悬滴法:一种生成三维黑色素瘤球体的技术

0 次观看3:33 分钟 • April 30th, 2023

— 类球体是一种三维体外细胞培养模型,可模拟体内肿瘤结构,有助于研究肿瘤内部的相互作用。进行培养时,首先在适当的培养基中制备黑色素瘤细胞的单细胞悬液。接着,将少量该细胞悬液点样于无菌非黏附性培养皿盖内表面,各液滴之间保持足够间距。小心将皿盖翻转,倒置于含有PBS的培养皿底部,以形成保湿环境。将培养板置于适宜条件下孵育。

来自 PBS 的水分可防止悬滴中培养基的蒸发。通过补充几微升培养基来更新悬滴。由于表面张力的作用,液滴保持其球形并悬挂在培养板的内表面。重力作用使细胞保持悬浮状态而不铺展,并在液滴内聚集形成三维球状体。最后,用 PBS 冲洗液滴以收集球状体,并将其置于非黏附性培养皿中。

在以下实验方案中,我们将通过悬滴法演示生成451-LU黑色素瘤细胞的三维球状体。

— 首先,根据常规细胞培养方案,使用含10% FCS的RPMI培养基培养黑色素瘤细胞451-LU。为生成黑色素瘤球状体,用PBS洗涤培养的黑色素瘤细胞,随后加入5毫升1x胰蛋白酶-EDTA PBS溶液,在室温下孵育3至5分钟。加入5毫升含10% FCS的RPMI培养基以中和胰蛋白酶活性。然后将细胞悬液转移至离心管中,在200 × g条件下离心5分钟以收集细胞。用含10% FCS的RPMI培养基重悬细胞沉淀。

接下来,对细胞进行计数,并将细胞悬液稀释至终浓度为每毫升10,000个细胞。使用电子多通道移液器,在无菌、非黏附性10厘米细胞培养皿的皿盖内表面,制成40个、每个25微升的细胞悬液小滴。

接下来,快速而平稳地将盖子翻转,并将其放置在含有 5 毫升 PBS 的细胞培养皿上。将悬滴培养皿置于 37 摄氏度、5% 二氧化碳环境中培养 10 至 14 天。

初次点样后第五天,使用电子移液器向每滴中加入含10%胎牛血清的10微升RPMI培养基。10至15天后,用PBS缓冲液轻轻冲洗培养皿盖,收集悬浮的类球体。将类球体收集至新的非黏附性细胞培养皿中。

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最后更新:22 八月 2026