血脑肿瘤屏障（BBTB）模型：用于评估治疗药物向肿瘤递送的血脑屏障（BBB）模型改良方法

血脑屏障（BBB）是由内皮细胞和星形胶质细胞等脑细胞构成的选择性屏障，可调控血液与脑组织之间的物质转运。

为了构建血脑屏障模型，将膜插件倒置在培养皿盖上。

将星形胶质细胞接种于膜上。将培养板置于小室上方并进行孵育。

这会将星形胶质细胞捕获在膜与孔板表面之间。

将培养板倒置，使星形胶质细胞沉降至底部，并向孔中加入适量培养基。

向插入物中添加表达最佳紧密连接蛋白的内皮细胞，以增强细胞间连接，形成屏障所必需的细胞间接触。

孵育以使内皮细胞贴附于膜上。

移除用过的培养基，并将插入物转移至另一含有无生长因子星形胶质细胞培养基的孔中。

随后，向插入物中加入不含生长因子的内皮细胞培养基，并进行孵育。

缺乏生长因子会抑制细胞分裂，从而维持细胞间的接触并稳定屏障功能。

内皮细胞与星形胶质细胞相互作用，形成具有紧密连接的基底膜，类似于血脑屏障（BBB）。

接下来，将胶质瘤类球体接种到新的培养孔中。

将血脑屏障模型转移至这些球状体上，并进行孵育以形成血脑肿瘤屏障（BBTB）模型。

将靶分子添加到 BBTB 模型中，以评估其向肿瘤部位的递送情况。

在无菌细胞培养罩内，用 5 毫升无菌 PBS 轻柔洗涤培养的星形胶质细胞。使用真空泵轻轻弃去 PBS，加入 2 毫升细胞解离试剂，作用 5 分钟以使细胞脱落。

然后，向容器中加入 10 毫升无菌完全星形胶质细胞培养基，以抑制细胞解离试剂的活性。使用无菌血清移液管将解离的细胞从容器转移至无菌 15 毫升离心管中。

在室温下以 250 ×g 离心 3 分钟。同时，准备好插入物。使用无菌镊子将插入物脑组织面向上放置于无菌 6 孔板的盖子上。

离心结束后，小心弃去细胞悬液的上清液，并在细胞沉淀中加入1毫升ABM plus培养基，轻轻吹打管壁上的沉淀物，吹打5次，使星形胶质细胞重新悬浮。

然后，计数细胞并将细胞悬液密度调整为每400 µL ABM培养基中含150,000个细胞。将该细胞悬液加入至插入式培养膜的脑侧中央，用无菌移液器吸头借助毛细作用小心铺匀。

保持插入物的脑组织面朝上，将6孔板重新放回到插入物上。将孔板和插入物（脑组织面朝上）放入37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中，以促进细胞贴壁。

此后，将6孔板恢复至常规位置，此时插入物的血面朝上。加入培养基，并按照文本方案中所述继续孵育。在无菌细胞培养罩内，用5毫升无菌PBS小心清洗培养的内皮细胞。

使用真空泵轻轻弃去 PBS，并加入 2 毫升细胞解离试剂，作用 5 分钟以使细胞脱离。随后，向容器中加入 10 毫升无菌的完全内皮细胞培养基，以抑制细胞解离试剂的活性。

使用无菌的血清移液管将脱离的细胞从容器转移至无菌的15毫升离心管中。在室温下以250 ×g 离心3分钟。随后，弃去上清液，并通过在管壁上缓慢吹打细胞悬液至多五次，将内皮细胞沉淀重悬于1毫升EBM plus培养基中。

计数细胞，并将细胞