小鼠量度本地过敏反应

该程序的总体目标是测量血管通透性的变化，以量化局部过敏反应。这是通过首先使动物对过敏原（如 O 白蛋白）敏感来实现的。第二步是通过皮内注射过敏原来挑战耳朵。

然后将 Evan 的蓝色染料注射到尾静脉中。最后一步是通过孵育过夜从受攻击的耳朵中提取染料。在形式上，酰胺最终是一种光谱光度法，用于量化进入耳朵的染料量。

与现有方法相比，该技术的主要优点是染料外渗是通过光谱法测量的。这意味着该测定不容易受到观察者偏差的影响。一般来说，刚接触这种方法的人会很挣扎，因为皮内和尾静脉注射在技术上具有挑战性，需要大量练习才能达到熟练程度。

首先将等分试样的卵原液置于室温下使用。在室温下，将卵原液稀释至每毫升 1 毫克浓度。使用 5 毫升聚苯乙烯圆底管。

以中等速度涡旋试管，并小心加入等体积的完全均质化的样品。将明矾滴加到 ova 溶液中。同时，使用相同的技术以一比一的比例制备混入 PBS 中的明矾的阴性对照溶液。

然后盖上试管并将它们固定在涡旋上。在连接试管的情况下，以最低设置运行涡旋半小时。溶液准备好后，立即进行 BAB 小鼠致敏。

将卵明矾混合物装入 1 毫升注射器中。然后用 27 号针头将 100 微升注射到每只小鼠的腹膜中。在接下来的三周内，对使用不含卵的明矾溶液的阴性对照小鼠重复此作。

重复此过程，在最后一次注射后每只小鼠总共注射 3 次，至少等待两周后再从冷冻卵子原液中进行局部过敏反应测定。首先在 PBS 中制备每毫升 5 毫克的工作溶液。使用 5% ISO 氟短暂涡旋。

麻醉致敏的小鼠，当它变得不动时，将 iso 氟调低至 3%现在将 10 微升卵制剂装入三个 10 胰岛素注射器，并用 31 号针头盖住它，并在第二个注射器中装入 10 微升 1 个 XPBS。接下来，在解剖显微镜下用透明胶带粘性面包裹一根 15 毫升的锥形管，将麻醉小鼠左耳的背侧固定到管子上。将 PBS 注射器的针头斜面朝上插入耳朵的两片叶子之间，然后慢慢注入全部 10 微升。

避免撞击血管。注射成功将导致明显的皮内波动。将整个音量注入耳朵至关重要。

如果任何液体从注射部位泄漏出来，则动物不能用于分析。此外，如果针头完全穿过耳朵或划伤耳朵表面，则检测无效，因为这些创伤会混淆结果进入右耳。在三分钟内使用相同的方法注射卵子。

将鼠标转移到限制器上，并将其放在加热灯下。然后缓慢地将 200 微升 0.5% 埃文思蓝染料注入尾静脉。使用 27 号针头，如果在注射所有染料之前血管被破坏，快速注射可能会造成损害。

继续在尾巴的另一侧注射。现在等待 10 分钟，然后用二氧化碳对小鼠实施安乐死，然后进行宫颈脱位。动物被安乐死后，用镊子和剪刀去除耳朵。

用镊子抓住耳边，不要对注射部位施加压力。然后切近耳朵底部的软骨脊，但不要穿过耳朵底部的软骨脊。收集尽可能多的组织。

现在采取适当的预防措施，将每只耳朵的 700 微升甲酰胺分装到微量离心管中。将耳朵转移到每个管子上，并在 63 摄氏度的干热块中孵育过夜，第二天大部分染料将被提取，但耳朵可能会出现轻微的蓝色。将每个样品 300 微升一式两份添加到 96 孔板中。

避免转移任何毛皮，不要为空白形成任何气泡。用 300 微升甲酰胺加载两个孔。然后测量 620 纳米处的吸光度。

从背景中减去值并分析结果。PBS 致敏动物对卵子攻击或 PBS 攻击没有反应。不出所料，两只耳朵都是白色的。

在 OVA 致敏动物中接受 PBS 攻击的年份是全白色或浅蓝色，定位于注射部位，在那里他的耳朵接受 OVA 攻击在施用染料后 10 分钟内逐渐变暗，PBS 致敏动物的 IDE 处理的耳组织在 PBS 和 OVA 攻击后吸光度读数可以忽略不计。而对于卵致敏动物，PBS 注射通常导致平均吸光度读数为 0.13。相反，50 μg 卵子攻击导致平均吸光度读数为 0.58。

用于挑战的卵子数量可以在限制内进行调整。例如，20 μg 的激发试验导致平均吸光度为 0.30。然而，小于 20 μg 的激发试验并未给出可靠的结果。

虽然一旦一个人精通皮内和静脉注射就具有挑战性，但这项技术可以在大约 15 分钟内对一只动物进行。两个人一起工作，一个人进行耳部注射，另一个进行尾静脉注射。该程序可以在大约一个小时内对 10 只动物进行。该测定法用途广泛，因为它可用于主动和被动皮肤过敏反应。

它也可用于多种过敏原。不要忘记 isof 氟会对人类生殖系统产生负面影响。仅在通风良好的房间内使用，并在诱导室上安装一个清除罐，以中和废气（如果您怀孕）。

使用氟时，请佩戴碳过滤面罩以尽量减少接触。