在c-fos蛋白免疫组织学检测:一个有用​​的工具，中央通路在特定的生理反应所涉及的标记在体内和离体

这种针对 c-FOS 蛋白的免疫组织化学检测的总体目标是评估脑组织中的神经元活动。这种方法可以帮助回答我们在神经生理学领域的关键问题，例如脑映射和识别参与特定生理调节的大脑区域。该技术的主要优点是 c-FOS 基因在没有刺激的情况下具有低表达，这允许在我们的测试模拟中更容易量化神经元活动。

要开始此程序，请在室温下用 0.1 摩尔 PBS 洗涤冠状脑干切片 10 分钟。重复洗涤 3 次。接下来，在室温下将切片与 3% 过氧化氢在 0.1 摩尔 PBS 中孵育 30 分钟，以抑制内源性过氧化物酶活性。

然后，在室温下用 0.1 摩尔 PBS 洗涤切片 10 分钟，重复 3 次。通过在室温下将冠状切片与 2% 山羊血清的 PBST 溶液孵育 1 小时来阻断非特异性结合位点。随后，在 4 摄氏度下，用 PBST 中针对 c-FOS 蛋白的快速多克隆抗体和 0.25% 牛血清白蛋白孵育切片 48 小时。

在此步骤中，在室温下用 0.1 摩尔 PBS 洗涤切片 10 分钟，然后重复该过程 3 次。接下来，在室温下用含 0.25% 牛血清白蛋白的 PBST 中的生物素化山羊抗兔抗体孵育冠状切片 1 小时。1 小时后，在室温下用 PBST 洗涤切片 10 分钟，然后重复 3 次。

然后，将冠状切片与亲和素生物素过氧化物酶复合物在 PBST 中孵育 1 小时。随后，在室温下用 PBST 洗涤切片 10 分钟，然后再重复两次。然后，在室温下用 05 摩尔 Tris 缓冲液洗涤切片 10 分钟，再重复洗涤 2 次。

接下来，在室温下将冠状切片与 DAB、硫酸镍铵和过氧化氢在 05 摩尔 Tris 缓冲液中孵育。向剩余的 Tris 缓冲液中加入 17 微升过氧化氢。当染色强度最佳时，在室温下用 0.1 摩尔 PBS 洗涤切片 10 分钟以终止反应，然后重复洗涤 4 次。

然后，用蒸馏水清洗切片。现在，用刷子小心地将它们按头尾顺序铺在载玻片上，将切片连续安装在载玻片上。之后，让切片风干并根据样品清楚地标记载玻片。

然后，将载玻片在室温下浸入无水酒精浴中 30 秒，使切片脱水，并重复该过程两次。接下来，将玻片在室温下浸入二甲苯浴中 3 分钟，然后重复两次。随后，在每张载玻片上滴入五滴封固剂。

将盖玻片放在其上，避免形成气泡。让玻片风干 48 小时。这里展示的是 medula oblangata 的一部分图画。

虚线区域显示孤立束核的连合部和正中部。矩形表示拍摄显微照片的区域。这些是 c/mNTS 在常氧或缺氧条件下的显微照片。

黑色箭头显示 c-FOS 阳性细胞。这是一个直方图，显示了在常氧或缺氧条件下 c/mNTS 中每个切片的 c-FOS 阳性细胞的平均数量。缺氧条件下 c-FOS 阳性细胞的数量显著高于常氧状态。

看完这个视频，您应该对如何使用 c-FOS 免疫组化检测作为参与特定生理刺激的中枢通路的标志物有一个很好的了解。