August 28th, 2010
全胚胎培养技术,使我们文化的大鼠和小鼠胚胎体外在midgestation阶段对应有限的时期条件。在这个视频协议,我们将演示后,用肩瓶型文化体系E12.5大鼠全胚胎培养我们的标准程序。
在发育生物学中,有各种动物用于实验。腐烂胚胎的 Hor 农业技术成立于 1950 年代,在夏威夷农业现代基因作建立之前发展起来。弱化的导演直接以基因死亡或转染的爱的区域为目标,因为胚胎可以纵并且作为显微镜,因此整个 embr 培养是非常有用的工具。
当我们想研究毛氏胚胎植入后发育后的动态发育过程时。毛利胚胎的生长严重依赖于功能呈递器,这限制了培养期。一般来说,我们可以在大鼠胚胎第 8.5 至 14.5 天期间培养胚胎,在小鼠胚胎第 6.5 天和 12.5 天内培养胚胎。
在实验室中,我们使用旋转培养系统培养大鼠和小鼠胚胎。该培养系统最受欢迎,适用于铅妊娠期间大鼠和小鼠胚胎的培养。那是在红色和小鼠的 E 11.5 和 9.5 之后。
在本视频中,我们想介绍使用 E 12.5 RU 胚胎进行饥饿培养的标准方案。在这种情况下,胚胎可以培养两天,这足以检验 hor 农业中的各种有效作。成功有两个关键步骤。
首先,解剖程序应准确,不损伤胚胎,尤其是棒状血管。其次,程序应该尽可能快。对于年龄较大的胚胎尤其如此。
例如,对于 E 10.5 小鼠胚胎,它们应该在 30 分钟内转移。我们对 pack 6 突变体右胚胎应用了全胚胎培养技术。例如,我们通过用染料爱少量细胞或通过将水平细胞移植到白色类型和柔和背景的胚胎中来分析突变体中神经细胞的迁移模式。
此外,我们还建立了一种通过使用电击的电作将基因转移到培养的小鼠和红色胚胎中的方法。我们可以简单地在发育中的大脑区域引入外源基因、显性阴性形式和 siRNA 的构建体。因此,我们可以通过功能丧失和获得功能实验轻松分析基因功能。
我们还使用器官培养或切片培养或农业研究用 GFP 或 RFP 调平的细胞的行为。因此,您可以将 Lio 培养物与其他技术结合使用进行各种实验。
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本视频协议展示了使用旋转器型瓶培养系统对E12.5后大鼠胚胎进行全胚培养的技术。这种方法允许在关键的中期妊娠阶段进行离体培养。