通过荧光示踪鉴定小鼠视网膜神经节细胞亚型

荧光标记的视网膜神经节细胞或RGC的转基因小鼠中分离的视网膜组织放入记录室中。

视觉信息被传递到 RGC，其轴突通过视神经将其传递到大脑。

RGC 亚型的区别在于其树突的分支模式，树突在视网膜内层内分层成亚层。

压平视网膜组织并使用组织锚固定。

将腔室转移到显微镜载物台上并灌注含氧溶液以维持 RGC 活力。

使用红外照明，识别荧光RGC。

含有荧光示踪剂的移液器放在 RGC 上。

施加正压以防止堵塞。

切换到负压，将膜吸入移液器以形成密封。

施加抽吸力以破裂膜，建立全细胞构型，促进示踪剂扩散到树突中。

观察树突形态和分层以识别 RGC 亚型。

在含氧细胞外溶液中洗涤视网膜，并用塑料转移移液器将其转移到玻璃底记录室中。之后，使用镊子小心地将组织压平，感光层朝下。使用移液器去除多余的液体。并使用带有尼龙网的铂环固定组织。然后用含氧细胞外溶液填充腔室并将其安装到显微镜载物台上。用含氧细胞外溶液以每分钟2至4毫升的速度灌注组织。

为了准备此过程，请使用微量移液器拉出一些玻璃微量移液器进行电生理记录。使用IR-DIC光学器件观察神经节细胞层。然后使用约480纳米的落射荧光鉴定GFP加神经节细胞。接下来，在DIC中找到装有细胞内溶液的移液器。施加轻微的正压并将任何电压归零amp升压器上的偏移。

随后，将玻璃微量移液器放在GFP阳性池上，并应用测试电压命令步骤来监测密封阻力。负压应在移液器和细胞膜之间形成千兆欧姆密封。形成稳定的密封后，通过施加短暂的负压脉冲来破裂膜，以获得整个细胞的进入。等待一到两分钟，让细胞的树突充满荧光示踪剂。