modtagelighed alleler alene er sandsynligvis utilstrækkelige i initiering og opretholdelse af kronisk sygdom3. Andre ikke-genetiske faktorer, herunder ændringer i tarm mikrobiom sammensætning og en reduktion i mangfoldighed har været forbundet med tarmbetændelse. Det er imidlertid uklart, om Gut dysbiosis går forud for eller er konsekvensen af dysregulerede immunrespons3. Selvom etiologien af IBD fortsat er uklar, vores forståelse af patogenesen af sygdommen er blevet forstærket af eksperimentelle musemodeller af tarmbetændelse10,11. Disse modeller individuelt repræsenterer ikke fuldt ud kompleksiteten af den menneskelige sygdom, men de er værdifulde for belyse patofysiologiske veje, der kunne være relevante for IBD og for validering af foreløbig terapeutiske strategier10, 11. Sådanne musemodeller er typisk afhængige af indledning af betændelse ved kemisk induktion eller infektion, immuncelle overførsel eller genetisk manipulation. Desuden omfatter disse strategier ofte forstyrrelser i epitelial integritet eller graduering af medfødte eller adaptive immunitet.
Salmonella enterica d er intestinale patogener, der kan inficere mennesker og mus. Efter indtagelse kan salmonella kolonisere tarmen ved direkte invasion af epithelia, M-celler eller antigen, som præsenterer cellerne12. Mus inficeret oralt med S. Typhimurium resulterer i koloniseringen primært af systemiske steder som milten og mesenteriske lymfeknuder med relativt lav overflod i mave-tarmkanalen12. Men, forbehandling af mus med streptomycin øger effektiviteten af salmonella kolonisering af tarmen ved at mindske værten beskyttende virkninger af den normale mikrobiota13. Patologiske funktioner i denne model omfatter afbrydelse eller ulceration af epitelial barriere, granulocyt rekruttering, og svær ødem13. Alternativt, infektion med vaccine grade S. Typhimurium ΔAroA mutant fører til kronisk kolonisering af cecum og kolon, der fortsætter op til dag 40 efter infektion14. The S. Typhimurium ΔAroA stamme har en defekt i biosyntesen af aromatiske aminosyrer; Dette gør den mutante stamme avirulent og kan udnyttes som en meget effektiv vaccine15. Oral infektion i mus fører til en Th1-og Th17-cytokin associeret inflammatorisk respons, omfattende væv Remodeling, og kollagen deposition. Vævs patologi er forbundet med forhøjede niveauer af Pro-fibrotisk faktor som TGF-β1, CTGF, og IGF14. Transmural fibrotisk ardannelse rapporteret i denne model minder om striktur formationer ofte observeret i IBD. Induktion af fibrose ved salmonella kræver virulens, som er kodet af salmonella patogenicitetsøer (SPI)-1 og 2 12. Vigtigere, dette S. Tymphimurium ΔAroA infektion model er et nyttigt system til undersøgelse af fibrotiske reaktioner i mutant mus vedligeholdt på en C57/Bl6 baggrund. Den C57/Bl6 stamme er ekstremt følsom over for S. Typhiumurim SL1344 infektion på grund af en tab-af-funktion mutation i genet kodning den naturlige resistens-associeret makrofag protein (nramp)-116,17. Vi har konstateret, at IL-17A og RORα-afhængige medfødte lymfoide celler er vigtige bidragydere til patogenesen i denne model18.
En stor komplikation af CD er den dysregulerede og overdreven aflejring af ekstracellulære matrix (ECM) herunder kollagen2,19. Selv om mave-tarmkanalen har en relativ høj kapacitet til regenerering, kan fibrotisk ardannelse opstå på grund af uløste sårheling svar, der er forbundet med kronisk og svær inflammation20,21. I cd, dette resulterer i skadelige virkninger på væv arkitektur fører til signifikant organ svækkelse21,22. Den transmural karakter af inflammation observeret i CD i sidste ende går forud for fortykkelse af tarmvæggen forbundet med symptomatisk stenose eller striktur dannelse21. Omkring en tredjedel af CD-patienter kræver tarm resektion for denne komplikation22. Der er ingen effektive anti-fibrotiske behandlinger i IBD, da brugen af immunsuppressiva såsom azathioprin eller anti-tnfα biologiske lægemidler ikke har nogen indvirkning eller kun beskedent reducerede kravet om kirurgiske indgreb19,23 . Mens fibrose menes at være konsekvensen af kronisk inflammation, celler af mesenchymal oprindelse såsom fibroblaster og pericytes menes at være de primære cellulære kilder til ECM i fibrotisk ardannelse21,24. Kroniske S. Typhimurium ΔAroA infektion er en robust musemodel af tarm fibrose, der kan tilbyde indsigt i patogenesen af CD-lignende funktioner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyre protokoller blev godkendt af dyresundheds komiteen på University of British Columbia.
1. forberedelse af salmonella typhimurium ΔAroA kulturer for oral sonde af mus
- Fra en frosset glycerol bestand af S. Typhimurium ΔAroA, Forbered en stribe plade ved hjælp af LB agar indeholdende 100 μg/mL streptomycin med en steril inokulerende løkke. Inkuber natten over ved 37 °C. Stribe pladerne kan opbevares i op til en uge ved 4 °C.
- En dag før infektion forberedes antibiotika ved at opløse 0,5 g streptomycin i 2,5 mL vand. Efter filter sterilisering streptomycin opløsning, oralt sonde musene ved hjælp af en pære-tippet 22g sonde nål og 1 ml sprøjte med 100 μl streptomycin opløsning (20 mg streptomycin/dosis). Ved hjælp af en inokulerende løkke, podes 3 ml af lb bouillon (50 μg/ml streptomycin) i en kultur tube med en enkelt koloni. Incubate salmonella kultur aerobisk ved 37 °C natten over med omrystning ved 200 RPM.
- På infektions dagen forberedes den endelige infektionsdosis ved at udføre 2 på hinanden følgende 1/10 fortyndinger af salmonella kulturer fra dag til dag i steril PBS. Dette ville resultere i en 100 μl inokulum indeholdende ca. 3 x 106 CFU.
- Ved hjælp af en pære tippet 22g sonde nål og en 1 ml sprøjte, sonde hver mus med 100 μl af den tilberedte salmonella.
Bemærk: Forbered salmonella kulturer ved hjælp af aseptiske teknikker. Endelig inokulationskoncentration af salmonella kan verificeres ved belægning af serielle fortyndinger på LB agar med streptomycin. Den S. typhimurium ΔAroA stamme kan opnås ved at kontakte professor McNagny (kelly@brc.ubc.ca).
2. vurdering af salmonella byrden i væv
- Forbered 2 mL sikker lås, runde bund mikrorør med 1 mL steril PBS og en autoklave rustfri stål perle. Forvejning af rørene før vævs samlingen.
- Resect cecal og splenisk væv fra mus aflives ved kuldioxid eksponering. Saml væv fra enkelte dyr i separate rør. Afvejes rørene for at bestemme vævs vægten.
- Homogeniser ved hjælp af en mixer Mill apparat til 15 min ved 30 Hz. Overfør 900 μL PBS pr. brønd i en 96-brønd på 2 mL megablock. Pipetten 100 μL væv homogeniseres i den første brønd, bland godt, og Udfør serielle fortyndinger ved at tilsætte 100 μL til efterfølgende brønde, indtil der opnås en 10-6 fortynding. Plade 10 μL af hver fortynding i triplicater på LB-agar, der indeholder 100 μg/mL streptomcyin.
- Tæl og Multiplicer gennemsnitlig CFU med en faktor på 100, da 10 μL af prøven på 1000 μL blev belagt, og den relevante fortyndingsfaktor. Dividere vævs vægten total CFU med vævs vægte for at bestemme CFU pr. gram væv.
Bemærk: Opbevar alle prøver på is eller ved 4 °C under vævs behandling. Brug pipettespidser med bred åbning, når du udfører serielle fortyndinger med vævs homogenater. Forbered 96-Well megablock indeholdende PBS på forhånd.
3. picrosirius rød farvning og kvantificering af kollagen.
- Fix cecal væv natten over i 10% Buffered formalin og forberede sig til paraffin indlejring. Skær 5-μm sektioner for Picrosirius rød farvning som beskrevet tidligere25.
- Optag sammensatte billeder af hele cecal tværsnit på et lysfelt-mikroskop.
- Åbn Fiji (ImageJ), og træk og slip. tif-billedfilen på værktøjslinjen.
- På menulinjen skal du vælge billed ≫ Type > RGB-stak for at opdele billedet i røde, grønne og blå kanaler. Skub den vandrette bjælke nederst i panelet for at indstille kanalen til grøn.
- Åbn billede ≫ juster ≫ tærskel værktøj. Juster minimum-og maksimumgrænser for at eliminere baggrunds signaler. Når den ønskede tærskel er indstillet, skal du lukke tærskel værktøjet og gå til Analysér ≫ indstillede mål. Afkryde område, område fraktion, grænse til tærskelog display label.
- Gate afsnittet væv med enten frihånds valg eller polygon valg værktøj og måle% område positivt for kollagen ved at klikke analysere > måle.
- Normalisere det absolutte område positivt for kollagen farvning til vævs området.
Bemærk: Fiji (ImageJ) er et open source-program, der kan downloades på https://fiji.sc. Billeder med samme optagelsesbetingelser (dvs. lysstyrke og fokus) skal have identiske tærskelværdier for nøjagtig kvantificering. Hvis der er nogen baggrunds farvning inden for det valgte væv, måle det absolutte område og trække det fra området positivt for kollagen fra hele vævet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Behandling med streptomycin efterfulgt af oral infektion med S. Typhimurium ΔAroA fører til robust tarmbetændelse og fibrose især i cecum (figur 1). Typiske patogen byrder på 108 til 109 CFU pr. 1 g cecum og 104 CFU pr. 1 g milt kan inddrives fra inficerede dyr (figur 2). Vurdering af fibrose i picrosirius rødfarvede cecal sektioner indikerer peak fibrose 21 dage efter infektion, mens en stor del af patologien er løst ved dag 42 PI (figur 3 og figur 4). Kollagen deposition er mest udtalt i submucosa af tarmen, mens fibrose i slimhinden er mildere.
Figur 1. Diagram over cecal sektionering for histologi, vurdering af salmonella byrde og cytokinkvantificering.
Segment 1, der repræsenterer cecal-spidsen, kan anvendes til analyse af genekspression, mens segment 2 vil blive fastsat i 10% Buffered formalin for histologi, og segment 3 vil blive homogeniseret for bakteriel optælling.
Figur 2. Patogenet i CECA og spleens.
Salmonella CFU pr. vægt af vævet i løbet af infektionen. Dette tal er blevet ændret fra Lo et al.26. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Picrosirius røde farvede tværsnit af tarm vævet.
Lyse feltbilleder af CECA fra ikke-inficerede dyr og dyr 21 og 42 dage efter S. Typhimurium ΔAroA infektion. Skala bjælke, 200 μm. Dette tal er blevet ændret fra Lo et al.26.
Figur 4. Kvantificering af kollagen deposition ved morphometriske analyser.
(A) PSR + farvning normaliseret til vævs arealet. Betydning bestemt af en-vejs ANOVA Krutil-Wallis-test med Dunns post test. * *, S < 0,01, N.S., s > 0,05. Dette tal er blevet ændret fra Lo et al.26. B) eksempel på kvantitativ bestemmelse af kollagen i cecal-vævet ved hjælp af Fiji. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vores forståelse af patogenesen af IBD er blevet stærkt forstærket af musemodeller af tarmbetændelse. Selv om sådanne individuelle modeller ikke rekapitulerer alle funktioner i den komplekse og multifaktorielle menneskelige sygdom, de har været nyttige i at identificere centrale elementer i sygdomsprogression. Fibrotiske strikturer forbundet med IBD er fortsat et stort uopfyldt klinisk behov, da aktuelle behandlinger er ineffektive til at vende sygdomsudvikling. Desuden er intestinal fibrose svært at studere i et laboratorium indstilling på grund af begrænsninger i nuværende dyremodeller. Kronisk udsættelse for tnb'er i Balb/c mus har vist sig at fremkalde robust kollagen deposition i tyktarmen, der drives af Il-13 og TGF-B1 signalering27,28. Men, tarm fibrose er ikke almindeligt observeret i andre rutinemæssigt anvendte laboratorie modeller af colitis såsom DSS behandling, IL-10-mangel, eller adoptivforældre T celle overførsel modeller. Grassl et al. påvist, at kronisk gastrointestinal infektion af C57Bl6 med den svækkede δaroa mutant salmonella stamme resulterer i robust fibrose i slimhinden og submucosavævet regioner i cecum12. De rapporterede, at peak fibrose opstod tre uger efter infektion og var forbundet med Th1 og Th17 immunitet og forhøjede Pro-fibrotiske faktorer TGF-B1, CTGF, og IGF-112. Denne patologi minder om CD, da den svære inflammation og fibrose er transmural. Mens IBD er typisk progressiv, en vigtig begrænsning af den kroniske salmonella infektion model er den forbigående karakter af fibrotisk immunopathology. I C57Bl/6 mus, tarmsygdom er typisk løses ved uge seks efter infektion. På trods af denne mangel, de sidste stadier af denne infektion model kan udnyttes til at identificere faktorer eller processer, der er involveret i at fremme sygdoms remission26.
Selv om bakterielle patogen-drevne modeller af colitis er godt undersøgt, er der ingen sammenslutning mellem salmonella og CD. Det er imidlertid blevet foreslået, at omfanget af fibrotisk sygdom i de sidste stadier af kronisk salmonella kolonisering ikke direkte korrelerer med patogeners byrder, hvilket tyder på, at patologien er "selv formerings", når svær tarm inflammation initieres af salmonella29. I modsætning hertil har den overtrædende-invasive Escherichia coli (AIEC) patogenvar været stærkt forbundet med udviklingen af CD på grund af sin høje forekomst i ileal slimhinde af patienter30. Desuden fører vedvarende AIEC-kolonisering (op til 9 uger) af ileum, cecum og kolon af flere muse stammer, herunder C57Bl/6, til robust matrix akkumulering i tarmen via flagellin-ekspression, hvilket demonstrerer det fibrogeniske induktions potentiale i denne patogenbiont31af32. Den seneste udvikling af infektions drevne modeller af tarm fibrose har givet robuste eksperimentelle modeller af IBD. Disse har givet nye systemer til at dissekere forholdet mellem enteriske bakterielle arter, herunder deres virulensfaktorer, og Host modtagelighed faktorer, der kan forbedre vores forståelse af IBD-associeret fibrose.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen finansielle interessekonflikter at afsløre.
Acknowledgments
Vi takker Ingrid Barta for histologi tjenester.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 ml round bottom safe lock tubes | Eppendorf | 22363344 | |
| Stainless steel beads | Qiagen | 69989 | |
| PBS | Gibco | 10010031 | |
| Large-Orifice Pipet Tips | Fisher | 2707134 | |
| 2 mL megablock plates | Sarstedt | 82.1972.002 | |
| Gavage needles | FST | 18061-22 | |
| Streptomycin sulfate | Sigma | S9137 | |
| Mixer mill | Retsch | MM |
References
- Danese, S., Fiocchi, C.
- Baumgart, D. C., Sandborn, W. J.
- Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J. Advances in inflammatory bowel disease pathogenesis: linking host genetics and the microbiome. Gut. 62 (10), 1505-1510 (2013).
- Xavier, R. J., Podolsky, D. K. Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature. 448 (7152), 427-434 (2007).
- Cho, J. H. The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature Reviews Immunology. 8 (6), 458-466 (2008).
- Ogura, Y., et al. A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn's disease. Nature. 411 (6837), 603-606 (2001).
- Jostins, L., et al. Host-microbe interactions have shaped the genetic architecture of inflammatory bowel disease. Nature. 491 (7422), 119-124 (2012).
- Rivas, M. A., et al. Deep resequencing of GWAS loci identifies independent rare variants associated with inflammatory bowel disease. Nature Genetics. 43 (11), 1066-1073 (2011).
- Rioux, J. D., et al. Genome-wide association study identifies new susceptibility loci for Crohn disease and implicates autophagy in disease pathogenesis. Nature Genetics. 39 (5), 596-604 (2007).
- Uhlig, H. H., Powrie, F. Mouse models of intestinal inflammation as tools to understand the pathogenesis of inflammatory bowel disease. European Journal of Immunology. 39 (8), 2021-2026 (2009).
- Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models. Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).
- Grassl, G. A., Finlay, B. B.
- Barthel, M., et al. Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host. Infection and Immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).
- Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K., Vallance, B. A., Finlay, B. B. Chronic Enteric Salmonella Infection in Mice Leads to Severe and Persistent Intestinal Fibrosis. Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).
- Hoiseth, S. K., Stocker, B. A. Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are non-virulent and effective as live vaccines. Nature. 291 (5812), 238-239 (1981).
- Valdez, Y., Ferreira, R. B., Finlay, B. B. Molecular mechanisms of Salmonella virulence and host resistance. Current Topics in Microbiology and Immunology. 337, 93-127 (2009).
- Valdez, Y., et al. Nramp1 drives an accelerated inflammatory response during Salmonella-induced colitis in mice. Cellular Microbiology. 11 (2), 351-362 (2009).
- Lo, B. C., et al. The orphan nuclear receptor RORalpha and group 3 innate lymphoid cells drive fibrosis in a mouse model of Crohn's disease. Science Immunology. 1 (3), eaaf8864 (2016).
- Burke, J. P., et al.
- Hogan, B. L., et al. Repair and regeneration of the respiratory system: complexity, plasticity, and mechanisms of lung stem cell function. Cell Stem Cell. 15 (2), 123-138 (2014).
- Fiocchi, C., Lund, P. K. Themes in fibrosis and gastrointestinal inflammation. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (5), G677-G683 (2011).
- Rieder, F., Fiocchi, C. Intestinal fibrosis in IBD—a dynamic, multifactorial process. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 6 (4), 228-235 (2009).
- Bouguen, G., Peyrin-Biroulet, L. Surgery for adult Crohn's disease: what is the actual risk? Gut. 60 (9), 1178-1181 (2011).
- Wynn, T. A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis. The Journal of Pathology. 214 (2), 199-210 (2008).
- Junqueira, L. C., Bignolas, G., Brentani, R. R. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).
- Lo, B. C., et al. IL-22 Preserves Gut Epithelial Integrity and Promotes Disease Remission during Chronic Salmonella Infection. Journal of Immunology. 202 (3), 956-965 (2019).
- Fichtner-Feigl, S., et al. Induction of IL-13 triggers TGF-beta1-dependent tissue fibrosis in chronic 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid colitis. Journal of Immunology. 178 (9), 5859-5870 (2007).
- Fichtner-Feigl, S., et al. IL-13 signaling via IL-13R alpha2 induces major downstream fibrogenic factors mediating fibrosis in chronic TNBS colitis. Gastroenterology. 135 (6), e2001-e2007 (2013).
- Johnson, L. A., et al. Intestinal fibrosis is reduced by early elimination of inflammation in a mouse model of IBD: impact of a "Top-Down" approach to intestinal fibrosis in mice. Inflammatory Bowel Diseases. 18 (3), 460-471 (2012).
- Darfeuille-Michaud, A., et al. High prevalence of adherent-invasive Escherichia coli associated with ileal mucosa in Crohn's disease. Gastroenterology. 127 (2), 412-421 (2004).
- Small, C. L., Reid-Yu, S. A., McPhee, J. B., Coombes, B. K. Persistent infection with Crohn's disease-associated adherent-invasive Escherichia coli leads to chronic inflammation and intestinal fibrosis. Nature Communications. 4, 1957 (2013).
- Imai, J., et al. Flagellin-mediated activation of IL-33-ST2 signaling by a pathobiont promotes intestinal fibrosis. Mucosal Immunology. , (2019).
