Name: 小鼠小肠淋巴细胞的分离和流式细胞表征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: 学习从小鼠小肠不同区室分离单细胞群体并进行流式细胞表征的方法。该技术快速、可重复，无需繁琐的Percoll梯度，有助于研究黏膜免疫学及肠道微生物群对免疫系统发育的影响。

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NKS 获得美国国立卫生研究院（NIH）K08 AI108690 项目资助。

所有研究均在哈佛医学院机构动物护理和使用委员会（IACUC）的严格审查和指导下进行，该委员会符合美国实验动物科学协会（AALAS）制定的兽医标准。
1. 通过共同饲养进行细菌的水平传播（可选）&#160;
<ol>
	<li>为尽量减少外源性污染（特别是使用无菌小鼠时），在组装无菌一次性笼盒时应采用无菌操作技术，并使用经过高压灭菌的饲料和饮水。</li>
	<li>使用耳标或耳缘打孔对携带不同微生物群的6周龄C57BL/6小鼠进行个体标记，并将它们共同饲养于同一笼中。由于小鼠具有食粪行为，会摄取笼底的粪便颗粒，因此微生物可在小鼠之间自然发生水平传播。</li>
	<li>将小鼠共同饲养至少1周，以确保在分析前有足够时间完成微生物的传播及免疫系统的改变。</li>
</ol>
2. 小肠上皮内层和固有层单细胞悬液的制备
<ol>
	<li>溶液的配制
	<ol>
		<li>制备提取液（每根小肠）：30 ml RPMI + 93 &#181;l 5% (w/v) 二硫苏糖醇 (DTT) + 60 &#181;l 0.5 M EDTA + 500 &#181;1 升胎牛血清（FBS）。使用前立即加入 DTT。</li>
		<li>准备消化液（每小肠一份）：25 ml RPMI + 12.5 mg dispase + 37.5 mg collagenase II + 300 &#181;l FBS。使用前立即加入dispase和collagenase。</li>
		<li>所有在 37 °C 进行的孵育步骤 &#176;C，将溶液预热至37 &#176;C.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>以 CO₂ 安乐死小鼠2 窒息后行颈椎脱位</li>
	<li>将小鼠背侧朝下放置，用70%乙醇喷洒腹部。使用剪刀沿腹侧正中线从耻骨联合至剑突依次剪开皮肤和腹膜筋膜，进行剖腹手术，从而暴露腹腔。</li>
	<li>使用剪刀横断幽门括约肌，将小肠与胃分离。轻柔地从小肠系膜中分离小肠，去除肠系膜脂肪。
	<ol>
		<li>为完全移除小肠，在回盲交界处进行第二次切割。将分离的小肠置于冷（即., 4 &#176;C) 含 10% FBS 的 RPMI，以最大化细胞存活率。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用弯头镊子轻轻去除大块脂肪组织。在去除脂肪时需小心，避免撕裂肠组织本身。</li>
	<li>使用连接在注射器上的18 G饲喂针，以15–20 ml冷的PBS轻轻冲洗肠道，以去除肠内容物。</li>
	<li>使用剪刀切除派尔集合淋巴结（PPs），并将其置于含5%胎牛血清（FBS）的冷RPMI培养基中。PPs位于小肠对系膜侧，呈多叶状白色团块。根据小鼠品系的不同，每只小鼠通常有8至12个PPs。</li>
	<li>将小肠切成3至4英寸长的节段。</li>
	<li>用润湿的RPMI将每段小肠在纸巾上滚动，以去除残留脂肪，同时使用钝头解剖刀将脂肪从组织上分离。</li>
	<li>用弯头镊子插入肠段并夹住组织远端，将组织翻转；然后用一把直头镊子从弯头镊子上轻轻取下组织段（从近端开始），使组织内翻。</li>
	<li>将组织片段放入含有30 ml提取液和一枚搅拌子的烧杯中。盖紧杯盖，在37℃下以500 rpm搅拌15分钟。 &#176;C；搅拌应充分但不产生湍流。</li>
	<li>孵育后，使用钢质滤网将组织碎片与含有上皮层的上清液分离，上清液应呈浑浊状。此上清液含有肠上皮内淋巴细胞，可根据需要进一步分析；如需分析，可继续进行步骤2.18至2.23的样品过滤操作。</li>
	<li>用手轻轻搅动组织碎片以去除残留的提取液。</li>
	<li>将组织置于干燥的纸巾上，并反复翻转数次，以促进去除未被提取液释放的残留黏液。</li>
	<li>将组织碎片放入含有 600 μl 的 1.5 ml 离心管中 &#181;消化液的量。</li>
	<li>用剪刀将组织剪碎，直至组织碎片不再粘附在剪刀上且溶液呈现均一状态。此步骤对于确保组织完全酶解至关重要。</li>
	<li>将切碎的小肠加入含有 25 ml 消化液的容器中，37℃、500 rpm 搅拌 30 分钟 &#176;C. 消化进行至一半时（即用移液管上下吹打（15 分钟时），以帮助打碎组织中的大块团块。</li>
	<li>将消化后的组织（或若处理IELs则取自步骤2.12的上皮层）通过100 μm细胞滤器过滤 &#181;将细胞滤筛中的液体过滤至50 ml离心管中，用20 ml含10% FBS的RPMI冲洗滤筛。</li>
	<li>在 4 ℃ 下以 500 × g 离心 10 分钟 &#176;C.</li>
	<li>小心倾倒上清液，并将沉淀物重悬于 1 ml 含 10% FBS 的 RPMI 培养基中。</li>
	<li>将重悬的细胞通过40 μm细胞滤网过滤 &#181;将细胞滤过筛置于50 ml离心管中，用20 ml含10% FBS的RPMI冲洗滤过筛。</li>
	<li>在 4 ℃ 条件下，以 500 × g 离心力离心 10 分钟 &#176;C.</li>
	<li>小心倾去上清液，将沉淀重悬于 1 ml 含 2% FBS 的 RPMI 中。</li>
</ol>
3. 从小肠派尔集合淋巴结制备单细胞悬液
<ol>
	<li>将切除的派尔集合淋巴结（PPs）转移至含有25 ml消化液和搅拌子的杯子中。盖紧盖子，在37 °C下以500 rpm转速旋转10分钟。</li>
	<li>将消化后的派尔集合淋巴结通过40 µm细胞滤筛过滤至50 ml离心管中。若仍有团块残留，可用1 ml注射器推杆的平端将其压过滤筛。</li>
	<li>用含10%胎牛血清（FBS）的10 ml RPMI冲洗滤筛。</li>
	<li>在4 °C下以500 × g离心10分钟，收集过滤后的溶液。</li>
	<li>小心弃去上清液，将沉淀物重悬于1 ml含2% FBS的RPMI中。</li>
</ol>
4. 流式细胞术表面染色
<ol>
	<li>分装适量体积的细胞（例如., 200 &#181;将 LPLs 的 l 加入 96 孔圆底板中。</li>
	<li>在 4 ℃ 下以 500 × g 离心 5 分钟 &#176;C. 通过倒置培养板弃去上清液。</li>
	<li>将细胞重悬于 90 &#181;含 2% FBS 和 1:100 稀释度抗 CD16/32（Fc 封闭）的 RPMI 溶液，4 ℃孵育 10 分钟 &#176;C.</li>
	<li>加入10 &#181;l PBS。在 4℃ 下以 500 × g 离心 5 分钟 &#176;C. 通过倒置培养板弃去上清液。</li>
	<li>将细胞重悬于 250 &#181;l PBS。在 4℃ 下以 500 x g 离心 5 分钟 &#176;C. 将培养板倒置，弃去上清液。</li>
	<li>（可选）如需要，可按照试剂生产商的说明书用活细胞染料对细胞进行染色。</li>
	<li>将细胞重悬于 100 &#181;l 1% 甲醛用于固定细胞，孵育 1 小时&#160;在4℃避光条件下 &#176;C.</li>
	<li>加入200 &#181;l PBS。在 4℃ 下以 500 × g 离心 5 分钟 &#176;C. 将培养板倒置，弃去上清液。</li>
	<li>将细胞重悬于 250 &#181;l PBS。在 4℃ 下以 500 × g 离心 5 分钟 &#176;C. 将培养板倒置，弃去上清液。</li>
	<li>将细胞重悬于 200 &#181;l PBS。使用流式细胞仪分析细胞。</li>
</ol>

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<li>Carrasco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+lymphocyte+isolation+methods+for+endoscopic+biopsy+specimens+from+the+colonic+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of lymphocyte isolation methods for endoscopic biopsy specimens from the colonic mucosa.</a> J Immunol Methods. 389 (1-2), 29-37 (2013).</li>
<li>Van Damme, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+agents+and+enzymes+used+for+the+extraction+of+gut+lymphocytes+influence+flow+cytometric+detection+of+T+cell+surface+markers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Chemical agents and enzymes used for the extraction of gut lymphocytes influence flow cytometric detection of T cell surface markers.</a> J Immunol Methods. 236 (1-2), 27-35 (2000).</li>
</ol>

未声明利益冲突。

我们介绍一种用于分离和流式细胞术表征小肠淋巴细胞的方案，包括固有层淋巴细胞（LPLs）、上皮内淋巴细胞（IELs）以及派尔集合淋巴结（PPs）中的淋巴细胞。对于希望评估微生物群变化如何影响小肠免疫系统的研究者，我们详细描述了在携带不同微生物群的小鼠之间进行微生物水平传播的简便步骤。尽管本方案重点针对小肠，但该方法同样适用于大肠淋巴细胞的分析，唯一的区别在于大肠中不存在可被肉眼识别的派尔集合淋巴结（尽管存在结肠斑块，但通常无法通过肉眼观察到）。
从小肠组织中获得最佳淋巴细胞分离效果涉及多个关键步骤。仔细去除脂肪组织对于确保淋巴细胞的存活率和获得最大产量至关重要。此外，二硫苏糖醇（DTT）是一种在上皮细胞提取过程中起关键作用的黏液溶解剂。鉴于其性质不稳定，建议将5%的溶液分装成单次使用剂量，于≤-20 °C保存，并避免对未用完的部分进行再次冷冻。尽管在提取液中使用乙二胺四乙酸（EDTA）有助于去除上皮细胞15，但在消化过程中，EDTA的存在——以及过量的胎牛血清（FBS）或黏液——可能会抑制胶原酶的活性。已有研究表明，所用胶原酶的浓度会差异性地影响细胞表面标志物的...

小肠的主要功能通常被认为是营养物质的消化与吸收1。尽管这一代谢功能显然至关重要，但小肠在保护宿主免受肠腔内持续存在的环境抗原侵袭方面也具有同等重要的作用2。肠道通过仅由单层细胞构成的上皮层，将外部环境（例如，管腔内的抗原）与宿主的内部环境分隔开来。因此，小肠免疫系统面临一项艰巨的任务：必须精确调控其反应阈值，允许来自食物和共生微生物的外来抗原在几乎不引发免疫反应或仅引发轻微免疫反应的情况下进入黏膜，同时对入侵的病原体及其他&#34;有害&#34;抗原产生强有力的免疫应答。对这些抗原产生过度或不适当的免疫反应可导致病理性疾病（例如，炎症性肠病、1型糖尿病、多发性硬化症），必须加以避免3-6。
总体而言，胃肠道被认为是人体最大的免疫器官，含有超过70%的抗体分泌细胞7。小肠免疫系统由三个主要区室组成——固有层（LP）、上皮内层和派尔集合淋巴结（PPs），每个区室均含有特征性的淋巴细胞群体2。固有层淋巴细胞（LPLs）主要为TCRαβ+ T细胞，约含20%的B细胞；上皮内淋巴细胞（IELs）中B细胞极少，TCRγδ+ T细胞数量多于TCRαβ+ T细胞；而派尔集合淋巴结（PPs）作为嵌于小肠壁内的次级淋巴器官，约含有80%的B细胞。尽管这些解剖区域各自具有略微不同的功能和发育基础，但它们协同作用，共同保护宿主免受病原体侵害。
此外，人们日益认识到微生物群是肠道免疫系统发育的关键决定因素，并越来越重视特定微生物与特定细胞谱系发生之间的对应关系8,9。而且，鉴于肠道免疫系统的“教育”过程会影响解剖学上远端部位的免疫应答（例如，关节炎、多发性硬化症、肺炎），现已明确肠道免疫系统的发育与比以往所认识到的更多的疾病过程相关10-12。因此，对肠道免疫系统进行定量评估的兴趣已超越宿主-病原体相互作用的范畴，扩展至宿主-共生微生物相互作用以及多种全身性疾病的发病机制研究。
鉴于目前分离肠道淋巴细胞的方法存在较大差异，一种在保证产量、细胞活力和实验重复性的同时兼顾所需时间的优化方法变得愈发重要。涉及Percoll梯度离心的方案耗时且劳动强度大，可能更容易引入人为误差，从而导致细胞得率和活力不稳定13。本文提供了一种优化的实验方案，用于从小肠全部三个免疫区室中分离和鉴定淋巴细胞。此外，考虑到人们对微生物诱导黏膜免疫系统变化的兴趣日益增加，本方案还包括可用于实现小鼠间微生物水平传播的步骤，以评估这些变化对肠道免疫系统的定量影响。

<table><tbody><tr><td>无菌手套</td><td>Kimberly-Clark</td><td>555092</td><td></td></tr><tr><td>无菌小鼠笼</td><td>Innovive</td><td>MS2-AD</td><td>包含笼盖、笼底和Alpha-Dri垫料</td></tr><tr><td>金属饲料盒</td><td>Innovive</td><td>M-FEED</td><td></td></tr><tr><td>饮水瓶</td><td>Innovive</td><td>M-WB-300</td><td></td></tr><tr><td>卡片架</td><td>Innovive</td><td>CRD-HLD-H</td><td></td></tr><tr><td>可高压灭菌的啮齿类动物饲料（NIH-31M）</td><td>Zeigler</td><td>4131207530</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 培养基</td><td>Gibco</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>二硫苏糖醇（DTT）</td><td>Sigma</td><td>D5545-5G</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M EDTA（pH 8.0）</td><td>Ambion</td><td>AM9262</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>GemBio</td><td>100-510</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Invitrogen</td><td>17105-041</td><td>方案中的浓度基于1.878 U/mg的酶活性</td></tr><tr><td>胶原酶II型&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>17101-015</td><td>方案中的浓度基于245 U/mg的酶活性</td></tr><tr><td>解剖剪刀</td><td>Roboz</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>饲喂针头（18 G，2&quot; 长）</td><td>Roboz</td><td>FN-7905</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 注射器</td><td>BD</td><td>305482</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>一次性手术刀（15号刀片）</td><td>Miltex</td><td>4-415</td><td></td></tr><tr><td>弯头镊子</td><td>Roboz</td><td>RS-5211</td><td></td></tr><tr><td>直头镊子</td><td>Roboz</td><td>RS-5132</td><td></td></tr><tr><td>多功能杯，120 ml</td><td>VWR</td><td>89009-662</td><td></td></tr><tr><td>搅拌子</td><td>VWR</td><td>58949-062</td><td></td></tr><tr><td>多孔位搅拌板，9孔位</td><td>VWR</td><td>12621-048</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢锥形滤网，3英寸&amp;nbsp;</td><td>RSVP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml 离心管</td><td>Eppendorf</td><td>0030 125.150</td><td></td></tr><tr><td>100 &amp;mu;m 细胞滤网</td><td>Falcon</td><td>08-771-19</td><td></td></tr><tr><td>40 &amp;mu;m 细胞滤网</td><td>Falcon</td><td>08-771-1</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 锥形离心管</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 注射器</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>96孔圆底培养板</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD16/32（Fc阻断剂）</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>（可选）可固定的活率染料 eFluor 780</td><td>eBiosciences</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>10% 中性缓冲福尔马林</td><td>Thermo Scientific</td><td>5725</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠小肠淋巴细胞的分离与流式细胞术表征

Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes

肠道是人体所有器官中免疫细胞数量最多的部位，持续暴露于微生物和饮食来源的外来抗原。随着对管腔内抗原在塑造免疫应答中的作用以及肠道内免疫细胞教育在多种系统性疾病中的关键意义的认识不断加深，人们对表征肠道免疫系统产生了日益浓厚的兴趣。然而，许多已发表的实验方案繁琐且耗时。本文介绍一种快速、可重复且无需繁琐Percoll梯度离心的简化方法，用于从小肠固有层、上皮内层和派尔集合淋巴结中分离淋巴细胞。尽管该方案主要针对小肠，但也适用于结肠的分析。此外，我们强调了根据具体科学问题可能需要进一步优化的若干方面。该方法可获得大量活的淋巴细胞，可用于后续的流式细胞术分析或其他表征手段。

对小肠淋巴细胞单细胞悬液进行流式细胞术分析时，应获得一群具有与脾细胞相似的前向散射和侧向散射特征的离散细胞群（图 1A 和 1B）。若在分离初期未将组织保持在 4 °C，淋巴细胞可能开始死亡，导致淋巴细胞群体的前向散射信号降低，且更难与其他上皮细胞和死细胞分离（图 1C）。此外，若小肠组织未彻底清除肠系膜脂肪，则几乎会导致淋巴细胞完全丢失（图 1D）。这些现象说明，操作迅速（即，避免组织升温）以及注重细节（即，彻底去除微量肠系膜脂肪）对于保证样本质量至关重要。通常情况下，我们可获得约 80% 活性的小肠固有层淋巴细胞（LPLs）（图 1E）。
图2A 展示了微生物群的组成如何显著影响特定细胞群体的数量。正如我们先前所证实的，无菌（GF）小鼠完全缺乏任...

由于人们日益认识到肠道淋巴细胞在多种肠道及全身性疾病中发挥着关键作用，对这些细胞进行定量表征的研究兴趣不断增长。在本方案中，我们描述了如何从小肠不同区室中分离单细胞群体，以用于后续的流式细胞术分析。

肠道——作为体内含有免疫细胞数量最多的器官—— constantly exposed to foreign antigens, both ...

本实验的总体目标是从不同小肠区室中分离出单细胞群体，随后可用于流式细胞术分析或其他表征手段。该方法有助于回答黏膜免疫学中的关键问题，例如微生物群如何影响肠道免疫系统的发育。该技术的主要优势在于操作快速、可重复性强，且无需繁琐的Percoll梯度离心步骤。开始此操作时，将小鼠背侧朝下放置，并用70%乙醇喷洒腹部，沿腹正中线从耻骨联合至剑突依次切开皮肤和腹膜筋膜，进行剖腹手术，从而暴露腹腔。接着，通过横断幽门括约肌将小肠与胃分离。轻柔地从小肠系膜中分离小肠，并剔除肠系膜脂肪组织。为完全取出小肠，在回盲交界处进行第二次切割。将分离的小肠置于含有10%胎牛血清（FBS）的4°C RPMI培养基中，以最大限度维持细胞活力。使用弯头镊子小心去除大块脂肪组织，并在操作过程中注意避免撕裂肠组织本身。为清除肠内容物，使用连接注射器的18号喂养针插入小肠近端，用15至20毫升冷PBS轻轻冲洗肠道。用剪刀切除位于小肠对系膜侧、呈多叶状白色团块的派伊尔结。随后将其置于含有5% FBS的冷RPMI培养基中。接下来，将小肠切成三到四英寸长的节段，用浸有 RPMI 的纸巾在每个小肠节段上滚动，去除残留的脂肪，并使用钝性解剖刀轻轻剥离组织上的脂肪。必须严格注意彻底清除肠系膜脂肪，因为即使微量脂肪也可能导致淋巴细胞死亡，从而影响细胞活力。随后，使用弯头镊子插入肠段一端，并夹住组织远端，将组织翻转；再用一对直头镊子从近端轻轻将组织节段拉出，使组织内表面外翻。将组织片段放入含有30毫升提取液和一个搅拌子的杯子中。盖紧杯盖，在37摄氏度下搅拌15分钟。搅拌应充分但不产生湍流。15 分钟后，使用钢制滤网将组织块与含有上清液的上皮组织分离，上清液应呈浑浊状。用手在 RPMI 培养基中轻轻搅动组织块，以洗去残留的提取液。然后将组织置于干燥的纸巾上，并反复翻转数次，以促进去除未被提取液释放的残余黏液。随后，将组织碎片放入含有600微升消化液的1.5毫升离心管中。剪碎组织，直至组织碎片不再粘附于剪刀，且溶液呈现均匀状态。此步骤对于确保组织完全酶解至关重要。将组织剪碎至碎片不再粘附剪刀且溶液呈现均一状态，对于确保细胞得率以及实验结果的可重复性至关重要。将剪碎的小肠组织加入含有25毫升消化液的容器中，在37摄氏度下搅拌消化30分钟。消化进行至一半时，用血清移液管反复吹打溶液，以帮助分解可能存在的较大组织块。接下来，将消化后的组织通过100微米细胞滤筛过滤至一个15毫升离心管中。用20毫升含10%胎牛血清（FBS）的RPMI培养基冲洗滤筛。随后，将过滤后的溶液在4摄氏度下离心10分钟。小心倒出上清液，并将沉淀物重悬于 1 毫升含 10% FBS 的 RPMI 培养基中。将重悬的细胞通过 40 微米细胞滤器过滤至 15 毫升离心管中。用 20 毫升含 10% FBS 的 RPMI 培养基冲洗滤器。随后，将过滤后的溶液在4 °C下离心10分钟。小心倾去上清液，并用1 mL含2% FBS的RPMI培养基重悬沉淀。在此步骤中，将切除的派伊尔集合淋巴结转移至含有25 mL消化液和一个搅拌子的烧杯中。盖紧盖子，在37摄氏度下离心10分钟。随后，将消化后的派伊尔集合淋巴结通过40微米细胞滤筛过滤至15毫升离心管中。如有任何团块残留，使用1毫升注射器推杆的平头端将其压过滤筛。然后，用 10 毫升含 10% FBS 的 RPMI 培养基冲洗滤网。将过滤后的溶液在 4°C 下离心 10 分钟。随后，小心弃去上清液，并将沉淀物重悬于 1 毫升含 2% FBS 的 RPMI 培养基中。对小肠淋巴细胞的单细胞悬液进行流式细胞术分析时，应获得一群具有与脾细胞相似的前向散射和侧向散射特征的明确细胞群。在分离初期，若组织未始终保持在4°C条件下，淋巴细胞可能开始死亡，导致淋巴细胞群体的前向散射信号降低，且更难以与其他上皮细胞和死细胞区分。此外，若未从小肠组织中完全去除肠系膜脂肪，则将几乎完全丧失淋巴细胞。通常可获得小肠固有层淋巴细胞约80%的存活率。熟练掌握后，可在不到四小时内处理四只小鼠，并制备好用于染色的单细胞悬液。操作过程中，彻底去除所有肠系膜脂肪并充分剪碎组织以确保完全消化至关重要。通过该方案获得的单细胞悬液可用于流式细胞术以外的其他用途，例如体外实验、基因表达分析或过继性转移，以进一步表征这些细胞的功能。该技术建立后，为黏膜免疫学领域的研究人员探索小鼠肠道免疫系统的发生过程及其功能意义铺平了道路。观看本视频后，您应能够充分掌握如何从小鼠小肠的不同区室中分离单细胞悬液，具体步骤包括清除肠系膜脂肪、分离上皮层以及使用胶原酶消化组织。

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Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

小鼠小肠淋巴细胞的分离和流式细胞表征

本文详细介绍了一种快速分离小鼠肠道树突状细胞（DCs）和巨噬细胞的方法。通过多色流式细胞术对肠道树突状细胞和巨噬细胞进行表型鉴定，同时采用磁珠富集联合细胞分选技术，获得高纯度的细胞群体用于功能研究。...

从小鼠肠道中分离与鉴定树突状细胞和巨噬细胞

淋巴细胞是适应性免疫应答中的主要效应细胞。本文介绍一种淋巴细胞纯化方案，用于研究目标分子在淋巴细胞活化过程中的生理功能。 体外 和...

小鼠淋巴细胞的分离与活化

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通过光谱流式细胞术分析从实体组织中分离的细胞悬液

本文详细描述了一种从小肠免疫系统的诱导部位（包括肠道相关淋巴组织派伊尔集合淋巴结和引流肠系膜淋巴结）以及效应部位（包括小肠固有层和肠上皮）分离淋巴细胞的实验方案。...

从小鼠小肠免疫系统中分离淋巴细胞

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小鼠肝脏消化用于淋巴管内皮细胞的流式细胞术分析

本文介绍了一种从小鼠胸腺、胰腺引流淋巴结和脾脏制备单细胞悬液的实验方案，以便进一步通过流式细胞术对这些细胞进行研究。此外，该方案还可用于通过流式细胞术鉴定调节性T细胞的不同亚群。...

利用流式细胞术检测小鼠胸腺、胰腺引流淋巴结和脾脏中调节性T细胞亚群

本文介绍了一种通过流式细胞术对小鼠腹膜、脾脏和骨髓组织中免疫B细胞区室异质性的简单分析方法。该方案可适用于并扩展至其他小鼠组织。...

小鼠B细胞发育的流式细胞术表征

这是一种从妊娠和非妊娠小鼠中分离子宫淋巴样细胞的方法。该方法可用于多种下游应用，如流式细胞术表型分析、细胞分选、功能检测、RNA测序和蛋白质组学。本方案展示了如何通过流式细胞术对子宫第一组天然淋巴细胞进行表型分析。...

子宫固有淋巴细胞的分离及其流式细胞术分析

本研究中，我们提供了一种高效且可重复的小鼠呼吸系统免疫细胞群体分离方案。同时，我们还介绍了一种利用基于9色流式细胞术的检测...

小鼠肺组织中固有和适应性免疫细胞鉴定的流式细胞术分析

本方案提供了建立小鼠小肠类器官、从小鼠小肠固有层中分离1型固有淋巴细胞，以及在两种细胞类型之间建立三维（3D）共培养体系的详细操作步骤，用于研究肠上皮细胞与1型固有淋巴细胞之间的双向相互作用。...

小鼠小肠上皮类器官与固有淋巴细胞的共培养

本文介绍了一种基于磁珠分离小鼠皮肤淋巴毛细血管内皮细胞的方法。所分离的淋巴内皮细胞可用于后续实验 体外 实验和蛋白质表达分析...

小鼠皮肤淋巴管内皮细胞的分离

学习从小鼠小肠不同区室分离单细胞群体并进行流式细胞表征的方法。该技术快速、可重复，无需繁琐的Percoll梯度，有助于研究黏膜免疫学及肠道微生物群对免疫系统发育的影响。

小鼠小肠淋巴细胞的分离与流式细胞术表征

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