在昆虫细胞中使用杆状病毒表达系统生成基孔肯雅热病毒样颗粒

基孔肯雅病毒样颗粒 VLP 是由嵌入脂质双层内的病毒包膜蛋白组成的非感染性结构，不含遗传物质。

为了产生基孔肯雅热 VLP，用表达基孔肯雅热结构基因盒的重组杆状病毒感染草地贪夜蛾 Sf9 昆虫细胞。该盒由杆状病毒启动子与编码衣壳的基孔肯雅热结构基因和包膜蛋白融合而成。

孵育过程中，杆状病毒包膜糖蛋白与昆虫细胞上的表面受体结合。这促进杆状病毒进入病毒 DNA 并将其释放到细胞质中，产生含有基孔肯雅衣壳和包膜蛋白的多蛋白。

合成后，衣壳蛋白的自催化裂解产生在内质网 ER 中具有包膜蛋白的前体多蛋白。在内质网腔中，酶裂解前体多蛋白，产生单个蛋白质，进入高尔基体区室进行进一步加工，形成蛋白质异源三聚体。

高尔基体驻留蛋白酶切割蛋白质异源三聚体，产生具有 E2 和 E1 蛋白的成熟包膜蛋白。这些包膜蛋白易位到膜上，出芽成 VLP 并释放到培养基中。

受感染的培养物转移到试管中并离心以沉淀昆虫细胞。吸出含有VLP的上清液并过滤以去除碎屑。

所得滤液含有基孔肯雅热 VLP，可用于免疫病理学研究。

在多点搅拌板系统上以 130 rpm 连续搅拌，在旋转瓶中悬浮培养先前制备的 Spodoptera frugiperda 或 Sf9 细胞。将培养体积保持在不超过旋转瓶体积的一半，以便适当曝气。接下来，通过用预先制备的重组杆状病毒在旋转瓶中以每毫升 2 x 10⁶ 个细胞的密度感染 250 毫升 Sf9 细胞来表达 CHIK VLP，并将细胞放回 28 摄氏度的培养箱中。

使用台盼蓝排除来确定细胞活力是否已降至 70% 至 80%。确认后，将培养物直接从悬浮液转移到 50 毫升锥形管中，并将细胞旋转下来。收集上清液，并在沉降前通过 0.22 微米孔膜过滤它们。