人类神经干细胞计数

现在我将向您展示如何计数人神经前体细胞。当您需要将细胞用于免疫化学实验或使用核因子装置进行转染时，就需要对细胞进行计数。我使用带有边缘网格的相差显微镜血细胞计数板，同时使用一种名为台盼蓝的染料。该染料可用于区分活细胞与死细胞。

死亡或即将死亡的细胞会摄取这种染料而呈现蓝色。当你在血细胞计数板中观察时，活细胞能够排斥这种染料，因此不会呈现蓝色。通过这种方法，你可以判断细胞的存活率，以制备含有台盼蓝和培养基的溶液。

我将向这个0.5毫升离心管中加入20微升的台盼蓝溶液。然后，再加入25微升的培养基。这样，目前我共有45微升的台盼蓝与培养基混合溶液，因此当我加入5微升的细胞悬液后，即可实现1比10的稀释比例。

现在，我将加入5 µL细胞悬液。首先，我会用手指轻弹管壁使细胞充分重悬。接下来，我需要确保该溶液充分混匀。

因此，我将把床升降几次。最后，我会将约12微升的这种细胞悬液加入血细胞计数板中。它有两个加样口，您可以使用其中任意一个。

因此，您只需将溶液从这个端口加入，液体就会通过毛细作用被吸入。现在我已准备好进行计数。这是在10倍镜下观察血细胞计数板的视野，此处有一个包含16个方格的象限。

如您所见，我们可以在此观察到活细胞和死细胞。此处这些是活细胞，例如这个、这个以及这个。此外，我们还有一些死细胞，例如这个。

如果仔细观察，死细胞呈深蓝色，而活细胞周围则呈现出类似冰晶的亮圈。现在我将开始计数所有活细胞，计数顺序为从左到右、从上到下。

1、2、3、4、5、6、33、1、32、33、34、3、5、3、6。因此，该象限中共有六个细胞。当观察到位于象限边界线上的细胞时，例如此处这条线上的细胞，为了保持一致性，我仅计数位于左侧边界和上侧边界上的细胞。

我会对血细胞计数板上所有四个象限的边界细胞进行持续计数。接下来，我们将计算每微升中含有多少个细胞。为此，我将取每个象限细胞数的平均值（即38），再乘以10，这个系数是由计数室的尺寸所决定的。

同时，我们还要乘以10，这是本实验中的稀释倍数。最终，我们将得到每微升中的细胞数量。因此，在本例中，每微升含有3,800个细胞。

由于我们将细胞沉淀重悬于500微升溶液中，因此可以计算出细胞的总数。至此，所有步骤均已完成。