利用昆虫细胞中杆状病毒表达系统产生基孔肯雅病毒样颗粒

基孔肯雅病毒样颗粒（VLPs）是由包埋在脂质双层中的病毒包膜蛋白组成、不含遗传物质的非感染性结构。

为制备基孔肯雅病毒样颗粒（VLP），使用表达基孔肯雅病毒结构基因盒的重组杆状病毒感染Spodoptera frugiperda Sf9 昆虫细胞。该基因盒由杆状病毒启动子与编码衣壳蛋白和包膜蛋白的基孔肯雅病毒结构基因融合而成。

孵育过程中，杆状病毒包膜糖蛋白会结合昆虫细胞表面的受体，促进杆状病毒进入细胞并将病毒DNA释放到细胞质中，从而产生包含基孔肯雅病毒衣壳蛋白和包膜蛋白的多聚蛋白。

合成后，衣壳蛋白发生自催化裂解，产生含有包膜蛋白的前体多聚蛋白，并进入内质网（ER）。在内质网腔中，酶将前体多聚蛋白切割，生成单个蛋白，这些蛋白进入高尔基体区室进行进一步加工，形成蛋白异源三聚体。

高尔基体内的定位于高尔基体的蛋白酶切割蛋白异源三聚体，产生具有E2和E1蛋白的成熟包膜蛋白。这些包膜蛋白转运至膜上，出芽形成病毒样颗粒（VLPs），并释放到培养基中。

将感染的培养物转移至离心管中，离心以沉淀昆虫细胞。吸除含有病毒样颗粒（VLP）的上清液，并通过过滤去除碎片。

含有基孔肯雅病毒样颗粒的滤液已可用于免疫病理学研究。

在多点搅拌板系统上，以130 rpm持续搅拌，于旋转烧瓶中悬浮培养预先制备的斜纹夜蛾（Spodoptera frugiperda）Sf9细胞。为确保充分通气，培养液体积不应超过旋转烧瓶体积的一半。接下来，将预先制备的重组杆状病毒感染250毫升Sf9细胞（细胞密度为2 × 10⁶ 个/毫升），置于旋转烧瓶中，随后将细胞放回28°C培养箱中继续培养以表达CHIK病毒样颗粒（VLPs）。

使用台盼蓝排斥法检测细胞活力是否已降至70%至80%。确认后，将培养物直接从悬浮液转移至50毫升锥形管中，离心沉淀细胞。收集上清液，并在沉淀前通过0.22微米孔径膜过滤。