Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

Rachel A. Battaglia; Parijat Kabiraj; Helen H. Willcockson; Melinda Lian; Natasha T. Snider

doi:10.3791/55655

JoVE Journal
Biochemistry

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Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

从多个小鼠组织分离中间丝状蛋白以研究与老化相关的翻译后修饰

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09:29 min

May 18, 2017

DOI: 10.3791/55655-v

Rachel A. Battaglia¹, Parijat Kabiraj¹, Helen H. Willcockson¹, Melinda Lian¹, Natasha T. Snider¹

¹Department of Cell Biology and Physiology, School of Medicine,University of North Carolina at Chapel Hill

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在这种方法中，我们提出了从多个小鼠组织快速高效地分离中间丝（IF）蛋白质的生物化学方法。分离的IF可用于通过质谱法和其他生化测定法研究翻译后修饰的变化。

该生化程序的总体目标是从多个小鼠组织中分离富含中间丝的组分，以研究不同组织特异性中间丝蛋白的翻译后修饰。这种方法可以帮助回答中间丝领域的关键问题，例如在哺乳动物衰老过程中这些重要的应激保护细胞骨架蛋白的功能和调节如何受到影响。该技术的主要优点是，结合自动组织裂解步骤使用户能够快速有效地处理多个组织样本。

首先，将 1 毫升冰冷的 Triton X-100 缓冲液（补充有蛋白酶抑制剂）加入玻璃管匀浆器中，并将其置于冰上。从液氮储存中取出一小块组织，将其直接放入玻璃均质器中。然后，在始终将均质器和样品保持在冰上的同时，使用大约 50 次聚四氟乙烯浆料使样品均质化，同时最大限度地减少气泡的形成。

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