杏仁核脑切片中神经元通路的可视化和映射

在小鼠大脑中，杏仁核包含与内侧前额叶皮层或 mPFC 神经元形成突触连接的神经元。

以杏仁核脑切片为例，其中 mPFC 神经元表达与荧光蛋白融合的光敏通道视紫红质。

切片放入记录室中，并在荧光显微镜下观察以定位 mPFC 神经元。

切换到明场视图并引入包含内部溶液的贴片移液器。

施加正压，将移液器推进到杏仁核神经元。

元接触后，会形成酒窝。

施加吸力以形成紧密的密封。

继续抽吸以破裂膜，与细胞内部建立接触。

切片以激活 mPFC 神经元通道视紫红质，触发正离子流入、动作电位产生和神经递质释放。

神经递质与突触后杏仁核神经元受体结合，引起离子流入和电流生成。

记录突触后神经元电流以分析 mPFC-杏仁核连接。

要准备贴片显微镜以激活纤维和细胞的光遗传学，请将安装的发光二极管或 LED 置于光传输路径上。使用功率计测量后焦平面和每个物镜输出端波长为 470 纳米的 LED 光强度。使用电子表格计算光强度（以毫瓦每平方毫米为单位），并为每个物镜创建校准曲线。

接下来，从界面室中取出急性杏仁核切片，并将其放置在安装在显微镜上的切片室中。放置切片，使界面室中朝上的切片表面在记录室中也朝上。以每分钟 1 至 2 毫升的速度用新鲜的含氧 ACSF 灌注切片。温度应约为 31 摄氏度。打开荧光灯，并为表达的特定荧光蛋白选择适当的滤光片组。使用 5 倍目标获取概览。

接下来，根据实验的需要打开或限制显微镜光路中的孔径。要获得贴片记录，请用内部溶液填充贴片移液器并将其安装在电极支架中。对贴片移液器施加正压，然后慢慢将其降低到浴液中。然后，在目视控制下，使用显微纵器将贴片移液器放入切片中。用贴片移液器从侧面和顶部接近感兴趣的神经元。

当移液器到达细胞表面时释放正压，如细胞表面可见的凹坑所示。施加负压以获得千兆密封。进一步抽吸以破裂膜贴片并获得全细胞记录。接下来，通过用470纳米波长的光激活通道视紫红质，同时记录来自细胞的电响应，用连接的LED刺激标记的纤维。

对于突触刺激，使用数据采集软件的数字输出来触发 LED。手动调节 LED 刺激强度。根据需要，对于下一个记录的细胞，或在存在特定测试物质的情况下，使用打开或限制的孔径重复刺激。