RNA CISH信号检测：在完整组织标本中进行RNA原位杂交时检测显色信号的技术

为了在RNA杂交过程中检测显色信号，首先取一张载玻片上的组织切片。该切片含有目标RNA，并已与辣根过氧化物酶标记的RNA探针预先杂交。

在组织切片上滴加数滴二氨基联苯胺（DAB）检测底物，孵育。

DAB进入细胞后，辣根过氧化物酶催化其氧化，形成棕色沉淀。该反应使细胞内特定的RNA序列呈现棕色。不含靶RNA的细胞无过氧化物酶活性，因而不被染色。

接下来，用苏木精对组织切片进行复染。苏木精可与DNA结合，使组织切片呈现紫色染色。

用氨水（一种蓝化溶液）处理组织切片。该步骤可减弱紫色染色的强度，使细胞呈现蓝色。此步骤对于清晰观察细胞内的棕色斑点至关重要。

现在，将组织切片浸入浓度递增的乙醇中，随后用二甲苯（一种有机溶剂）处理。这些步骤可使组织切片脱水，以获得更清晰的图像。

最后，使用封片剂和盖玻片封固载玻片，并在光学显微镜下观察。细胞中出现点状棕褐色颗粒，表明目标 RNA 的存在。

取适量大小的离心管，分别加入等量的 DAB-A 和 DAB-B 溶液，每份组织切片配制约 120 微升 DAB 底物，并涡旋混匀。从切片架中依次取出每张切片，轻敲并快速甩动以去除多余液体，然后放回切片架中。用移液器将约 120 微升 DAB 混合液滴加到每张组织切片上，确保切片完全覆盖。室温孵育 10 分钟，随后进行复染。

每个载玻片上滴加一滴封片剂，然后将盖玻片置于载玻片上，静置使其自然干燥。数小时后，按照文中的描述，使用光学显微镜进行观察评估。