小鼠海马体小胶质细胞动力学的体内双光子成像

取一只在小胶质细胞中表达荧光蛋白的麻醉转基因小鼠。在双光子显微镜下将其固定在带有电动载物台的立体定位框架上。

头骨装有一根玻璃底金属管，可轻轻地将海马角膜氨 1 或 CA1 区域上方的肺泡压平，确保光学界面清晰，而不会

对下层组织施加过大的压力。

金属管装满水以优化光传输。

激活激发波长的脉冲激光。

使用来自脑实质的荧光和来自金属管的反射光，调整CA1区域的焦点。

重新定位鼠标头部，使玻璃底部平行于成像平面，确保整个视野的均匀聚焦。

调整物镜以获得最佳分辨率，并观察CA1区域的体内小胶质细胞动力学。

接下来，对齿状回进行成像，其中荧光小胶质细胞确认了 CA1 的完整性。

鼠标放在双光子显微镜物镜下方的头部固定装置中，并放在电动XY扫描台上。然后用水填充玻璃底部和物镜之间的空间，而不会产生气泡。在脉冲激光的连续照明下，在脑实质发出的荧光和金属管边缘的反射光的引导下，将焦点调整到CA1。

通过倾斜头固定装置来调整鼠标头的角度，使玻璃底部与成像平面平行。然后，调整物镜的校正环，以在CA1中目标结构的深度处实现最高分辨率。接下来，确认齿状回分子层（DG）中的荧光细胞在距玻璃底部500微米的深度处在整个视场中成像。只有在手术成功的情况下，才能立即检测到 DG 信号。

确保小胶质细胞已恢复其分支形态。然后对CA1中的目标层进行体内成像。