鼠标应用结扎Peyer氏修补肠袢含量评价M细胞的细菌吸收

在一个专门的卵泡相关Peyer氏斑上皮M细胞在肠道相关淋巴组织的粘膜免疫监视中发挥的重要作用。在这里，我们描述了细菌transcytosis M细胞的评价方法

该程序的总体目标是检查位于肠粘膜免疫系统内的 M 细胞对细菌的摄取。该程序的第一步是暴露并结扎麻醉小鼠的肠道 pyres 斑块。然后将荧光细菌注射到连接区域。

一小时后，切掉柴堆斑块。然后渗透组织中的细胞并进行 M 细胞标志物 GP 2 染色。最后，使用共聚焦显微镜观察样品，并且可以可视化细菌被 M 细胞转胞吞作用。

除了提供对 m 细胞细菌转胞吞作用的分子基础的见解外，dismissal 还可以应用于其他系统。例如，该方案可用于辅助细胞通透性，并在框架肠道中使用氯和微生物使用无菌玻璃涂抹器在 LB 螺旋板上划线荧光细菌，并在 37 摄氏度下孵育板，直到可见单个菌落。从固体螺旋钻上挑选一个菌落，并将其接种到两毫升新鲜的 LB 培养基中。

然后在摇床上以 37 摄氏度培养细菌过夜。发酵剂培养物生长后，将 500 微升细菌转移到 4.5 毫升 LB 培养基中，并在 37 摄氏度下孵育这种新培养物 3 到 4 小时，或直到其 600 纳米的光密度达到 1，表明细菌生长处于对数期。此时，将培养物在 4 摄氏度下以 3000 倍 G 离心 5 分钟，以离心后收获细菌，弃去 snat 并用 5 毫升无菌 PBS 洗涤沉淀 重复洗涤步骤后，Resus 将细菌悬浮在 5 毫升 PBS 中。

将小鼠置于持续的 isof 氟麻醉下后，使用无菌工具无菌打开小鼠的腹部。首先暴露小肠并找到 PI 的补丁。找到 PI 的补丁后，使用无菌缝纫纱线将肠道结扎到补丁一侧约 5 毫米处。

在手术过程中注意避免切断血管。连接肠道后，使用注射器将 50 微升细菌悬浮液（约 10 微升）注射到 7 个 CFU 中，注射到肠道松散侧的已结扎的 pyres 补片环中。然后用纱线结扎肠道的另一侧。

用夹子关闭小鼠的腹部，并在安乐死前将小鼠保持在麻醉状态一小时。要收获柴堆补丁，请小心地切除柴堆补丁。然后用力冲洗 PBS 通过收获的肠道切片数次，以清洗 PI 贴片的顶端侧并去除多余的粘膜液和细菌。

洗涤 PI 的贴片后，将其放入 24 孔板的孔中，并添加细胞效应或细胞渗透溶液。将样品在冰上孵育 1 小时。固定 P'S 贴片后，将其浸泡在 1 毫升烫发洗涤缓冲液中 5 分钟。

重复此洗涤步骤 3 次。然后将样品置于 1 mL 封闭缓冲液中，并在冰上孵育 30 分钟。封闭步骤后，添加抗小鼠 GP 2 单克隆抗体至终浓度为 5 μg/mL，并在 4 摄氏度下孵育样品过夜以对 M 细胞进行染色。

接下来，像以前一样清洗样品。为偶联抗体添加二级地板，并将样品在冰上避光孵育 2 小时。样品染色后，在 PBS 中轻轻洗涤样品。

然后将三到四片圆形盖玻片放在载玻片上，将 PIRES 贴片嵌入 200 微升 30% 甘油的 PBS 溶液中。在载玻片上，使用 DM IRE 双共聚焦激光显微镜或 Delta 视觉修复反卷积显微镜观察样品。在这张图片中，可以看到绿色 GFP 标记的鼠伤寒沙门氏菌被顶端质膜上以红色显示的 GP 2 包围。

在这个旋转的图像中，细菌在顶端下细胞质囊泡内可见。看完这个视频，你应该对如何使用连接的 pys 肠 Lu asay 评估 M 细胞的细菌转胞吞作用有一个很好的了解。