DAB在RNA杂交中的作用是什么？

DAB作为显色底物被辣根过氧化物酶氧化，产生棕色沉淀，表明目标RNA的存在。

为什么需要反染？

用苏木精反染提供对比，使RNA信号在组织背景下更容易可视化。

氨水如何影响染色？

氨水降低苏木精染色的强度，使细胞呈现蓝色，并增强棕色RNA信号的可见性。

组织脱水包括哪些步骤？

组织脱水包括将切片浸入不同浓度的乙醇中，然后用二甲苯处理。

显微镜观察前的最后一步是什么？

最后一步是用载物溶液和盖玻片密封切片，以准备在光学显微镜下观察。

RNA CISH 信号检测:一种在完整组织标本中 RNA 原位杂交过程中检测显色信号的技术

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 views • 2:42 min • April 30th, 2023

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要检测RNA杂交过程中的显色信号，首先在载玻片上切取组织切片。本节包含与辣根过氧化物酶标记的RNA探针预杂交的靶RNA。

在

组织切片上滴几滴二氨基联苯胺或DAB，一种检测底物并孵育。

DAB进入细胞，辣根过氧化物酶将其氧化形成棕色沉淀物。该反应赋予细胞中特定 RNA 序列棕色。不含靶RNA的细胞将没有过氧化物酶活性，并且保持不染色。

接下来，用苏木精复染组织切片。苏木精与 DNA 结合，并在组织切片上形成紫色染色。

用氨水处理组织切片 - 一种发蓝溶液。它降低了紫色染色的强度，使细胞呈蓝色。此步骤对于清晰地可视化细胞内的褐色斑点至关重要。

现在，将组织切片浸入浓度增加的乙醇中，然后用二甲苯 - 一种有机溶剂进行处理。这些步骤使组织切片脱水以获得更好的图像。

最后，用安装溶液和盖玻片密封载玻片，并在光学显微镜下观察。细胞表现出点状棕色点，表明存在靶RNA。

将

相同数量的每种 DAB-A 和 DAB-B 溶液滴入适当大小的管中，使每个部分和涡旋产生大约 120 微升的 DAB 底物。从载玻片架上取出每张载玻片，一次一张，轻敲轻弹以去除多余的液体，然后将其放回载玻片架中。将大约 120 微升 DAB 混合物移液到每个组织切片上，确保切片被覆盖。在室温下孵育10分钟，然后进行复染。

每个玻璃板条滴一滴封固剂，然后将板条放在载玻片上并让它们风干。几个小时后，按照手稿中所述，使用光学显微镜继续进行评估。