A Hydrophobic Tissue Clearing Method for a Rat Brain Tissue Sample

doi:10.3791/31501

Encyclopedia of Experiments
Neuroscience

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A Hydrophobic Tissue Clearing Method for a Rat Brain Tissue Sample

大鼠脑组织样品的疏水组织透明化方法

Protocol

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02:08 min

July 8, 2025

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Transcript

从脑组织样本开始，由于存在色素和脂质，该样本是不透明的。这些成分在荧光标记的神经元中引起光散射。

将组织依次孵育在甲醇浓度增加的溶液中，以去除其中的水分并逐渐使组织脱水。

然后，用浓甲醇处理该组织以消除残留的水分，确保完全脱水。

接下来，将组织转移到含有二氯甲烷和甲醇的初始透明溶剂中。

轻轻摇晃孵育，使溶剂深入渗透组织。

二氯甲烷可去除组织中的色素和脂质，减少光散射并提高透明度。

最后，将组织转移到疏水溶剂二苄基醚中，并在不摇晃的情况下孵育。

溶剂充当最终的透明剂，进一步提高组织透明度。

这个过程提高了光穿透性，使标记的神经元及其在脑组织中的连接能够更清晰地可视化样本。

在

室温下将样品在 20%、40%、60%、80% 和 100% 甲醇中连续孵育一小时。然后，将其在新鲜的 100% 甲醇中孵育过夜。第二天，将样品在室温下在室温下摇动，在新鲜制备的66%DCM中的33%甲醇中孵育3小时。三小时后，将样品在二苄醚中孵育，不要摇动直至透明。然后，将其储存在二苄基醚中直至成像。