什么是神经祖细胞？

神经祖细胞是可以分化为各种类型神经细胞的干细胞。

SFEBs是如何形成的？

SFEBs在无血清培养基中培养NPCs时形成，促进胚胎体的形成。

使用hiPSCs的意义是什么？

hiPSCs为研究和治疗应用提供了无限的NPCs来源。

分化过程需要多长时间？

分化过程大约需要30天，包括培养基更换和孵化。

SFEBs的应用是什么？

SFEBs可用于研究神经发育、疾病建模和药物测试。

该协议使用什么培养基？

该协议使用DM-1、DM-2和DM-3用于NPC分化的不同阶段。

无血清胚状体的发育和维持

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:52 min • July 8th, 2025

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从在分化培养基-1或DM-1中含有神经祖细胞或鼻咽癌聚集体的孔开始。

这些 NPC 是人类诱导多能干细胞或 hiPSC 在受控条件下使用 DM-1 产生的神经谱系的前体。

将 NPC 聚集体转移到放置在含有 DM-1 的孔内的膜插入物上，并去除多余的培养基。

将

培养基更改为 DM-2 并孵育。

DM-2 提供营养物质和分化因子，促进鼻咽癌成熟为不同的神经细胞类型。

未分化的 NPC 转化为胚样体，称为无血清胚样体或 SFEB，因为培养基缺乏血清。这些 EB 类似于发育中的大脑的形态。

将插入物转移到含有DM-3的孔中。

DM-3 含有对 SFEB 维持和生长所必需的生长因子。

孵育直至 SFEB 达到所需大小。

培养

细胞两周后，制备带有 40 微米细胞培养插入物和 1 毫升 DM1 培养基的六孔板。在加入培养的细胞之前，将这些板孵育至少四个小时。

接下来，使用200微升广口移液器吸头，用约20微升培养基收集两周大的细胞聚集体。用最少的溶液将 4 到 6 个聚集体转移到每个插入物上。去除多余的部分。

在此步骤中，快速、稳定地工作非常重要。在从 SFEB 周围去除介质时，您可能会看到 SFEB 由于表面张力而在溶液中移动。移除介质后可以重新定位它们。

将所有聚集体加载到插入物上后，将培养基更换为 1 毫升 DM2 并继续培养细胞。每隔一天用新鲜培养基更换 3/4 的培养基。培养 14 天后，开始向培养物中添加 DM3 培养基。继续培养 16 天以培养 SFEB。