对于检测磁力搅拌器方法旋毛虫幼虫肌肉样品

这种诊断方法的总体目标是识别感染食源性人畜共患寄生虫旋毛虫的肉类或肉制品。该方法是直接检测肉类中旋毛虫幼虫的金标准。该技术的主要优点是易于执行并且不需要专门的设备。

一般来说，刚接触这种方法的人可能会很困难，因为不能使用内部控制，并且必须在整个测试过程中应用严格的质量管理。演示该程序的是我实验室的技术人员 Nora Thaben。你好！要制备用于消化的肌肉样本，请将 100 克样本放入搅拌机或研磨机中。

并加入两毫升预热的水以利于混合。以最大速度搅拌 2 到 3 秒钟。在第二次混合之前，打开搅拌机并将混合碗边缘的任何肌肉样品转移到底部。

重复搅拌，然后继续搅拌 2 到 3 秒，直到没有可见的肉块残留。在开始此程序之前，请按照文本方案中的说明在 3 升烧杯中制备消化液。将 1 升预热的消化液转移到培养瓶中。

将碎肉转移到烧杯中。并用勺子或叉子将肉散布在消化液中。用剩余的消化液彻底冲洗搅拌碗、盖子、刀片和叉子。

将烧杯放在热板上，保持 44 至 46 摄氏度的恒定温度，同时用温度计监测。然后用铝箔盖住烧杯。搅拌消化液 30 分钟，形成深涡流，不飞溅，直到肉颗粒消失。

在消化肌肉样本后，必须过滤消化液并确定未消化组织的量。将秤调整为零，称量一个干净的 180 微米筛子，并注意其重量。检查分离漏斗是否垂直调平。

为了使幼虫沉淀良好，分离玻璃漏斗的宽度不应大于其长度的 55%。小心地将消化液通过筛子倒入分离玻璃漏斗中，避免溢出。为避免灵敏度损失，请用大约 200 毫升的自来水彻底冲洗玻璃烧杯和筛子。

并将冲洗水转移到分离玻璃漏斗中。提起筛子，用挤压瓶彻底冲洗筛子下面的区域。冲洗水也应收集在分离玻璃漏斗中。

将筛子留在分离漏斗上，以便在整个沉淀过程中进行干燥。要开始沉淀程序，请将过滤后的消化液在分离漏斗中放置 30 分钟，以使旋毛虫幼虫沉淀在漏斗底部。沉淀完成后，完全打开分离漏斗的旋塞，让至少 20 mL 的消化液快速流入量筒。

然后，向相反方向完全打开旋塞阀，让 10 毫升消解液通过。最后，向相反方向打开旋塞阀，让另外 10 毫升液体进入量筒。将 40 毫升消化液留在圆筒中 10 分钟，让幼虫沉淀。

继续确定未消化组织的数量。从沉淀漏斗中取出筛子，用纸巾擦干筛子。从含有未消化组织的筛重中减去过滤前的筛重。

如果筛子上剩余的起始样品重量不超过 5%，则认为消化过程令人满意。如果未消化的组织量超过 5%，则使用新鲜的肌肉样本重复消化。如果没有新鲜的样品，请再次消化剩余的材料。

消化液在圆筒中放置 10 分钟后，用移液管抽吸去除 30 毫升上清液，不要干扰 10 毫升沉淀物。为了减少样品中组织纤维的量，向沉淀物中加入 30 毫升自来水，然后再放置 10 分钟。重复此洗涤，直到液体澄清。

液体澄清后，去除上清液，将 10 毫升洗涤后的沉淀物转移到带网格的培养皿中。用 10 毫升自来水冲洗圆筒，然后将水加入清洗过的沉积物中。洗涤步骤后，立即使用旋毛镜或立体显微镜检查样品，并使用可调节强度的平台下透射光源。

使用 15 到 20 倍的放大倍率，系统地逐个网格检查培养皿。如果未发现可疑结构，则以圆周方式轻轻移动培养皿中的液体，以使可能被忽视的任何旋毛虫幼虫积聚在培养皿的中心。重复检查。

如果发现可疑结构，将放大倍数增加到 40 至 100 倍。用移液管从培养皿中取出旋毛虫幼虫并收集在容器中。检查完整个培养皿后，重复显微镜检查程序，从轻轻摇动培养皿开始。

重复该过程至少 3 次。或者直到没有找到更多的幼虫。确定每克肌肉组织的幼虫数量。

如果消化液中存在过多的幼虫而无法可靠地确定幼虫数量，请将含有幼虫的液体返回到量筒中。用挤压洗液瓶中的自来水冲洗培养皿，让幼虫沉降到底部。沉淀 10 分钟后，将幼虫以 1 毫升的增量从量筒底部转移到新量筒中，将消化液减少至规定体积。

通过剧烈摇动将幼虫均匀地悬浮在 10 毫升中。在摇动运动期间，将 12 滴 20 微升幼虫悬浮液移液移液到培养皿上。通过显微镜检查每 20 微升液滴，并按照文本方案中的说明计算幼虫的总数。

在对旋毛虫幼虫进行显微镜检查之前，重要的是要充分清洗每个样品以去除可能妨碍幼虫鉴定的碎屑。旋毛虫幼虫长 0.7 至 1.5 毫米，宽约 0.3 毫米。食管狭窄，末端略圆。

粘小体是体腔前半部分的结构，由一根细长的管子组成，周围环绕着一排 45 到 55 个大细胞。直肠也是圆形的，没有任何突起或附属物。消化后，感染性肌肉幼虫的形状可能会有所不同，这使得鉴定更加困难。

典型形式包括紧密盘绕和轻微盘绕的移动幼虫，或 C 形或完全展开的幼虫。除旋毛虫幼虫外，其他结构可在肌肉消化后找到。从野猪身上偶然发现的例子包括蚯蚓的鬃毛状毛发、吸虫 Alaria alata、肌肉纤维、Metastrongylus 属的线虫、植物纤维和蛔虫 Toxocara 的幼虫。

一旦掌握，如果作得当，该技术可以在大约两个小时内完成。看完这个视频，您应该对如何用磁力搅拌器法检测肉类中的旋毛虫幼虫有了很好的了解。考虑到最重要的关键控制点。