一个实时的基于电阻抗技术测量癌细胞入侵内皮细胞单层

本文介绍了一种

该视频演示了一种使用基于实时电阻抗的技术监测癌细胞对内皮细胞单层侵袭的方法。首先，称为 VE 的人脐静脉内皮细胞位于 16 孔 EPL 中，孔底涂有金电极。为了产生汇合的单层癌细胞，添加了附着在 VE 上并侵入 HVAC 单层，破坏内皮细胞连接 然后获得阻抗读数，这取决于细胞覆盖的井底总面积。

然后可以根据电阻抗的变化来确定侵袭的程度。该技术或现有方法（如空隙室和 METROGEL 测定）的主要优点是内皮细胞肿瘤细胞相互作用更接近体内转移过程，并且数据是实时获得的，与其他方法的终点分析相比更容易量化。虽然这种方法可以提供对癌细胞侵袭的见解。

它也可以应用于其他系统，例如研究免疫系统中的细胞相互作用。此外，我们观察 UX 细胞生长的实验初始阶段可用于评估任何细胞系的细胞增殖，而无需进一步的侵入步骤证明该程序将是我实验室的 Rahim 研究生。该方案的所有步骤都应在无菌条件下在组织培养罩中进行。

用于本实验的 Xcel 系统永久保存在 37 摄氏度的 5% 二氧化碳培养箱中，该培养箱专门用于该仪器首次使用。仪器应在培养箱中放置至少 16 小时，以平衡新的温度和湿度环境。接下来，通过在 37 摄氏度下涂上 0.1% 明胶 1 小时来制备 EPL 16。

板涂覆后，用 PBS 洗涤一次。然后加入 100 微升重组的 e gm two 培养基进行空白读数。在没有细胞的情况下测量背景阻抗。

将 EPL 放在计算机上的 Excel 代理系统中。在软件窗口中单击桌面上的 RTCA 软件图标，打开 Excel 代理软件。单击布局选项卡并选择包含样品的孔。

对实时数据采集的频率进行编程。单击计划选项卡，然后单击添加步骤图标扫描表示读数的数量，间隔表示读数之间的时间间隔。这些值分别自动设置为 1 和 1.00 分钟。

这将对系统进行编程以执行后台读取。单击 add a step（添加步骤），然后在扫描框中输入 300，在 intervals（间隔）框中输入 10 分钟。这将对仪器进行编程，以执行长达 50 小时的阻抗测量。

要开始实验，请单击 start a step 图标。在执行背景测量后，将测量每个井的背景阻抗。窗口将显示该消息。

准备下一步，请点击。下一步开始。此时，可以添加细胞，并且可以如所述监测单层的形成。

在下一节中，将此处使用的人脐静脉、内皮细胞或 VE 在 EGM 两种培养基中培养，两种培养基用含有生长因子补充剂的 EGM 两种子弹试剂盒重构，5% FBS 细胞应维持在 37 摄氏度培养箱中，在 5% 二氧化碳存在下。实验当天，检查HUB E的共流度 在显微镜下，细胞应为低传代数，优选不超过6次且小于75%Con流度，以产生色调，通过胰蛋白酶单层收获细胞。一旦细胞从培养瓶中分离出来，应通过 200 G 离心去除所有痕量的胰蛋白酶。

然后重新悬浮细胞，并将 e GM 两种培养基重构至浓度为 2.5 倍 10 至每毫升的第五个细胞。细胞重悬后，从 EXOGEN 系统中取出背景校准的 EPL，并将 100 微升 HX 悬液添加到板中已有的 100 微升 E GM 两种培养基中。立即将 EPL 放入 Excel 系统细胞分析仪中。

通过单击软件窗口中的 start step 按钮开始获取阻抗读数。让内皮细胞生长。系统将继续每 10 分钟读取一次阻抗读数。

Uve 在接种后 4 至 6 小时显示细胞指数的特征性瞬时扁平化，然后在 16 至 18 小时后再次稳定。因此，让细胞形成汇合的单层至少 18 小时非常重要。一旦形成单层，就该添加侵袭细胞以准备侵袭测定。

准备侵袭的肿瘤细胞。这里使用骨肉瘤细胞。首先通过胰蛋白酶收获细胞。

通过将细胞以 200 G 离心并用 PPS 洗涤一次来去除所有痕量的胰蛋白酶。洗涤后，在用于培养肿瘤细胞的培养基（如含有 10% FBS 的 RPMI 或 DMEA 培养基）中，以 10 倍/毫升的终密度悬浮细胞至第 5 个细胞。通过单击软件窗口中的暂停步骤图标来暂停实验。

取出 EPL 并从 vac 单层中吸出 EGM 两种培养基。向第四个细胞中加入 100 微升含有 1 乘 10 的肿瘤细胞悬液。通常，1 比 2.5 个肿瘤细胞与内皮细胞的比例最适合检测。

但是，该比率可以针对单个细胞系进行优化。将 EPL 放回培养箱中的 Excel 代理系统中。单击"继续"步骤，继续以 10 分钟的间隔获取阻抗读数。

在接下来的 6 到 12 小时内实时监控入侵情况。细胞指数下降是由于内皮连接的回缩和侵入肿瘤细胞的渗透造成的。实验完成后，使用 exergen 软件将结果标准化为添加侵袭肿瘤细胞的时间。

exergen 软件允许在 exergen 系统上对 VEX 进行标准化，如本视频所示，在外能系统上培养 VEX，并在形成单层后加入 K 7 M 2 细胞或 K 12 细胞。如此处所示，在引入 K 7 M 2 细胞后的几个小时内，细胞指数急剧下降。K seven M two 是一种高度转移性的骨肉瘤细胞系。

这些细胞表达高水平的细胞骨架接头蛋白烯，这是细胞系侵袭特性的原因。另一方面，K 12 细胞的转移性较低，无法像 K 7 M 2 细胞那样有效地穿透内皮单层。这表现为像元索引的下降幅度较小，如下所示。

此处显示的控件表示 uve 单层的阻抗。在没有癌细胞的情况下，实验一式三份进行。看完这个视频后，您应该对如何通过生成内皮细胞单层并用癌细胞攻击单层来实时测量侵袭有一个很好的理解。

涉及 胡 XL 单层形成的实验的初始步骤可用于通过阻抗评估细胞增殖。二。