Summary
ここで説明するプロトコルは、スパイク糖タンパク質に擬似的に結合した強化された緑色蛍光タンパク質標識付き小胞性口内炎ウイルスによる感染を阻害する回復血清サンプルの能力を評価することによって、SARS-CoV-2スパイクタンパク質に対する中和抗体を測定するための迅速かつ効果的な方法を概説する。
Abstract
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2(SARS-CoV-2)によって引き起こされるCOVID-19パンデミックが進化し続ける中、ウイルスに対する中和抗体の存在が将来の感染に対する保護を提供することが明らかになりました。したがって、有効なCOVID-19ワクチンの作成と翻訳が前例のないスピードで続く中、SARS-CoV-2に対する中和抗体を測定するための迅速かつ効果的な方法の開発は、以前に感染した個人と予防接種を受けた個人の両方に対する感染に対する長期的な保護を決定するためにますます重要になります。本論文では、最近COVID-19から回復した患者から回復血清中中和抗体の存在を測定するために、SARS-CoV-2スパイクタンパク質を擬似型にしたウイルス性口内炎ウイルス(VSV)を用いた高スループットプロトコルについて説明する。複製擬型ウイルスを使用すると、SARS-CoV-2 処理に必要な封じ込めレベル 3 の機能が不要になり、このプロトコルは事実上すべてのコンテインメント レベル 2 ラボにアクセスできます。96 ウェル形式を使用すると、短いターンアラウンドタイム 24 時間で多くのサンプルを同時に実行できます。
Introduction
2019年12月、コロナウイルスの新しいコロナウイルスが同定され、コロナウイルス病2019(COVID-19)1の原因物質であるSARS-CoV-2と知られています。SARS-CoV-2はコロナビリダ科に属するベタコロナウイルスである。これらのエンベロープウイルスは、大きな陽性感覚RNAゲノムを含み、ヒトおよび動物両方における呼吸器および腸感染症の原因である2。2021年5月時点で、世界中で1億5,700万人以上のCOVID-19の症例が報告されており、320万人以上が死亡しています。効果的なワクチンの開発は、少なくとも77の前臨床ワクチンを調査中で、90は現在臨床試験を受けている世界中の研究者の主要な目標となっています4.
コロナウイルスは、スパイクタンパク質(S)、ヌクレオキャプシド(N)、エンベロープタンパク質(E)、膜タンパク質(M)を含む4つの構造タンパク質をコードする。SARS-CoV-2の侵入には、Sの受容体結合ドメイン(RBD)と宿主受容体、ヒトアンジオテンシン変換酵素2(hACE2)、および宿主細胞セリンプロテアーゼによるタンパク質分解性切断後の膜融合、トランス膜プロテアーゼセリン2(TMPRSS2)5、6、7、8、9、100との相互作用が必要です。.SARS-CoVのSタンパク質の液性免疫優位性は、以前に報告されており、SARS-CoV-211、12、13についても示されています。実際、Sに対する中和抗体応答は、感染24ヶ月後のSARS-CoV患者から回復血清中に検出されており、長期的な免疫応答におけるそれらの重要な役割を強調している。Sタンパク質は有望なワクチン標的として同定されており、開発中のほとんどのワクチンの重要な成分となっています15,16.
中和抗体の迅速な検出はワクチン開発の重要な側面であるが、影響を受けた領域における感染率および血清疫学的サーベイランスの速度に光を当てる可能性もある17。SARS-CoV-2 S糖タンパク質を擬似型の複製能力VSVは、野生型VSV糖タンパク質の代わりに、バイオセーフティレベル2の設定でSARS-CoV-2感染を研究するために、Whelanと同僚18によって親切に寄贈された。VSV発現スパイク(VSV-S)は、SARS-CoV-2スパイクタンパク質に対する中和抗体応答を決定するために利用される。ここで使用されるVSV-Sは増強された緑色蛍光タンパク質(eGFP)を発現するので、eGFP病巣は感染を定量化するために24時間以内に検出され、プラーク形成には48〜72時間かかることがあります。ここに要約すると、VSV-S-eGFP感染を中和する回復期の患者血清の能力を決定するための簡単で効果的なプロトコルがあります。この方法はまた、SARS-CoV-2 Sタンパク質の宿主とウイルスの相互作用を妨害することを目的とする他の潜在的な治療を尋問するために容易に適応され得る。
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Protocol
1. SARS-CoV-2擬似ウイルスの製造および定量のためのめっき細胞(1日目)
- 組織培養の準備
- 暖かい1xダルベッコのリン酸緩衝生理食塩(DPBS);10%胎児ウシ血清(FBS)と1%ペニシリン/ストレプトマイシン(オプション)を含むDulbeccoの改変イーグル培地(DMEM)。約15分間水浴中に0.25%トリプシンエチレン酢酸(EDTA)から37°Cまで。
- 70%エタノールで組織培養フードを消毒し、必要に応じて組織培養フードに組織培養皿、パスツールピペット、血清ピペットを配置します。水浴からPBS、DMEM、トリプシンを取り除き、組織培養フードに入れる前に70%エタノールで消毒します。
- めっきと細胞の維持
- DMEMでVero E6細胞を成長させる(10%FBSを含む)T75組織培養フラスコまたは15cmの組織培養皿で5%CO2を有する37°Cインキュベーターで培養する。細胞が80-90%コンフルエントである場合、必要に応じて細胞を通過させる。
- 各皿に1x PBSの10 mLを加え、4-5回穏やかに揺らすことによって細胞を洗います。PBSを吸引する。各皿に3mLのトリプシン-EDTAを加え、プレートを揺らし、表面全体が覆われていることを確認します。37°Cで5%CO2で約5分間、または細胞が剥離するまで培養します。
- 7 mLのDMEM(10%FBSを含む)を加えてトリプシンを非アクティブ化し、何度か上下にピペットを入れて細胞を再中断します。500×gのベンチトップ遠心分離機を用いてトリプシンを5分間回転させ、細胞ペレットを邪魔することなく培地を吸引し、10mLのDMEM(10%FBSを含む)で細胞を再懸濁させた。細胞が将来の実験に必要な場合は、15 mLの新鮮なDMEM(10%FBSを含む)を含む新しい皿に1 mLを入れます。
- 自動細胞カウンターまたはヘモサイトメーターを使用して細胞を数え、15cmプレートごとに約1×107細胞を加え、5%CO2で37°Cで100%コンフルエント(1-2日)までインキュベートします。
2. VSV-S-EGFP 擬ウイルス製剤
- 感染症
- 感染の多重度(MOI)0.01でVSV-S-eGFPストックウイルスを5%CO2で37°Cで1時間37°Cで12 mLでVSV-S-eGFPストックウイルスに感染させ、時折プレートを揺らす。イノキュラムを新鮮なDMEM(2%FBSと20 mM HEPES、pH 7.7を含む)で置き換え、5%CO2で34°Cに設定されたインキュベーターに移動します。
注意:細胞培養におけるVSV-S-eGFPの伝播には34°Cの温度が必要です。 - 広範な細胞変性効果(CPE)と細胞剥離の観察時に細胞上清を収集し、約48時間の感染後に。蛍光顕微鏡を使用して、感染後24時間から始まる感染細胞によるeGFPの広範な発現を可視化する。
- 感染の多重度(MOI)0.01でVSV-S-eGFPストックウイルスを5%CO2で37°Cで1時間37°Cで12 mLでVSV-S-eGFPストックウイルスに感染させ、時折プレートを揺らす。イノキュラムを新鮮なDMEM(2%FBSと20 mM HEPES、pH 7.7を含む)で置き換え、5%CO2で34°Cに設定されたインキュベーターに移動します。
- 徴収
- 4°Cで1,000×gでベンチトップ遠心分離機を5分間使用して上澄み物を遠心分離し、細胞の破片を除去します。上清をアリコートして複数の凍結融解サイクルを回避し、-80°Cで保存する。
3. VSV-S-eGFP 擬似ウイルスのタテリング
- ウイルス価を決定するシリアル希釈
- 6ウェルプレート上のプレートベロE6細胞は、DMEM(10%FBS)で1ウェルあたり6×105細胞の播種密度で、5%CO2で37°Cで一晩インキュベートする。
注: TMPRSS2 および hACE2 を過剰発現するベロセルも使用できます。 - 7マイクロ遠心チューブに900 μLの培地を入れることにより、VSV-S-eGFPウイルスの10倍シリアル希釈シリーズを冷たい無血清DMEMにセットする。ラベルチューブは1から7まで。ウイルスストックの100 μLを最初のチューブと渦に簡単に加えます。チューブ1からチューブ2および渦に100μLの希釈ウイルスを簡単に移す;チューブ7まで続けます。
- ベロE6細胞を含む6ウェルプレートの全ウェルから培地を吸引し、500μLの希釈液10-2〜10-7に置き換える。5%CO2で37°Cで45分間プレートをインキュベートし、15分ごとにそっと揺らします。
- 吸入し、2x DMEMと6%カルボキシメチルセルロース(CMC)の1:1混合物を含むオーバーレイに置き換え、3%CMCの最終濃度は、10%FBSを補った;34°Cでインキュベートし、5%のCO2 を48時間行います。
注:感染工程中に15分間、37°Cの水浴でオーバーレイ混合物を事前に温めます。10%FBSを補う2x DMEMと1%アガロースの1:1混合物は、CMCの代わりに使用することができる。アガロースで重ね合わせるには、1%アガロース(dH2O)を沸騰させ、冷たい2倍のDMEMと混ぜます。混合物は、セル単層(約37〜40°C)に添加する前に適切な温度であることを確認してください。アガロースをオーバーレイに使用する場合、細胞は染色前に少なくとも1時間、3:1メタノール:酢酸の2 mLでインキュベートすることによって固定されなければならない。
- 6ウェルプレート上のプレートベロE6細胞は、DMEM(10%FBS)で1ウェルあたり6×105細胞の播種密度で、5%CO2で37°Cで一晩インキュベートする。
- ウイルス性タイターの染色と計算
- 蛍光顕微鏡下でeGFPの結晶バイオレットまたは直接可視化で染色することにより、プラークを可視化します。
- プレートを汚す場合は、オーバーレイを吸引し、PBSで1回洗浄し、2 mLの0.1%結晶バイオレット(メタノールとdH2O)を各ウェルに加えます。脱染色する前に、室温で約20分間プレートロッカーに置きます。クリスタルバイオレットを取り出し、dH2 OまたはPBSを使用して各ウェルを2回軽く洗います。
注:洗浄と染色のステップは、手順全体を通して細胞単層がそのまま残るように、各ウェルの側面に向かってゆっくりとピペットすることによって穏やかに行われるべきです。 - プレートを数える前に、プレートを少なくとも1時間乾燥させます。プラーク数が20〜200プラークを含む井戸から得られるようにしてください。mL当たりのプラーク形成単位(PFU)でウイルスの価価率を算出するには、感染量とカウントされるウェルの希釈係数を乗算し、この数をそれぞれのウェルに存在するプラークから割る。
4. 市販の抗体および回復期の患者血清によるSARS-CoV-2擬似ウイルスの中和測定のためのめっき細胞(1日目)
- 組織培養の準備
- セクション1に記載されているように培地及び組織培養フードを準備する。さらに、サンプルあたり最低2回の反復(すなわち、6サンプルあたり1プレート)を収容するために必要な数の96ウェルプレートを準備します。サンプル・ボリュームが許可されている場合は、追加の反復を追加します。
- めっきと細胞の維持
- セクション 1 で説明されているように、Vero E6 細胞を成長および維持します。96ウェルプレート当たり少なくとも10mLの細胞懸濁液を、1mL当たり2×10個の5細胞の濃度で調製する(必要に応じて48時間後に行われるアッセイの場合、プレート1.5×10細胞/mL当たり10個)。マルチチャネルピペットを使用して96ウェルプレートの各ウェルに100μLのセル懸濁液を加え、5%CO2で37°Cで24時間インキュベートします。
注:細胞の懸濁液をよく混ぜ、細胞の均等な分布を確保するために、すべての方向に穏やかに各プレートを揺らす。
- セクション 1 で説明されているように、Vero E6 細胞を成長および維持します。96ウェルプレート当たり少なくとも10mLの細胞懸濁液を、1mL当たり2×10個の5細胞の濃度で調製する(必要に応じて48時間後に行われるアッセイの場合、プレート1.5×10細胞/mL当たり10個)。マルチチャネルピペットを使用して96ウェルプレートの各ウェルに100μLのセル懸濁液を加え、5%CO2で37°Cで24時間インキュベートします。
5. 抗体または血清希釈および感染症(2日目)
注:このプロトコルは、市販の抗体と患者血清の両方によるVSV-S-eGFPの中和を測定するために適用することができ、また、前臨床ワクチン開発研究のために動物から採取された血清。*患者/動物血清サンプルを取り扱う際に記載されている追加のステップに注意してください。
- シリアル希釈シリーズ
- 血清サンプルを希釈する前に、各サンプルを56°Cの水浴中で30分間加熱不活性化し、補体を不活性化します。患者のサンプルを取り扱う際に必要な安全対策を講じる。開いたサンプル容器は、組織培養フード内で、適切な封じ込めレベル2の個人用保護具が着用されていることを確認する。
- 空の96ウェルプレート(プレート1)に希釈シリーズを設定します。
- 80 μL の 96 ウェルプレートの行 A ですべての希釈を開始します。
注:使用される中和抗体の濃度は、メーカーが予測した活性に依存します。ここで使用されているSARS-CoV-2スパイク中和抗体( 材料表を参照)については、5μg/mLから始めて、少なくとも50%の中和を観察します。 - 40 μL の無血清 DMEM (ペニシリン/ストレプトマイシン 1%) を行 B から G に、80 μL を行 H に加えます。行 H にウイルスを追加しないでください。
- 12ウェルマルチチャネルピペットを使用して、40 μLの希釈された血清または抗体を行Aから行Bに混合して転送し、行Fまで繰り返し、行Fから40 μLを廃棄します。ウイルス専用制御行を表すため、行 G に血清を追加しないでください。
- 感染とオーバーレイ
- MOI 0.05(または2000 pfu)で各井戸を治療するために、希釈されたVSV-S-eGFPの適切な量を準備します。(この計算を完了する際には、合計80 μLの体積の60 μLのみが細胞に移動することに注意してください。
注:VSV-S-eGFPは温度に敏感であるため、使用していないときはいつでもウイルスストックが氷の上にとどまることを確認し、凍結を繰り返した後にタイターが異なるように複数の凍結融解サイクルを避けてください。 - 40 μLの希釈ウイルスをプレート1のG行AからGの各ウェルに加え、上下4〜5回ピペットで混ぜます。5%CO2で37°Cでプレートを1時間インキュベートします。
- インキュベーター(プレート2)から細胞を含むプレートを取り出し、すべてのウェルから慎重に吸引します。プレート1からプレート2に60μLの抗体/ウイルス混合物を移し、5%CO2で37°Cで1時間インキュベートし、20分ごとにプレートを揺らします。
- DMEMにCMCを含む140 μLのオーバーレイで各ウェルをトップアップし、最終的な濃度は3%のCMC(10%FBSと1%ペニシリン/ストレプトマイシン)です。プレート2を34°Cに設定し、5%CO2をイメージング前に約24時間置きます。
注:感染工程中に15分間、37°Cの水浴でオーバーレイ混合物を事前に温めます。
- MOI 0.05(または2000 pfu)で各井戸を治療するために、希釈されたVSV-S-eGFPの適切な量を準備します。(この計算を完了する際には、合計80 μLの体積の60 μLのみが細胞に移動することに注意してください。
6. イメージングと定量化(3日目)
- 自動蛍光イメージャーを使用したイメージプレート(フルオレセイン・イソチオシアネート(FITC)フィルタまたは励起波長488nmの代替フィルタを使用)。個々のeGFP病巣を自動的に識別してカウントするプロトコルを作成することで、ウイルス感染を定量化します。自動カウント機能が使用できない場合は、ImageJ ソフトウェアを使用して eGFP フォシの数を定量化します。
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Representative Results
本プロトコルは、VSV-S-eGFP擬ウイルス感染の阻害(検出されたeGFP病巣の喪失によって定量化可能)を介してSARS-CoV-2 Sタンパク質に対する中和抗体を検出するための迅速かつ効果的な方法を概説する。図1に、プロトコルの概略図を示します。市販の抗体は、アッセイが実行されるたびに正のコントロールとして使用して、アッセイの一貫性を確保することが推奨されます。ここでは、IGG対照と比較してSARS-CoV-2スパイクRBDに対して市販の中和IgG抗体を用いた希釈曲線を示す(両方の抗体の詳細については、材料表を参照してください。図2)。
回復期患者サンプルは、SARS-CoV-2感染後約3ヶ月で採取し、かつ、上述の方法を用いて疑似ウイルス中和を決定した(図3)。重要なことに、健康なドナー血清を用いて最小限のバックグラウンド阻害が観察された。さらに、このアッセイは、入院の必要性に基づいて、症状の重症度が高い患者と軽度の疾患を有する患者を区別する。他の報告に沿って、入院患者は入院を必要としない患者よりも中和能力の増加を示す傾向があることを小さなコホート内で観察した。これは入院患者サンプルと非入院患者サンプルに対して必ずしも当てはまるとは限りませんが、アッセイが様々な程度の中和を区別する能力は資産です。患者血清の中和能がここで示されたものよりはるかに高い場合もある。必要に応じて、患者血清の希釈開始を調整してもよいし、追加の希釈ステップを追加のプレート上で行ってもよい。
図1: 回復血清によるVSV-S-eGFPの中和を実証するプロトコルの概要 略語: VSV = 静脈性口内炎ウイルス;eGFP = 強化された緑色蛍光タンパク質;COVID-19 = コロナウイルス病. この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図2:SARS-CoV-2に対する市販の中和抗体がIgGと並んで陰性対照の一例として用いられている。 ウイルス感染を阻害する抗体を中和する能力はさまざまです。購入した特定の抗体に関する情報を参照して、希釈曲線を開始する濃度を決定します(サンプルは三重で実行され、誤差範囲は±SDを表します)。(A)阻害率は、蛍光イメージング(B)を介して検出されたeGFP病巣の数に基づいて計算された。略語: SARS-CoV-2 = 重度の急性呼吸器症候群コロナウイルス 2;IgG = 免疫グロブリン;SD = 標準偏差;eGFP = 強化された緑色蛍光タンパク質;RBD =受容体結合ドメイン。 この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図3:VSV-S-eGFPを中和する患者からの回復血清の能力は、症状の重症度によって異なる。 患者血清サンプルは、約3ヶ月後にSARS-CoV-2感染後に採取し、対照サンプルを感染していない患者から採取した(サンプルは三重で実行され、誤差範囲は±SDを表す)。(A)阻害率は、蛍光イメージング(B)を介して検出されたeGFP病巣の数に基づいて計算された。略語: SARS-CoV-2 = 重度の急性呼吸器症候群コロナウイルス 2;SD = 標準偏差;eGFP = 強化された緑色蛍光タンパク質。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
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Discussion
ここで説明する方法は、必要に応じてさまざまなラボ環境やリソースに合わせて調整できます。重要なことに、このプロトコルの主な制限は、封じ込めレベル2空間および組織培養フードの必要性である。VSV-S-eGFPのようなSARS-CoV-2スパイクを擬似型複製するRNAウイルスの適用は、封じ込めレベル3の作業領域を必要とするSARS-CoV-2ウイルスに代わる手ごわい代替手段であるが、一部のグループでは制限されたままである可能性がある。ここで説明する他のすべての手順は非常に柔軟であり、ほぼすべての包含レベル 2 のラボで実行できます。例えば、自動計数機能を備えた蛍光イメージャーの使用は必要ありません。ここで使用される 96 ウェル形式は、利用可能な最も低い目標(2x)を使用してほぼ全体のウェルをイメージするために必要な約 4 つの視野のみを意味します。
手動蛍光顕微鏡を使用して各ウェルの複数のフィールドを画像化し、ImageJ(フリーソフトウェア)を使用してeGFP病巣を定量化することができます。さらに、96ウェル形式を使用して、可能な限り低い量の血清を使用し、消耗品の使用量を最小限に抑えることを選択しました。蛍光顕微鏡が利用できない場合、このプロトコルは、結晶紫色の固定および染色後のプラーク形成を検出するために6-または12ウェル形式までスケールアップすることができる(上記のウイルス用タイタープロトコルと同様)。このプロトコルを実行する際に留意すべき最も重要な考慮事項は、VSV-S-eGFP の温度感度です。VSV-S-eGFPを使用する場合、常にウイルスを少量にアリクォートして、複数の凍結融解サイクルを避け、可能な限りウイルスを氷上に保ちます。さらに、24時間後に強い蛍光シグナルが検出される可能性があります。しかし、感染後20~28時間で画像撮影した後も同様の結果を得ています。
SARS-CoV-2に対する抗体の存在を検出するために利用可能ないくつかの方法があり、金標準の酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)アッセイを含む、S21,22に対する抗体の全量を定量する。ここでは、患者からの回復血清中の免疫性SARS-CoV-2スパイクタンパク質に対する中和抗体を特異的に検出する迅速かつ信頼性の高い方法を概説した。我々は、疑似ウイルス感染の自動定量化によって24時間以内に多数のサンプル中の中和抗体の検出を可能にする96ウェル形式に適応し、最終的なデータ報告の迅速なターンアラウンドを可能にすることによって、古典的なプラーク還元中和試験(PRNT)を改善しました。血清中中中中和抗体の検出に加えて、この方法は、モノクローナル抗体、組換え可溶性hACE2、またはプロテアーゼ阻害剤などのhACE2とのSARS-CoV-2スパイクタンパク質相互作用を直接阻害することを目的とする他の治療戦略のハイスループットスクリーニングを実施するように適応することができ、ウイルスエントリー23を妨げる.いくつかのSARS-CoV-2スパイクタンパク質変異体の出現に伴い、ウイルス24の異なる変異体による感染後に同様の中和レベルが発生するかどうかを判断するために、この方法を適用してもよいことにも注意することが重要である。
SARS-CoV-2に対する抗体を検出する他の方法としては、ELISA、レンチウイルスベースのアッセイ、および血清サンプルの中和能力を評価する市販キットが含まれる。一般的に使用されるIgM-またはIgG結合性エリザは、以前の感染または免疫を追跡する抗体濃度の存在を判定する有効な方法であるが、それらは結合抗体の中和能25を区別することができない。疑似型レンチウイルスベースの中和アッセイは、VSV-S-eGFPを複製するのではなく、非複製性ウイルス粒子を使用することによって、安全性プロファイルを改善しました。しかし、レンチウイルス力価は26、27よりはるかに低くなる傾向にあるため、これはテスト能力の面で障壁を作り出す。SARS-CoV-2スパイクタンパク質(RBD具体的にはRBD)の競合阻害を介した感染を遮断する抗体の能力を測定するいくつかの市販キットがあり、回復血清(例えば、CUSABIO、GenScript、アブノヴァ)でのインキュベーション後のhACE2受容体と結合する。これらのキットの多くは、評判の高い感度と特異性を持っていますが、比較的高価で、大量のサンプルには適していません。ここで提供されるプロトコルは、高速で信頼性が高く、安価です。このハイスループット方式は、多くのサンプルをテストするために使用することができ、24時間以内に堅牢な読み出しを達成する。
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Disclosures
著者は、この出版物に関連する競合する財政的利益を持っていません。
Acknowledgments
Whelanラボは、このプロトコルで使用されるVSV-S-eGFPウイルスを寛大に提供してくれたことに感謝します(Case et al. 2020で説明)。また、患者の血液サンプル(REBプロトコルID 20200371-01H)を収集したビル・キャメロン博士とユタポーン・コーワン博士(およびチーム)に感謝します。著者らは、この記事の研究、著者、および/または出版物に対する次の財政支援の受領を開示する:この研究は、オタワ病院財団からの寛大な支援とカナダ保健研究所(#448323)からの助成金とCOVID-19科学のためのシスルダウン財団からのファストグラントからC.S.I.T.R.J.への迅速な助成金によって資金提供されましたJPは、クラスターMitacsフェローシップによって資金提供されています。T.A.はCIHRバンティング・フェローシップによって資金提供を受けています。また、この研究のために血液サンプルを参加し、寄付したすべての人に感謝したいと思います。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.25% trypsin-EDTA (Gibco) | Fisher scientific | LS25200114 | |
| ArrayScan VTI HCS | Thermo Fisher Scientific | Automated fluorescent imager | |
| carboxymethyl cellulose | Sigma | C5678 | |
| Dulbecco's modified Eagle's medium (Gibco) | Fisher scientific | 10-013-CV | |
| Dulbecco's modified Eagle's medium (Powder) (Gibco) | Thermo Fisher Scientific | 12-800-017 | |
| Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (DPBS) | Fisher scientific | 21-031-CV | |
| HEPES | Fisher scientific | BP-310-500 | |
| IgG Isotype Control (mouse) | Thermo Fisher Scientific | 31903 | |
| Penicillin/streptomycin | Thermo Fisher Scientific | 15070063 | |
| SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Neutralizing Antibody, Mouse Mab | SinoBiological | 40592-MM57 | |
| Vero E6 cells | ATCC | CRL-1586 |
References
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