调优并行分段流动列和启用多重检测

该 HPLC 程序的总体目标是调整平行分段流柱以实现多重检测。该方法回答了健康和福祉、环境科学、法医学以及任何需要分析复杂样品（如生物发现）的领域的关键问题。该技术可以进行全面的样品分析，同时还可以获得有关复杂混合物中物质的化学和生物活性性质的信息。

多重检测方案还允许快速分析。这种方法有助于开发定义复杂混合物（如咖啡和葡萄酒）的化学指纹的策略，使制造商能够区分他们的产品和廉价的假冒品种。最初，不将整个样品发送到一个检测器进行准确分析可能会让人感觉不合常规。

然而，每个流中的分析物浓度高于常规色谱柱的总流速。首先，分别用 100% UE 水和纯甲醇设置流动相 A 和 B 的 HPLC 仪器。如果要使用 MS 检测器，请在两个流动相中加入 0.1% 甲酸，然后根据制造商的说明吹扫 HPLC 泵。

组装 MS UV VS.和 DPPH 探测器。按照制造商的说明。确保组件布置正确，使检测器管路中的死体积最小。

然后将 UV VISTA 检测器波长设置为此处样品的特定波长。MS 检测器为 280 纳米。使用阳性模式进行总离子计数或全扫描检测方法的 TIC 分析。

将 MS 检测器的温度和气体流量平衡到以下值。蒸发器温度 500 摄氏度，毛细管温度 350 摄氏度，辅助气体流量 40 个单位，扫气流量 5 个单位，鞘气速率 60 个单位，喷雾电压 3.5 伏。要制备 DPPH 自由基试剂，首先将 25 毫克 DPPH 自由基溶解在容量瓶中的 250 毫升甲醇中。

向溶液中加入 250 μL 甲酸，并对溶液进行超声处理 10 分钟。然后盖上烧瓶和箔纸以防止光照。接下来，按照制造商的建议，使用 DPPH 自由基溶液吹扫泵，以设置 DPPH 自由基系统。

确保泵管路固定在 T 形件的入口处，然后将 100 微升反应线圈连接到 T 形件的出口。将检测器连接到反应线圈 ENC 外壳的另一端，即反应线圈和柱温箱。最后，将 DPPH 自由基 UV V 检测器设置为 520 纳米。

要构建平行分段流或 PSF 色谱柱，首先将色谱柱入口连接到 HPLC 仪器。接下来，使用一根管路将中心端口连接到 MS 检测器。使用相同尺寸的管路将一个外周色谱柱端口连接到 UV VS 检测器，将另一个外周色谱柱端口连接到 DPPH 自由检出系统的 T 件。

用色谱柱塞子堵住任何未使用的外围端口。对于内径为 4.6 毫米、长度为 250 毫米的色谱柱，将 HPLC 的流速调整为每分钟 1 毫升 100% 流动相 B。平衡 20 分钟。

要开始调整 PSF 系统，请先撕开空收集容器。使用这些样品瓶分别从 UV VS 中收集流动相。和 DPPH 自由基端口。记下收集时间段，并在每个容器中收集至少 500 毫克溶剂。

接下来，称量收集容器以确定流动相的质量，并将质量除以甲醇密度，以计算从每个端口收集的流动相的体积。最后，确定 MS 检测器的流速，并计算所有检测器的流速比，作为文本方案中指定的总流量的百分比。如果流量比例与理想值有很大偏差，请在必要时添加额外的管路以调整背压并重复收集和计算过程。

最后，设置 DPPH 自由式试剂泵的流速，以匹配连接到检测器的出口端口的流速。对咖啡样品进行多重 HPLC 分析。记录 DPPH 自由基 UV VS 的能力。同时，Ms.Chromatograms使样品中对DPPH自由基有阳性反应的化合物能够根据

保留时间对齐与UV与MS响应轻松匹配，其中MSS TIC检测器观察到阳性响应，记录峰的分子量。不同检测过程之间易于匹配峰，可以快速、更高效地对复杂样品（如咖啡）进行筛选和表征。一旦掌握了该技术，就可以在大约一个小时内完成设置，并按照此程序进行样品分析。可以使用其他检测器（如示差折光荧光）和基于化学的检测（如化学发光）来获取额外的样品信息。

观看此视频后，您应该认识到多重检测过程对于更好地了解复杂样品的重要性。此外，使用平行分段流柱进行多重检测是进行生物勘探的一种非常有效的方法。