人类神经干细胞计数
August 22nd, 2007
知识是需要许多组织培养操作活菌的确切人数。本协议描述了如何区分活细胞和死细胞和使用hemacytometer量化细胞。虽然它描述了人类神经干/前体细胞（hNSPCs）计数，它可用于其他类型的细胞。
现在，我将向您展示如何对人神经前体细胞进行计数，当您想将细胞用于免疫化学或想用核因子机器进行转染时，您可以对细胞进行计数。我使用具有边缘网格的相差血细胞仪，我们还使用一种称为 trip 和 blue 的染料。这种染料很有用，因为它可以区分活细胞和死细胞。
死亡或垂死的细胞吸收这种染料，它们呈蓝色。当您观察血液中的细胞时，细胞仪和活细胞能够排除这种染料，它们，它们，它们，它们不会呈现蓝色。这样您就可以确定细胞的活力，以制备 TRIP 和 Blue 以及培养基的溶液。
我将向这个 0.5 mil 外延管中加入 20 微升 Trap 和蓝色溶液。然后我将添加 25 微升培养基。所以现在我有 45 μL 的捕集盘蓝色和培养基溶液，这样当我加入 5 μL 细胞悬液时，我将进行 1 到 10 的稀释。
所以现在我要添加 5 μL 细胞悬液。首先，我将确保通过手指涡旋充分重悬细胞。所以现在我想确保这个解决方案混合得很好。
所以我要把床上放下几次。最后，我将大约12 μL的这种细胞悬液加载到血细胞仪中。它有两个端口，您可以使用任何一个。
因此，您所要做的就是在该端口引入溶液，液体将被毛细管作用吸走。现在我准备好数数了。下面是 10 倍的血细胞仪，这里有一个包含 16 个正方形的象限。
正如你所看到的，我们可以在这里观察到活细胞和死细胞。在这里，我们有活细胞，例如 this 和 this 和 this。我们还有一些死细胞，比如这个。
如果你注意到，死细胞呈深蓝色，而活细胞周围有某种冰雹。所以现在我要计算所有活细胞。所以我要从左到右，从上到下。
1、2、3、4、5、6、33、1 32、33、34、3 5、3 6。所以我们在这个象限中总共有 3 个 6 个单元格。因此，当我看到位于象限边界线上的单元格（例如此处的这条线）时，为了保持一致，我会对位于左边框和上边框上的单元格进行计数。
我始终如一地对血细胞仪上所有象限的这些边界上的细胞进行计数。所以现在我们要计算每微升有多少个细胞。为了做到这一点，我将取每个象限的单元格的平均值，即 38 乘以 10，这是一个由腔室尺寸决定的因素。
我们还要乘以 10，这就是我们在本例中的稀释因子。最后，我们将得到每微升的细胞数。所以在这种情况下，我们每微升有 3， 800 个细胞。
由于我们将细胞托盘悬浮在 500 微升溶液中，因此您可以计算出您总共有多少个细胞。我们都准备好了。
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概述
本协议概述了一种使用血球计数板计数人类神经干/前体细胞（hNSPCs）的方法。它强调了在各种组织培养应用中区分活细胞和死细胞的重要性。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 细胞生物学
- 组织培养
背景
- 活细胞计数对于组织培养操作至关重要。
- 活细胞可以排除某些染料，而死细胞不能。
- 血球计数板是一种标准的细胞计数工具。
- Trippan蓝染料常用于评估细胞活力。
研究目的
- 提供一种可靠的计数hNSPCs的方法。
- 有效地区分活细胞和死细胞。
- 协助研究人员为免疫化学或转染等进一步实验做准备。
使用的方法
- 使用相差显微血球计数板。
- 应用Trippan蓝染料以区分细胞活力。
- 在显微镜下计数细胞。
- 制备Trippan蓝和培养基的溶液。
主要结果
- 成功地区分活细胞和死细胞。
- 准确计数hNSPCs。
- 证明了Trippan蓝染料的有效性。
- 验证了血球计数板作为一种可靠的计数方法。
结论
- 该协议提供了一种简单的细胞计数方法。
- 它适用于hNSPCs以外的各种细胞类型。
- 了解细胞活力对于成功的组织培养实验至关重要。
常见问题
Executive Industry Relevance
Accurate quantification of viable human neural stem/precursor cells (hNSPCs) is essential for reproducible tissue culture workflows in neuroscience drug discovery. This protocol enables reliable cell viability assessment and concentration measurement, supporting consistent experimental seeding for downstream applications such as immunocytochemistry and transfection. By standardizing live/dead discrimination using Trypan blue and hemacytometer-based counting, the method enhances predictive confidence in early-stage target validation and assay development pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables precise seeding of hNSPCs for target engagement and pathway modulation studies.
- Operational Value: Reduces variability in cell-based assays by ensuring consistent input of viable cells.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Provides quantitative, reproducible cell concentration data critical for assay standardization.
- Operational Value: Supports scalable preparation of cell suspensions for high-content screening formats.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Maintains cellular input consistency across discovery-to-preclinical transition stages.
- Operational Value: Facilitates cross-functional collaboration through standardized cell counting practices.
Pipeline & Workflow Integration
This method fits within the early discovery continuum, supporting reliable cell preparation from target validation through assay optimization and preclinical efficacy testing.
- Discovery Biology: Ensures accurate cell dosing for target validation experiments involving hNSPCs.
- Screening: Delivers standardized, quantifiable cell inputs necessary for reproducible assay performance.
- Analytics: Generates viable cell concentration and total count outputs used to normalize experimental conditions.
- Translational Research: Supports continuity in cell handling between in vitro discovery and preclinical models.
- Enterprise Reuse: Represents a transferable, low-complexity capability applicable across multiple cell types and projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Improves predictive confidence by minimizing variability in cell-based experimental inputs.
- Operational Value: Enhances reproducibility and standardization across laboratories and teams.
- Strategic Value: Supports better go/no-go decisions through reliable assay foundations.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted advancement by ensuring data quality in early efficacy screening.
Implementation Considerations
- Requires basic tissue culture technique and microscopy proficiency.
- Dependent on hemacytometer availability and proper cleaning to avoid contamination.
- Necessitates consistent operator training for unbiased quadrant selection and border-counting rules.
- Limited by manual counting throughput; not suited for high-throughput automation without adaptation.
- Relies on correct dilution and mixing to ensure representative sampling of cell suspension.
