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将大鼠海马切片放入电生理学装置中。
将刺激电极放置在海马CA1区域的辐射层中,该区域接收来自CA3神经元的轴突投射。
在CA1顶端树突附近放置一个记录电极。
将另一个记录电极放置在金字塔层中。
受到刺激后,CA3 轴突投射去极化并产生动作电位,释放兴奋性神经递质。
这些神经递质与突触后 CA1 顶端树突结合,诱导正离子流入和膜去极化,称为兴奋性突触后电位或 EPSP。
记录电极测量值从顶端树突(场 EPSP 或 fEPSP)中求和的 EPSP。一旦获得稳定的 fEPSP 信号,降低电极并短暂停顿。
应用一系列刺激强度来确定与 fEPSP 斜率的输入输出关系,然后根据斜率选择并应用特定强度。
第二个记录电极测量来自 CA1 神经元细胞体的组合动作电位,从而产生群体峰值。
在突触标记和捕获实验中,在显微镜下,将两个刺激电极放置在CA1区域的辐射层中以刺激Schaffer侧支纤维,并将一个记录电极放置在CA1的顶端树突区域,以记录fEPSP反应。
在金字塔层层中放置另一个记录电极,以记录种群峰值。当所有电极接触切片时,进行测试刺激以确保在两个输入中都能获得适当的场 EPSP 信号。
一旦获得适当的 fEPSP 信号,请小心地使用机械手的精细运动旋钮将电极进一步降低约 200 微米,然后等待 20 分钟让切片恢复。之后,通过测量20微安至100微安电流强度范围内的磁场EPSP斜率来确定输入/输出关系。
然后,对于每个输入,将唤起最大场EPSP斜率40%的刺激强度设置为整个实验的恒定刺激。15 到 20 分钟后,开始记录基线。
在LTP/LTD 诱导前记录至少 30 至 60 分钟的稳定基线。