0 次观看 • 3:33 分钟 • April 30th, 2023
— 类球体是一种三维体外细胞培养模型,可模拟体内肿瘤结构,有助于研究肿瘤内部的相互作用。进行培养时,首先在适当的培养基中制备黑色素瘤细胞的单细胞悬液。接着,将少量该细胞悬液点样于无菌非黏附性培养皿盖内表面,各液滴之间保持足够间距。小心将皿盖翻转,倒置于含有PBS的培养皿底部,以形成保湿环境。将培养板置于适宜条件下孵育。
来自 PBS 的水分可防止悬滴中培养基的蒸发。通过补充几微升培养基来更新悬滴。由于表面张力的作用,液滴保持其球形并悬挂在培养板的内表面。重力作用使细胞保持悬浮状态而不铺展,并在液滴内聚集形成三维球状体。最后,用 PBS 冲洗液滴以收集球状体,并将其置于非黏附性培养皿中。
在以下实验方案中,我们将通过悬滴法演示生成451-LU黑色素瘤细胞的三维球状体。
— 首先,根据常规细胞培养方案,使用含10% FCS的RPMI培养基培养黑色素瘤细胞451-LU。为生成黑色素瘤球状体,用PBS洗涤培养的黑色素瘤细胞,随后加入5毫升1x胰蛋白酶-EDTA PBS溶液,在室温下孵育3至5分钟。加入5毫升含10% FCS的RPMI培养基以中和胰蛋白酶活性。然后将细胞悬液转移至离心管中,在200 × g条件下离心5分钟以收集细胞。用含10% FCS的RPMI培养基重悬细胞沉淀。
接下来,对细胞进行计数,并将细胞悬液稀释至终浓度为每毫升10,000个细胞。使用电子多通道移液器,在无菌、非黏附性10厘米细胞培养皿的皿盖内表面,制成40个、每个25微升的细胞悬液小滴。
接下来,快速而平稳地将盖子翻转,并将其放置在含有 5 毫升 PBS 的细胞培养皿上。将悬滴培养皿置于 37 摄氏度、5% 二氧化碳环境中培养 10 至 14 天。
初次点样后第五天,使用电子移液器向每滴中加入含10%胎牛血清的10微升RPMI培养基。10至15天后,用PBS缓冲液轻轻冲洗培养皿盖,收集悬浮的类球体。将类球体收集至新的非黏附性细胞培养皿中。
本文介绍了利用悬滴法生成黑色素瘤细胞三维球体的方法。这些球体可模拟体内肿瘤结构,有助于研究肿瘤内部的相互作用。
通过悬滴法生成的三维黑色素瘤类球体提供了一种生理相关性较强的体外模型,可高度模拟体内肿瘤结构。该体系能够更准确地研究肿瘤内部的相互作用,并支持肿瘤学发现流程中的早期靶点验证和机制性风险评估。该方法通过弥合传统二维培养与复杂体内模型之间的差距,增强了转化研究的连续性。
悬滴球体法适用于从早期发现到临床前研究的连续过程,可在体内研究之前实现可靠的靶点验证和检测方法开发。
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最后更新:22 八月 2026